最新缺血预处理大鼠心肌细胞中的Bcl2蛋白对线粒体通透性转换...ppt课件

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新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时Bcl-2蛋白表达的研究

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时Ｂｃｌ－2蛋白表达的研究【摘要】目的：通过研究新生大鼠脑缺血时bcl-2蛋白在海马区的表达特点，探讨bcl-2蛋白在缺血缺氧性脑损伤（HIBD）的作用。

方法：56只7日龄新生SD大鼠随机分为1个对照组和7个实验组。

给动物吸入含有92％氮气和8％氧气混合气体建立新生大鼠HIBD动物模型，分别在脑损伤后不同时间点(0.5、1、3、6、12、24、48、72 h等)断头处死动物，取海马组织，用免疫组织化学方法检测海马脑神经细胞凋亡及bcl-2蛋白表达情况。

结果：TUNEL染色的阳性细胞数与bc1-2蛋白阳性的细胞数在HIBD后的不同时间点出现分别有显著差异，海马区bcl-2蛋白阳性细胞在HIBD后立即出现，6 h达到高峰，之后渐下降。

结论：bcl-2蛋白强表达于海马缺血区和缺血周边区的神经元，与神经元的存活或死亡有一定联系。

【关键词】新生大鼠；脑缺氧缺血；bcl-2基因；细胞凋亡脑组织对缺氧极为敏感，神经细胞极易因低氧缺血而受到损伤，如何提高脑组织对低氧缺血损伤的耐受性，是当前一个热门研究课题。

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic ischemic brain damage，HIBD) 导致的继发性神经元死亡、丢失与细胞凋亡有关。

Bcl-2(称为B细胞淋巴瘤/白血病-2) 是从小鼠细胞淋巴瘤中分离得到的原癌基因，是已被发现的与细胞凋亡关系密切的基因，可在中枢神经系表达[1]。

本研究用新生大鼠HIBD模型，采用免疫组织化学法来研究Bcl-2蛋白在缺氧缺血（hypoxic ischemic，HI）后脑海马区组织中表达的动态变化，探讨bcl-2基因在HIBD后神经元凋亡中的作用，对HIBD的临床治疗提供理论依据。

1 资料与方法1．1 实验动物与分组：7日龄SD大鼠56只(由沈阳医学院实验动物中心提供)，体重（15±1．6）g，雌雄兼用，随机分为1个对照组和7个实验组，每组7只。

缺血性预处理的ppt课件

以收入美国心脏联合会（American Heart Association）年会的论文量为例，在1986年仅为9篇，而在随后几年已增加了几十倍。
Medline检索到有关ischemic preconditioning的文章
时间
论文数
86
9
87~96
641
97~04 05～07
2019 1347
3.腺苷与缺血性预处理
心脏在经受短暂缺血的数秒内腺苷水平迅速增高。腺苷这一迅速增加的现象提示，在短暂的预处理缺血时，腺苷受体被增加的腺苷占领，并介导在缺血性预处理中发挥重要作用。其主要证据为：缺血性预处理减少心肌梗死体积的心脏保护作用可被腺苷受体阻断剂所消除。外源性的腺苷能诱导类似缺血性预处理的心脏保护作用。
一.腺苷（Adenosine）
1.腺苷在心脏中的产生及代谢
腺苷是一种局部的内分泌激素，广泛存在于身体的各部。对特定的生物功能具有一般调节作用，包括对心血管系统、神经系统及内分泌系统的调节。
在正常状况下，心肌释放少量的基础水平腺苷，其产生的途径有S－腺苷高半胱氨酸的水解和AMP的去磷酸化。细胞内的清除腺苷的途径有3条：①通过腺苷激酶再磷酸化生成AMP；②通过腺苷脱氨酶生成肌苷； ③释放出细胞。
Kitakaze及其同事在狗的心脏上证明，预处理心脏的腺苷合成酶—5’nucleotidase的活性比对照组高，而且5’nucleotidase具有缺血性预处理样的保护作用。
另外，腺苷受体通过其偶联的G蛋白在缺血性预处理中扮演重要作用。
– G蛋白可分为4个主要亚类Gs、Gi、Gq、和Gβ。腺苷A1受体与Gi相偶联起抑制作用，A1受体与型G上s，相于偶预联处起理刺性激缺作血用前。预在先兔给的予心G脏i抑缺制血剂模河豚毒，则能阻断缺血性预处理，减少心肌梗死体积的保护作用。

大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2和Bax的表达

护剂，二者联用会降低硫糖铝的疗效；吗叮啉和普鲁本辛联合应用，
普鲁本辛为抗胆碱药，能抑制胃肠蠕动，而吗叮啉为胃动力药，促进胃肠蠕动，二者合用疗效均受影响Ｈ。合理用药对于医疗机构来说非常重要，同时也是确保患者生命安全的重要环节，为了保证合理用药首先要从医疗人员环节做起，提升临床医师与护理人员对于抗菌知识的掌握程度，提升其药理学等方面的知识认知，医疗结构对于相关人员的知识结构及掌握程度要定期进
【摘要】目的探讨大鼠脑缺血再灌注（ＣＩＲ）后早期凋亡相关基因Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ在脑皮质神经元中的表达变化。方法将５６只大鼠随机分
为假手术组（对照组）及缺血再灌注组（观察组），采用免疫组织化学法测定Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ的表达。结果随着ＣＩＲ时间的延长，凋亡细胞增多，缺血组Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ表达增多，与对照组相比，。差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１），Ｂｃｌ一２的表达在１２ｈ达到最高，Ｂａｘ的增加一直持续到４８ｈ。结论ＣＩＲ后Ｂｃｌ一２表达的增加早于Ｂａｘ，ＣＩＲ后神经细胞凋亡可能与Ｂｃｌ一２／Ｂａｘ失调有关。
不宜同服。
杜绝抗生素的滥用问题。针对患者病情治疗需要，实施最有效最经济
的抗生素应用，减少临床中耐药性的发生，把握好患者的最佳治疗期限与最好用药间隔。

大鼠在体缺血后处理对肺细胞凋亡及肺Bax和Bcl-2表达的影响

大鼠在体缺血后处理对肺细胞凋亡及肺Bax和Bcl-2表达的影响摘要】目的：通过实验在动物整体水平上初步探讨:缺血后处理(ischemic postconditioning,IPO)在肺缺血/再灌注损伤（ischemia/reperfusion,I/R）中的保护作用。

方法：成年SD大鼠60只，随机分为3组，每组20只，设立假手术组（Sham组）、缺血/再灌注组（I/R组）、缺血后处理组（IPO组）。

观察各组肺组织的病理学改变，肺湿/干重之比，TUNEL法检测细胞凋亡指数，免疫组化法测定肺组织中Bcl-2与Bax的表达。

结果：与I/R组相比，IPO组病理学改变减轻、肺湿/干重之比与肺细胞凋亡指数明显降低、Bax表达显著减少、而Bcl-2表达明显增高。

结论：缺血/再灌注损伤可损害肺组织结构，增加细胞凋亡，而IPO可能通过调节Bax与Bcl-2的表达来降低细胞凋亡指数，从而减轻肺损伤。

【关键词】肺；缺血后处理；细胞凋亡；Bax；Bcl-2【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）09-0115-02缺血后处理是指组织或器官发生缺血后，在长时间再灌注之前进行数次短暂缺血/再灌注循环，从而减轻再灌注损伤的一种保护作用。

肺缺血后处理的研究起步较晚，其保护机制还未确定。

因此本实验通过建立肺缺血/再灌注损伤模型，探讨缺血后处理在肺I/R损伤中的保护作用及其可能机制。

1.材料和方法1.1 实验分组成年SD大鼠60只，雌雄不拘，并随机分为3组，每组20只。

10%水合氯醛腹腔麻醉，气管插管，接动物呼吸机。

（1）sham组：开胸后游离左侧肺门，不予其它处理；（2）I/R组：开胸后于肺充盈末用无创微血管夹夹闭左侧肺门，45min后松开微血管夹，灌注180min；（3）IPO组：处理同I/R组，但在松开微血管夹即刻，采取复灌30s、停灌30s，连续6个循环，作为缺血后处理，之后再灌注180min。

针灸预处理对缺血再灌注大鼠心肌Bcl-2mRNA和BaxmRNA基因表达的影响

针灸预处理对缺血再灌注大鼠心肌Bcl-2mRNA和BaxmRNA基因表达的影响赵宇辉;孙忠人;魏运芳【期刊名称】《中医药学报》【年(卷),期】2009(037)001【摘要】目的:为探求针灸预处理与缺血预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2mRNA及BaxmRNA的影响,丰富治未病理论.方法:采用针灸预处理组间,针灸预处理与缺血预处理比较,利用大鼠心肌缺血再灌注模型观察,分正常对照组,假手术组,缺血再灌注组,缺血预处理组,手针预处理日1次组,电针预处理日1次组,艾灸预处理日1次组,手针预处理日2次组,电针预处理日2次组,艾灸预处理日2次组.结果:表明针灸预处理与缺血预处理使bcl-2mRNA增多,使baxmRNA减少,且针灸预处理日2次组比日1次组和缺血预处理更有效,进一步证明了中医针灸"治未病"理论科学价值.【总页数】3页(P16-18)【作者】赵宇辉;孙忠人;魏运芳【作者单位】深圳市宝安区观澜人民医院康复理疗科,广东,深圳,518110;黑龙江中医药大学,哈尔滨黑龙江150040;深圳市宝安区观澜人民医院康复理疗科,广东,深圳,518110【正文语种】中文【中图分类】R246.6【相关文献】1.心宁丸对心肌缺血大鼠心肌组织bcl-2mRNA、baxmRNA、eNOS、ET-1表达的影响 [J], 徐惠梅;孙高亚;任海军;罗梓萍2.针灸预处理对缺血再灌注大鼠心肌血清SOD和MDA的影响 [J], 赵宇辉;孙忠人;张丽娟3.针灸预处理对大鼠心肌缺血再灌注后内质网应激的影响 [J], 翟昌林;唐关敏;胡惠林;徐文博4.螺内酯对急性心肌梗死心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2mRNA及BaxmRNA表达影响 [J], 许香梅;任晓敏;刘曙光;刘海云;王晓燕;董士民5.参附注射液预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤后HSP70基因表达的影响 [J], 王峰;尚立芝;曹珊;崔明霞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

曲美他嗪对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠的治疗效果及对Bcl_2、Caspase_3蛋白表达的影响

曲美他嗪对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠的治疗效果及对Bcl_2、Caspase_3蛋白表达的影响朱雪梅【摘要】Objective To investigate the effect of trimetazidine on the expression of B cell lymphoma leukemia_2(Bcl_2)and cys-teinyl aspartate_specificproteinase_3(Caspase_3)in rats with acute myocardial ischemia_reperfusion injury.Methods 48 healthy adult male SD rats were randomly divided into sham operation group,model group,low dose group and high dose group,with 12 rats in each group.The rats of the model group,low dose group and high dose group were prepared for the acute myocardial ischemia reper-fusion injury.The low dose group was given10mg/kg trimetazidine and the high dose group was given 20mg/kg trimetazidine.The creatine kinase(CK)and lactate dehydrogenase(LDH)were detected by automatic biochemical analyzer,the myocardial tissue was observed by HE staining,the apoptosis of cardiomyocytes was detected by DNA in situ end labeling(TUNEL),and the expression of Bcl_2 and Caspase_3 protein in myocardium was detected by immunohistochemistry.Results There were no obvious changes in my-ocardial tissue in the sham operated group;in the model group,the myocardial fibers were disordered and the cells were severely ede-matous;the myocardial cell swelling in the low dose group and the high dose group was alleviated.The CK,LDH and Apoptosis in-dex(AI)values in model group,low dose group and high dose group were significantlyhigher than those in sham operation group(P<0.05);the CK,LDH and AI values in the high dose group were(720.02 ± 80.21)U/L,(1642.04 ±137.72)U/L and(7.89 ± 1.04)respectively,which were significantly lower than those in the low dose group and the model group(P<0.05);the expression levels of Caspase_2 protein gray value in model group,low dose group and high dose group were significantly higher than that in the sham operation group,while the expression levels of Bcl_2 protein gray value were lower than that in sham operation group(P<0. 05);the expression of Caspase_2 protein gray value in high dose group was(120.03 ± 24.15),significantly lower than that in the low dose group and model group(P<0.05),while the expression of Bcl_2 gray value was(155.16 ± 10.10),significantly higher than that in the low dose group and model group.Conclusions High dose of trimetazidine can inhibit cardiomyocyte apoptosis in rats with acute myocardial ischemia reperfusion injury,which is related to theup_regulation of Bcl_2 protein expression and down_regula-tion of Caspase_2 protein expression.%目的探讨曲美他嗪对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠的治疗效果及对B细胞淋巴瘤/白血病_2基因(Bcl_2)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶_3(Caspase_3)表达的影响.方法选取健康成年雄性SD大鼠48只,随机分为假手术组、模型组、低剂量组和高剂量组,每组12只,其中模型组、低剂量组和高剂量组大鼠制备急性心肌缺血再灌注损伤,低剂量组给予10mg/kg曲美他嗪灌胃,高剂量组给予20mg/kg曲美他嗪灌胃,采用全自动生化分析仪检测肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH),采用HE染色观察心肌组织,采用DNA原位末端标记(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,免疫组化法检测心肌组织Bcl_2和Caspase_3蛋白表达.结果假手术组心肌组织未见明显改变,模型组心肌纤维排列紊乱,细胞严重水肿,低剂量组和高剂量组心肌细胞肿胀减轻;模型组、低剂量组和高剂量组CK、LDH和凋亡指数(AI)值明显高于假手术组(P<0.05);高剂量组CK、LDH和AI值分别为(720.02 ± 80.21)U/L、(1642.04 ± 137.72)U/L和(7.89 ± 1.04),明显低于低剂量组和模型组(P<0.05);模型组、低剂量组和高剂量组Caspase_2蛋白表达灰度值明显高于假手术组,而Bcl_2蛋白表达灰度值明显低于假手术组(P<0.05);高剂量组Caspase_2蛋白表达灰度值为(120.03 ± 24.15),明显低于低剂量组和模型组(P<0.05),而Bcl_2蛋白表达灰度值为(155.16 ± 10.10),明显高于低剂量组和模型组.结论高剂量曲美他嗪能抑制急性心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡,与其上调Bcl_2蛋白表达,下调Caspase_2蛋白表达有关.【期刊名称】《心脑血管病防治》【年(卷),期】2018(018)001【总页数】5页(P4-6,9,封3)【关键词】曲美他嗪;急性心肌缺血再灌注损伤;B细胞淋巴瘤/白血病_2基因;天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶_3【作者】朱雪梅【作者单位】100029 北京市中西医结合医院【正文语种】中文【中图分类】R542.2+2心肌缺血再灌注损伤的发生机制比较复杂，已有的研究认为与自由基损伤、钙离子超载、心肌纤维代谢障碍、血管内皮细胞损伤、中性粒细胞和细胞凋亡等诸多因素有关[1]。

丙泊酚预处理减轻大鼠心肌缺血／再灌注损伤与其抑制线粒体通透性转换的关系

ＬＤＡ前２ｎ经股静脉分别注射注射２ｍｌＬ二甲基亚砜和丙泊酚１ｍｋ～・ｎＡＣ０ｍｉ０Ｉｏ・ｘｇ・ｇｍｉ共２ｎ０ｍｉ。结果
再灌注１０２
ｍｉ，Ｐ组凋亡指数（４３２３）明显低于Ｉ（３３３４）（ｎ后Ｐ２．５± ．５％Ｒ组３．８± ．７％Ｐ＜００）ＤＯ组心肌细胞凋亡指数与Ｉ．５；ＭＳＲ组无明显差异（Ｐ＞００）．５。电镜下ＩＲ组线粒体微观结构损伤严重，膜电位较Ｓａｈｍ组显著降低（．５±００．１．４Ｐ＜．５。０２．６ｕ０９ ±０２，００）ｓＰＰ组线粒体形态学改变明显减轻，电位（．７± ．３显著高于Ｉ膜０６０１）Ｒ组（００）ＭＳＰ＜．５。ＤＯ组则没有线粒体保护作用。结论丙泊酚预处理可减轻大鼠心肌缺血／再灌注损伤，其机制与抑制线粒体通透性转换有关。
ｏａｓｉｅａｅｏｉｈｂｔｏｆｍｉｏｈｎｒａｐｒｅｂｌｙｔａｓｔｎｎｒｔｓｒｌｔｄｔｎｉｉｉｎｏｔｃｏｄｉｅｍａｉｔｒｎｉｏｉｉ
ＳＨＡＮＧＸｉｎ —ｕＬｉｇｙａＺｏｇｙｅ．ＩＪｎ．ｕｎ．ＥＮＧＹｉ— ｉｇｎｒｎｕ（．ｅａｔｅｔｆＡａｓｅｉｌｙＰｋｕＤｓｉｅｒｌｏｉｌＮｎｎ２１０，ｈｎ；１Ｄｐｒｎｏｎｅｈｓｏｇ，ｕｏｉｒｔｆｒｓｔ，ａｆｇ１８０ＣｉａｍｔａｏｔｃＲｅａＨｐａｉ２ＸｚｏｄｃｌｏｅｅＪｎｓｓｔｔｏＡｅｈｓｌｙＸｚｏ２１０，ｈｎ）．ｕｈｕＭｅｉｌｇ，ｉｇｕＩｔｕｎｓｅｉｏ，ｕｈｕ２０２ＣｉａａＣｌａｎｉｅｆｔｏｇ

缺血再灌注大鼠脑皮质Bcl-2、Bax和Caspase-3的动态表达

缺血再灌注大鼠脑皮质Bcl －2、Bax 和Caspase －3的动态表达赵航王敏1曲丽莹2刘春春1蔡睿1于海洋1安林1薛晓飞1刘玲（吉林大学白求恩医学院人体解剖学教研室，吉林长春130021）〔摘要〕目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后Bcl-2、Bax 、Caspase-3的表达与再灌注时间的关系。

方法采用插线法制作大鼠大脑中动脉栓塞后再灌注模型，通过TTC 染色法检测模型；应用RT-PCR 及免疫组织化学方法，分别观察脑缺血再灌注后2、6、12、24、48h Bcl-2、Bax 、Caspase-3表达的动态变化。

结果Bcl-2mRNA 在缺血再灌注2h 后表达开始增多，6h 明显增多，24h 达高峰，48h 开始减少；Bax mRNA 表达较Bcl-2延后，2h 开始微量表达，6h 开始增多，增高趋势持续至48h ；Caspase-3mRNA 在6h 后微量表达，12h 略有增多，24h 明显增多，持续增高至48h 。

蛋白表达的时程变化与mRNA 一致。

结论脑缺血再灌注损伤的早期，凋亡相关因子Bcl-2、Bax 、Caspase-3表达显著，且呈增高趋势，其中Bax 生成的上调与Caspase-3的激活密切相关。

〔关键词〕缺血；再灌注；凋亡〔中图分类号〕R74〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202（2012）13-2801-03；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.13.0601吉林大学白求恩医学院2吉林大学中日联谊医院普外科通讯作者：刘玲（1978-），女，讲师，主要从事神经解剖学研究。

第一作者：赵航（1980-），男，助理工程师，主要从事神经解剖学研究。

近年，脑缺血再灌注损伤成为医学界研究的热点问题。

研究显示，在脑缺血再灌注损伤的病理变化过程中细胞凋亡是主动的可逆的过程〔1〕。

因此，对脑缺血再灌注损伤引起的神经细胞凋亡机制进行深入研究具有重要意义。

大鼠急性心肌梗死心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax、FAS的表达

大鼠急性心肌梗死心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax、FAS的表达
2011-09-14 高友山钱学贤
目的观察大鼠急性心肌梗死(AMI)时心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白的表达。
材料与方法结扎SD大鼠左冠前降支建立AMI模型，SD大鼠随机分为7组：正常对照、AMI 2 h、AMI 4 h、AMI 6 h、AMI 24 h、AMI 48 h及AMI 7 d。心肌标本的处理：实验结束时取出心脏，用于病理检查者10%中性福尔马林固定，石蜡包埋；用于DNA Ladder检测者，液氮冻存待测。用TUNEL及DNA Ladder检测心肌细胞凋亡；采用免疫组化方法检测Bcl-2、Bax、FAS的表达。
结果 ①AMI 6 h之前各组无明显组织形态改变；24 h可见梗死区心肌细胞肿胀、空泡形成，横纹消失，出现多形
核白细胞浸润。48 h心肌纤维出现玻璃样变，嗜酸性增强，核溶解，白细胞浸润明显增多。7 d时梗死灶肌纤维消失，炎性肉芽肿及成纤维细胞所代替。②AMI 2 h受累区出现心肌细胞凋亡，6 h达高峰(33.5%±4.2%)，至24 h时受累区仍有较多凋亡；48 h梗死区可见少许凋亡细胞，7 d时梗死区未见凋亡。48 h及7 d时梗死周围区见少量心肌细胞凋亡。对照组及梗死2 h组DNA Ladder阴性，梗死4 h组1例阳性(阳性率20%)，6 h组5例阳性(83.3%)，24 h组4例阳性(66.7%)，48 h组1例阳性(20%)，7 d组阴性。6 h组及24 h组DNA Ladder阳性率高于其他组(P＜0.01)。③AMI 2 h组Bcl-2表达即明显增多，到4 h组时达高峰(43.2%±4.5%)，之后渐降低，到24 h时已不到高峰时的1/3，7 d时已接近基础水平。FAS的表达在AMI 4 h组达高峰，其值54.9%±7.3%，之后表达渐少，至24 h组时表达已不足4 h组的一半，7 d组表达很少。Bax表达在AMI 24 h组前变化不明显，48 h组略增高，7 d组表达较前明显增多，达17.5%±3.4%。

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治疗, 通常>60min ➢ 超难治性SE (Super RSE) 全身麻醉治疗24h仍不终止发作，其
中包括减停麻醉药过程中复发
早期SE
确定性SE
难治性SE
超难治性SE
5min
30min
60-120min
20
癫痫持续状态-分类
根据癫痫发作类型
惊厥性SE Convulsive SE (CSE) ➢ 全面性 Generalized CSE ➢ 局灶性 Focal CSE
SE的定义 SE的分类 SE患者的病因评估惊厥性SE的治疗非惊厥性SE的处理
15
癫痫持续状态 Status Epilepticus (SE)
SE的定义 SE的分类 SE患者的病因评估惊厥性SE的治疗非惊厥性SE的处理
16
癫痫持续状态-定义
传统定义
➢ 1次癫痫发作持续30min以上，或反复多次发作持续>30min，且发作间期意识不恢复至发作前的基线状态
ILAE 2001定义
➢ 一次癫痫发作持续时间大大超过了该型癫痫发作大多数患者发作的时间，或反复发作，在发作间期患者的意识状态不能恢复到基线状态
➢ 时间界定 >5min？（从实际临床操作角度）
“癫痫持续状态”实为“癫痫发作持续状态”，并非仅限于癫痫患者
17
癫痫持续状态 Status Epilepticus (SE)
26
癫痫持续状态-惊厥性SE的治疗
治疗原则
➢ 尽早治疗，遵循SE处理流程，尽快终止发作 ➢ 查找SE病因，如有可能进行对因治疗 ➢ 支持治疗，维持呼吸、循环及水电解质平衡
缺血预处理大鼠心肌细胞中的 Bcl2蛋白对线粒体通透性转
换...
背
景
缺血预处理（IPC）是迄今保护缺血/ 再灌注（I/R）心肌的最强效方式之一。缺血/再灌注损伤致心肌细胞死亡有凋亡和坏死两种形式。IPC心肌保护作用主要表现在缩小心肌梗死面积。线粒体是细胞关键的细胞器之一，它在供能、调节渗透压、钙稳态，PH值以及细胞信号传导中起了重要作用。
预期实验结果
Bcl-2蛋白含量：
正常对照组＞缺血预处理组＞缺血再灌组
MPTP开放程度：
正常对照组＜缺血预处理组＜缺血再灌组
说明Bcl-2蛋白对MPTP的开放有抑制作用
Thank you !
癫痫持续状态的诊断与处理
2015最新指南
14
癫痫持续状态 Status Epilepticus (SE)
非惊厥性SE Non-convulsive SE (NCSE) 需满足
➢ 明确的和持久的(>30min)行为、意识状态或感知觉改变 ➢ 通过临床或神经心理检查证实上述改变 ➢ EEG持续或接近持续的阵发性放电 ➢ 不伴持续性的惊厥症状如肌肉强直、阵挛等
分类
➢ 可以活动的患者 Ambulatory NCS (如:癫痫患者不典型失神持续状态) ➢ 危重患者 (如CSE治疗后正常对照组：穿线但不做结扎处理，持续灌流。缺血再灌组：结扎30min，再灌注20min。缺血预处理组：连续3次停灌3min+复灌 5min，然后
缺血30min，再灌注20min。
3.Bcl-2蛋白含量的测定
取心尖以上缺血梗死区横切2mm厚心肌，用免疫组化sp法测定心肌Bcl-2的含量
• 血/尿毒物检测 • 遗传代谢相关检查如伴有发热 ➢ 血常规、CSF
24
癫痫持续状态-病因评估
癫痫患者的SE
➢ 抗癫痫药血浓度 ➢ 血电解质 ➢ V-EEG ➢ 根据情况复查头颅影像学 ➢ 如伴有发热
血常规、CSF
25
癫痫持续状态 Status Epilepticus (SE)
SE的定义 SE的分类 SE患者的病因评估惊厥性SE的治疗非惊厥性SE的处理
SE的定义 SE的分类 SE患者的病因评估惊厥性SE的治疗非惊厥性SE的处理
18
癫痫持续状态-分类
根据癫痫发作持续时间及治疗反应分类根据癫痫发作类型分类根据癫痫发作病因分类
19
癫痫持续状态-分类
根据癫痫发作持续时间及治疗反应
➢ 早期SE ( Impending SE, Early SE) >5min ➢ 确定性SE (Established SE) >30min ➢ 难治性SE (Refractory SE,RSE) 对二线治疗无效，需全身麻醉
4.心肌线粒体的制备
取左前壁心肌组织，转移至分离缓冲液A中冲洗、剪碎、匀浆。用低温高速离心机分离线粒体。
5. MPTP开放程度的检测
线粒体蛋白含量的测定：线粒体悬液用考马斯亮蓝法进行蛋白含量测定，以1mg/ml的BSA作为标准品。线粒体悬液的吸光度：根据蛋白定量的结果用肿胀液将线粒体混悬液稀释为0.25mg/ml。在线粒体悬液中加200µmol/ml的 CaCl2，测定加入 CaCl2前后A520吸光度的变化，每隔30s进行一次，连续观察15min。以到达平衡后的吸光度变化ΔS作为MPTP开放程度的指标。
材
料
实验动物：SD大鼠实验药品：戊巴比妥钠，抗鼠Bcl-2抗体及SP免疫组化
试剂盒,分离缓冲液A
实验仪器：呼吸机，分光光度计，低温高速离心机
方
法
1.建立动物缺血模型
大鼠用戊巴比妥钠麻醉后，用止血钳游离大鼠左侧的胸大肌，暴露左第2，3，4肋，分别在左第2，3，4肋间隙距离胸骨左缘约0.5cm处进针穿线，每个肋间隙同一进针点穿两根长约40cm的0号手术线，再将两根线用力拉向两侧，分开肋间肌和软组织并结扎肋间动脉，留取结扎线的剩余部分，将两根结扎线剩余部分用力拉向两侧拉开胸腔，并固定之。充分暴露心脏及其表面的血管，剪开心包膜，结扎冠状动脉前降支，结扎之前在预结扎的冠状动脉前降支处放置一根约 0.5cm长直径1.5mm的乳胶管，打一个活结结扎，以备进行反复多次缺血再灌实验。
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癫痫持续状态-分类
根据癫痫发作的病因分类
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癫痫持续状态 Status Epilepticus (SE)
SE的定义 SE的分类 SE患者的病因评估惊厥性SE的治疗非惊厥性SE的处理
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癫痫持续状态-病因评估
新发生的SE（既往无癫痫发作病史）
➢ 血电解质
➢ V-EEG ➢ 头颅影像学 ➢ 如临床怀疑相关疾病