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Microbiology experiment病毒的血凝实验（HA）（一）实验目的（二）实验原理（三）实验器材（四）实验方法（五）实验要点（六）实验作业（一）实验目的1.1.掌握病毒的血凝试验的操作方法掌握病毒的血凝试验的操作方法掌握病毒的血凝试验的操作方法。
2.2.掌握病毒效价的判定掌握病毒效价的判定掌握病毒效价的判定。
（二）实验原理某些病毒某些病毒，，如鸡新城疫如鸡新城疫、、禽减蛋综合症等，有能凝集动物红细胞的特性有能凝集动物红细胞的特性，，此即红细胞凝集现象红细胞凝集现象。
这些病毒囊膜上有糖蛋白血凝素这些病毒囊膜上有糖蛋白血凝素，，能与动物的红细胞表面的糖蛋白受体结合动物的红细胞表面的糖蛋白受体结合，，发生红细胞凝集现象发生红细胞凝集现象。
可以利用这一特性判断被检材料中有无病毒的存在性判断被检材料中有无病毒的存在，，并可以测定病毒的效价可以测定病毒的效价。
（三）实验器材1.1.鸡鸡1%1%红细胞悬浮液红细胞悬浮液 由健康来航公鸡羽根静脉采血迅速置于装有抗凝血剂（3%3%柠檬酸钠溶液柠檬酸钠溶液柠檬酸钠溶液））的离心管中心管中，，用生理盐水洗涤3次，每次以30003000r/min r/min r/min离心离心离心101010分钟分钟分钟，，将血浆将血浆、、白细胞等充分洗去等充分洗去，，根据沉淀的红细胞压积根据沉淀的红细胞压积，，用PH=7PH=7的生理盐水稀释成的生理盐水稀释成1%悬浮液悬浮液。
2.2.病毒病毒病毒：：鸡新城疫弱毒疫苗3.0.85%3.0.85%生理盐水生理盐水生理盐水，，微量移液器微量移液器，，9696孔孔板，滴头滴头，，微量振荡器微量振荡器。
1%红细胞病(μ50 50 50 50 50 50 50 50 50 生理盐水(μl)材料上述材料全部按顺序加完后上述材料全部按顺序加完后，，振荡振荡969696孔孔板，使红细胞与病毒充分接触使红细胞与病毒充分接触，，然后置于2020--2222℃℃室温中静置室温中静置，，自第自第151515分钟开始分钟开始观察结果观察结果，，每5分钟检查一次分钟检查一次，，至6060分钟分钟结束结束，，观察结果时注意不要摇震观察结果时注意不要摇震969696孔孔板。
南京大学生物技术系实验报告
题目实验器材的准备与干热灭菌
姓名年03 月08 日
【一、实验目的】
为本学期的微生物学实验做准备。
【二、实验原理】
1、灭菌：杀死或消灭一切环境中的所有微生物
灼烧灭菌
干热灭菌
高压蒸汽灭菌
2、消毒：消灭病原菌和有害的微生物
75%乙醇
3、干热灭菌：利用高温使菌体蛋白质变性或凝固、酶失活而达到灭菌
目的。
适用于空的玻璃器皿（如培养皿、锥形瓶、试管、移液管等）、金属用具等灭菌。
优点是灭菌器皿保持干燥。
但带有胶皮、塑料的物品、液体及固体培养基不能用干热灭菌。
4、灼烧灭菌：利用火焰直接把微生物烧死。
适用于金属小用具接种前
后的灭菌、试管口、锥形瓶口、接种移液管和滴管外部等的灭菌。
【四、操作步骤】
1、玻璃器皿清洗、晾干。
2、棉塞制作。
3、培养皿和移液管的包扎方法。
4、写标签（培养基的名称、配制日期、组别）。
5、将包装好的玻璃器皿放入干热灭菌器内，即烘箱。
6、关门加热。
7、当温度上升至160～170℃时，保持此温度2小时。
8、停止加热，待温度下降至40℃以下时将门打开，取出灭菌器皿备用。
【五、实验结果】
1、熟悉了环境，保证实验室的整洁和以后实验的顺利进行。
2、对微生物学实验有了概念上的了解。
【六、实验讨论】。
微生物学绪论：1.微生物的定义：指一般肉眼看不见或者看不清的微小生物的总成2.分类：①原核：细菌，放射菌，蓝菌，支原体，立克次氏体和衣原体②真核：真菌（酵母菌、霉菌、蕈菌），原生动物，显微藻类③非细胞类：病毒和亚病毒（类病毒，拟病毒，朊病毒）3.微生物的特点：①小（体积微小）微米级：光学镜纳米级：电子镜②简（结构）单细胞，简单多细胞，非细胞③低（进化地位低）原核，真核，非细胞类病毒、亚病毒4.发展史：①史前期（朦胧阶段）②发展期（形态描述阶段）③初创期（生理研究阶段）④奠基期（生化研究阶段）⑤发展期（分子生物学阶段）5.微生物与人的关系：医疗保健、工业、农业、生产、环保①与工业的关系：a.食物罐藏防腐 b.酿造工作 c.纯种厌氧发酵的建立d.液体的深层通气搅拌大规模培养技术的创建 f.代谢调控发酵技术②与农业大作用：a.以菌治害虫和以菌治植病的生物防治技术 b.以菌增肥效和以菌促长的微生物增产技术 c.以菌作饲料和以菌当蔬菜的单细胞蛋白和食用菌生产技术 d.以菌产沼气等生物能源技术③与环保的关系：a.促进许多重大问题的突破 b.促分子生物学的三大来源和技术之一 c.刺进经典遗传学发展为分子遗传学 d.微生物与基因工程6.微生物的五大共性：①体积小，面积大②吸收多，转化快③生长快，繁殖快④适应强，易变异⑤分布广，种类多第一章1.细菌：是一类细胞细短，结构简单，胞壁坚韧，多以二分裂方式繁殖和水生性较强的原核生物2.细胞的形态可分为三类：球状，杆状，螺旋状3.细菌的鉴别染色法——革兰氏染色法步骤：涂片固定→结晶紫初染1min→碘液媒染1min→95%乙醇脱色0.5min→番红复染1min 阳性菌（G+)→紫色阴性菌(G-)→红色4.细菌细胞壁的化学组成与结构：肽聚糖单体、网状结构；5.革兰氏阳性菌的细胞壁：由肽聚糖和磷壁酸组成6.磷壁酸：占40%革兰氏阳性菌所特有成分七主链由数十个磷壁酸苷油或磷壁酸核糖醇组成有的还有D-Ala和还原糖所组成的侧链7.磷壁酸的特点：①通过分子上的大量负电荷浓缩细胞周围的Mg2+，以提高细胞膜上一些合成酶的活力②储藏元素③调节细胞内自溶素的活力，借以防止细胞因自溶而死亡，作为噬菌体的特异性吸附受体④赋予G+细菌特异的表面抗原，因而可用于菌种鉴定⑤增强某些致病菌对宿主细胞的粘连，避免被白细胞吞噬，并有抗补体（一种酶）的作用8.外壁层：位于肽聚糖层的外部，包括脂多糖，外膜蛋白，磷脂9.脂多糖（Lps）的功能：①革兰氏阴性菌的致病物质-内毒素的物质基础②与磷壁酸相似，吸附二阶阳离子以提高这些离子在细胞表面浓度③由于Lps的多样决定革兰氏阴性菌表面抗原决定簇的多样性④噬菌体吸附位点10.古生菌（古细菌或谷菌）：细胞壁含假肽聚糖11.革兰氏染色的原理：革兰氏阳性菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透明性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，放保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上，呈紫色革兰氏阴性菌：肽聚糖层薄，交联疏松乙醇脱色不能使其结构放缩，其脂含量高，乙醇酱脂溶解，缝隙大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，呈红色12.缺壁细菌：L型细菌和支原体可遗传13.聚β-羟丁酸颗粒（PHB）：①概念：为碳源储存物②功能：储存能量，碳源，可降低渗透压③功用：具有无毒，可塑和易降解等特点，可用于造医用塑料，克服白色污染14.质粒特点：①可自我复制，稳定遗传，对生存不是必要的，复制与染色体分开但同步进行②不同质粒携带不同遗传信息③无质粒细菌可通过结合，转化，转导方式获得，不能自发产生15.细菌DNA：放射自显影下2-4μm长的E.coli其DNA长1-1.4μm无组蛋白与精氨亚精氨结合，故有稳定性和柔软性16.细菌细胞的特殊结构：①糖被：a.包被与某些细菌细胞壁外的一层厚度补丁的透明胶状物质b.种类：微荚膜：＜0.2μm，与细胞表面牢固结合荚膜：＞0.2μm，与菌表面结合松弛振荡离心可得粘液层：与菌表面结构松弛，可向菌的周围扩散，增大粘性菌胶团：多个细菌共有一个荚膜c.荚膜的观察：光镜，复染色，特殊染色d.荚膜的组成：糖被的成分一般是多糖，少数是蛋白质或多肽也有多太多糖复合型17.鞭毛：生长在某些细菌表面的长丝状，波曲的蛋白质附属物18.鞭毛的结构：由鞭毛丝，钩状鞘基本组成19.鞭毛的活动：靠鞭毛丝旋转而动动力为原质子的力，与膜内外质子浓度差和电势决定20.“栓菌”实验：即设法把单毛菌鞭毛的游离端用相应抗体牢固“栓”在载玻片上然后再光镜下观察细胞行为，结果该菌只能不断打转而未作伸缩运动，故旋转轮正确21.性菌毛：性状介于菌毛和鞭毛之间，传递遗传信息22.芽孢：某些细菌长到一定阶段以后，细胞内形成的圆或卵圆形的内生孢子，是对不良环境有较强抵抗力的休眠体23.芽孢特性：①多层膜结构通透性很差②组分：水分小（5%），DPA，富含疏水性角蛋白③抗性强：热，酶解，辐射，药物④休眠体新陈代谢几乎停止，一个芽孢产生一个个体24.芽孢意义：①鉴定价值：不同芽孢的大小，位置，形状不同②作为无菌标准25.伴胞晶体：少数芽孢杆菌在形成芽孢的同时会在孢子旁形成一颗菱形，方形或不规则形的碱溶性蛋白质晶体。
