环境工程微生物学实验

环境工程微生物学实验讲义环境工程微生物学实验讲义实验一光学显微镜的使用一、目的要求1、熟悉普通光学显微镜的构造及其使用方法。

2、了解油镜的原理，并掌握其使用方法。

3、学习生物图的绘制方法二、实验内容学习普通光学显微镜的使用方法，学会判断是否需要使用油镜，学习理解，学习怎样使用和利用光圈，反光镜，调整反差，使视野达到最好的观察效果。

学习使用油镜观察微生物标本示范片。

观察的示范片有，细菌三型涂片、葡萄球菌涂片、枯草芽孢杆菌涂片、褐球固氮菌涂片、八叠球菌涂片、猪链球菌涂片，青霉、曲霉示范片等。

三、实验器材显微镜、各种示范片、香柏油、二甲苯、擦镜纸等。

四、方法步骤1 用低倍镜对（调）光，使视野明亮。

2 选择要观察的标本片，首先在低倍镜观察（寻找观察目标）。

3 高倍镜观察（选取理想的观察目标）。

4 油镜观察：高倍镜观察后――上升镜筒（或者是下调载物台）――油镜转至正下方，在载玻片上加一小滴香柏油――小心地下降镜筒使镜头浸在油里――用粗螺旋将镜筒（载物台）缓慢上升，寻找目标（物象）――用细螺旋调节，使物象清晰――观察记录。

5 观察完毕。

上升镜筒（或者是下调载物台），转动物镜转换器，使油镜物镜偏位。

用干净擦镜纸擦去镜头上的油迹，再取一张擦镜纸醮上二甲苯擦去镜头上残留的香柏油，最后再用一张干净的擦镜纸擦去残留在镜头上的二甲苯。

6 将显微镜各部分还原至进实验室时模样。

五结果与思考1 绘图记录观察结果（以细菌三型为例）细菌三型涂片观察放大倍数目×10 物×100_细菌三型涂片观察放大倍数目×10 物×1002 油镜完毕后，镜头应如何处理?六、讲解时的注意事项：1、本次实验为学生第一次进入微生物实验室，因此在开始实验时必须向学生交代实验室的一些规章制度及注意事项。

2、对显微镜的介绍从原理到各部件到使用都务必详细，包括使用过程中应该注意的事项，尽量减少学生用坏仪器的几率。

3、一定要详细讲解观察时视野内的反差调节，提高学生的实验效率。

《环境工程实验Ⅰ》（环境工程微生物）教学大纲一、基本信息1二、教学目标及任务环境工程微生物学实验是一门操作技能较强的课程。

通过一系列的实验操作，强化学生无菌操作的理念，使学生掌握微生物实验的基本方法。

通过观察不同的实验材料，进行各项实验操作、分析实验结果、完成实验作业等环节，配合课堂教学，以验证和巩固课堂讲授的微生物学的理论知识。

本课程支撑环境工程专业毕业要求1、2、4和6。

三、学时分配教学课时分配四、实验内容及教学要求实验一:光学显微镜的使用及细菌形态的观察实验目的：学会光学显微镜的使用方法，观察细菌的形态。

本实验教学要求：了解光学显微镜的构造，理解光学显微镜成像原理，掌握显微镜的操作和保养方法。

观察细菌的个体形态，学会生物图的绘制。

本实验重点、难点：显微镜的操作和保养方法，油镜观察细菌的形态，生物图的绘制。

实验二:细菌的简单染色和革兰氏染色实验目的：学会细菌染色的操作技术。

本实验教学要求：了解细菌的图片及染色在微生物实验中的重要性，理解革兰氏染色的原理，掌握细菌染色的操作技术。

本实验重点、难点：掌握微生物的一般染色和革兰氏染色方法。

实验三:真菌的形态观察实验目的：学会用显微镜观察真菌的个体形态本实验教学要求：进一步熟悉和掌握显微镜的操作方法，掌握制作水浸片的方法，观察真菌（酵母、霉菌）的个体形态。

本实验重点、难点：学习制作水浸片的方法，观察真菌的个体形态实验四:微生物细胞的计数和测量实验目的：学会用血球计数板对微生物计数本实验教学要求：了解血球计数板的结构，理解血球计数板计数计微生物的原理和掌握计数方法。

学习测微技术，测量细胞（酵母菌）的大小。

本实验重点、难点：测微技术原理，测量细胞（酵母菌）的大小实验五:培养基的配制，器皿的包扎，灭菌方法实验目的：学习培养基的配制及灭菌方法本实验教学要求：了解配制培养基的过程，理解配制培养基的原理，掌握配制方法。

学会各种各种器皿的包扎，灭菌技术。

本实验重点、难点：培养基配制的原理及方法。

1.使用油镜时，为什么要先用低倍镜观察油镜指的是为了减少高倍镜的折光,在物镜和玻片之间滴上松节油等.所以油镜其实就是给高倍镜物镜和玻片之间加油.而所有高倍镜之前都先要用低倍镜观察，是因为低倍镜下好找目标。

低倍镜放大10倍，高倍镜放大40倍，油镜放大100倍，先用低倍镜、高倍镜，既便于找到目标，又方便调焦距。

要使显微镜视野明亮，除采用光源外，还可以采取哪些措施?加大聚光器光圈，同样设置下低倍物镜比高倍物镜视野亮把材料切薄一点透光较好使用滤光片,增加反差和清晰度。

向上调节聚光器。

2.怎样区别活性污泥中的几种固着型纤毛虫大多数情况下，会遇到钟虫、柄纤毛虫、累枝虫等。

三种虫形态均类似钟的形状，钟虫每个都是独立的，相互之间没有连接;柄纤毛虫类似钟虫，量很大，只是在根部汇聚在一根柄上，可以理解成一根柄上分出很多个钟虫；而累枝虫就像是树，一根柄上分出很多个柄，然后很多个柄上又分出很多个“钟虫”。

用压滴法制作标本片时注意什么问题4.涂片为什么要固定，固定时应注意什么问题如果不固定的话你进行染色后水洗去多余染料的同时会将菌体一并冲走注意的就是不要弄死细胞咯！不知道你用什么方法,如果是用火，那就是不要烧死它们,用载玻片背面靠近火源，过两次就好。

Over一般我都是用酒精灯的外焰烤的但是要注意温度.温度过高挥出现变形细胞。

温度已载玻片接触手背,手背不觉得烫为宜.加热只水分蒸发完全后，再在酒精灯外焰上通过两到三次,就成了。

革兰氏染色法中若只做1～4步，不用番红染液复染，能否分辨出革兰氏染色结果？为什么?革兰氏染色在微生物学中有何实践意义？细菌大多可以按照革兰氏法划分,在杀菌方面自然管用，还有实验方面,比方说，实验需要G阳性细菌作为研究材料，如果最后需要杀死细菌获取什么代谢产物，已知是G阳性细菌，那就有目的地杀除了,摒除了盲目手段。

6.培养基是根据什么原理配制成的？肉膏蛋白胨琼脂培养基中的不同成分各起什么作用是按照微生物生长的营养需求及其相互比例配制的.牛肉膏和蛋白胨提供微生物生长所需的蛋白质、核酸和维生素、无机盐（微量元素），琼脂只为培养基提供半固体的支撑结构，不提供微生物生长的营养。

培养基的配制和灭菌细菌的纯种分离、培养接种技术及菌落形态的观察姓名：***学号：************ 课程名称：环境工程微生物实验一、实验目的1、熟悉玻璃器皿的洗涤与灭菌前的准备工作。

2、了解微生物培养基的基本原理，掌握配制、分装培养基的方法。

3、学习各类物品的包装、配制、灭菌技术。

4、从环境中分离、培养微生物，掌握一些常用微生物和纯化微生物的方法。

5、学会几种接种技术。

6、平板菌落计数。

7、抗Cu菌的筛选。

8、观察实验分离出来的几种细菌的个体形态及与其相应的菌落的形态特征。

9、通过观察和比较细菌，放线菌，酵母菌及霉菌的菌落形态，达到初步鉴别微生物的能力。

二、实验原理1、培养基原理：培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的需要，有碳、氢‘氧、氮、磷、硫、钾、钙、钠、镁、铁、等微量元素和水，按一定的体积分数配制而成。

调整适合的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。

由于微生物的种类及代谢类型的多样性，因而培养基放入种类也多，他们的配方及配制法也有所差异，但一般的配置过程大致相同。

本实验采用肉汤蛋白胨培养基、查氏培养基（筛选霉菌）、高氏1号淀粉琼脂培养基（筛选放线菌）。

2、灭菌原理:本次实验中培养基、移液枪头等采取加压蒸汽灭菌法。

加压蒸汽灭菌器是能耐一定压力的密闭金属锅，加压灭菌的原理在于提高灭菌器内的蒸汽温度来达到灭菌的目的。

培养皿等玻璃器皿用具采用干热灭菌法，另外还有膜过滤灭菌法。

接种时对接种针等采用灼烧灭菌。

3、分离纯化原理：本实验使用的平板表面涂布法，是把聚集在一起的群体分散成能在培养基上长成单个菌落的分离方法。

此法加样量不宜太多，只能在0.5mL以下，培养时起初不能倒置，现正置一段时间等水分蒸发后倒置。

平板划线法也可以分离从而获得单一菌落以观察其形态特征。

4、微生物的接种原理：接种就是将一定量的微生物在无菌操作条件下转移到另一无菌的并适合该菌生长繁殖所需的培养基中的过程。

本次实验采取斜面接种法、穿刺接种法，使用到的接种工具是接种环，接种针。

环境工程微生物学大实验实验报告实验十二环境中四环素抗性细菌的分离鉴定组员：吴富华，张真，，金炯震环5205一、实验目的1、自行设计实验方案从环境中分离四环素抗性菌的实验方法。

2、分离获得四环素抗行菌。

3、检测并分析获得的菌株的四环素抗性强弱。

4、学会通过16SrDNA鉴定实验获得的菌株的种属。

二、实验要求1、自行设计实验证明富集培养是否成功。

2、观察并记录实验现象，作适当的分析或解释。

3、获得至少一株四环素抗性菌（不要多于三株），并进行短期保存。

4、根据实验视频指导和说明，完成菌株基因组DNA纯化，16SrDNA的PCR扩增。

5、比较各组筛选出的抗性菌抗性强弱。

6、各组间交流实验过程和实验结果，分析抗性菌抗性的影响因素。

7、养成良好的实验习惯和团队合作的作风，并给出评价。

三、实验器材1、培养基（营养琼脂，琼脂粉，酵母膏，胰蛋白胨，氯化钠），提供四环素，琼脂糖，灭菌条件。

2、室温和37℃恒温培养箱和摇床。

3、离心机，漩涡震荡仪，PCR仪，电泳仪，紫外成像分析仪。

四、实验步骤（略）1、配置富集培养基和四环素梯度培养基2、四环素抗性菌富集培养3、单菌株筛选4、四环素抗性强弱比较5、单菌株基因组DNA的提取6、16SrDNA的PCR扩增7、PCR产物电泳实验内容、具体操作单菌株基因组DNA提取（5.17进行步骤1-4；5.18进行步骤5-10；5.20进行步骤11）（1）选择5.8号挑选的菌株进行DNA提取实验；（2）取200μL菌液转移到1.5mL灭过菌的EP管中，10000rpm常温离心1min，去掉上清（得到菌细胞）。

菌细胞可在-20℃冻存。

（3）如果是革兰氏阳性菌，取100μL，1mg/mL的溶菌酶/TE加到菌液中，漩涡震荡混匀，37℃温浴1h（溶菌步骤）。

（4）用取液器（移液枪）缓慢吸加500μL（革兰氏阳性）或600μL（革兰氏阴性）裂解缓冲液和20μL，20mg/mL蛋白酶K（proteinase K），充分混匀，50℃过夜（完全裂解细菌并降解所有蛋白质）。

《环境工程微生物学》课程实验教学大纲［适用对象］环境科学专业［实验学时］18学时一、实验教学任务和目的《环境工程微生物学实验》是与《环境工程微生物学》理论课程密切结合的一门重要的、非单独设课的环境科学专业基础实验课程。

课程学习的目的是让学生掌握本课程基本技能操作，为学习基础环境科学有关课程和为学生将来从事环境相关工作和科研工作奠定基础。

二、实验教学基本要求(1)训练学生掌握环境微生物学最基本的操作技能。

(2)加深理解课堂讲授的某些环境微生物学理论。

(3)培养学生观察、思考、分析问题、解决问题和提出问题的能力。

(4)培养学生实事求是、严肃认真的科学态度，以及敢于创新的开拓精神。

(5)培养学生树立勤俭节约、爱护公物的良好作风。

三、实验教学内容实验一细菌的人工培养法1、实验目的和要求(1)掌握各种培养基接种技术。

(2)熟悉细菌在培养基中的生长现象；认识菌落、菌苔。

(3)了解常用的液体、固体和半固体培养基的成分、制备方法和用途。

2、实验内容(1)培养基的配制，摆斜面，倒平板(2)分离培养法(平板划线法)(3)斜面培养基接种方法(4)液体培养基接种法(5)半固体培养基的接种法(6)观察细菌在培养基上的生长情况：细菌各种培养物的示教；描述细菌在各种培养基上的生长现象；观察大肠杆菌与痢疾杆菌在半固体培养基上的现象。

普通琼脂平板，普通琼脂斜面，半固体培养基，肉汤培养基，接种环，接种针，酒精灯，大肠杆菌24小时斜面培养物等。

4、实验学时3学时实验二细菌的分布及消毒与灭菌1、实验目的和要求掌握高压蒸气灭菌器的使用方法及注意事项；证实热力和紫外线的杀菌效果；证实常用消毒剂的消毒效果；证明细菌在自然界和正常人体的存在，为在微生物学实践中树立严格的“无菌观念”提供依据。

2、实验内容(1)高压蒸气灭菌法(2)干热灭菌器(干烤箱)(3)紫外线的杀菌实验(4)热力对芽胞及繁殖体的作用(5)药物敏感性试验(6)化学消毒剂的杀菌的作用------ 手指皮肤消毒前后的细菌学检查(7)空气中的细菌检查(8)污水和净水中的细菌数检查(9)皮肤表面的细菌检查3、实验仪器普通琼脂平板、1%高层琼脂，血琼脂平板，无菌试管，无菌吸管，无菌平皿，灭菌棉签，咽拭子，酒精灯等。

以“微”见大，为世界疫情提供“中国方案”：《环境工程微生物实验》课程思政优秀案例一、课程基本情况《环境工程微生物学实验》是环境工程专业的一门专业实验必修课，也是环境工程专业的主干课程之一。

通过课程学习，使学生系统地了解微生物学方面的基础理论，掌握微生物在环境中所处的地位以及在废水、固废处理中的重要作用及利用微生物进行生化处理的技术技能，从而进一步利用微生物为环境治理工程服务。

课程思政的目标是培养学生的科学素养、奉献精神和爱国主义精神等，塑造学生正确的世界观、人生观和价值观。

二、课程思政教学设计思路（一）认知目标（1）掌握光学显微镜的结构、光学原理及操作与使用方法；（2）熟练制备培养微生物所需要的培养基的方法；（3）掌握环境中微生物生长的测定方法；（4）掌握从环境中分离和培养微生物的方法和技能。

（二）能力目标（1）通过光学显微镜的使用，培养学生微生物方面的基本技能；（2）通过培养基的制备及微生物数量的测定，使学生具备测定微生物的基本能力；（3）学生掌握从环境中分离和培养微生物的方法和技能，培养科学探究能力，养成良好的科研思维能力。

（三）情感目标（1）学生通过使用显微镜实验观测微生物的形态，从而了解我国是最早利用微生物的国家之一，树立民族自信心；（2）通过微生物分离、培养与测定实验，使学生了解我国著名微生物家汤飞凡对微生物学发展发展的贡献以及钟南山院士对新冠病毒控制的杰出贡献，激发学生学习微生物专业的热情，培养爱国主义情怀和良好的科学素养。

（3）通过细菌数量的测定实验，引出2021年新冠肺炎病毒在我国和国外的控制情况及我国控制新冠病毒的方法和措施为国外提供很好的借鉴，中国为世界问题的解决提供方案，增强民族自豪感。

三、教学方法与教学过程课程导入直接影响学生的学习兴趣，好的课程导入对学生学习的积极性和主动性有着重要的影响。

在环境工程微生物实验中，可以采用情境教学法导入课程。

如以大家比较熟悉的新冠肺炎病毒为例，教师先展示新冠肺炎病毒的图片，组织学生讨论：“怎样才能观察到新冠肺炎病毒，实验室如何分离、检测新冠肺炎病毒，以及如何防治新冠肺炎病毒？”，从而引出本课程的学习目的和重要性。

环境工程微生物学操作实验报告-范例培养基的配制和灭菌细菌的纯种分离、培养接种技术及菌落形态的观察姓名：张世凡学号：201330480123课程名称：环境工程微生物实验一、实验目的1、熟悉玻璃器皿的洗涤与灭菌前的准备工作。

2、了解微生物培养基的基本原理，掌握配制、分装培养基的方法。

3、学习各类物品的包装、配制、灭菌技术。

4、从环境中分离、培养微生物，掌握一些常用微生物和纯化微生物的方法。

5、学会几种接种技术。

6、平板菌落计数。

7、抗Cu菌的筛选。

8、观察实验分离出来的几种细菌的个体形态及与其相应的菌落的形态特征。

9、通过观察和比较细菌，放线菌，酵母菌及霉菌的菌落形态，达到初步鉴别微生物的能力。

二、实验原理1、培养基原理：培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的需要，有碳、氢‘氧、氮、磷、硫、钾、钙、钠、镁、铁、等微量元素和水，按一定的体积分数配制而成。

调整适合的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。

由于微生物的种类及代谢类型的多样性，因而培养基放入种类也多，他们的配方及配制法也有所差异，但一般的配置过程大致相同。

本实验采用肉汤蛋白胨培养基、查氏培养基（筛选霉菌）、高氏1号淀粉琼脂培养基（筛选放线菌）。

2、灭菌原理:本次实验中培养基、移液枪头等采取加压蒸汽灭菌法。

加压蒸汽灭菌器是能耐一定压力的密闭金属锅，加压灭菌的原理在于提高灭菌器内的蒸汽温度来达到灭菌的目的。

培养皿等玻璃器皿用具采用干热灭菌法，另外还有膜过滤灭菌法。

接种时对接种针等采用灼烧灭菌。

3、分离纯化原理：本实验使用的平板表面涂布法，是把聚集在一起的群体分散成能在培养基上长成单个菌落的分离方法。

此法加样量不宜太多，只能在0.5mL以下，培养时起初不能倒置，现正置一段时间等水分蒸发后倒置。

平板划线法也可以分离从而获得单一菌落以观察其形态特征。

4、微生物的接种原理：接种就是将一定量的微生物在无菌操作条件下转移到另一无菌的并适合该菌生长繁殖所需的培养基中的过程。

环境工程微生物学实验项目培养基的制备与灭菌环境中的微生物大肠杆菌的平板划线分离法微生物的染色与鉴定平板菌落计数法水污染控制工程实验项目离心泵性能测定板框过滤实验干燥实验环境化学实验项目水体中总磷、生产率和叶绿素含量的测定天然水体中氨氮的测定底泥中铬的简单状态鉴别底质对汞的吸附作用大气中氮氧化物的测定碱液吸收气体中的二氧化硫电位法测定茶叶中的微量氟食品添加剂的检测-软饮料中防腐剂和色素的检测环境监测实验项目目恃比色法测定水中色度分光光度法测定水中浊度纳试剂比色法测定氨氮酸性高锰酸钾指数碘量法测定水中溶解氧的）的测定化学需氧量（CODC r碘量法测定硫化物4-氨基安替比林分光光度挥发酚的测定重量法测污水中石油类大气中总悬浮颗粒物的测定甲醛缓冲溶液吸收-盐酸副玫瑰苯胺分光光度法测定大气中二氧化硫城市交通噪声测量环境仪器分析实验项目气相色谱定量分析-内标法测定邻二甲苯中杂质利用气-固色谱法分析O2，N2，CH4混合气体高效液相色谱法甲苯含量的测定离子色谱法测定废水中的阴离子火焰原子吸收法测定水中钙，镁的含量原子发射光谱法测定废水中的重金属气相质谱法测定气体组分利用红外光谱法进行化合物结构鉴定有机化合物的吸收光谱及溶剂效应差值吸收光谱法测定废水中微量苯酚邻二氮菲分光光度法测定铁Ce4+氧化还原滴定法测定Fe2+的含量NaOH电位滴定法测定H3PO4的含量及H3PO4的各级酸离解常数自动电位滴定法测定水中Cl- I-的含量空气污染控制工程实验项目粉尘密度的测定粉体粒径分布的测汽车尾气中总悬浮物、硫氧化物及氮氧化物的测定环境空气中硫氧化物及氮氧化物的测定室内空气中总悬浮物及VOCs的测定旋风除尘试验袋式除尘试验吸附法去除气体中的VOCs的实验及模拟生物法净化VOCs的实验及模拟水污染控制工程实验项目自由沉淀絮凝沉淀实验气浮离子交换实验活性炭吸附实验水充氧实验废水可生化性测定厌氧污泥活性的测试污泥脱水性能测定环境工程试验教学大纲实验教学大纲代号课程名称英文名称学期安排任课教师教材或参考书0902105 环境工程微生物学实验Experiments of EnvironmentalEngineering Microbiologcy第五学期白卯娟自编实验讲义0902106 环境监测实验Professional experiments forenvironmental monitoring第六学期鲁风芹环境监测实验刘0902107 水污染控制工程实验Water Pollution ControlEngineering第六学期路明义水污染控制工程0902108 大气污染控制工程实验0902215 环境化学实验Experiments of EnvironmentalChemistry第五学期周贵忠自编实验讲义0902216 环境仪器分析实验Apparatus Analysis ofEnvironment第四学期孙玉焕自编实验讲义。

实验三培养基的制备和灭菌技术一、实验目的（一）熟悉灭菌前的准备工作。

（二）掌握培养基和无菌水的制备方法。

（三）掌握高压蒸气灭菌技术。

二、实验仪器、材料（一）培养皿（直径90 mm）10套，试管（15 mm×150 mm）5支，（18 mm×180mm）5支，移液管（10 mL）1支，（1 mL）2支，锥形瓶（250 mL）2个，烧杯（500 mL）1个，玻棒2支，玻璃珠30粒。

（二）纱布、棉花、牛皮纸（或报纸）。

（三）精密pH试纸6.4～8.4、10％HCl、10％NaOH。

（四）牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、或市售营养琼脂培养基、蒸馏水。

（五）高压蒸气灭菌锅、烘箱、煤气灯或酒精灯。

三、实验内容（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．洗涤玻璃器皿在使用前必须洗涤干净。

培养皿、试管、锥形瓶等可用洗衣粉加去污粉洗刷并用自来水冲净。

移液管先用洗液浸泡，再用水冲洗干净。

洗刷干净的玻璃器皿自然晾干或放入烘箱中烘干、备用。

2．包装（1）移液管的吸端用细铁丝将少许棉花塞入构成l～1.5 cm长的棉塞（以防细菌吸入口中，并避免将口中细菌吹人管内）。

棉塞要塞得松紧适宜，吸时既能通气，又不致使棉花滑人管内。

将塞好棉花的移液管的尖端，放在4～5 cm宽的长纸条的一端，移液管与纸条约成30°夹角，折叠包装纸包住移液管的尖端（图7A)，用左手将移液管压紧，在桌面上向前搓转，纸条螺旋式地包在移液管外面，余下纸头折叠打结。

按实验需要，可单支包装或多支包装，待灭菌。

（2）用棉塞将试管管口和锥形瓶瓶口部塞住棉塞的制作：按试管口或锥形瓶口大小估计用棉量，将棉花铺成中心厚，周围逐渐变薄的圆形，对折后卷成卷，一手握粗端，将细端塞入试管或锥形瓶的口内，棉塞不宜过松或过紧，用手提棉塞，以管、瓶不掉下为准。

棉塞四周应紧贴管壁和瓶壁，1不能有皱折，以防空气微生物沿棉塞皱折侵入。

棉塞插入2／3，其余留在管口（或瓶口）外，便于拔塞。

实验一 光学显微镜的操作及细菌、放线菌和蓝细菌个体形态的观察Ⅰ、显微镜的使用一、实验原理微生物学研究用的显微镜通常有低倍物镜(16mm ，10⨯)高倍物镜(4mm ，40-45⨯)和油镜(1.8mm ，95-100⨯)三种。

油镜常标有黑圈或红圈，它是三者中放大倍数最大的。

使用油镜时，油镜与其他物镜的不同是载玻片与接物镜之间，不是隔一层空气，而是隔一层油质，称为油浸系。

这种油常选用香柏油，因香柏油的折射率n ＝1.52，与玻璃基本相同。

当光线通过载玻片后， 可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射。

如果玻片与物镜之间的介质为空气，则称为干燥系；当光线通过玻片后，受到折射发生散射现象，进入物镜的光线显然减少，这样视野的照明度就减低了(图Ⅰ-1)。

利用油镜不但能增加照明度；更主要的是能增加数值口径。

因为显微镜的放大效能由其数值孔径决定的。

所谓数值孔径，即光线投射到物镜上的最大角度(称镜口角)的一半正弦，乘上玻片与物镜间介质折射率所得的乘积，可用下列公式表示：2sin α⋅=⋅n A N式中 数值孔径=⋅A N介质折射率=n最大入射角，即镜口角=α数值孔径的大小又是衡量一台显微镜分辨力强弱的依据；分辨力是指显微镜能辨别物体两点间最小距离的能力。

A N ⋅=2λ能辨别两点间最小距离式中 λ=光波波长由上述可知若n 值和α角越大则N ·A 越大或光波波长越短，则显微镜的分辨力越大(图Ⅰ-2)。

一些物质的折射率：水 1.33 玻璃 1.52 空气 1.0 香柏油 1.515。

二、实验器材1、仪器显微镜；2、材料巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)标本片，香柏油，二甲苯，擦镜纸。

三、操作步骤1、取镜显微镜是光学精密仪器，使用时应特别小心。

从镜箱中取出时，一手握镜臂，一手托镜座，放在实验台上。

在使用时要特别小心。

使用前首先要熟悉显微镜的结构和性能，检查各部零件是否完全合用，镜身有无尘土，镜头是否清洁。