黄芪对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎小鼠的治疗作用及机制研究_孙宇111
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黄芪多糖对小鼠免疫功能影响的研究石永芳【期刊名称】《山东化工》【年(卷),期】2017(46)3【摘要】将40只小鼠随机分为正常对照组、氢化可的松(HC)致免疫功能低下组,正常黄芪多糖组,HC加黄芪多糖组.对照组注射生理盐水0.8 mL/只,实验组注射黄芪多糖0.8 mL/只,连续注射7~14 d.检测到黄芪多糖显著增加小鼠淋巴细胞转化率、溶血素生成、胸腺和脾脏重量,表明黄芪多糖可显著提高小鼠免疫力.%40 mice were randomly divided into normal control group,hydrocortisone (HC) induced by low immune function group,normal group HC plus astragalus polysaccharides,astragalus polysaccharide group.The control group was injected with saline 0.8mL/,the experimental group was injected with Astragalus Polysaccharide 0.8mL/,continuous injection 7 to 14days.Detection of Astragalus Polysaccharide significantly increase the lymphocyte transformation rate,hemolysin,weight of thymus and spleen,showed that Astragalus polysaccharide can significantly improve the immune system of mice.【总页数】2页(P17-18)【作者】石永芳【作者单位】菏泽学院药物科学与技术系,山东菏泽 274015【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.黄芪多糖对猪免疫功能影响的研究进展 [J], 刘瑞生2.黄芪多糖对猪免疫功能影响的研究进展 [J], 隋昀原;沈国顺3.黄芪多糖对肠道免疫功能影响的研究进展 [J], 韩立丽;王建发;王凤龙;韦旭斌4.黄芪多糖对小鼠免疫功能影响的研究 [J], 卢炜;顾蓓蓓;卢劲晔;陆江5.基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨黄芪多糖对肺癌小鼠免疫功能的影响及对Th1/Th2的调节作用 [J], 刘艳玲;袁娟;郭敏;张延锋;陆君君;曹巍因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
黄芪的抗疲劳作用及其机制研究进展概述:黄芪,又称黄耆,是一种中药常用的补益药材。
自古以来,黄芪就被广泛应用于治疗疲劳和提高人体免疫力的领域。
众多研究表明,黄芪具有抗疲劳的功效,并且其机制也逐渐被揭示。
本文将对黄芪的抗疲劳作用及其机制的研究进展进行探讨。
一、黄芪的抗疲劳作用的实验证据1. 体外实验体外研究发现,黄芪提取物中的活性成分能够显著延长小鼠肝脏组织的存活时间,同时减轻肝细胞的损伤。
此外,黄芪对心肌细胞的保护作用也得到很好的验证。
这些实验证据表明,黄芪具有一定的抗疲劳作用。
2. 动物实验黄芪的抗疲劳作用不仅在细胞水平上得到了验证,在动物实验中也取得了一系列的实验结果。
研究发现,黄芪可以提高实验动物在游泳、跑步等负荷性运动中的耐力,并缓解运动后的肌肉疲劳。
此外,黄芪还可以增加实验动物外周血红细胞的数量、提高肝糖原和肌肉糖原的含量,从而延缓动物疲劳的发生。
3. 人体实验对黄芪的抗疲劳作用进行人体实验的研究也已经取得了初步的成果。
一些临床试验表明,黄芪能够显著改善人体疲劳状态,提高人的身体抵抗力,缓解身体疲劳程度并促进身体康复。
然而,目前人体实验研究还相对较少,需要进一步的验证和深入研究。
二、黄芪抗疲劳机制的研究进展1. 抗氧化作用黄芪中的多种活性成分具有明显的抗氧化活性,可以中和体内自由基,减少氧化应激对机体的损伤。
抗氧化作用可以降低乳酸产生,减少疲劳物质的堆积,从而延缓疲劳的发生。
2. 免疫调节作用黄芪中的多糖类成分能够增强机体的免疫力,促进淋巴细胞的增殖和活化,提高免疫细胞的杀伤能力。
免疫调节作用可以减轻体内炎症反应,促进疲劳物质的代谢,从而改善疲劳状态。
3. 能量代谢调节作用黄芪中的多种成分可以促进肝糖原和肌肉糖原的合成,提高能量供应,延缓疲劳的发生。
同时,黄芪还可以提高氧耗和有氧代谢能力,增加肌肉中线粒体的数量,进一步提高能量代谢效率。
4. 神经调节作用黄芪中的活性成分可以调节神经递质的合成和释放,影响中枢神经系统的功能。
黄芪注射液对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的保护作用及机理研究黄芪注射液对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的保护作用及机理研究引言:脊髓缺血再灌注损伤是一种常见的严重影响神经功能恢复的病理过程,其发病机制尚未完全明确。
黄芪作为中草药,据传可以改善神经功能。
本文旨在探讨黄芪注射液对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的保护作用及机理。
方法:1. 实验动物选取30只成年雄性SD大鼠,随机分为3组(n=10),分别为正常对照组、模型组和黄芪注射液治疗组。
2. 确立脊髓缺血再灌注损伤模型:通过丝线结扎模拟脊髓缺血,再松开结扎使脊髓再灌注。
3. 黄芪注射液治疗:黄芪注射液通过腹腔注射给予治疗组大鼠,剂量为每千克体重0.1g。
4. 分别在缺血再灌注72小时后,采集大鼠血液和脊髓样本。
结果:1. 黄芪注射液治疗组大鼠在模型组相比,神经功能评分较高,脊髓水肿程度减轻,神经细胞凋亡指数降低。
2. 治疗组大鼠脊髓组织中乳酸脱氢酶(LDH)活性和丙二醛(MDA)含量显著降低,且超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著升高,比模型组明显改善。
3. 治疗组大鼠血液中炎性因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量明显降低,抗炎因子白细胞介素-10(IL-10)的含量显著增加。
讨论:黄芪注射液具有保护大鼠脊髓缺血再灌注损伤的作用,可能与其多种活性成分有关。
黄芪能够抑制氧自由基的生成,减轻组织氧化损伤,提高抗氧化能力;同时通过调节炎性因子,抑制炎症反应,减少神经细胞损伤;此外,黄芪也可能通过促进血流灌注和微循环,提高脊髓缺血区域的供氧能力,减轻缺血再灌注损伤。
结论:黄芪注射液对大鼠脊髓缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其机理可能与抗氧化、抗炎和改善微循环等多方面因素有关。
进一步的研究可以探讨黄芪注射液的适宜剂量和治疗时机,为临床治疗脊髓缺血再灌注损伤提供更有效的方案综上所述,黄芪注射液在治疗大鼠脊髓缺血再灌注损伤中表现出明显的保护作用。
黄芪多糖增强小鼠免疫功能的实验研究王庭欣王庭祥吴广臣刘峥颢夏立娅【摘要】目的研究黄芪多糖对小鼠免疫功能的影响。
方法采用ConA诱导小鼠淋巴细胞转化试验及迟发性变态反响试验测试黄芪多糖(Astragalus Polysaccharide APS)对小鼠细胞免疫功能的影响;采用抗体生成细胞检测及半数溶血值实验测试黄芪多糖对小鼠体液免疫的影响;采用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验测试黄芪多糖对小鼠非特异性免疫的影响。
结果黄芪多糖能明显进步小鼠的足跖肿胀度、脾脏生成抗体细胞数、半数溶血值及巨噬细胞吞噬功能,黄芪多糖对小鼠淋巴细胞增殖才能无明显影响。
结论黄芪多糖对正常小鼠的细胞免疫、体液免疫及巨噬细胞功能均有明显的增强作用。
【关键词】黄芪;小鼠;多糖;免疫Abstract:ObjectiveTo investigate the effect of astragalus polysaccharide (APS) on immunological function in mice.MethodsBy lymphocyte transformation test and delayed type hypersensitivity (DTH), the effect of APS on celluar immunity was evaluated. By determining plaque forming cells (PFC) and HC50, the effect of APS on humoral immunity was studied. Abdomen macrophages of mice devour chicken red cell was used to asscessphagositosis of peritoneal macrophages.ResultsCompared with the normal control group, APS could promote DTH, PFC, HC50 and phagositosis of peritoneal macrophages,but had no effect on lymphocyte proliferation.ConclusionAPS can stimulate the immunological function in mice in different ways.Key words:Astragalus; Mice; Polysaccharide; Immunity黄芪属豆科多年生草本植物,其主要含有多糖、谷甾醇、棕榈酸、胆碱、黄酮类等营养素,能镇静中枢神经系统,去除体内脂质过氧化物,具有较强的抗氧化作用[1,2]。
黄芪多糖对小鼠免疫功能的药理学实验研究范文彤【期刊名称】《中国当代医药》【年(卷),期】2018(025)003【摘要】目的考察黄芪多糖多次给药(14~17 d)对小鼠体液、细胞和非特异性免疫功能的影响.方法选取雄性昆明种小鼠作为研究对象,按体重随机分为8组,分别为空白对照组(考虑到纤维素本身也是多糖,为了排除其作用,特设空白组对照,下同)、正常对照组、模型组、灵芝多糖1000 mg/kg、黄芪多糖125、250、500、1000 mg/kg剂量组,每组12只,每天早8:00禁食,下午14:00根据体重灌胃给药,给药量为0.4 ml/20 g,空白组不给药或溶媒,正常和模型组给予同体积的0.5%的CMC,给药2h后按3g/只动物的量喂食.共给药15 d,于给药第10天除空白和正常对照组外其余所有小鼠右侧腋部均接种S180荷瘤细胞,于末次给药24 h后小鼠眼眶取血,分离血清,将血清稀释3倍后测定IgG沉淀环直径,与标准IgG相对照,计算样品中IgG的相对含量,试验结果进行统计学处理.结果黄芪多糖125、250、500和1000 mg/kg能明显增加环磷酰胺和荷瘤所致免疫低下小鼠的血清IgG含量.黄芪多糖500 mg/kg和1000 mg/kg能明显增加放射损伤的小鼠血清IgG含量;2,4-二硝基氟苯皮肤接触致敏后,1周左右再次接触可以引起T细胞介导的迟发性变态反应,黄芪多糖250 mg/kg和500 mg/kg可增加2,4-二硝基氟苯引起的正常小鼠的迟发性变态反应,黄芪多糖125 mg/kg和500 mg/kg可增加2,4-二硝基氟苯引起的环磷酰胺所致免疫低下小鼠的迟发性变态反应;黄芪多糖250 mg/kg和500 mg/kg能明显恢复环磷酰胺所致免疫低下小鼠的吞噬细胞功能,500 mg/kg可使小鼠碳廓清指数K和吞噬指数α显著增加.结论黄芪多糖具有明显增加体液免疫的功能,对T淋巴系免疫细胞的功能有一定的促进作用,且能显著提高小鼠的非特异性免疫功能.【总页数】5页(P10-14)【作者】范文彤【作者单位】天津怀仁制药有限公司,天津300385【正文语种】中文【中图分类】R543.5【相关文献】1.黄芪多糖注射液对免疫功能低下小鼠血清IL-4和IFN-4影响的实验研究 [J], 颜培宇;于晓红;张德山;闻杰2.黄芪多糖对小鼠免疫功能影响的实验研究 [J], 高旭;李丽芬;刘斌钰3.黄芪多糖对创伤应激小鼠细胞免疫功能影响的实验研究 [J], 刘俊英;曾广仙;代丽红;熊金蓉;李杏娟;韩泽民;廖弈华;沈关心4.基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨黄芪多糖对肺癌小鼠免疫功能的影响及对Th1/Th2的调节作用 [J], 刘艳玲;袁娟;郭敏;张延锋;陆君君;曹巍5.黄芪多糖增强小鼠免疫功能的实验研究 [J], 王庭欣;王庭祥;吴广臣;刘峥颢;夏立娅因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
黄芪多糖对大鼠脊髓损伤后运动功能和脊髓病理的效果郑利强;伍亚民;石永江;江琼【摘要】目的:观察黄芪多糖对脊髓损伤后运动功能和脊髓病理变化的影响。
方法70只成年Sprague-Dawley大鼠分为正常组(n=10)、损伤组(n=30)和治疗组(n=30),损伤组和治疗组内再分为7 d、14 d、28 d三个亚组。
损伤组和治疗组均采用Allen法(10 g×25 mm)损伤大鼠T10脊髓。
造模成功后,治疗组术后每天腹腔注射黄芪多糖注射液10 mg/kg。
术后7 d、14 d、28 d,各亚组分别行BBB评分,HE染色观察细胞形态,Nissl染色观察尼氏小体,铬花青染色观察脱髓鞘情况。
结果术后各时间点,治疗组BBB评分高于损伤组(P<0.05)。
损伤组术后7 d、14 d损伤部位以坏死组织为主,空洞开始形成;28 d时空洞基本形成,空洞周围有致密瘢痕。
治疗组各时间点损伤部位坏死较轻,14 d、28 d时空洞面积缩小。
损伤组术后7 d出现脱髓鞘,并逐渐加重;术后28 d,损伤中心出现空洞。
治疗组各时间点脱髓鞘及髓鞘排列疏松情况有所改善。
损伤组术后7 d尼氏小体开始融合,14 d时融合加重,28 d时几乎完全融合或溶解。
治疗组各时间点尼氏小体融合程度较轻。
结论黄芪多糖能减轻脊髓损伤后病理损害,促进运动功能改善。
%Objective To observe the effect of astragalus polysaccharide on motor function and pathology after spinal cord injury in rats. Methods Seventy adult Sprague-Dawley rats were selected as normal group (n=10), injury group (n=30) and treatment group (n=30), and the injury group and the treatment group were divided into 7 days, 14 days, 28 days subgroups. The injury group and the treatment group were modeled with Allen's mode at T10 (10 g×25 mm). Th e treatment group was injected with astragalus polysaccharide 10 mg/kg per day af-ter injury. They were ratedwith Basso-Beattie-Bresnahan (BBB) scores 7 days, 14 days and 28 days after injury, while the morphology was observed with HE staining, Nylon body was observed with Nissl staining, and myelin sheath was observed with eriochrome cyanine stain-ing. Results The BBB score was significantly higher in the treatment group than in the injury group at each time point (P<0.05). There was a large number of necrotic tissue in the injured cords and cystic cavity began to form 7 and 14 days after injury. Cystic cavity formed basical-ly and surrounded with dense scar 28 days after injury. The necrosis and cystic cavity alleviated in the treatment group at each time point. Demyelination and myelin sheaths loose were found 7 days after injury, and aggravated with the time. There was a cystic cavity in trauma center 28 days after injury. The demyelination and myelin sheaths loose relieved at each time point in the treatment group. Nissl bodies be-gan to coalesce 7 days after injury, and aggravated 14 days after injury, coalesced completely 28 days after injury. Nissl body coalesced alle-viatively in the treatment group at each time point. Conclusion Astragalus polysaccharide may reduce the damage and promote the recovery of motor function after spinal cord injury in rats.【期刊名称】《中国康复理论与实践》【年(卷),期】2016(022)011【总页数】7页(P1269-1275)【关键词】脊髓损伤;黄芪多糖;运动功能;病理;大鼠【作者】郑利强;伍亚民;石永江;江琼【作者单位】重庆医科大学,重庆市400016;第三军医大学大坪医院野战外科研究所三室,创伤烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆市400042;解放军后勤工程学院门诊部,重庆市401331;重庆医科大学,重庆市400016【正文语种】中文【中图分类】R651.2[本文著录格式] 郑利强,伍亚民,石永江,等.黄芪多糖对大鼠脊髓损伤后运动功能和脊髓病理的效果[J].中国康复理论与实践,2016,22(11):1269-1275.CITED AS:Zheng LQ,Wu YM,ShiYJ,etal.Effectof astragalus polysaccharide onmotor function and pathology after spinal cord injury inrats[J].Zhongguo Kangfu Lilun Yu Shijian,2016,22(11):1269-1275.脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是一种严重致残性疾病,导致损伤平面以下感觉运动功能障碍。
黄芪对小鼠免疫功能的调节作用邵启祥;徐芬红【期刊名称】《镇江医学院学报》【年(卷),期】1994(004)004【摘要】中药黄芪常作为免疫调节剂应用于肿瘤等疾病的辅助治疗。
本文采用黄芪小鼠体内外试验,研究了黄芪对ConA、LPS活化淋巴细胞的增殖调节、循环免疫复合物清除和IL-2的诱生和抗体产生的调节。
结果表明体内注射黄芪能增强ConA刺激的T淋巴细胞的增殖反应和IL-2的诱生,亦能加强CIC的清除,增强抗体的产生,但对LPS刺激引起的B细胞增殖无明显促进作用。
体外试验表明低剂量黄芪(5%)能增强ConA刺激引起的T细胞增殖和IL-2产生,中等剂量(10%)和高剂量(20%)黄芪反而抑制ConA刺激引起的T细胞增殖和IL-2的产生,对LPS刺激引起的B细胞增殖作用三个剂量的黄芪均无明显促进作用。
【总页数】2页(P261,264)【作者】邵启祥;徐芬红【作者单位】不详;不详【正文语种】中文【中图分类】R282.710.5【相关文献】1.黄芪总提物对小鼠免疫功能调节作用研究 [J], 许杜娟;陈敏珠2.黄芪多糖对布鲁菌S2株感染小鼠免疫功能的调节作用 [J], 王晓曼;陈志磊;王少毅;许振国;杨瑞强;张树全;曹志然3.黄芪注射液对荷结肠癌小鼠免疫功能低下的正向调节作用研究 [J], 樊占兵;李明;魏双江;秦彩娟;肖庆旺4.黄芪蛰虫口服液对氢化可的松免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用 [J], 侯春兰;董蕾;张新雅;王晓辉5.基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨黄芪多糖对肺癌小鼠免疫功能的影响及对Th1/Th2的调节作用 [J], 刘艳玲;袁娟;郭敏;张延锋;陆君君;曹巍因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
中药黄芪对实验性脊髓损伤的神经保护作用刘世清;马永刚;彭昊;卫爱林【期刊名称】《中国骨伤》【年(卷),期】2003(016)008【摘要】目的探讨黄芪(AR)对脊髓继发性损伤的保护作用,并与甲基强地松龙(MP)进行对照.方法 Wistar大鼠60只,以改良Allen氏法制备脊髓打击伤模型,随机分为三组.测定不同药物处理后4 h、8 h、24 h脊髓组织线粒体SOD活性和MDA浓度以及血液流变学改变;光镜观察用药后1、2周黄芪对病理学改变的影响,同时进行联合行为学评分(CBS).结果黄芪处理后脊髓组织MDA浓度明显低于各时相点对照组,SOD活性显著升高(P<0.01),与MP治疗组无明显差异(P>0.05).血液流变学指标也有所改善.病理检查发现黄芪治疗组髓鞘受损轻微,组织赦免范围增大.结论黄芪治疗可以缓解脊髓损伤后的脂质过氧化反应,改善微循环,从而发挥脊髓保护作用.【总页数】3页(P463-465)【作者】刘世清;马永刚;彭昊;卫爱林【作者单位】武汉大学人民医院骨科,湖北,武汉,430060;武汉大学人民医院骨科,湖北,武汉,430060;武汉大学人民医院骨科,湖北,武汉,430060;武汉大学人民医院骨科,湖北,武汉,430060【正文语种】中文【中图分类】R68【相关文献】1.黄芪注射液对大鼠急性脊髓损伤的神经保护作用 [J], 张洁妹;唐扣明2.褪黑素对大鼠实验性脊髓损伤的神经保护作用 [J], 胡爱民;张治国;侯志贞;曾益华;许瑞佳;尹延伟3.黄芪对大鼠实验性脊髓损伤的神经保护作用 [J], 任宪盛;冷向阳;杨有庚;徐莘香4.苯妥英钠对实验性脊髓损伤的神经保护作用研究 [J], 黎铁伟;刘兴波;刘明5.中药蒲黄对脊髓损伤大鼠的神经保护作用 [J], 王卫国;徐展望因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
黄芪对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎小鼠的治疗作用及机制研究孙宇1王水英1黄梦汶2景园雅2谢昆2程晓东1,21.上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院(上海200437)2.同济大学生命科学与技术学院(上海200092)【摘要】目的:观察中药黄芪对实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE )小鼠的治疗作用,并探讨其免疫调节机制。
方法:建立C57BL /6小鼠EAE 模型,通过5级临床症状评分观察黄芪对EAE 小鼠的治疗作用;HE 染色观察黄芪对EAE 小鼠脊髓炎症细胞浸润的影响;CCK-8法检测脾脏髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG )多肽MOG 35-55特异性T 细胞增殖情况;ELISA 法检测脾脏MOG 35-55特异性T 细胞培养上清液中IFN-γ、TNF-α、IL-17、IL-4的水平。
结果:黄芪能够有效抑制EAE 小鼠的临床症状,减轻中枢神经系统的炎性反应,抑制MOG 35-55特异性T 细胞增殖及IFN-γ、TNF-α、IL-17的分泌,促进IL-4的分泌。
结论:黄芪能够有效抑制中枢神系统的自身免疫反应,这种作用与其抑制MOG 35-55特异性T 细胞增殖,减少Th1、Th17型细胞因子分泌,促进Th2型细胞因子分泌相关。
【关键词】黄芪;实验性自身免疫性脑脊髓膜炎;T 细胞增殖;细胞因子【中图分类号】R285.5【文献标志码】A【文章编号】1008-861X (2013)04-0058-05[基金项目]国家自然科学基金资助项目(81173630);上海高校特聘教授“东方学者”资助项目(2008-037);上海市人才发展基金资助项目(2009-022);上海市“浦江人才”计划项目(PJ-2011-0001059)[作者简介]孙宇,女,在读博士生,主要从事中医药治疗自身免疫性疾病的临床及基础研究。
[通讯作者]程晓东,教授,博士生导师。
Email :xcheng@tongji.edu.cn多发性硬化症(multiple sclerosis ,MS )是一种中枢神经系统的自身免疫性炎性疾病,以髓鞘脱失、炎症、神经胶质增生、不同程度的轴索变性和进行性神经功能紊乱为主要特征[1]。
该病病因及发病机制尚未明确,无特效治疗药物。
实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(experimental autoimmune encephalomyelitis ,EAE )是多发性硬化的动物模型,广泛应用于自身免疫性疾病的实验研究,已成为目前国际上公认的生物医学研究领域中最经典和最成熟的动物模型[2]。
MS /EAE 的发病机制中,CD4+T 细胞介导的免疫反应起着主要作用[3]。
黄芪是一味重要的健脾益气类中药,具有免疫调节作用,在临床中应用黄芪复方治疗多发性硬化效果明显[4]。
本研究以EAE 作为多发性硬化的动物模型,探讨黄芪对EAE 小鼠的治疗作用,并研究其中枢神经免疫药理学机制,为临床治疗提供生物学依据。
1材料和方法1.1实验材料1.1.1动物8 9周龄SPF 级雌性C57BL /6小鼠共44只,体质量18 20g ,购于中国科学院上海实验动物中心,生产单位许可证号为SCSK (沪2007-0005),动物合格证号为SYSK (沪2009-0022);饲养于同济大学实验动物中心。
1.1.2药物与试剂黄芪饮片购于上海雷允上药业有限公司(批号:YT2012090911);髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein ,MOG )MOG 35-55多肽由上海吉尔生化有限公司合成;完全弗氏佐剂(CFA ),Sigma 公司生产;结核分枝杆菌H37Ra (TB ),BD 公司生产;百日咳毒素(PT ),Calbiochem 公司生产;Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒,Dojindo 公司生产;干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL )-17和IL-4的鼠ELISA 试剂盒,R&D 公司生产;RPMI 1640培养基和胎牛血清,Hyclone 公司生产。
1.2EAE 模型制备和分组及药物干预将小鼠随机分为3组:正常组11只、EAE 组21只及黄芪组21只。
将EAE 组及黄芪组小鼠进行EAE 模型制备,MOG35-55溶于PBS至终浓度2mg/ml,在CFA中加入TB至终浓度5mg/ml,MOG35-55溶液与CFA按1ʒ1进行乳化。
在免疫当日(day0)乙醚麻醉小鼠,于背部脊柱两侧分两点注射MOG35-55乳化剂(200μg/只),腹腔注射PT(200ng/只);在造模后第2天(day2)再次腹腔注射PT(200ng/只)。
以小鼠开始出现尾部瘫痪症状为EAE发病起始,即模型制备成功。
药物干预:黄芪组予黄芪水煎液按生药量20g·kg-1·d-1(相当于成人用量100g·kg-1·d-1)灌胃给药,于造模前7d开始干预直至观察终点,正常组、EAE组予等量蒸馏水。
1.3观察指标1.3.1临床症状评分从免疫当日(day0)起对各组小鼠进行一般情况监测,记录体质量及临床症状评分。
评分标准采用国际通用的5级评分法[5]:0分,无异常表现;1分,尾部瘫痪;2分,后肢轻度瘫痪或步态不稳;3分,后肢完全瘫痪;4分,四肢完全瘫痪;5分,濒死状态或死亡。
1.3.2脊髓组织病理学检查于小鼠发病高峰期(day16)每组取5只取材,腹腔注射10%水合氯醛麻醉,待小鼠完全麻醉后打开胸腔,左心室灌注生理盐水25ml,然后用4%中性甲醛灌注固定,解剖分离脊髓组织,置于4%中性甲醛固定24h。
石蜡包埋切片,进行HE染色观察脊髓组织炎性细胞浸润情况。
1.3.3MOG35-55特异性T细胞增殖检测、细胞因子检测脾淋巴细胞的分离和培养:分别于发病起始(day11)、发病高峰期(day16)将小鼠颈椎脱臼处死,无菌取脾脏,PBS冲洗,转移至70μm细胞过滤筛上,无菌注射器芯研磨,并用PBS冲洗。
收集细胞悬液,离心弃上清,红细胞裂解液裂解红细胞,PBS清洗,用RPMI1640完全培养基重悬细胞,调整细胞密度至2ˑ106/ml,将其接种在96孔板及24孔板中,加入MOG35-55至20μg/ml,置于37ħ、5%CO2培养箱中培养。
MOG35-55特异性T细胞增殖检测(CCK-8法):上述96孔板培养68h后,每孔加入10μl CCK-8试剂,继续培养至72h,用酶标仪测定吸光度(波长450nm)。
细胞因子检测:上述24孔板培养48h后取出,收集细胞培养上清液,-20ħ冻存。
按照ELISA试剂盒说明书检测上清液中IFN-γ、TNF-α、IL-17、IL-4水平。
上述实验每组每个时间点各取3只小鼠。
1.4统计学方法数据以xʃs表示,两组间比较采用Student’s t检验,多组间比较采用方差分析。
P<0.05为差异具有统计学意义。
2结果2.1对EAE小鼠临床表现的影响EAE组小鼠发病起始于免疫后第11天,发病高峰出现于免疫后第16天,16d后病情逐渐进入缓解期;与EAE组相比,黄芪组小鼠的发病起始及发病高峰时间有所延迟,分别为第13天和第18天。
表明黄芪对缓解EAE小鼠的临床症状具有一定预防和治疗作用。
见图1。
图1黄芪组及EAE组的临床症状评分在EAE模型诱导后,各组小鼠的体质量均有所下降,免疫后第3天起体质量逐渐缓慢上升;临近发病起始体质量开始显著下降,并且随病情加重而持续减轻,经过发病高峰期后逐渐缓解。
在第11天和第16天,EAE组和黄芪组小鼠的体质量差异有统计学意义(P<0.05)。
见图2,表1。
图2黄芪组及EAE组的体质量变化趋势表1不同发病时间两组小鼠体质量比较(n=10,xʃs,g)组别11d16d21dEAE组18.48ʃ1.1617.67ʃ0.8418.79ʃ0.69黄芪组19.76ʃ1.1518.80ʃ1.0619.49ʃ1.26t值0.01800.01140.1157P<0.05<0.05>0.052.2对EAE 小鼠中枢神经系统炎症反应的影响在第16天取脊髓组织,HE 染色显示正常组小鼠脊髓组织结构完整有序。
EAE 组小鼠脊髓组织内炎性细胞浸润,主要侵犯白质区;在整条脊髓中以颈椎和腰椎膨大部位更加明显,可见大量炎性细胞的浸润。
黄芪组脊髓中的炎性细胞浸润明显减轻。
见图3。
A ,B :正常组;C ,D :EAE 组;E ,F :黄芪组图3小鼠脊髓病理图(HE 染色;A 、C 、E ,ˑ40;B 、D 、F ,ˑ100)2.3对MOG 35-55特异性T 细胞增殖的影响在不同发病时期,即第11天和第16天,与正常组相比,EAE 组MOG 35-55抗原刺激下MOG 35-55特异性T 细胞增殖明显(P <0.01);与EAE 组比较,黄芪组MOG 35-55特异性T 细胞增殖均被抑制(P <0.01)。
见表2。
2.4对MOG 35-55特异性T 细胞产生细胞因子水平的影响MOG 35-55抗原刺激下,与正常组相比,EAE 组小鼠MOG 35-55特异性T 细胞分泌IFN-γ、TNF-α、IL-17及IL-4水平显著升高。
在第11天和第16天,黄芪组MOG 35-55特异性T 细胞所分泌的IFN-γ及IL-17水平显著降低,IL-4的水平显著升高;而黄芪组TNF-α水平仅在第11天显著降低。
见表3。
表2不同发病时期各组小鼠MOG 35-55特异性T 细胞增殖情况(A 450值)(n =3,x ʃs )组别11d16d正常组0.3024ʃ0.05670.3086ʃ0.0445EAE 组1.7637ʃ0.0989**1.3439ʃ0.0888**黄芪组0.8082ʃ0.0541##0.6378ʃ0.0008##注:与正常组比较,*P <0.05,**P <0.01;与EAE 组比较,#P <0.05,##P <0.01。
下同。
表3不同发病时期各组小鼠MOG 35-55特异性T 细胞分泌细胞因子水平(n =3,x ʃs ,pg /ml )时间组别IFN-γTNF-αIL-17IL-411d正常组EAE 组黄芪组40.33ʃ13.0921.83ʃ8.8211.04ʃ6.705.00ʃ1.91197.61ʃ17.23**183.46ʃ21.29**181.83ʃ16.20**43.11ʃ8.81*106.52ʃ18.25##112.31ʃ18.06#120.91ʃ20.12#67.11ʃ7.83#16d正常组39.74ʃ12.6220.63ʃ6.5411.86ʃ5.104.93ʃ1.71EAE 组133.41ʃ9.13**145.39ʃ23.89**157.74ʃ15.54**58.20ʃ12.30*黄芪组92.82ʃ15.74#110.56ʃ19.57114.60ʃ20.35#125.27ʃ9.49##3讨论EAE /MS 的发病机制,多数学者认为易感因素引起了机体自身免疫反应,外周血的淋巴细胞、单核细胞被激活,活化的T 细胞可以表达多种黏附分子与血管壁上的受体结合,血管内皮细胞也可表达选择素与T 细胞结合,趋化因子也可促使T 细胞进入CNS[6]。