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病理制片过程的几点体会标签：病理制片；脱水；浸蜡；包埋在病理技术领域中，HE染色是最常规和最基本的操作技术，一张优质的HE 切片，是病理诊断、教学和科研中一个不可缺少的环节。
病理制片技术是病理学的一项重要组成部分。
一位病理技术工作者，首先要求能懂得组织的石蜡包埋和HE染色的机制，熟练石蜡切片和HE染色技术的操作。
几十年来，病理技术有了较大的发展，新设备的问世使病理技术工作者大大减少了繁琐的手工操作，新技术的应用充实了病理诊断的方法，提高了诊断的准确性。
尽管如此，最常规、最基本、最重要的仍然是石蜡切片和HE染色，因为它的质量与病理诊断的准确性休息相关。
一张优质的HE染色切片，可以清晰地观察到各种不同的组织结构作为病理诊断上的确切依据。
制备一张优质的HE染色切片，绝非仅指染色，它包括很多方面：1 固定固定应及时。
采用10％的甲醛溶液固定组织，组织固定是制片的关键。
新鲜的组织经过适当的固定，才能保持细胞和组织的固有形态，否则，细胞内的各种酶在缺氧时将细胞内的蛋白质分解破坏，导致组织自溶。
因此，手术切除的组织标本一定要及时固定。
固定液的选择、固定液的量、组织块的大小、固定的时间及固定温度相当重要的。
Mallory曾经说过：“若是你能取到新鲜的组织能切片不超过2～3 mm的切块和记得固定液是10倍于组织块的总体积，你的诊断的正确性已得到了80%的保证。
”固定的作用可见一斑。
2 脱水脱水要彻底。
脱水常用乙醇，要由低浓度逐级至高浓度，逐步置换组织内水分。
一般组织内含有大量水分，所以在石蜡包埋前，必须脱去组织内的所有水分。
脱水剂的选择，经与水在任何比例下能混为一体，使组织内的水分逐步减少，脱水必须干净、彻底，组织脱水是关键，脱水不尽，影响以后的透明和浸蜡。
如脱水不尽的蜡块，切片后组织一经与空气接触，即干燥收缩，蜡块切面出现凹陷，甚至裂缝，切片时虽勉强切片，而染色时切片容易脱落。
保留的蜡块，遇到下次再切片时就会相当困難。
病理组织切片制作技术病理组织切片制作技术病理组织切片常用的制作方法有三种。
即石蜡切片法，冰冻切片法和火棉胶切片法。
以石蜡切片法为代表，切片的基本制作过程是：组织取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→组织包埋→组织切片→展片附贴→切片脱蜡→染色→脱水→染片透明→封固。
以上基本过程是互相联系的，任何一环节出现问题，都将使整个切片制作归于失败。
因此应细致、耐心、认真负责，并事先做好计划安排。
一、取材采取病料，要刀剪锐利，剪切时不可挤压，扯拉病料，以防人为损伤。
切取的工具要清洁。
采取病料越新鲜越好，一般不超过死后24小时。
应选择病变部与可疑病变部切取，切取时要由表及里，有浅入深并包括周围正常组织一部分。
特殊病料应根据器官的结构特点切取。
管状，囊状和皮肤组织应注意垂直切取（横切）。
带有薄膜的组织，要防止切时薄膜分离和脱落。
切取组织块大小，以1.5×1.5×0.3厘米为宜，最厚不宜超过0.5厘米。
组织块病变一面应平整光滑，另一面可不平整，以便包埋时辨认。
切取后，放入事先准备好的装有固定液的磨口玻璃广口瓶中，并做好标记。
二、固定固定的目的是迅速将组织细胞杀死，使细胞中的蛋白质，糖，脂肪等凝固，从而保持与活组织相似的结构状态。
材料取下后，应迅速固定。
固定液数量应为病理组织块的5到20倍。
由于一般把组织块浸入固定液后数小时，固定液渗入组织液的深度只达2到3厘米。
因此，可以放置冰箱内固定，使组织内酶失去作用，细菌也能停止滋生。
最常用的固定液是10%的福尔马林溶液：使用时，用40%的甲醛饱和水溶液10毫升，加水90毫升配成。
三、冲洗固定后的组织块，应将固定液洗去。
一般均用流水（自来水）冲洗12到24小时左右。
及时冲洗尚有停止固定的作用，防止固定过度，有利于制片染色。
冲洗时如不方便用流水冲洗，也可用较大容器盛装水浸洗，每隔相当时间换水一次。
整个浸洗时间比流水冲洗应稍长一些。
酒精固定的组织材料不需冲洗。
组织病理切片制作流程1.取材取材的好坏，直接影响切片质量。
取材时，要有一把锋利的取材刀，在切割组织时要避免取材刀来回拖拉，切取的组织块厚薄要均匀，一般厚度以0.2 ～0.3cm为适，较容易发脆的组织如甲状腺、肝脏、血块、淋巴结、大块癌组织等可适当厚一点，而脂肪组织、肺组织、纤维性肿瘤、平滑肌瘤等致密的或试剂不易渗入的组织应取薄一些；淋巴结应修掉两侧球冠，并尽量剔除周围的脂肪组织。
在取材中还应十分注意组织内是否有缝线或骨组织，如碰到不可避免的钙化组织，应与技术室讲明，在切取纤维组织、肌肉、组织、胃肠道时，应注意纤维及肌肉的走向，取材时尽可能按与纤维平行走向切取为佳。
组织取材的具体要求如下：(1)材料新鲜：人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，所以，取材组织愈新鲜愈好，以保证原有的形态学结构。
(2)组织块大小：较理想的组织块体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。
(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。
夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。
(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。
(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。
纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。
(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。
为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
病理制片技术——常用特殊染色一、六胺银染色1．第一步准备工作：配制六胺银染液，将10％硝酸银2．5ml倒入干净的染色缸内，加入2％硼砂5ml，液体呈乳白色，再加入3％乌洛托品40ml，染液逐渐呈透明状。
2．第二步染色过程：事先把温箱调至60℃备用，切片经脱蜡至水，用1％过碘酸氧化10 min，水洗，然后切片放人六胺银染液放置60℃温箱1 h，染真菌时间要相对短一些，一般情况下肉眼看到染液变色，切片呈棕色时从温箱取出染色缸，倒掉染液，自来水冲洗1min，用0．25％氯化金调色1 min，水洗后，用3％硫代硫酸钠染5min,水洗，用苏木精染液浅染，水洗、分化、冲水返蓝，伊红染10 s，最后经脱水、透明、封固。
3．图示结果：基底膜与毛细血管间质性物质、真菌呈棕黑色，核呈蓝色。
4．注葸事项(1)掌握染色温度和时间，如60℃染1 h，80℃染30～40 min。
(2)真菌类染色时间相对要短，染色时间过长，切片染色过深，可用分色剂处理。
二、黏液卡红染色1．第一步准备工作：配制黏卡染液，将称好的胭脂1 g、氢氧化铝1 g倒入瓶内，加入5 0％L醇100 rnl混合摇匀，再加入氯化铝0．5g，水浴加温逐渐煮沸并搅动液体，使其充分溶解(注意染液容易外溅)，数分钟后，染液由红色变成透明深紫红色，冷却后将液体倒入量筒，再加入50％乙醇至原量，过滤，放人冰箱备用。
2．第二步染色方法：染液使用时原液与蒸馏水比例为1：4稀释.切片厚5 um，脱蜡至水，经苏木精染色2 min、水洗、分化、返蓝后进人黏卡液染色2 h以上，染液可以重复使用多次，但要适当延长染色时间．切片水洗后，脱水、透明、封固。
3．图示结果：黏液为红色，胞核为蓝色．4．注意事项(1)染液使用时比例为1份黏卡原液，4份蒸馏水。
(2)用酶消化对照染色特异性很大，消化时间为20 min。
(3)配制黏卡染液时要防止液体溅出。
三、石碳酸品红染色1．第一步准备工作(1)配制盐基性品红饱和液：盐基性品红溶于乙醇内。
甲状腺穿刺细胞学液基制片流程甲状腺穿刺细胞学液基制片是一种常见的病理学检查方法，可用于评估甲状腺细胞的形态学特征和诊断甲状腺疾病。
以下是制片流程的详细描述：1.患者进入手术室，取患者的甲状腺穿刺液样本。
The patient enters the operating room, and a sample of thyroid aspiration fluid is taken from the patient.2.将甲状腺穿刺液样本倒入培养皿中。
Pour the thyroid aspiration fluid sample into a culture dish.3.加入液基固定液，使细胞固定在载玻片上。
Add liquid-based fixative to immobilize the cells on a glass slide.4.载玻片放置在离心机中，进行离心处理。
Place the glass slide in a centrifuge for centrifugation.5.注射已离心的细胞沉淀，形成细胞颗粒在载玻片上。
Inject the centrifuged cellular sediment, formingcellular particles on the glass slide.6.将载玻片在特定的温度和湿度条件下干燥。
Dry the glass slide under specific temperature and humidity conditions.7.用甲状腺穿刺细胞蘸液染色，增强形态学特征的观察。
Stain the thyroid aspiration cells with a dye to enhance observation of morphological characteristics.8.在显微镜下观察载玻片，注意细胞的形态学特征。
Observe the glass slide under a microscope, paying attention to the morphological characteristics of the cells.9.检查细胞的大小、形状、核仁及细胞浆等细胞学指标。
组织病理切片的制作流程1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。
取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。
(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。
(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。
夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。
(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。
(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。
纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。
(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。
为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
2．固定(1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。
故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。
苏木素-伊红染色（HE）切片制作HE制片是病理实验室最基本的方法，是各种制片技术最基础的部分。
它包括组织固定、脱水、透明、包埋、切片、漂片、烤片、脱蜡、染色、脱水、透明和封固等程序。
HE染色是既基本又是十分重要的工作。
HE染色的好坏直接影响病理医生的正确诊断，而HE染色质量好坏与HE制片的每一步骤关系都十分密切。
任一步骤出问题都会直接影响最终的染色结果。
现将方法介绍如下：（一）组织处理(全封闭自动组织脱水机处理程序)：（1）福尔马林Ⅰ：30min（2）福尔马林Ⅱ：30min（3）70%乙醇：30min（4）85%乙醇：30min（5）95%乙醇：1h（6）95%乙醇：1h（7）无水乙醇Ⅰ：1.5h（8）无水乙醇Ⅱ：1.5h（9）二甲苯Ⅰ：30min（10）二甲苯Ⅱ：45min（11）石蜡Ⅰ：30min（12）石蜡Ⅱ：30min（13）石蜡Ⅲ：1h（14）石蜡Ⅳ：1h程序中除二甲苯外余试剂处理中均加温至37摄氏度并加压。
石蜡选用熔点为58摄氏度的硬蜡。
组织包埋：包埋时将60℃的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺序排列好，使切面朝下。
（二）切片切片厚约4~8μm，通常厚约4μm，细胞小而密的组织如淋巴结，可以切3μm，而细胞疏的组织，如脑组织可切5-8μm。
将切片在45℃左右水浴中展开，展开程度以组织完全摊平为准。
切片至65-75℃烘箱中烤片10min，一般时间越长效果越好，以切片紧贴于载玻片上呈半透明状为佳。
常规组织块捞片1-2张，胃肠镜小组织以3×3排列共捞9个。
（三）染色步骤：（1）环保液脱蜡5min（2）环保液脱蜡5min（3）无水乙醇2min（4）95%乙醇2min（5）85%乙醇2min（6）流水冲洗切片10min（7）抖干切片水分入苏木素10min（8）流水稍洗（9）2%盐酸乙醇分化10-30秒，根据组织不同选择不同的分化时间（10）流水返蓝15min或稀氨水返蓝30秒（11）流水稍洗（12）入伊红20-60秒（13）流水稍洗（14）75%乙醇脱水兼分色数秒（15）85%乙醇脱水兼分色数秒（16）95%乙醇脱水5min（17）无水乙醇脱水5min（18）无水乙醇脱水5min（19）等量乙醇环保液脱水5min（20）环保液二甲苯3min（21）环保液二甲苯5min（22）中性树胶封片（四）对HE切片的质量要求：（1）切片完整、贴片恰当；（2）切片较薄和均匀；（3）无皱折；（4）无刀痕；（5）染色清晰、核浆分明、透明度好；（6）无固缩、龟裂、污染；（7）封胶适当、玻片清洁；（8）标签号码清楚，字体端正。
组织病理切⽚制作流程（完整版）组织病理切⽚的制作流程1．取材组织取材的⽅法是制作切⽚的⼀个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取⾃⼈体(外科⼿术切除标本、活检标本、⼫检标本)或动物，并确定取材的部位和⽅法。
取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有⼀定的部位和⽅法，不能任意切取组织作为制⽚材料，不然，⽆法达到教学、科研和临床诊断的⽬的，具体要求如下：(1) 材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，⼈体组织⼀般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。
⑵组织块的⼤⼩：所取组织块较理想的体积为2.0cm X 2.0cm X 0.3cm,以使固定液能迅速⽽均匀地渗⼊组织内部，但根据制⽚材料和⽬的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切⽚，其组织块可以薄取0.1?0.2cm即可，这样可以缩短固定脱⽔透明的时间，若制作教学切⽚厚取0.3?0.5cm,这样可以同⼀蜡块制作出较多的教学切⽚。
(3) 勿挤压组织块: 切取组织块⽤的⼑剪要锋利，切割时不可来回锉动。
夹取组织时切勿过紧，以免因挤压⽽使组织、细胞变形。
(4) 规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。
(5) 选好组织块的切⾯: 根据各器官的组织结构，决定其切⾯的⾛向。
纵切或横切往往是显⽰组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。
(6) 保持材料的清洁: 组织块上如有⾎液、污物、粘液、⾷物、粪便等，可⽤⽔冲洗⼲净后再放⼊固定液中。
(7) 保持组织的原有形态: 新鲜组织固定后，或多或少会产⽣收缩现象，有时甚⾄完全变形。
为此可将组织展平，以尽可能维持原形。
2．固定(1) ⼩块组织固定法：这是最常⽤的⽅法，从⼈体或动物体取下的⼩块组织，须⽴即置⼊液态固定剂中进⾏固定，通常，标本与固定液的⽐例为1:4?20，但组织块不宜过⼤过厚，否则固定液不能迅速渗透。
病理制片过程在临床病理科与组织学实验室,切片就是最重要得技术之一。
切片得质量不好,就无法对标本进行观察。
好得切片机只就是整个样品制备过程中得一个环节。
要制备一张好得切片,必须要将技术、知识与技巧进行完美得结合。
待切片样品得质量就是非常关键得因素,而样品质量有取决于前期处理工作得准确无误(例如:固定、巨检、脱水与包埋)必须选择正确得切片机型号以及合适得钢刀或一次性刀片。
切片必须根据实际应用出发,需要根据样品得类型、大小、期望得厚度认真考虑,还要兼顾操作者得便利性与舒适性。
要且出高质量得切片,经验丰富得操作者也就是必不可少得条件之一。
操作者必须懂得切片机得工作原理,能够对机器进行精细调节以达到最佳效果;并且能应对常见故障,消除一些潜在得切片问题;还可以运用恰当得切片技术,提高切片速度但不影响质量。
目前能做病理组织切片得地方很多,但要数上海舜田生物做出得病理切片相对质量上比较好,该公司有1位专业从事病理实验得老师及相关实验技术人员,积累了丰富得实验经验,所作出得切片及染色效果相当不错。
1 正确处理标本得重要性1、1 固定正确得固定就是病理制片技术中最重要得一步,这个步骤会影响到后续得每个环节。
如果固定不充分,样品得质量就会有欠缺。
组织必须在选定得固定剂中浸泡足够长得时间,使大分子保持固有形态。
正确得固定可以防止样品在脱水剂中发生变性以及后期处理步骤对于样品造成得损害。
固定不充分可能增加切片得困难,表现出过度收缩,并且会导致细胞核染色不足与/或胞核呈现“泡沫”状。
1、2巨检样品需要修切成薄片,并尽可能做到均匀,否则很难在切片机上切出好得片子。
如果样品太厚以至于无法渗透充分,则必须经过再次处理才能进行切片。
这样会影响样品得质量,更浪费时间。
从最初得步骤开始就正确处理会使后面得工作更简单,因此在大体取材得时候多花些功夫会为以后得步骤节省大量时间与精力。
备注:包埋盒塞满组织且组织过厚就无法很好得固定,后续得处理步骤也会效果欠佳。
1、3脱钙为了后期进行石蜡包埋切片,骨组织需要进行脱钙,钙必须被完全去除才能确保切片得完整,并且可以防止刀具得损坏。
在用酸溶液进行脱钙之前,骨组织必须经过彻底得固定,这样其中得软组织成分才能够被保护,且防止细胞核在酸得作用下被破坏,比如蛋白质水解作用。
1、4组织处理(脱水)组织经过一系列经典得处理过程,就是使原本亲水性得组织最终可以用疏水性得介质进行包埋,比如石蜡,火棉胶与绝大多数树酯。
备注:样品无论就是处理不充分还就是处理过度,都可能导致切片效果不理想。
脱水机旋转升降式脱水机目前仍有一些病理工作者使用,但就是全自动全封闭负压/压力式脱水机逐渐占据主导地位。
后者更有利于保护工作环境,更确保组织与试剂得充分作用,可以更有效缩短脱水时间。
一些更先进得全自动全封闭脱水机还可以自动记录试剂得使用情况,并对试剂进行智能监控与更换。
有一点非常重要,就就是处理过度对组织造成破坏绝对不亚于处理不充分造成得后果。
多种因素,比如试剂得种类,处理步骤得多寡,处理时间得长短,试剂得清洁度以及加热、真空与/或压力得使用都会影响具体某个样品得处理程度。
注:不同来源与不同大小得样品最好不要共用同一个处理程序,这样可以避免其中部分样品处理过度,而部分处理还不充分。
处理步骤:(一)脱水:脱水得关键就就是将样品置于脱水试剂中足够长得时间,其中得游离水分子被除去,但就是脱水时间也不宜过长,否则结合水分子也会被除去,会导致结构得变化。
而脱水时间过短致使水分还残留在样品中,就会导致包埋介质无法很好渗透入样品。
但就是,脱水过度会导致样品得皱缩变脆。
从过度脱水得组织块上切到得切片,一旦放入水中,切片就会膨胀最后破碎。
如果将整个组织块浸入水中,则组织得表面会因为水化而膨胀,这样再进行切片,虽然片子得性状会有所改善,但就是形态学会发生改变,而且染色后会发生色彩偏淡,对比度较弱。
最常用得脱水剂就是乙醇与变性酒精。
甲基酒精有毒性,会破坏肝脏中得甲醛,因此不太单独使用。
异丙醇就是乙醇最佳替代物,常规在微波处理中使用。
丁醇,剧毒,适用于较慢得组织处理过程,,而且多用在植物与动物组织。
无水酒精往往会含有水分,因此最好能检测一下试剂得纯度。
可以用液体比重计来测定,也可以将几毫升酒精滴入几毫升二甲苯或甲苯,如果混合液出现混浊就表示酒精中至少含有2％得水分。
(二)透明:用来进行透明得试剂与脱水剂以及包埋介质必须非常容易混合。
如果组织在透明剂中时间不够,那么组织就会发软甚至呈糊状。
略微延长时间并/或定期更换新鲜溶液可以避免透明不足得问题。
最常用得透明试剂如下:二甲苯:目前仍被广泛使用得一种芳香烃类化合物,能够快速替换组织中得乙醇。
在正确得脱水步骤后,芳香烃能够改变样品得折射率并使组织变透明。
当有水分存在得时候,二甲苯会变混浊,这时必须更换。
作用时间过长会导致组织变硬,尤其一些纤维、肌肉中枢神经系统或软骨组织更容易变硬。
如果发现组织在完成处理后变得太硬或发脆,请减少透明得时间或者寻找二甲苯替代物。
请注意,微波处理过程不需要使用透明剂,可以降低组织处理过度得风险。
二甲苯替代物:苯烯试剂或者短链脂肪酸碳氢化合物(烷烃)也得到了快速普及。
苯烯试剂不会像二甲苯那样使组织发生硬化,但就是前者更容易污染石蜡,因此石蜡需要更频繁得更换。
脂肪族化合物更容易渗透入组织,相对二甲苯而言,更容易去除组织中得脂肪。
然而,这类化合物不能接触到水分,因此在比较潮湿得地区很难使用。
若放弃二甲苯而使用其替代物,则重新调整处理得时间与溶液循环使用次数就显得尤为重要。
其她透明试剂例如苯,甲苯,氯仿与香精油得应用并不多见。
(三)浸蜡(石蜡渗透):石蜡就是石油裂解物得提取物,属于惰性得碳氢化合物得混合物。
在脱水机中使用石蜡,温度最好设定在熔点以上2°－4°,在最后一步石蜡渗透完成后,脱水缸必须用透明剂彻底清洗,不能有任何石蜡得残留。
负压可以增强渗透得效果,但就是在处理活检样本得时候,负压与加热都必须慎用。
另外还需要注意,即便有些脱水机增加到了4个蜡缸,总得渗透时间不能延长。
在确保渗透效果得基础上,组织在石蜡中停留得时间越短越好。
1、5石蜡包埋包埋就是将正确定位得组织包裹在一种介质中(此处以石蜡为例)然后固化。
每个实验室都会创建一套特有得处理方法,这就决定了样品在处理后得硬度。
用来包埋得石蜡必须能够与样品得硬度相匹配,这样才能确保进行切片得蜡块质地尽可能均匀。
另外有两点对于切片也至关重要:温度与样品得定位。
组织包埋机已被广泛使用,机器最大得优点就就是能够在每个步骤上都达到确得温控。
石蜡熔化并保持熔化状态得这个温度非常重要,必须确保一些添加剂完全溶解入石蜡。
模具,样品与石蜡之间得温差必须控制在几度以内,这样才能确保石蜡充分包围并支撑样品。
已经包埋得模具最好放置在包埋机得冷台上而不就是冰块上,这样可以使石蜡固化且不产生裂缝。
样品必须进行正确定位,从而保证正确得面被切到,但就是对于样品与刀刃接触得方式必须要经过考虑。
对于不同类型得样品,有很多种方法可供参考,用来正确定位样品。
1、5、1提高包埋效果得技巧有些石蜡特别适合用于渗透,有些更适合用于包埋,而有些都适合。
可以向供应商查询。
石蜡应当在高于其熔点2°C至4°C得温度下进行熔化与储存,这样其中得添加剂才能溶解入液体。
如果温度太低,其中一些较重得添加剂,比如聚合物就会沉在底部,然后最先流出。
熔化得石蜡在流出以前最好先进行搅拌。
设定包埋机得参数,确保石蜡流出口过夜得时候处于保温状态。
经常清空并清洗流出口。
始终确保流出蜡缸得石蜡就是过滤后得。
与以往得观点相反,将石蜡设定在高温(大约85°C)持续数星期,反而就是无害得。
尽管石蜡中添加了稳定剂,在氧化作用下,石蜡仍然会变质。
最初得征兆就就是颜色转变为草黄色直到黄色。
随后可能有异味产生。
选择尺寸恰当得模具,确保样品得四周都被石蜡包围,样品置于中心。
用压平装置或者弯头镊子得背部轻柔地将样品展平(易碎样品可能会被压碎)。
不要让样品在模具中撑太满。
大或硬得样品必须按照一定角度放置在模具中。
如果同一个样品包含多种不同密度得成分,则包埋得时候要确保样品最硬得部分必须最后接触到锋利得刀刃。
皮肤往往带有毛发,则包埋得时候必须保证毛发最后才被切到。
动物样本中,如果组织得来源不同但就是切片得性状相似则可以包埋在同一个蜡块中,比如肝脏与脾脏,脑组织与脊髓。
脱钙得骨组织必须包埋在“硬”石蜡中,样品最窄得一端必须位于蜡块得底边,从而在切片得时候,最先接触到刀刃。
(见下图)为了切片得稳定性,模具中必须添加足够得石蜡,确保包埋盒至少充盈一半。
如果石蜡漏出,那么在蜡块完全固化之前,必须添加石蜡。
1、5、2石蜡添加剂:绝大多数市售得用于组织学得石蜡就是含有添加剂得,目得在于改善切片得质量,改变硬度或者有利于连片。
常见得添加剂如下:蜂蜡－降低结晶得大小,增加粘度与附着力。
橡胶－降低脆性,增加粘度,有助于连片其她石蜡－降低结晶大小,使质地更平滑,可以在不改变熔点得前提下提高硬度。
塑料－增加硬度,对硬组织起到很好得支撑作用,得到更薄得切片DMSO(二甲基亚砜)－增强渗透(警告！－腐蚀性)1、5、3熔点与凝固点:绝大多数用于组织学得石蜡就是多种石蜡得混合物,这样可以确保得硬度与指定得凝固点。
“凝固点”就是制造商使用得术语,其实相当于“ 熔点”。
这个温度就是指在石蜡中插入小木棒后,石蜡开始在木棒上凝固得那个温度。
凝固点与熔点温度往往就是同一个温度或者在两个温度之间。
市售石蜡得特性往往根据其添加物与熔点得不同而有一定差异。
56°C 到58°C这个范围被常规实验室中普遍应用。
较低熔点得石蜡(50°C 到53°C)往往有其特殊得应用。
一般情况,低熔点得石蜡往往比较柔软,因此更适合包埋较软得组织。
进行较薄得切片比较困难,但就是很容易连片。
(可以选购质地较硬但就是熔点较低得石蜡。
)相反得,高熔点得石蜡一般比较硬。
对于质地较硬得样品,这样得石蜡有更好得支撑效果,而且很容易得到薄切片,但就是连片就比较困难了。
1、5、4样品夹具在切片以前,完成包埋得蜡块必须固定到切片机得样品夹具上。
夹持力必须确保样品能被完全固定,因此蜡块往往会附着在一个支持物上,比如塑料包埋框或者环行样品夹。
在不使石蜡变形且避免造成切片形状不规则得前提下,用最大得力量夹持支撑物。
请注意,石蜡块必须牢固附着于支撑物(例如,在包埋盒中必须有足够得石蜡充填),并且支撑物得背后必须接触实心物体得表面。
塑料最常用得支撑物就就是简单并独立使用得一次性包埋盒。
与市售得模具配套使用,蜡块得平面会很平整,且边缘能在X与Y轴向上保持平行。
用相同方法包埋得一批组织块不需要对表面进行调节或仅需要很小得调节。
