病理制片技1
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病理制片技术——常用试剂及染液的配制一、Harris氏苏木精染色液的配制1.试剂准备:苏木精10 g,硫酸铝钾80 g,无水乙醇200 ml,蒸馏水2000 rnl,氧化汞3 g,冰乙酸40ml。
2.配制步骤(1)将2000 ml蒸馏水注入一只3000 的大号三角烧瓶内,加入80 g硫酸铝钾后置电炉或电磁炉上加热硫酸铝钾完全溶解。
(2)将200 ml无水乙醇注入一只300 ml的三角烧瓶内,加入10 g苏木精摇动使之完全溶解。
(3)将已完全溶解于无水乙醇的苏木色精液体缓缓注入已完全溶解的2000 ml硫酸铝钾液体中,继续加热至液体沸腾关闭电源。
此时液体应呈透明的玫瑰红色。
(4)将3 g氧化汞溶于20ml蒸馏水中搅匀后缓缓(一定要缓慢)方入未被氧化的苏木精液体中,边加氧化汞边搅拌。
此时苏木精被氧化,液体的颜色会迅速地变成深蓝紫色。
(5)氧化汞加完后用玻棒充分的搅拌液体并继续加热至液体再度沸腾关闭电源。
(6)用湿毛巾保护,将装有停止沸腾的热苏木精的三角烧瓶转移至冷水中迅速降温至室温。
(7)密封瓶口室温避光直射储存备用,临用前每100 ml苏木精液加入2~3 ml冰乙酸混匀。
二、伊红染色液的配制l. 试剂准备;伊红Y 20 g,蒸馏水1500 ml,95%乙醇500 ml,冰乙酸lml。
2.配制步骤(1)先将20 g伊红Y溶于500 m1蒸馏水中,用玻棒搅拌至其完全溶解后再加入1000 ml 蒸馏水并搅匀,液体呈深红色。
(2)加入500 ml 95%乙醇并搅匀,此时液体由深红色转变为荧光绿色。
(3)加入lml冰乙酸并搅匀,密封瓶口室温储存备用。
三、HE染色分化液的配制0.5%盐酸乙醇液:蒸馏水300 ml与95%乙醇700 ml混合后加入浓盐酸5 ml混匀。
四、HE染色返蓝液的配制0.5%氢氧化氨液:在1000毫拜蒸馏水中溶入5毫升浓氢氧化氨混匀。
病理组织切片制作技术病理组织切片制作技术病理组织切片常用的制作方法有三种。
即石蜡切片法,冰冻切片法和火棉胶切片法。
以石蜡切片法为代表,切片的基本制作过程是:组织取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→组织包埋→组织切片→展片附贴→切片脱蜡→染色→脱水→染片透明→封固。
以上基本过程是互相联系的,任何一环节出现问题,都将使整个切片制作归于失败。
因此应细致、耐心、认真负责,并事先做好计划安排。
一、取材采取病料,要刀剪锐利,剪切时不可挤压,扯拉病料,以防人为损伤。
切取的工具要清洁。
采取病料越新鲜越好,一般不超过死后24小时。
应选择病变部与可疑病变部切取,切取时要由表及里,有浅入深并包括周围正常组织一部分。
特殊病料应根据器官的结构特点切取。
管状,囊状和皮肤组织应注意垂直切取(横切)。
带有薄膜的组织,要防止切时薄膜分离和脱落。
切取组织块大小,以1.5×1.5×0.3厘米为宜,最厚不宜超过0.5厘米。
组织块病变一面应平整光滑,另一面可不平整,以便包埋时辨认。
切取后,放入事先准备好的装有固定液的磨口玻璃广口瓶中,并做好标记。
二、固定固定的目的是迅速将组织细胞杀死,使细胞中的蛋白质,糖,脂肪等凝固,从而保持与活组织相似的结构状态。
材料取下后,应迅速固定。
固定液数量应为病理组织块的5到20倍。
由于一般把组织块浸入固定液后数小时,固定液渗入组织液的深度只达2到3厘米。
因此,可以放置冰箱内固定,使组织内酶失去作用,细菌也能停止滋生。
最常用的固定液是10%的福尔马林溶液:使用时,用40%的甲醛饱和水溶液10毫升,加水90毫升配成。
三、冲洗固定后的组织块,应将固定液洗去。
一般均用流水(自来水)冲洗12到24小时左右。
及时冲洗尚有停止固定的作用,防止固定过度,有利于制片染色。
冲洗时如不方便用流水冲洗,也可用较大容器盛装水浸洗,每隔相当时间换水一次。
整个浸洗时间比流水冲洗应稍长一些。
酒精固定的组织材料不需冲洗。
英文回答:Pathological tissue production is an extremely important technique in clinical pathology and is carried out for in—depth research into the morphology and immunisation of tissue specimens。
The technical processes include specimen collection, tissue fixation, dehydration, transparency,immersion of waxes, wrapping, slices, de waxes, dyes and seals。
The first is sample collection, which is usually taken from surgery or piercing, followed by fixed liquid tissues and cell proteins。
Post—fixed tissues require dehydration to gradually replace moisture in tissues by gradual leaching in increased concentrations of ethanol or isopropanol。
This is followed by transparent treatment, leaching the dehydrated tissue into the transparency agent, removing the dehydration agent and gradually making it transparent。
病理组织制片技术基本流程病理组织制片技术是病理学中的一项重要技术,它通过将病理标本切片、染色和覆盖玻片,使得细胞和组织的形态结构能够被显微镜观察和分析。
这项技术在医学诊断、研究和教学中起到了关键作用。
下面将介绍病理组织制片技术的基本流程。
1. 标本采集与固定病理组织制片的第一步是标本采集与固定。
医生根据患者的病情,选择合适的组织或细胞标本进行采集。
常见的标本包括切除标本、活检标本等。
采集后,标本需要立即进行固定,以保持组织的形态结构和化学成分的稳定。
最常用的固定剂是10%的中性缓冲福尔马林溶液。
2. 组织处理与包埋固定后的标本需要进行组织处理与包埋。
首先,将固定的标本进行去除固定剂的处理,然后用乙醇逐渐脱水,最后用苯麻油进行透明处理。
透明处理后,标本需要被包埋在石蜡中,以便后续的切片操作。
3. 切片与染色石蜡包埋的标本需要进行切片与染色。
首先,使用组织切片机将石蜡块切割成薄片,通常厚度为4-6微米。
切片后,将切片浸泡在水中,使其展开。
然后,将切片依次浸泡在染色剂中,进行组织染色。
不同的染色剂可以突显不同的细胞和组织结构,例如血液常规染色、免疫组化染色等。
4. 脱脂与覆盖玻片染色后的切片需要进行脱脂与覆盖玻片。
首先,将染色后的切片依次浸泡在醇中,去除多余的染色剂。
然后,使用透明剂将切片与玻片粘结在一起,使其固定。
最后,将覆盖玻片放在切片上,使用压力将其压平,使切片与玻片紧密结合。
5. 干燥与封装覆盖玻片后的切片需要进行干燥与封装。
将覆盖玻片的切片放置在干燥箱中,通过温度和时间控制,将其彻底干燥。
干燥后,将切片放置在干燥剂中,以防止切片吸湿。
最后,将切片放入切片盒中,进行封装,以便长期保存和使用。
病理组织制片技术的基本流程包括标本采集与固定、组织处理与包埋、切片与染色、脱脂与覆盖玻片以及干燥与封装。
这一流程确保了病理标本的形态结构得以保留,并使其能够被显微镜观察和分析。
病理组织制片技术的应用广泛,对于疾病的诊断和治疗具有重要意义,同时也为病理学研究和教学提供了有力支撑。
病理标本切片技术病理学作为现代医学的重要组成部分,着重于通过病理学检查以确定疾病诊断及治疗方案。
而病理标本切片技术作为病理学检查中的关键步骤之一,对疾病的诊断及治疗起着不可替代的作用。
一、病理标本切片技术概述病理标本切片技术是将组织样本切割成非常薄的部分,以便进行显微镜检查的过程。
这一过程通常被称为“制片”,其一般包括如下步骤:1.组织预处理:该步骤包括固定、清洗、脱水、透明化等几个关键步骤,目的是使组织样本保持原有形态并易于切割。
2.切片:该步骤使用病理切片机将组织样本切割成具有一定厚度的切片,通常在3~10μm之间。
3.染色:该步骤是为了使组织样本结构更易于识别,通常使用的染色剂有常规的血液学染色剂、免疫组织化学染色剂等。
二、病理标本切片技术的重要性正确的病理标本切片技术可以帮助病理学家准确判断疾病病变的类型、性质及病变程度等。
其重要性主要表现在以下三个方面:1.诊断:病理标本切片技术可以提供病理学家直接观察、评估组织标本,从而给出准确的疾病诊断。
例如,肿瘤和白血病等疾病需要进行病理学检查并使用病理标本切片技术来确诊。
2.治疗:病理标本切片技术还可以对病人进行治疗方案的定制。
例如,通过病理标本切片技术可以判断某种瘤细胞是否对某种药物敏感,从而在治疗中选用更加有效的药物。
3.预后:病理标本切片技术还可以帮助病人对病程进行预测和评估。
例如,在肿瘤的治疗过程中,通过病理标本切片技术可以评估肿瘤对治疗的响应并进行预测,从而评估病人的预后。
三、病理标本切片技术中存在的挑战与未来发展方向病理标本切片技术虽然在现代医学中发挥了不可替代的作用,但其在实践中仍然存在一些挑战:1.样本收集限制:某些类型的病理标本很难取得,例如甲状腺和胰腺的病理标本。
2.自动化技术发展不足:虽然近年来出现了许多自动化切片仪器,但其切片精度和效率仍然需要进一步提高。
未来病理标本切片技术的发展方向主要包括:1.数字化技术:该技术可以将制片过程中得到的显微镜图像数字化,实现对图像的分析和存储。
病理组织制片总结一、背景介绍病理组织制片是一项重要的临床辅助诊断技术,通过取得患者组织标本并对其进行加工处理,制备出显微镜下可观察的薄片,以供病理医师进行病变分析和诊断。
本文将对病理组织制片的步骤、注意事项以及常见问题进行总结。
二、病理组织制片步骤1. 标本采集与固定标本采集是制备病理组织制片的第一步,应该准确地选取代表性的病变部位进行采集。
常用的标本采集方式包括手术切除、穿刺采样和切片检查等。
采集后,应迅速进行固定处理,以防止组织成分的破坏和细胞学改变。
2. 组织处理与包埋组织处理包括去除标本中的血液、脂肪和黏液等非组织性成分,并进行组织切片的预处理。
常用的预处理方法包括脱水、清洁和透明化等。
之后,将组织标本置于蜡块中,进行包埋处理,以固定组织结构。
3. 组织切片与染色包埋完成后,使用病理切片机将蜡块切割成薄片,并将其放置在载玻片上。
然后,进行染色处理,常用的染色方式包括血液涂片染色和特殊染色等。
染色后,可以更清晰地观察组织的形态和病变特征。
4. 显微镜观察与诊断将制备好的组织切片放置在显微镜下观察,通过对组织形态、细胞结构和病变特征的分析,病理医师可以得出初步的诊断结论。
对于一些复杂的病变,可能还需要进行免疫组织化学染色、细胞学分析或分子生物学检测等进一步的检查。
三、病理组织制片注意事项1. 标本采集与保存标本采集应准确、全面,避免采集到非病变或代表性不足的组织。
采集后,应尽快放入合适的固定液中进行保存,避免组织变性和细胞改变。
2. 组织处理与包埋组织处理过程中,应注意充分去除标本中的血液、脂肪和黏液等非组织性成分,以避免对组织结构的干扰。
在包埋过程中,应确保组织蜡块的质地均匀,以避免制备出的组织切片质量不佳。
3. 组织切片与染色在进行组织切片时,应遵循操作规范,保证切片的厚度和质量。
染色时,应准确掌握染色剂的使用方法和浸泡时间,避免染色效果不理想。
4. 显微镜观察与诊断显微镜观察是病理组织制片的核心环节,病理医师应具备良好的观察技巧和分析能力。
病理制片技术——常用特殊染色
一、六胺银染色
1.第一步准备工作:配制六胺银染液,将10%硝酸银2.5ml倒入干净的染色缸内,加入2%硼砂5ml,液体呈乳白色,再加入3%乌洛托品40ml,染液逐渐呈透明状。
2.第二步染色过程:事先把温箱调至60℃备用,切片经脱蜡至水,用1%过碘酸氧化10 min,水洗,然后切片放人六胺银染液放置60℃温箱1 h,染真菌时间要相对短一些,一般情况下肉眼看到染液变色,切片呈棕色时从温箱取出染色缸,倒掉染液,自来水冲洗1min,用0.25%氯化金调色1 min,水洗后,用3%硫代硫酸钠染5min,水洗,用苏木精染液浅染,水洗、分化、冲水返蓝,伊红染10 s,最后经脱水、透明、封固。
3.图示结果:基底膜与毛细血管间质性物质、真菌呈棕黑色,核呈蓝色。
4.注葸事项
(1)掌握染色温度和时间,如60℃染1 h,80℃染30~40 min。
(2)真菌类染色时间相对要短,染色时间过长,切片染色过深,可用分色剂处理。
二、黏液卡红染色
1.第一步准备工作:配制黏卡染液,将称好的胭脂1 g、氢氧化铝1 g倒入瓶内,加入5 0%L醇100 rnl混合摇匀,再加入氯化铝0.5g,水浴加温逐渐煮沸并搅动液体,使其充分溶解(注意染液容易外溅),数分钟后,染液由红色变成透明深紫红色,冷却后将液体倒入量筒,再加入50%乙醇至原量,过滤,放人冰箱备用。
2.第二步染色方法:染液使用时原液与蒸馏水比例为1:4稀释.切片厚5 um,脱蜡至水,经苏木精染色2 min、水洗、分化、返蓝后进人黏卡液染色2 h以上,染液可以重复使用多次,但要适当延长染色时间.切片水洗后,脱水、透明、封固。
3.图示结果:黏液为红色,胞核为蓝色.
4.注意事项
(1)染液使用时比例为1份黏卡原液,4份蒸馏水。
(2)用酶消化对照染色特异性很大,消化时间为20 min。
(3)配制黏卡染液时要防止液体溅出。
三、石碳酸品红染色
1.第一步准备工作
(1)配制盐基性品红饱和液:盐基性品红溶于乙醇内。
(2)配制石碳酸水溶液:将石碳酸结晶放入热水浴溶解后取5 ml与事先预热的蒸馏水95ml 匀备用.(以上二种液体可单独保存)。
(3)石碳酸品红染液:取盐基性品红溶液10 ml与5%石碳酸水溶液90 ml混合,使用前过滤。
2.第二步染色方法
切片厚度为6 um,脱蜡至水,石碳酸品红染色30 min至1 h,(或用微波炉高档加热10~ 20 s),水洗,用1%盐酸乙醇分化洗掉切片上多余染液,水洗,0.1%美蓝浅染,背景为淡蓝色、冲水、晾干、封固。
3.图示结果:抗酸杆菌呈亮红色,背景呈淡蓝色。
4.注意事项
(1)用微波染色时切片容易脱落.
(2)美蓝染色宜浅。
四、奥辛蓝一PAS染色
1.第一步准备工作
(1)配制奥辛蓝染液;将奥辛蓝1 g溶解于3%的醋酸溶液,调整液体PH值为2.5。
(2)配制PAS染液:将碱性品红1 g加人煮沸的蒸馏水内溶解,温度降至50℃时加入亚硫
酰氯1 ml(加亚硫酰氯时要在通风厨内进行)放入冰箱过夜。
加入活性碳2 g,摇动混合液1 min,静止10 min后,过滤于棕色瓶内,放置冰箱保存。
2.第二步染色方法
(1)奥辛蓝染色:切片脱蜡至水经3%醋酸溶液l10min,切片直接进入1%的奥辛蓝染色10
min,水洗,必要时用1%的中性红对比染色,水洗。
(2)PAS染色切片厚5um,脱蜡至水,用0.5%过碘酸氧化10min后流水冲洗1 min,用纸
吸干切片周围水分,用干燥的吸管吸取PAS染液,滴染10~20 min,流水冲洗1 min,用苏木精浅染1 min,水洗、分化、返蓝、然后进行脱水、透明、封固。
3.图示结果:PAS阳性物质呈玫瑰红色,胞核呈蓝色。
4.注意事项
(1)加亚硫酰氯时要在通风厨内进行。
(2)过碘酸恢复室温才能使用(20℃以内)。
(3)染色时要加对照片。
(4)氧化时间要限制在10 min内。
(5)PAS染液易挥发使染色反应迟缓或红色太浅,加入数滴亚硫酰氯即可。
(6)如果染奥辛蓝-PAS时,省略染苏木精步骤。