石蜡切片制作

石蜡切片制作流程以石蜡切片制作流程为标题，写一篇文章。

石蜡切片制作是一项常见的实验技术，在生物学、医学和材料科学等领域广泛应用。

石蜡切片可以用于显微镜下的观察和分析，能够提供关于细胞和组织结构的详细信息。

下面将介绍一下石蜡切片的制作流程。

1. 组织固定：首先，需要从感兴趣的样本中取得组织样本，并将其进行固定。

固定是为了保持组织的形态结构和化学成分，常用的固定剂有福尔马林、乙醛等。

固定过程中，需要确保样本完全浸泡在固定液中，通常需要数小时至数天的时间，以确保组织被充分固定。

2. 脱水：固定后的组织样本需要进行脱水处理，以去除其中的水分。

脱水是将样本中的水分逐渐替代为有机溶剂，常用的有乙醇、丙酮等。

通常采用递增浓度的有机溶剂，从低浓度逐渐提高到高浓度。

每个浓度的脱水液中，样本需要浸泡一定的时间，以确保脱水彻底。

3. 渗透：脱水后的组织样本需要进行渗透处理，以使其与石蜡更好地结合。

渗透剂通常为石蜡溶液，可以将样本浸泡在石蜡溶液中，以使其逐渐渗透进入组织内部。

渗透过程中，需要注意控制温度和时间，以确保渗透均匀。

4. 包埋：渗透后的组织样本需要进行包埋处理，即将其嵌入到石蜡中。

首先，将组织样本放置在石蜡模具中，并加入适量的石蜡。

然后，将模具放入石蜡包埋机中，利用加热和真空等处理，使石蜡与组织样本充分结合。

包埋过程中需要严格控制温度和时间，以确保石蜡固化完全。

5. 切片：包埋后的组织样本需要进行切片处理，以获取薄片供观察。

首先，使用切片机将石蜡块切割成薄片。

然后，将薄片置于载玻片上，并加热使其与载玻片结合。

最后，使用刮片等工具将石蜡薄片修整成所需的形状和大小。

6. 然后，对切片进行染色处理，以增强对组织结构的观察。

常用的染色方法有血液学染色、免疫组化染色等。

染色后，可以使用显微镜观察和分析切片中的细胞和组织结构。

总结起来，石蜡切片制作流程包括组织固定、脱水、渗透、包埋、切片和染色等步骤。

每个步骤都需要严格控制条件和时间，以确保制作出高质量的石蜡切片。

石蜡切片的制作石蜡切片的制作染色液和固定液的配制①Carnoy’S固定液：无水酒精60mL，氯仿30mL，冰醋酸10mL。

②Harris苏木精染色法：10％苏木精(950或无水酒精)溶液10mL10％钾矾水溶液200mL先将钾矾水溶液加热溶解，然后将溶的苏木精酒精溶液倒入，继续加热煮沸lmin，停火后缓慢加氧化汞0.5g，再加热煮沸lmin，速将三角瓶放入冷水内冷却。

同时加入冰醋酸6～10mL。

⑨奥新兰一沙黄染液配制：奥新兰0.3g，沙黄0.03g，铁铵矾0.4g，醋酸一盐酸缓冲液（PH=1.42）100mL，上液临用时混合。

④阿利新兰醋酸液：阿利新兰(Alcian．blue，简称AB) lg，3％醋酸水溶液100mL。

⑤1％高碘酸液：1g高碘酸溶解在100mL蒸馏水中。

⑥Shifr试剂的配制方法：煮沸蒸馏水200mL，停火后加入碱性品红1g，不停搅拌使溶解。

待溶液冷至50℃，加入1N HCl20mL冷至室温(25℃)加偏重亚硫酸钠1g摇荡，置暗处过夜。

又加活性碳2g充分摇荡数分钟，过滤。

滤液应呈无色或淡黄色，盛入有色瓶内，于冰箱（4℃）保存。

1 %冰醋酸水溶液：冰醋酸1ml , 蒸馏水100 ml 。

HE染色显示肠道黏膜上皮淋巴细胞奥新兰—沙黄染色显示肠道内肥大细胞AB/SO染色法阿利新兰醋酸染色显示肠道内杯状细胞AB-PAS染色法3.3.3 肠道的石蜡切片的制作（1）取材：用锋利的刀切取罗非鱼的一小段前肠（据胃5cm左右位置的前肠），组织块的规格为3～5mm×3～5mm×10～15mm。

（2）固定：采用Bouin氏固定液装瓶固定，固定液用量一般为组织块体积的10～20倍。

（3）冲洗：固定12～24h后，将材料自固定液中取出后，在70%酒精中换洗几次，可在酒精中加几滴氨水至洗去黄色为止。

（4）脱水：70%酒精（1h）→80%酒精（1h）→90%酒精（1h）→95%酒精（1h）→无水乙醇Ⅰ（1h）→无水乙醇Ⅱ（1h）（5）透明：无水乙醇与二甲苯溶液（1:1）（1h）→二甲苯Ⅰ（1h）→二甲苯Ⅱ（1h）（6）浸蜡：浸蜡的全过程应在恒温设备中进行，将恒温箱调至58℃。

石蜡切片的制作石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。

石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，它有很多优点，例如，比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片，能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存等。

缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆，制片时间太长。

一、石蜡切片的制作过程石蜡切片的制作过程主要是：取材→水洗→固定→水洗→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→染色。

（一）取材及水洗根据实验要求选取材料来源及部位，取要求部位的小块组织成为组织块，组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。

切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。

由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时，因此一般情况下，将动物处死后立即取需要的材料。

组织块取下后，先用相应的生理盐水漂洗以洗去血液、污渍以及粘液等。

如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。

（二）固定材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定以保持其原有的结构。

不同的组织应选用适当的固定液。

固定液的用量与组织块体积之比一般在20:1，不应使组织块贴于容器壁上。

材料固定完毕后，保存于严密紧塞或加盖的容器里，同时在容器外上标签，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。

固定的时间长短依据材料大小而定。

固定液有许多种，在固定的过程中应该根据需要选取合适的固定液，一般固定液都以新配为好，配好后应贮存在阴凉处，不宜放在日光下，以免引起化学变化而失去固定作用。

有些混合固定液的成份之间会发生氧化还原作用，一定要在使用前才混合，如果混合太早固定时就没有作用了。

（三）水洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。

，主要目的是洗去固定液的颜色以便后续的染色。

石蜡切片的主要制备程序
石蜡切片的主要制备程序可以概括为以下几个步骤：
1. 准备样品：选择需要切片的样品，如组织样本、细胞样品等，并采取相应的固定、处理和染色等预处理步骤，以保证样品的稳定性、可观察性和对比度。

2. 材料准备：准备好所需的石蜡、切片盒、切片刀、载玻片等材料，并进行清洁和消毒处理，以避免污染和交叉感染。

3. 石蜡浸透：将处理好的样品转移到石蜡中进行浸透。

首先将样品置于温度逐渐升高的浸透剂（如正己烷）中，以去除组织内水分和其他溶质，然后置于石蜡中进行浸透。

4. 切片制备：将石蜡浸透的样品固定于切片盒中，将石蜡块剪碎成适当大小，并放置在切片刀的刀脊上。

调整切片机参数（如温度、角度、速度等），并逐个切割出薄片。

5. 切片贴片：将切好的薄片浮于温水中或使用其他方法，如电离子器、热平台等，以使切片展平并附着于载玻片上。

6. 干燥固定：将切片连同载玻片一起进行干燥固定处理，以去除水分并保持切片的形态稳定。

7. 切片染色：根据实验需求，对切片进行适当的染色处理（如组织学染色、免疫组化染色等），以增强样品的可视化效果和区分感兴趣的结构。

8. 封片封装：将切片封装至封片盖玻片上，使用透明化导电胶或其他封片剂固定切片，并尽量排除气泡、保证封片质量。

9. 切片质控：对制备好的切片进行质量控制，使用显微镜观察和评估切片的清晰度、结构完整性、染色效果等。

最后，制备完成的石蜡切片可以用于显微镜观察、组织形态分析、病理学研究等应用。

需要注意的是，在整个制备过程中，应遵循标准实验操作规程、注意安全，以及依据实验要求进行相应的优化和调整。

石蜡切片制作注意事项石蜡切片制作是一种常用于组织学研究中的技术，具有保持组织形态和细胞结构的优势。

在进行石蜡切片制作时，需要注意以下几个方面：1. 选择合适的细胞或组织样本：石蜡切片制作的前提是有足够的组织细胞供应。

因此，在进行石蜡切片制作之前，需要对细胞或组织样本进行合适的处理和采集，确保细胞或组织的完整性和正确性。

2. 适当固定样本：在石蜡切片制作过程中，样本的固定是非常重要的环节。

固定样本的目的是保持细胞或组织的完整性和结构，防止其发生变性或破坏。

常用的固定剂包括福尔马林和乙醛。

在选择固定剂时，需要考虑到对细胞或组织的适应性以及对后续染色和切片的影响。

3. 适当脱水：样本固定后，需要对其进行脱水处理。

脱水的目的是去除细胞或组织中的水分，以便于后续的石蜡浸渍和切片。

通常采用一系列浓度递增的乙醇浸泡样本，使其逐渐脱水。

4. 合理浸渍：浸渍是将已脱水的细胞或组织样本渗透到石蜡中的过程。

在进行浸渍前，需要选择合适的石蜡溶液，根据样本的大小和类型，确定浸渍的时间和温度。

通常采用石蜡和蜡炉的结合，将样本置于石蜡中，使其充分渗透。

5. 切片均一性：在进行石蜡切片制作时，需要保证切片的均一性。

这需要在选择切片机或切片刀的同时，对切片进行适当的控制和处理。

需要调整切片机的切片速度、切片角度和切片厚度，以获得合适的切片切割。

6. 确保切片质量：在石蜡切片制作过程中，需要保证切片的质量。

这包括切片的厚度、形状和结构的完整性。

需要采用合适的切片机和切片刀，对切片进行适当的修整和处理，以获得高质量的切片。

7. 适当染色：在石蜡切片制作后，为了观察和研究样本的细胞结构和组织特点，通常需要对切片进行染色。

常用的染色方法包括常规染色和免疫组织化学染色。

在进行染色时，需要选择适当的染色剂和染色条件，以保证染色的质量和效果。

8. 妥善保存：在石蜡切片制作完成后，需要进行妥善的保存。

对于已染色的切片，可以使用封片剂将其封装并进行保存。

石蜡切片流程范文石蜡切片是一种常见的组织学技术，用于制备生物组织薄片，使其可以在显微镜下观察和分析。

下面是石蜡切片制备的详细流程。

1.组织固定：首先，需要选择适当的方法将生物组织进行固定，以保持其形状和结构。

最常用的方法是使用福尔马林溶液进行组织固定。

将组织样品置于福尔马林溶液中，通常需要固定24至48小时。

2.去水：固定完毕后，需要将组织中的水分除去，以便进行后续的处理。

通过逐渐提高样品中酒精浓度（例如70％、80％、95％和100％构成的酒精梯度）来逐步去除水分，通常每次浸泡20至30分钟。

3.清洁：去水后，通常需要对样品进行清洁，以去除可能存在的污物和其他杂质。

可以用清洁的醇溶液（例如100％酒精）浸泡样品数分钟，然后用去福尔马林等溶液洗涤样品。

4.浸渍：在石蜡切片制备过程中，需要将组织样品浸泡在石蜡中，以使其渗透并得到支撑。

选择适当的石蜡类型和温度很重要。

通常使用低熔点石蜡（例如58℃石蜡），在60至65℃的恒温水浴中加热并溶解石蜡。

5.渗透：将组织样品从酒精中转移到融化的石蜡中，通常需要经历多个步骤的渗透过程。

首先将样品浸泡在75％酒精中，然后再依次转移到浓缩的酒精溶液中（例如85％、95％和100％）和石蜡中，每次浸泡时间约为1小时。

6.包埋：当样品完成渗透后，需要进行包埋，即将渗透后的组织样品放置在切片模型中，并用石蜡封住。

将切片模型倒置，将溶解的石蜡缓慢倒入模型直到完全覆盖组织样品。

然后将切片模型固定在冷却装置中，等待石蜡冷却和固化。

7.切片：当石蜡块完全固化后，可以将其切割成所需的薄片。

通常使用旋转切片机或手动切片机进行切片。

将切片机的刀片调整到所需厚度（通常为3至5微米），将石蜡块放置在切片机上，并逐渐将刀片与石蜡块接触，以制备薄片。

8.制片：将切好的石蜡薄片静置在温水中，让其自然展开，并将其转移到预涂有胶水的载玻片上。

轻轻将玻片压在石蜡薄片上，以确保两者之间有良好的接触。

然后将载片放置在恒温台上，以便胶水干燥。

怎样制作石蜡切片制作石蜡切片需要一系列的步骤和材料。

以下是一种常见的制作石蜡切片的方法：1.准备材料和设备：-石蜡块：石蜡是一种透明且易于切片的材料，可以在化学试剂供应商或实验室设备供应商处购买。

-刀片：使用一把锋利的微创刀片来切割石蜡。

确保刀片是干净的，滴一滴乙醇或其他清洁溶液在刀片上擦拭，然后用干净的纸巾擦干。

-切片盒：选择适合的切片盒来放置切割好的石蜡切片。

-石蜡模具：这是一个用于制作石蜡块的模具，可以在实验室设备供应商处购买。

2.制备石蜡块：-首先，将石蜡块加热至约60-70°C，直到完全融化。

-将石蜡块从加热器中取出，小心地倒入石蜡模具中。

-等待石蜡冷却和凝固。

你可以将石蜡模具放入冷却台上以加快冷却过程。

3.切割石蜡块：-将已冷却和凝固的石蜡块从模具中取出。

-使用清洁干燥的刀片将石蜡块切成适当的大小。

你可以根据实验需求来确定切割的尺寸。

4.制备石蜡切片：-准备一张玻璃载玻片。

-小心地将切割好的石蜡片放在玻璃载玻片上。

5.烘干石蜡切片：-将玻璃载玻片连同石蜡切片放入干燥炉。

-设置炉温为50-60°C，保持1个小时以消除任何残留的水分。

6.染色和封片：-如果需要，可以将石蜡切片进行染色以便更好地观察。

- 使用适当的染色剂，如伊红（Eosin）或伊红-兰红（Eosin-Methylene Blue）来染色石蜡切片。

-染色后，将石蜡切片放入一盒有封盖的容器中，以便保存和保护切片。

制作石蜡切片需要一定的实验室技巧和经验，同时注意安全，避免烫伤和刀片伤害。

在操作过程中，务必佩戴手套和护目镜，确保实验室处于通风良好的环境中进行操作。

一、实习背景石蜡切片制作是病理学、生物学等研究领域中常用的制片方法，主要用于观察组织切片的微观结构。

为了更好地掌握石蜡切片的制作技术，我们开展了为期两周的石蜡切片制作实习。

二、实习目的1. 熟悉石蜡切片制作的基本原理和流程；2. 掌握石蜡切片制作的各项操作技巧；3. 培养团队协作精神和实验操作的严谨性。

三、实习内容1. 实验材料组织块、固定液、70%、85%、95%、100%酒精、二甲苯、石蜡、载玻片、切片刀、切片机、显微镜等。

2. 实验步骤（1）取材与固定取新鲜组织块，将其投入固定液中浸泡24小时，使组织中的蛋白质变性凝固，防止细胞自溶和细菌分解。

（2）脱水将固定后的组织块依次放入70%、85%、95%、100%酒精中，每次浸泡30分钟，逐渐脱去组织中的水分。

（3）透明将脱水后的组织块放入二甲苯中浸泡，每次浸泡30分钟，使组织块变得透明。

（4）浸蜡将透明后的组织块放入已溶化的石蜡中，浸泡30分钟，使石蜡渗入组织块。

（5）包埋将浸蜡后的组织块取出，放入熔化的石蜡中，使组织块包埋在石蜡中。

（6）切片将包埋好的石蜡块固定于切片机上，切成5-8微米的薄片。

（7）贴片将切下的薄片贴在载玻片上，放入45℃恒温箱中烘干。

（8）脱蜡将烘干后的切片放入100%酒精中浸泡，去除石蜡。

（9）染色将脱蜡后的切片放入苏木精染液中染色，再用盐酸酒精分化，最后放入伊红染液中复染。

（10）脱水、透明将染色后的切片依次放入70%、85%、95%、100%酒精中，每次浸泡30分钟，使切片透明。

（11）封片将透明后的切片覆以盖玻片，滴加树胶封片。

四、实习心得1. 通过本次实习，我深刻认识到石蜡切片制作过程中的各个环节都非常重要，任何一个环节的疏忽都可能导致切片失败。

2. 在实际操作中，要熟练掌握各项操作技巧，如切片、贴片、染色等，以保证切片质量。

3. 实验过程中要注重团队协作，合理分配任务，提高实验效率。

4. 在实验过程中，要严谨操作，严格按照实验步骤进行，确保实验结果的准确性。

石蜡切片制作和HE染色实验报告实验目的：
1. 掌握石蜡切片制作的基本步骤；
2. 熟悉HE染色的操作方法；
3. 观察并分析实验结果。

实验材料和仪器：
1. 组织标本；
2. 石蜡切片机；
3. HE染色试剂盒；
4. 显微镜。

实验步骤：
1. 组织标本处理，将组织标本固定、脱水、透明化和浸渍石蜡；
2. 石蜡切片制作，使用石蜡切片机将处理好的组织标本切成薄片；
3. HE染色，将切片依次浸入hematoxylin染液、脱水、eosin
染液和透明剂中；
4. 实验结果观察，使用显微镜观察染色后的切片，记录并分析
细胞结构和染色效果。

实验结果：
1. 经过石蜡切片制作和HE染色处理后，观察到组织标本的细
胞结构清晰可见；
2. HE染色使细胞核染成蓝色，胞质染成粉红色，对比明显；
3. 实验结果符合预期，证明石蜡切片制作和HE染色操作正确。

实验总结：
通过本次实验，我掌握了石蜡切片制作和HE染色的基本操作方法，对细胞结构和染色效果有了更深入的了解。

在今后的实验中，我将继续加强实验操作技能，提高实验结果的准确性和可靠性。

常规石蜡切片标本制作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!一、取材1. 选取合适的大小和厚度的组织块，通常为直径约1cm左右。

石蜡切片的制作
1、取材固定：将取的组织立即投入固定液中（10%的福尔马林溶液）固定24h。

2、脱水：修块后流水冲洗12～24h，70%的酒精过夜，梯度酒精脱水
80%酒精1h→85%酒精1h→90%酒精1h(开始熔蜡)→95%酒精45min→无水乙醇Ⅰ45min →无水乙醇Ⅱ45min→酒精二甲苯5min。

3、透明：二甲苯溶液。

4、浸蜡：透明组织块浸入石蜡内1.5h。

5、包埋：石蜡包埋柱内灌满石蜡，将组织放入柱内，蜡块冷却后，适当修整后装入真空袋。

6、切片：切片机
7、展片和贴片：切下的蜡片放在载玻片上，滴一滴70%的酒精放入40～45℃的水中，待其
展平后，用载玻片取出，并置温箱中烘干（60℃2h）。

8、脱蜡、浸水、染色、封藏。

切片→二甲苯Ⅰ（10min）→二甲苯Ⅱ（10min）→无水酒精2min→90%酒精2min→80%酒精2min→70%酒精2min→蒸馏水3min→苏木素染液15min→常水冲至不褪色为止→1%盐酸酸化迅速→自来水蓝化30min→85%乙醇迅速→1%伊红染液染色40s→
95%酒精Ⅰ迅速→95%酒精Ⅱ2min→无水酒精Ⅰ2min→无水酒精Ⅱ2min→
二甲苯Ⅰ5min→二甲苯Ⅱ5min；
9、盖片：滴加中性树胶，盖上盖玻片，镜检。

石蜡切片制作实验报告(一)石蜡切片制作实验报告概述本次实验是制备组织学切片中使用的石蜡切片。

石蜡切片是组织学研究中常用的一种切片制备方法，通过将组织固定、脱水、浸蜡以及切片等一系列步骤使组织固定在切片上，以供观察。

实验流程本次实验按照以下流程进行：1.取出组织标本，进行固定处理；2.固定后的组织在不断升级的酒精浓度溶液中脱水处理；3.使用排除气泡的炉子将组织浸泡至石蜡中，使其渐渐浸润；4.开始制作切片，将浸润的石蜡切片头制作成适当的角度，再使用切片机器进行切割即可。

具体步骤如下：固定处理1.取出标本，大小适中，保证可以在容器中完全浸润。

2.采用福尔马林-10%缓冲液进行固定，时间不宜过久。

3.在80%乙醇、95%乙醇、100%乙醇各中脱水15min，最后再脱水30min。

石蜡浸渗1.将组织标本放入去离子水中洗涤；2.放入甲醇2小时，2次更换甲醇；3.放入Pure-Lab99嵌入剂：甲醇(2:1、1:1、1:2)中渗透2小时，每次更换的比例变化，最后放在纯浸润剂中浸润15h以上。

4.上蜡，10min90℃，2h60℃接着重复2次10min90℃，最后重复最后一次的操作3次。

制作石蜡切片1.根据需要顺序排布组织标本，并将其固定在切片支架上。

2.制作切片头，可用吹软机将石蜡制软。

3.使用切片机器对浸润好的石蜡进行切割，厚度一般为5-8μm。

实验结果经过以上步骤，我们制得的石蜡切片呈现出清晰、平整、稳定的状态，对组织结构的观察达到了预期目的。

总结本次实验是比较基础的组织学实验，对于相关领域的学习和研究有很大的帮助。

在实验过程中，需要注意每一个步骤的顺序和时间，并根据实际情况做出适当的调整。

同时，在实验结束后需要及时清理相关设备和处理化学废品，保持实验室的安全和整洁。

参考文献•Junqueira, L. C., Bignolas, G., & Brentani, R. R. (1979).Picrosirius staining plus polarization microscopy, aspecific method for collagen detection in tissuesections. The Histochemical Journal, 11(4), 447-455. •Kohno, Y., & Ohtani, S. (1996). Aging of the adrenal glands: microarchitectural changes and cellproliferation in the rat adrenal cortex underadrenocorticotropic hormone stimulation. Archives ofHistology and Cytology, 59(4), 411-422.•Stearns, M. E. (1989). Histology and histochemistry of human prostate. The Prostate, 14(4), 303-317.致谢在实验过程中，我们受到了教师和同学们的悉心指导和帮助，在此谨向他们致以最诚挚的感谢。

石蜡切片的制作的实验指导石蜡制片法是将材料经过固定、脱水、透明、浸蜡后包埋在石蜡里面进行切片的方法，是永久制片法。

是光学显微镜的制片技术中最常用的一种方法。

（一）材料的采集与分割•采集材料应根据制片的目的和要求而定，材料要有代表性，无病虫害或其它损伤，如要观察病理解剖，则要取病斑、病症部位。

为使固定液能迅速的渗透材料，材料要进行分割。

分割时动作要迅速，以防材料萎蔫。

分割块的大小，宜小不宜大，一般不超过1cm3，分割后立即杀死固定。

•操作：取来桐花叶子数片，用刀片将其切割成小于1cm3大小的小块取材原则：•植物材料的取材（注意季节；横切面，纵切面）•动物组织的取材（各器脏的全部组织结构或重要结构，如消化管包括粘膜、粘膜下层、肌肉和外膜四层结构；切割方向，取材大小）注意事项：•遵循准确、典型、完整、适时原则•固定剂的选择•刀须锐利•详细记录时期、采集地点、标本名称、年龄、性别、取材部位、断面和所用固定剂等（二）杀死与固定•利用药剂迅速把细胞杀死，以保持材料本来的状态和结构。

•将F.A.A固定液放在具塞小瓶中，投入材料，盖好瓶盖，时间为24小时。

说明：F.A.A固定液既是良好的固定剂，也是保存剂，因此材料可长期保存在固定液中备用。

卡诺固定液穿透力强，固定较小材料一般1~6小时即可，最多不超过24小时。

因卡诺固定液不能做保存剂，所以固定后要用95%、85%酒精浸洗，每级约20min.，然后保存在70%的酒精中备用。

（乙醇+醋酸：F.A.A，也称卡诺氏固定液）固定和固定剂•固定的概念和目的••将所要观察的新鲜组织割取后立即投入某种固定剂中，通过化学药品的作用保存组织、细胞的形态结构，不使其改变形态和变质的一种措施•固定的作用和目的••防止组织自溶和腐败，保存细胞内蛋白质、脂肪、糖、酶等成分••使细胞成分沉淀和凝固，因而产生不同折射率，造成光学上的差异，使某些看不清的结构变得清晰，而且有些固定剂可使细胞各部分容易染色••固定剂兼有硬化作用，使组织硬化不易变形，利于后续操作••固定的主要目的是保持材料生活时的状态。

石蜡切片和HE染色详细步骤
一、石蜡切片制备
1、收集样品：根据样品的性质和形状，选择适当的采样工具和采样
容器，将样品采集到容品中并制冷处理，以防止样品发生腐败。

2、石蜡制备：在制作石蜡切片之前应先量出所需的石蜡，并将其放
入容器中，然后加入酒精等助剂加热溶解，当石蜡完全溶解熔融后，用桶
或温度控制的水浴加热，随着温度的升高，搅拌均匀，使石蜡液完全熔化，熔化后即可用于制作石蜡切片。

3、制备切片：将样品置于熔融石蜡中，用切片机将样品切成指定的
厚度，以便用于染色；将薄片分类清洗，用干净的棉棒涂上几滴石蜡，使
其连接牢固，然后放在凉爽的干燥地方。

二、HE染色
1、润湿：将样品片放入石蜡解决液，轻轻摩擦，使其充分润湿。

2、酒精消切：将石蜡解决液滴入被润湿的样品片，轻轻摇晃，完成
样品的酒精消切。

3、甲醛处理：将样品片放入含醛的苯乙酮溶液中，经摇晃后再放入95%乙醇中搅拌，使样品片可以完全吸收醛，促使样品受醛处理，使样品
片充分脱脂，加快染色效果和特殊部位的显示。

4、HE染色：将脱脂的样品片放入无菌玻璃容器内。

植物组织石蜡切片的制作以及注意事项1 植物组织石蜡切片的制作方法⑴固定：用50%或70% FAA固定液（50%或70%酒精：甲醛：冰乙酸=16:1:1; 幼嫩材料用50 % FAA；老的材料用70%的FAA），置于4℃固定24 h。

⑵脱水：将固定液倒去，加入50%乙醇，室温静置30 min；重复一次，室温静置20 min。

换成1%番红O溶液(用70%酒精配制)，室温脱水染色过夜。

次日继续脱水，酒精浓度梯度和时间依次为：80% 乙醇1h、95% 乙醇1h、无水乙醇1h、40min（2次）。

⑶透明：1/2无水乙醇+二甲苯混合液1h，纯二甲苯1h、40 min（2次）。

最后加入少量二甲苯（浸没材料即可）和碎蜡，放入38℃温箱中过夜。

⑷浸蜡：将温箱温度调至56℃，计时1h；换成二级蜡1h；三级蜡（3次）各1h、1h、40min（从温度上升到56℃开始计时）。

⑸包埋：将带有材料的液体蜡倒入叠好的纸槽中，迅速放入冰水中使蜡凝固，防止气泡产生，以及凝蜡不匀。

⑹切片：修整蜡块，用Lica RM2126切片机切片，厚度5-10 μm。

⑺贴片: 在载玻片上涂少许粘片剂，将切好的蜡带放入温水中，捞至载玻片上，最后置于37℃恒温箱过夜烤片。

⑻脱蜡及染色：①番红-固绿对染ⅰ脱蜡：二甲苯60min，二甲苯5 min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5 min、无水乙醇5 min、无水乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min、1%番红室温过夜。

ⅱ染色：80%乙醇5 min，1%固绿（用95%酒精配制）迅速蘸一下，大约10s，直接放到95%乙醇5min 、无水乙醇5min、无水乙醇5min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5min、二甲苯5 min（2次）。

②甲苯胺蓝染色ⅰ脱蜡：二甲苯60 min、二甲苯5 min、1/2无水乙醇+1/2二甲苯混合液5 min、无水乙醇5 min、无水乙醇5 min、95%乙醇5 min、80%乙醇5 min、70%乙醇5 min、50%乙醇5 min 、30%乙醇5 min、蒸馏水5 min。