四氯化碳致小鼠急性肝损伤动物模型建立方法的研究

肝损伤动物模型研究进展内容摘要：肝疾病；毒物，四氯化碳；醋氨酚；疾病模型，动物肝损伤是各种肝脏疾病的病变结果，对肝损伤的防治目前仍是一个严峻的课题。

通过建立实验性肝损伤动物模型，研究肝病的发生机制，筛选保肝药物，探索保肝作用原理，具有重要的现实意义。

现将近年来国内外对实验性肝损伤动物模型分类、作用原理、造模方法及其优缺点等研究进展作综述和探讨。

1化学性肝损伤动物模型1.1四氯化碳（carbontetrachloride,CCl4）CCl4导致肝损伤的主要机制目前认为与其自身和自由基代谢产物有关。

CCl4代谢产生的自由基进入机体后，在肝脏经细胞色素P450激活，生成三氯甲基自由基和三氯甲基过氧自由基，攻击肝脏细胞膜上的磷脂分子，使得细胞膜、内质网膜发生氯烷化和脂质过氧化，损伤细胞膜、细胞器；还能与膜脂质和蛋白质大分子进行共价结合，影响蛋白质代谢，并且破坏膜结构和功能的完整性，钙离子内流增加，影响细胞正常生理功能，最终导致肝细胞胞质中的可溶性酶渗出，细胞死亡[1]。

CCl4所致肝损伤可分为急性和慢性。

急性肝损伤：赖力英等应用4mL/kgCCl4剂量灌胃可诱发SD大鼠急性肝功能衰竭，死亡率达85%[2]。

慢性肝损伤：Zhang等采用2mL/kgCCl4腹膜内注射SD大鼠，每周2次，持续9周可伴有肝细胞坏死和明显炎症的肝硬化[3]。

CCl4导致肝损伤是经典模型之一，能准确反应肝细胞功能、代谢及形态学变化，重复性好且经济。

但CCl4同时还损伤动物的心、脾、肺、肾、脑等器官，另外，蒸汽和液体可由呼吸道、皮肤吸收，对人体也有一定毒性，操作时应注意。

1.2α萘基异硫氰酸酯(αNaphthylisothiocyanate,ANIT)ANIT是一种间接肝毒剂，其主要损害是通过膜脂质过氧化反应，致使肝细胞变性、坏死、胞内血清谷丙转氨酶(ALT）大量溢入血流，同时还导致胆管上皮细胞肿胀坏死，引起毛细胆管增生及小叶间胆管周围产生炎症，从而造成胆管阻塞，形成明显的胆汁淤积，并伴随以点状坏死为主的肝实质细胞损害，产生梗阻性黄疸，出现高胆红素血症和胆汁分泌减少。

一、四氯化碳急性肝损伤模型[造模原理]四氯化碳(CCl4 )是无色透明液体,不溶于水.CCl4的毒性主要与其活性代谢产物有关.在肝内CCl4惊NADPH和肝微粒体细胞色素P450混合功能氧化酶的作用,生成活泼的三氯甲基自由基和氯自由基.这些自由基能与细胞内和细胞膜上大分子发生共价结合,引起富含不饱和脂肪酸的生物膜发生脂质过氧化,导致膜结构和功能完整性的破坏,肝细胞损伤坏死.三氯甲基自由基还能抑制细胞膜和微粒体膜上该泵的活性,食Ca2+内流增加,从而引起细胞中毒死亡;三氯甲基自由基能与蛋白质形成共价键,损害线粒体,使还原型辅酶Ⅰ(NADH)及ATP在肝内生成减少,脂肪酸氧化抑制,影响肝脏能量生成障碍,并使三酰甘油和脂肪酸在肝细胞内蓄积.[实验动物]体重18-22g的小鼠、体重150-180的大鼠或体重4-45kg的家兔.[操作方法]用CCl4 在不同动物可以多种方法引起急性肝损伤.一般用花生油将CCl4 稀释为所需浓度. CCl4 致急性肝损伤所需剂量和用法见表8-1[模型评价与注意事项]1.( CCl4肝损伤模型是最常用的急性肝损伤模型,造模方法简单,成功率高,重复性好，价格低廉。

2．CCl4剂量不宜过大，以免造成动物中毒死亡。

3：CCl4是无色澄清的有毒液体，有特殊气味，难溶于水。

CCl4 一般用花生油、橄榄油、豆油等植物油混合成所需浓度，有时也可与矿物油(如液体石蜡)混合。

以植物油为例，10％CCl4的配制方法是：取5ml植物油和5g阿拉伯胶，置于乳钵中研匀，再加lOml纯CCl4。

研匀，然后加蒸馏水lO~15ml调成乳状，最后加蒸馏水至lOOml，用前摇匀。

4．用CCl4复制肝损伤模型的主要缺点是,不同动物个体肝损伤的程度差异较大. 还有研究表明，小鼠接受CCl4后肝脏病理学改变与血清ALT等生化指标改变的相关性不如大鼠好。

5 CCl4 液体和蒸气可以从呼吸道、皮肤吸收,对人体有一定毒性，操作时应注意防护.二、D-半乳糖胺急性肝损伤模型[造模原理]D-半乳糖胺(D-galactosamine)引起急性肝损伤的机制尚不完全清楚。

常用急性肝损伤动物模型研究进展肝脏是人类重要的代谢器官，承担着维持生命的重要功能，还有解毒、造血和凝血作用，其中一些有损肝脏的物质也必须依靠肝脏解毒，故肝损伤的发生率极高，肝病的防治工作刻不容缓。

寻找一种较为适合的肝损伤模型是进行肝病防治研究的必要前提，目前常用的肝损伤模型有化学性、免疫性、酒精性还有其他类肝损伤模型。

本文将近几年常用的各种急性肝损伤的动物模型进行综述，为选择合适的造模方法提供思路。

标签：急性肝损伤;动物模型;方法化学性肝损伤四氯化碳（CCl4）。

四氯化碳是最常用的致化学性肝损伤的药物，其特异性高，能够有效造成肝脏发生脂质过氧化反应。

CCl4进入体内后，能够在肝药酶的催化作用下产生自由基，与细胞膜上的大分子物质共价结合，产生脂质过氧化反应，破坏细胞膜的结构和功能。

周迎春[1]给小鼠灌胃1% CCl4（0.1 ml/10 g），24h后建立小鼠急性肝损伤模型，该模型重复性好，具有强烈的肝毒性，能使血清中ALT、AST含量迅速升高，是理想的造模药物。

但CCI4挥发性强，可经多途径传播吸收，对实验人员有一定的危害。

对乙酰氨基酚（AP）。

AP是目前临床常常用的解热镇痛药，但长期过量应用，会造成肝损伤疾病。

AP在体内代谢产生的N-乙酰对苯醌亚胺（NAPQI）可与肝细胞内生物大分子共价结合，影响蛋白质的正常生理功能。

吴洋东等[2]给昆明种系小鼠一次性腹腔注射AP 200mg/kg，40h后造成急性肝损伤模型，AP 可造成肝损伤而不会损害其他组织器官，模型重复性好，是常用的肝损伤模型。

D-氨基半乳糖（D-GaIN）。

D-氨基半乳糖（D-GaIN）可对肝细胞磷酸尿嘧啶产生干扰，可以损害质膜，形成肝细胞内复合物，消耗尿苷三磷酸，使肝细胞出现炎症和弥漫性坏死，其病理变化与病毒性肝炎相似。

王超等给小鼠一次性腹腔注射10% D-GalN 生理盐水溶液，剂量为600 mg /kg ，16h后造成急性肝损伤模型。

四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型建立与考察付双楠;高达;郭佳佳;苗明三;朱平生;宫嫚【期刊名称】《肝脏》【年(卷),期】2022(27)9【摘要】目的考察四氯化碳(CCL 4)致小鼠急性肝损伤稳定的动物模型,便于临床新药的研究与应用。

方法将KM小鼠随机分为空白组、模型组和联苯双酯组(5.625 mg/kg),通过腹腔注射0.1%CCL 4溶液复制小鼠急性肝损伤,检测造模后3 h、6 h、12 h和24 h的转氨酶水平、肝脏指数、肝组织病理变化进行模型稳定性研究。

结果模型组染毒后,ALT在3 h(45.21±13.17 IU/L)轻度升高(P<0.01)、12h(112.30±30.54 IU/L)和24 h(121.98±21.66 IU/L)升高明显(P<0.01);AST在3h(162.51±28.57 IU/L)、6 h(192.07±31.05 IU/L)、12 h(250.75±90.82 IU/L)、24 h(274.27±44.02 IU/L)均升高(均P<0.01),但在12 h和24 h升高显著;肝脏指数在3 h(6.72±1.90 g/100 g)、6 h(7.27±1.38 g/100 g)轻度升高(P<0.01),12h(12.41±1.18 g/100 g)及24 h(14.90±2.56 g/100 g)升高明显(P<0.01);肝脏病理变化在12 h及24 h可见明显的肝细胞肿胀、炎性细胞浸润,24 h损伤程度更显著。

结论腹腔注射0.1%CCL 4溶液制备小鼠急性肝损伤模型时,在12~24 h小时之间建模更适宜。

【总页数】5页(P1036-1040)【作者】付双楠;高达;郭佳佳;苗明三;朱平生;宫嫚【作者单位】解放军总医院第五医学中心中医肝病科;河南中医药大学【正文语种】中文【中图分类】R28【相关文献】1.四氯化碳致小鼠急性肝损伤动物模型建立方法的研究2.四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤模型的建立和优化3.高活性小牛血去蛋白提取物对四氯化碳致急性肝损伤模型小鼠的保护作用4.四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型的研究5.四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型造模要素及中医药防治的数据挖掘研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

笔筒草对四氯化碳所致急性肝损伤小鼠保肝作用研究目的探讨壮药笔筒草醇提物对CCl4所致小鼠急性肝损伤的作用。

方法采用CCl4腹腔注射造成急性肝损伤模型，将小鼠随机分成6组（空白对照组、模型组、联苯双酯阳性药组和笔筒草高、中、低剂量组），观察各剂量组对小鼠血清谷丙转氨酶（GPT）及谷草转氨酶（GOT）的影响。

结果与模型相比，给药组能降低GPT、GOT活性，联苯双酯模型组及笔筒草醇提取高、中、低剂量组均有显著性差异。

结论笔筒草对于CCl4所致小鼠急性肝损伤具有一定的保肝降酶作用。

标签：急性肝损伤；笔筒草；四氯化碳笔筒草，又称节节草（Equisetum ramosissimum），为木贼科木贼属植物，全草入药。

主要分布于东北、云南、贵州、陕西、甘肃等地，也分布于世界热带、亚热带地区[1]。

笔筒草主要成分为黄酮等[2]，中药学记载木贼有利尿作用，之前有文献报道过木贼草合剂治疗急性黄疸型肝炎有较好效果[3]。

近年来，药理实验表明本科植物具有抗心肌缺血、降血压、调血脂、降血糖的作用。

本实验通过研究笔筒草醇提物对于CCl4所致的急性肝损伤降酶保肝作用，为进一步研究保肝壮药，筛选其合理的组方提供科学实验依据。

1 材料与方法1.1 实验动物昆明小鼠（SPF级），雌雄兼用，体重18～22 g，2月龄，共90只，购自广西医科大学实验动物中心，动物证号（SCXK桂2009—0002）。

研究所用笔筒草采自广西南宁市老虎岭水库，经过广西中医药大学壮医药学院韦松基教授鉴定为木贼科木贼属植物笔筒草Equisetum ramosissimum全草。

采集回来经打粉机打碎后过40目筛，其有效成分采用渗漉法提取，溶剂为95%乙醇。

1.2 药物及试剂CCl4（成都市科龙化工试剂厂，批号：20110222）；花生油（鲁花一级压榨花生油）；氯化钠注射液（贵州科伦药业有限公司，批号：8110101G）；GOT试剂（南京建成生物工程研究所批号：20110616）；GPT试剂（南京建成生物工程研究所，批号：20110616）；联苯双酯滴丸（浙江万邦药业有限公司，批号：101207）。

!#hUWumf-MeKW l f2020，Dyc；39(6)：800可°5 -800-.论著.TUDCA通过抑制内质网应激及氧化应激减轻CCl4所致小鼠急性肝损伤苏艾荣，许金金,蒋秀琴(南京医科大学第二附属医院临床分子基因检测中心，江苏南京210003)&摘要］目的:探讨牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)对小鼠急性肝损伤的保护机制(方法：采用小鼠腹腔注射四氯化碳(CC14f诱导急性肝损伤动物模型，通过测定血清转氨酶变化及观察肝组织切片HE染色，检测TUDCA对小鼠急性肝损伤的保护效果；采用硫代巴比妥酸(TBA)法检测血清中丙二醛(MDA)的含量及轻胺法检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性;采用蛋白免疫印迹、PCR等方法检测肝组织中免疫球蛋白重链结合蛋白(BR)、肌醇需求酶1(IRE1)*c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白以及X盒结合蛋白1(XBP1)基因转录表达的变化，分析TUDCA对急性肝损伤的保护机制。

结果:TUDCA显著保护由CC14中毒引发的肝组织病变，与单独急性肝损伤相比,TUDCA预处理显著增强肝组织的抗氧化水平，并抑制内质网应激程度。

结论:TUDCA通过抑制由CC3中毒引发的内质网应激和氧化应激，对急性肝组织损伤具有显著保护作用。

&关键词］牛磺熊去氧胆酸；肝损伤；内质网应激；肌醇需求酶1；小鼠&中图分类号］R-33&文献标识码］A&文章编号］1671-6264(2020)06-0800-06dob10.3969/j.bsn.1671-6264.2020-06-017TUDCA alleviates acute liver injury in micc inducet by CCl Ntreatment by inhioiting ER stress and oxCative stressSU Airong，XU Jinjin,JIANG Xiuqin(Clinical Molecular Diagnostio Laboratoro，the Second Ailiatep Hospital lp Nanjing MePical University，Nanjing210003，China)&Abstract］Objective:To investigate the hepatopetective mechanisms of taueursodeoxycholic aT6(TUDCA)on acute liver injue W mice induced by carbon tetrachloide(CCI4)-Methods:The acute hepatotoxicity model was induced by intrapeitoneal injection of CCI4in mice.To investigate the protective effect of TUDCA on hepatic inju­ry，the activities of alanine aminotransferase(ALT)and aspaiate aminotransferase(AST)were characterized andthe tissue sections were analyzed by haematoxylin-eosin(H&E)stain.To further explore the potential protective mechanisms of TUDCA on hepatic injue，we measured the contents of malondialdehyde(MDA)，the activity of su­peroxide dismutase(SOD)in mice sxum，and analyzed the expressions of binding immunoglobulin protein(Bip)，inositod equibng kinase1(IRE1)，cJUN N temiinal kinase(JNK)and X-box binding protein-1(XBP1)-&收稿日期］2019-08-26&修回日期］2020-11-17&作者简介］苏艾荣(1978-)，女，内蒙古商都人，讲师，理学博士。

CCl4诱导的小鼠肝脏纤维化模型肝纤维化是指肝脏内弥漫性细胞外基质（特别是胶原）过度沉积，不是一个独立的疾病，是许多慢性肝病共同的病理过程，几乎各种慢性肝病（化学毒性、感染性、遗传代谢性、自身免疫性，以及胆汁淤积性）都可以导致肝纤维化。

CCl4是诱导实验动物产生肝纤维化和肝硬化最广泛使用的化学性肝毒物。

在肝细胞内质网中，经肝微粒体内依赖于细胞色素P450 的具有混合功能的氧化酶激活后，CCl4产生了自由CCl3·及Cl，它们与肝细胞内大分子发生共价结合，可攻击膜不饱和脂质，引发活性氧自由基的产生和脂质过氧化，损伤肝细胞，从而导致狄氏间隙内原本静止的贮脂细胞活化，释放出Ⅳ型胶原酶，降解Ⅳ型胶原。

同时该细胞由合成分泌Ⅲ型胶原改为合成分泌I 型胶原，取代了Ⅳ型胶原，促使肝脏纤维化1.实验动物SPF级BablC小鼠，健康，雄性，体重为18g-20g2.实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。

3.实验周期6W4.主要试剂CCl4（上海国药集团）5.建模方法按5ml/kg 体重皮下注射体积分数为20% CCl4的油剂溶液（CCl4：橄榄油=1:4）, 每3天1次，连续6W。

对照组动物皮下注射等量等次的橄榄油溶剂。

正常饮食饲养，观察动物活动、精神状况和饮食量,实验前后称量小鼠体重。

完成持续给药6W后，称体重，戊巴比妥钠腹腔注射麻醉小鼠，摘眼球取血，室温静置2h后于4℃3000r离心10分钟提取血清，放入-80℃冰箱冻存。

同时取肝左叶组织1.5cm×1cm×0.2cm于10%中性福尔马林中固定，石蜡包埋；其余肝组织液氮冷冻-80℃保存。

6.模型评价1.大体观察：CCl4组小鼠随着给药时间延长活动逐渐减少, 精神萎糜,毛发蓬乱无光泽；大体标本显示，CCl4组肝脏与周围组织粘连明显，肝边缘圆顿，肝脏表面和切面呈弥漫的细小结节。

2.肝脏指数变化：取肝脏，称质量，计算肝脏指数=肝脏重/体重，CCl4组小鼠肝脏显著高于对照组小鼠。