HE染色原理

1 / 3 我来一一解答你的疑问：

1.“做大鼠皮下HE染色后可以观察炎症细胞及其他细胞的存在情况吗？”

答：HE 染色，即苏木精 — 伊红染色法，苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。HE染色后是可以观察炎症细胞及其他细胞的存在情况，因为炎症细胞有自身的特点，通常细胞核较大，核质比大，H&E染色后，细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。因此，H&E染色，尤其在400倍放大的情况下，可以明显看到一个个以蓝色为主的点状的炎症细胞（主要是中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞），而其他细胞则体积较大，细胞质较多成粉红色，细胞核较小，呈蓝色或深蓝色。

2. “通过HE染色观察我的材料是否对皮下组织产生炎症反应，那么HE的结果包括哪些呢？”

答：通过HE染色来评价是否有炎症反应以及炎症反应的强弱，通常有两种方法：炎症细胞浸润区域的面积大小和高倍视野下平均炎症细胞的数量。1）H&E染色，在400倍下，是可以观察到明显的炎症细胞的，故可知道你的材料是否对皮下组织产生炎症反应；2）HE的结果通常用炎症细胞浸润区域的面积大小和高倍视野下平均炎症细胞的数量来评价，并通过统计数据，做出柱状图来进行统计学比较。炎症细胞浸润区域的面积大小：可以用image pro-plus (IPP)软件来计算，首先用软件中的选择区域图标选出你的炎性细胞浸润的区域，然后再点击area

count 计算该区域的面积，作为该张图片的炎性区域的面积，依次类推，计算出10张同一组HE图片的面积，求平均值作为该处理组的炎症反应的强度，用2 / 3 此法计算其他组炎症的强弱，进而比较。高倍视野下平均炎症细胞的数量：计算方法类似，也可以用image pro-plus (IPP)软件来计算，设置每个炎症细胞的参数，然后统计。如若不会用IPP软件，只好用笨的方法，自己人工计数，然后统计。

正德 利用 厚生 惟和

HE染色实验步骤及常见问题解析

一、HE染色

HE染色全名为苏木精(hematoxylin)和伊红(eosin)染色方法，是最基本的也是最重要的病理学染色技术。

一张质上乘的HE切片是病理医生得以做出正确诊断的关键。HE染色是目前国内外病理诊断上广泛采用的 常规染色方法。切片质量的好坏，可直接影响疾病诊断的及时与准确性。因此，能制作出一张高质量的HE染色切片，是必须掌握的技术之一。

二、染色原理

1.细胞核染色原理：

苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性燃料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

2.细胞浆染色原理：

细胞浆内主要成分是蛋白质，为两性化合物、细胞浆的染色与pH值有密切关系，当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时，胞浆对外不显电性，此时酸或碱性染料不易染色。当pH调到6.7-6.8时，大于蛋白质的等电点pH值，表现酸性电离，而带负电荷的阴离子，可被带正电荷的染料染色，现时胞核也被染色，核和胞浆难以区分。因此必须把pH调至胞浆等电点以下，在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷（阳离子），就可被带负电荷（阴离子）的染料染色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织，嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。

3.分化作用：

染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中用0.5%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木精的醌型结构，使组织与色素分离而褪色。经苏木精染色后，必须用0.5%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木精染料和细胞浆吸附的苏木精染料脱去，在进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。因此，在HE染色中分化是极为关键的一步。

实验一 组织取材、HE切片的制备和HE染色

组织取材、HE切片的制备

试剂：

甲醛、无水乙醇、二甲苯、石蜡等

器材：

手套、取材刀、剪刀、镊子、包埋盒、包埋框、切片机、漂烘仪、冷冻台、刀片、毛笔、载玻片、大体标本等

实验步骤：

1. 大体标本取材

2. 组织的固定、脱水、透明和浸蜡

⑴10%中性福尔马林 3h

⑵80%乙醇 1h

⑶90%乙醇 1h

⑷95%乙醇 1h30min

⑸95%乙醇 1h30min

⑹无水乙醇 1h

⑺无水乙醇 1h

⑻二甲苯 30min

⑼二甲苯 30min

⑽石蜡 40min

⑾石蜡 1h

⑿石蜡 1~2h

3. 组织的包埋

4. 石蜡组织的切片

5. 漂片、烤片

石蜡组织切片的HE染色

试剂：

苏木素-伊红染液、二甲苯、无水乙醇、盐酸、碳酸锂、中性树胶等

器材：

染色缸、烧杯、镊子、载玻片、盖玻片、滤纸、石蜡标本、显微镜等

实验步骤：

1. 二甲苯（I）脱10min

2. 二甲苯（Ⅱ）脱10min

3. 100％乙醇2min

4. 95％乙醇（I）2min

5. 95％乙醇（Ⅱ）2min

6. 自来水洗

7. 苏木素染色2-5min，自来水冲洗

8. 1%盐酸分化数秒，自来水洗

9. 碳酸锂兰化1min，自来水洗净

10. 80%乙醇1-2min

11. 伊红液30-60秒左右

12. 95％乙醇（I）1-2min

13. 95％乙醇（Ⅱ）1-2min

H-E染色

概 述

苏木精（Hematoxylin）-伊红（Eosin）染色也称普通染色，简称为H-E染色。是生物组织学、病理学及细胞学工作必不可少的最常用的染色方法，故又称常规染色

H-E染色应该是红蓝相映，层次浓淡均为分明稳恒定优质

各种固定、包埋方法所制作的组织切片和冰冻切片等，均可用采用常规染色

H-E染色原理

组织细胞的不同成分对苏木精染料的亲合力不同，经苏木精染色的组织切片，再利用酸乙醇的分化作用，可使细胞核等酸性成分着色清晰，而其它成分脱色

再经伊红染细胞质等碱性成分，则各种组织与病变的一般形态结构均可显示出来

一张优质的染色切片，可以清晰地观察到各种不同的组织结构以此作为病理诊断的确切依据

再根据此染色切片所见，分别进行不同的特殊染色

到目前为止人类所积累的病理组织学知识，绝大部分是从观察苏木精-伊红染色标本所得来的

第一节 染液及溶液的配制

一、明矾苏木精染液的配制

苏木精染液的配法很多，普通、常规染色多用明矾苏木精，常用的有哈瑞（Harris）、埃利希（Ehrlich）、德拉菲而德（Delafield）及迈耶（Mayer）等

明矾苏木精染液用钾明矾或铵明矾中的铝离子作为苏木精的媒染剂

利用氧化汞等氧化剂进行人工氧化或通过自然氧化成熟的方法，使苏木精具有较强的染色效果

还需用冰醋酸作为促染剂，以增强染色能力

（一）哈瑞斯（Harris）苏木精染液

1．配方

（1）甲液

苏木精 1g

无水乙醇 10ml

（2）乙液

钾明矾 （硫酸铝钾） 20g

蒸馏水 200ml

（3）其他

氧化汞 0.5～1g

冰醋酸 0.5～1ml