HE染色程序

全 自动染色机 在病理 HE 染色 中的

使用心得

随着医学技术的不断发展和医疗设备的不断更新，目前很多医院的病理科或相关实验室正在使用全自动染色机来替代繁琐的手工HE染色。全自动染色机HE染色与手工染色相比，染色结果色彩鲜艳，洁净透明，细胞质与细胞核结构清晰，有利于制片质量标准化[1]。

我科于2018年开始使用Leica Autostainer XL全自动染色机，在使用的这几年中，刚开始染色对比差、染色质量不稳定，到后来染色鲜亮、对比度好、染色质量稳定。全自动染色机运行稳定，故障率低，大大提高了染色效率，同时又节省了人力。要使一台全自动染色机能够出色的染出高质量的病理切片并且能够稳定地运行，我们不仅要懂得如何去调试程序和排除故障，而且要注重日常的使用和保养。现将我科近几年在使用Leica Autostainer XL全自动染色机过程中的一些经验和心得分享给大家，希望能给想要购入或正在使用全自动染色机的同仁们提供一些参考，内容如下：

1.

全自动染色机最好安放在通风厨里，这样可以减少染色过程中散发出的有害气体对人体的损害，染色机需要接水源和排水管，还配电源插座，有需要的可以预留出封片机的安放位置。

2.

全自动染色机具体的程序因设备品牌不同、使用的染色试剂不同等因素，所以程序的设置方法不同，大家可根据自身实际情况设置和调试出适合自己的染色程序。下面我们主要讨论下关于程序设置的一些注意事项：

1）.在进行全自动染色机的程序设置时，苏木精、盐酸乙醇、伊红等需要水洗的染液应尽量靠近水缸，脱水透明的染缸要靠近染色机的输出口，尽量避免滴落的试剂污染其它染液缸[2]。在染色程序运行过程中，尤其是程序设置初期，观察染片架的运行轨迹，尽量避免出现试剂互相污染的现象。染片架从脱蜡水化到苏木精再到分化液最后到伊红之前的80%乙醇，中间过程中需注意避免带水的染片架越过其他试剂缸。带水的染片架避免越过其他试剂。

HE染色注意事项：

1.染色时PH值的调节是很重要的，有时组织块在多聚甲醛中固定时间过长往往使组织酸化而影响细胞核的着色，因此切片入水后，转入饱和碳酸锂水溶液中处理10－30分钟，这样可使细胞核着色较好。

2.用伊红染色切片时，往往在经脱水的低浓度酒精时极易脱色，特别是对于细胞密集的组织更明显，这时可在脱水至95％酒精1后，再以95％配制的1％伊红液中复染3－5分钟，然后脱水透明，可以获得满意的效果。

3.苏木精染色后，分色是至关重要的，应该在显微镜下进行。一般以细胞核染色比较清晰，细胞质等基本无色为宜。如发现过染，可以延长分色时间，若染色太浅，则应重新进行染色后再分色，总之必需分色至细胞核清晰而背景基本无色才能往下进行。

4.切片经酒精脱水后，如在转入二甲苯时有混浊现象产生或呈白色不透明状态，此为脱水不彻底，应立即将切片退回无水酒精重新脱水，如再不透明时则应更换无水酒精。

HE染色是一种十分常见的染色方法，但对于不同的组织，其脱水，染色，透明等步骤的具体时间有所不同，很多环节还有待操作者进一步摸索

上面的链接中，苏木素的配方属于Harris苏木素，特点是即配即用。

如果你要长期使用，建议采用Mayer苏木素, Delafield苏木素或Ehrlich苏木素的配方（上网检索吧，资料很多）。这些苏木素都可以存放2年以上；尤其是后两者（我们实验室翻出来一些1978年配制的这种苏木素，过滤后染色效果与新液没有什么差别。）

值得注意的是：

1. 苏木素中的矾类，太少会使核染偏红，太多又会造成染色弥散，需要严格按照前人的配方摸索。

2. 刚配好的苏木素或者存放数年以上的，都应当过滤，否则分色效果不好。

3. 建议在分色-水洗后，入碳酸锂的水溶液（很稀到饱和都可以），恢复苏木素的蓝色。一般需要5-10分钟。劝你不要用氨水（有的书上这么讲的），因为氨水在有的情况下会造成脱片。

4. 如果伊红染色效果不好（颜色太淡），那么可以按照每100ml然液加一滴冰醋酸的办法增强胞浆着色。但负面作用是，如果染料质量不佳，有可能在切片存放1-2年后退色。所以你可以根据需要灵活选择。

he染色原理和流程

English.

Hematoxylin and Eosin (H&E) Staining Principle and

Procedure.

Hematoxylin and eosin (H&E) staining is a widely used

histological staining technique that employs hematoxylin

and eosin dyes to differentially stain the nuclei and

cytoplasmic components of cells, respectively. This

staining method provides a clear visualization of cellular

structures, enabling the identification and

characterization of tissues and cell types in tissue

sections.

Principle of H&E Staining.

H&E staining relies on the interaction between the

basic dye hematoxylin and acidic tissue components,

primarily DNA and RNA. Hematoxylin stains these nucleic acids blue or purple, highlighting the nuclei of cells. In

contrast, the acidic dye eosin binds to basic structures

such as proteins, staining the cytoplasm and extracellular

HE染色常见问题与对策

HE是最基本的也是最重要的病理学染色技术.一张质量上乘的HE切片是病理医生得以做出正确诊断的关键。许多所谓的“疑难病理案例”，大多数是由于制片质量差所造成的。制片质量差不仅在中小医院病理科会发生,有些大医院也会出现.因为, HE染色是一种多步骤、多因素决定的实验方法，无论是手工还是机器操作,都存在着许多影响因素,甚至会出现不理想的染色结果,从而导致误判和误诊。所以,除提高病理医生的诊断水平外,培训病理技术人员、提高技术人员的业务素质也是当务之急。本文对HE染色中常见的几个问题及其对策，进行分析与讨论如下。

1 切片在脱蜡后出现大片白色的斑点

原因:由于烤（烘)片温度太低，玻片在脱蜡前没有充分烤(烘)干；切片在二甲苯停留时间不足,或二甲苯使用过久,造成脱蜡不尽。

对策:如果玻片是由于没有烤（烘） ,先用无水乙醇处理去除玻片上的水分,然后重新用二甲苯脱去石蜡。如果烤（烘）干不足的现象比较严重，可能导致切片脱落,则无法补救。如果白色斑点是由于切片在二甲苯停留时间不足造成,或使用的二甲苯过久，切片则需退回到二甲苯停留时间相对长些,或更换二甲苯，脱色、漂白、重新染色。

2 细胞核染色苍白、暗淡，即苏木精染色太淡

原因:此类问题可能有3个影响因素,切片在苏木精染色液停留时间太短；苏木精染色液过度氧化，失去染色能力，不能再继续使用;分化步骤处理时间过长。如果是骨组织细胞核暗淡,则多数是由于脱钙过度造成。

对策:切片重新染色。如果组织在酸性固定液如Zenker、Bouin及非中性缓冲甲醛液固定时间过长,细胞核染色能力将减弱，须增加其在苏木精染色液的时间,或用一些方法增加组织的嗜碱性,以改善细胞核的着色。例如：建议上述组织切片最好使用Weigert铁苏木精染色液；如果组织是用Zenker液固定的,可将切片脱蜡后放在5%碳酸氢钠溶液3～4 h,流水冲洗5 min后染色；如果组织是用Bouin液固定的,可将切片脱蜡后放在5％碳酸锂1 h，流水冲洗10 min后染色。