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中华人民共和国国家标准水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法(GB7488-87)本标准参照采用国际标准ISO5815-1983，本国家标准规定采用稀释与接种法作为测定水中生化需氧量的标准方法。
这是一种经验的常规方法。
1适用范围本方法适用于BOD5大于2mg/L并且不超过6000mg/L的水样。
BOD5大于6000mg/L的水样仍可用本方法，但由于稀释会造成误差，有必要要求对测定结果做慎重的说明。
本试验得到的结果是生物化学和化学作用共同产生的结果，它们不象单一的、有明确定义的化学过程那样具有严格和明确的特性，但是它能提供用于评价各种水样质量的指标。
本试验的结果可能会被水中存在的某些物质所干扰，那些对微生物有毒的物质，如杀菌剂、有毒金属或游离氯等，会抑制生化作用。
水中的藻类或硝化微生物也可能造成虚假的偏高结果。
2定义生物化学需氧量(BOD)：在规定条件下，水中有机物和无机物在生物氧化作用下所消耗的溶解氧(以质量深度表示)3原理将水样注满培养瓶，塞好后应不透气，将瓶置于恒温条件下培养5天。
培养前后分别测定溶解氧浓度，由两者的差值可算出每升水消耗氧的质量，即BOD5值。
由于多数水样中含有较多的需氧物质，其需氧量往往超过水中可利用的溶解氧(DO)量，因此在培养前需对水样进行稀释，使培养后剩余的溶解氧(DO)符合规定。
一般水质检验所测BOD5只包括含碳物质的耗氧量和无机还原性物质的耗氧量。
有进需要分别测定含碳物质耗氧量和硝化作用的耗氧量。
常用的区别含碳和氮的硝化耗氧量的方法是向培养瓶中投加硝化抑制剂，加入矢量硝化抑制剂后，所测出的耗氧量即为含碳物质的耗氧量。
在5天培养时间内，硝化作用的耗氧取决于是否存在足够数量的能进行此种氧化作用的微生物，原污水或初级处理的出水中这种微生物的数量不足，不能氧化显著量的还原性氮，而许多二级生化处理的出水和受污染较久的水体中，往往含有大量硝化微生物，因此测定这种水样时应抑制其硝化反应。
BOD5的测定（稀释接种法）BOD5，即5天生化需氧量（也称为生化需氧量-5天），是自然水体和生活废水的有机质污染指标之一。
BOD5测定是指在5天内，在一定的温度和pH值下，微生物在无氧条件下将有机物氧化成为二氧化碳和水的化学量测定方法。
其结果反映了水中有机物的含量。
BOD5测定的原理是：通过将水样稀释后与特定的微生物进行接种，并在一定的条件下培养，使微生物对有机物进行氧化分解，用电化学分析仪器测定分解过程中氧的消耗量，计算出单位体积水样中有机物的含量。
BOD5测定中的稀释接种法是一种常见的测定方法，其主要步骤如下：1. 制备好试样和质量达标的无菌生理盐水，生理盐水中含有必需的微量元素和氮源，可以提供微生物的生长所需的营养物质。
2. 将水样进行必要的预处理，即去除悬浮物、沉淀物等大颗粒物质，并用筛网过滤掉较小的颗粒物质，得到清洁、透明的水样，以便稀释和接种。
3. 根据水样的不同特性和预期的BOD5值，选择适当的稀释倍数，将水样用无菌生理盐水稀释到不同浓度的试样中。
试样的总体积通常为300~350ml，并且每个稀释倍数至少需要重复3个。
4. 取少量的无菌水，将试管中的试样进行接种。
生物接种可以选择一些常见的微生物，比如肠杆菌和亚硝酸盐还原菌。
为了更好地模拟水体中的自然情况，可以采用在野外水域中分离出的有机物降解菌进行接种。
5. 分别将接种后的试样置于5天内，36 ± 1℃恒温搅拌培养，以促进微生物的快速生长和有机物的氧化分解。
6. 在5天后，再次测定水样中溶解氧的浓度，通过差值计算出BOD5值。
计算公式如下：BOD5= (T1-T2)×df/V其中，T1为初始溶解氧浓度，mg/L；T2为5天后的溶解氧浓度，mg/L；df为稀释倍数；V为试样体积，ml。
通过稀释接种法进行BOD5测定，可以掌握水体中有机物的污染情况，评估水质和水环境的健康状态。
在实际应用中，为了保证测定结果的准确性和可靠性，还需要进行控制实验（比如负对照实验和阳性对照实验）和重复测定。
HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法文档模板1. 引言主要描述了如何使用稀释与接种法来测定水质中的五日生化需氧量（BOD5）。
BOD5是评价废水中有机污染物浓度的重要指标之一，对于环境保护和水质监测非常重要。
2. 适用范围适用于对水样进行五日生化需氧量的测定，使用稀释与接种法。
3. 简介稀释与接种法是一种常用的测定BOD5的方法。
它通过将水样进行稀释，然后接种细菌种子来获得可控制的生化需氧量的反应。
详细描述了测定前的准备工作、实验步骤、计算方法等。
4. 测定前的准备工作4.1 样品采集及处理- 采集水样时要注意避免污染，使用干净的容器进行采集。
- 样品采集后，应尽快将其送至实验室进行处理。
4.2 实验室设备与试剂准备- 根据实验需求，准备适量的培养基、稀释液、标定溶液等试剂。
- 检查实验室设备的完好性，确保无损坏或污染。
5. 实验步骤5.1 样品的稀释- 根据实际需求，将水样按照一定比例稀释，以便得到可测定范围内的BOD5值。
5.2 接种菌液- 在适量的培养基中接种细菌种子，培育细菌液。
5.3 反应瓶的制备- 将已经稀释和接种好的水样倒入BOD5反应瓶中。
- 定量加入已标定过的溶液。
5.4 反应过程的控制- 设置好反应瓶的应有条件：适当的温度、通气等。
- 确保反应瓶中的溶液始终保持适当的pH值，并进行适当的搅拌。
5.5 BOD5值的测定- 在反应过程结束后，使用溶解氧电极等设备测定溶解氧的含量，得到BOD5值。
6. 数据处理与计算方法- 根据实际测定结果，使用相应的公式计算出BOD5值。
- 根据实验需要，进行数据分析及结果报告。
7. 附件所涉及的附件如下：- 附件1：实验记录表格样本- 附件2：标定溶液制备方法8. 法律名词及注释所涉及的法律名词及其注释如下：- 法律名词1：注释1- 法律名词2：注释29. 困难及解决办法在实际执行过程中，可能会遇到以下困难：- 困难1：描述困难1及其解决办法。
五日生化需氧量(BOD5)的测定日生五需化量(氧od5)的测b定、实验目一的掌生活握污或工业水废水日五生需化量氧测的。
定二、实验原理生化氧需是指量在好氧件条下微生，物分解中的水机物有生物化的过程学中消所耗解溶氧的量此生化。
全程进过行时的间很，如在长02下℃养，培完此过成程1需00多。
天目国前外内都采20℃用养培天五为检验作标指，为五称生日需氧量(化od5b。
)分测别样品定培前养的溶解后氧二者之，差即为odb值，以氧5的g/l表示m 。
水样稀用释稀释，水定合确的倍数非适重常。
稀要释数倍大或太太，小五则培天养后余剩的溶解太氧多或太，甚至为少零都，不得能可到的靠果结。
释的稀程应使五天培养度中消耗所溶解的氧大2m于g/l而剩余,溶解氧在1g/l以上。
m此在前提件下，稀条释倍可数估以算，也可依据经验以法来值确定对于不。
含或含少生微的物水，废测在bod定时应进5行接种。
三实、验仪培器箱，大养玻瓶璃1，000m量筒，blo培养瓶d各，规的格(胖、肚刻)度液移管等。
、四实验试剂除测定溶解所需氧试的外，还需剂列下试剂：化钙溶液氯三，氯化溶铁，液酸镁溶硫液，酸盐磷缓冲溶液。
等、实验五骤1.步2.3.稀释的配制水使蒸：水的馏解氧为2溶℃0的时饱和解溶氧在这含有饱，和溶氧蒸解水中馏，每00lm0加入l上述种四液各溶1l。
m测定水的c污odn值或cdr。
值调节水ph值至样中性。
样水培液养配制的：()1据根得测的cod值计出算释稀数倍，一般时同3~做4种释稀倍。
数2)(用即吸虹把一些先释水引稀入1000lm量的中(约所需体积的筒1/)，3用再液移管吸所需取水的体积样，加量筒入。
移取中样水3()稀用释水释到所稀需的积体注意（本次：验实稀释的总体积为700m所），小心摇l匀将，配此的好样用虹吸法水入引带号编的2培个瓶养中，至全完充，满好盖盖，水子封。
此为一种稀第释倍的数培液(在养整操作个过程应免产生避气泡。
其)的几种余释稀倍数养液培，亦按法上作操。
实验五水五日生化需氧量（BOD5）的测定1 目的1.1 理解BOD的含义及测定条件；1.2 了解水样预处理的道理与预处理方法。
2 方法原理生物化学需氧量(BOD)定义为：在规定的条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质，特别是有机物所进行的生物化学过程所消耗的溶解氧量。
该过程进行的时间很长，如在20℃培养条件下，全过程需100天，根据目前国际统一规定，在20±1℃的温度下，培养五天后测出的结果，称为五日生化需氧量，记为BOD5，其单位用质量浓度mg/L表示。
对于一般生活污水和工业废水，虽然含较多有机物，如果样品含有足够的微生物和具有足够氧气，就可以将样品直接进行测定，但为了保证微生物生长的需要，需加入一定量的无机营养盐(磷酸盐、钙、镁和铁盐)。
某些不含或少含微生物的工业废水、酸碱度高的废水、高温或氯化杀菌处理的废水等，测定前应接入可以分解水中有机物的微生物，这种方法称为接种。
对于一些废水中存在着难被一般生活污水中微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时，可以将水样适当稀释，并用驯化后含有适应性微生物的接种水进行接种。
一般检测水质的BOD5只包括含碳有机物质氧化的耗氧量和少量无机还原性物质的耗氧量。
由于许多二级生化处理的出水和受污染时间较长的水体中，往往含有大量硝化微生物。
这些微生物达到一定数量就可以产生硝化作用的生化过程。
为了抑制硝化作用的耗氧量，应加入适量的硝化抑制剂。
3 适用范围BOD5为2—1000mg/L水样，超过1000mg/L的水样，应适当稀释。
4 主要仪器及设备使用的玻璃仪器皿在实验前应认真清洗，防止油污、沾尘。
玻璃器皿干燥后方能使用。
常用实验室设备如下：4.1 生化培养箱温度控制在20±l℃，可连续无故障运行。
4.2 充氧设备充氧动力常采用无油空气压缩机(或隔膜泵、或氧气瓶、或真空泵)。
充氧流程可分为正压、负压充氧两种流程。
4.3 BOD培养瓶：容积550±1mL。
HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接
种法
HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法
1. 引言
2. 实验仪器和试剂
2.1 仪器
BOD5测定仪：用于测定水样的BOD5值。
2.2 试剂
磷酸盐缓冲溶液：用于维持水样的pH值，使其在适宜范围内。
水样：待测水样。
3. 实验步骤
3.1 样品准备
将待测水样收集到容器中，以确保采样的代表性。
3.2 稀释
将样品从容器中取出一定量，与磷酸盐缓冲溶液按照一定比例混合，使得水样的浓度适宜。
3.3 接种
将稀释后的样品接种到预先准备好的BOD5测定仪中，保持适宜的温度和湿度条件。
3.4 测定
在接种后的一段时间内（一般为五天），记录BOD5测定仪中的溶氧量变化情况。
3.5 计算BOD5值
根据测定期间溶氧的变化情况，利用适当的计算公式计算BOD5值。
4. 结果与讨论
根据测定得到的BOD5值，可以评价水样的耗氧能力和有机物的含量。
通过与相关标准进行对比，可以判断水质是否符合要求。
5.
稀释与接种法是测定水质BOD5值的常用方法之一。
通过该方法可以准确测定水样的有机物耗氧能力，评价水质的好坏，为水体的管理和保护提供依据。
中华人民共和国国家环境保护标准HJ 505—2009代替GB/T 7488-1987水质五日生化需氧量（BOD5）的测定稀释与接种法警告：丙烯基硫脲属于有毒化合物，操作时应按规定要求佩带防护器具，避免接触皮肤和衣服；标准溶液的配制应在通风柜内进行操作；检测后的残渣残液应做妥善的安全处理。
1 适用范围本标准规定了测定水中五日生化需氧量（BOD）的稀释与接种的方法。
本标准适用于地表水、工业废水和生活污水中五日生化需氧量（BOD）的测定。
方法的检出限为L，方法的测定下限为2mg/L，非稀释法和非稀释接种法的测定上限为6mg/L，稀释与稀释接种法的测定上限为6000mg/L。
2 规范性引用文件本标准内容引用了下列文件中的条款。
凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 7489 水质溶解氧的测定碘量法GB/T 11913 水质溶解氧的测定电化学探头法HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范3 方法原理生化需氧量是指在规定的条件下，微生物分解水中的某些可氧化的物质，特别是分解有机物的生物化学过程消耗的溶解氧。
通常情况下是指水样充满完全密闭的溶解氧瓶中，在（20±1）℃的暗处培养5d±4h 或(2+5)d±4h(先在0～4℃的暗处培养2d，接着在(20±1)℃的暗处培养5d，即培养(2+5)d)，分别测定培养前后水样中溶解氧的质量浓度，由培养前后溶解氧的质量浓度之差，计算每升样品消耗的溶解氧量，以BOD形式表示。
若样品中的有机物含量较多，BOD的质量浓度大于6mg/L，样品需适当稀释后测定；对不含或含微生物少的工业废水，如酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存的废水或经过氯化处理等的废水，在测定BOD时应进行接种，以引进能分解废水中有机物的微生物。
当废水中存在难以被一般生活污水中的微生物以正常的速度降解的有机物或含有剧毒物质时，应将驯化后的微1生物引入水样中进行接种。
五日生化需氧量BOD5的测定作业指导书生活污水与工业废水含有大量有机物,这些有机物在水体中分解时要消耗大量溶解氧,从而破坏水体中氧的平衡,使水质恶化。
生化需氧量是属于利用水中有机物在一定条件下所消耗的氧,用来表示水体中有机物的含量的一个重要指标。
生化需氧量的经典测定方法,是稀释接种法。
稀释接种法：1、方法原理生化需氧量是指在一定条件下,微生物分解存在水中的某些可氧化物质、特别是有机物所进行的生物化学过程消耗溶解氧的量。
于恒温培养箱内在20 1℃培养5天,分别测定样品培养前后的溶解氧,二者之差既为BOD5值,以氧的mg/L表示。
本方法适用于测定BOD5范围:2mg/L<C BOD5<6000mg/L,当>6000时,会因稀释带来误差。
仪器：(1)恒温培养箱(2)5—20L细口玻璃瓶(3)1000—2000ml量筒(4)玻璃棒:50ml,棒的底端固定一个10号的带有几个小孔的橡胶塞。
(5)溶解氧瓶(碘量瓶)：250—300ml试剂：(1)磷酸盐缓冲溶液将8.5g磷酸二氢钾(KH2PO4),21.75g磷酸氢二钾(K2HPO4),33.4g七水合磷酸氢二钠(Na2HPO4·7H2O),和1.7g 氯化铵(NH4Cl)溶于水中,稀至1000ml。
此溶液PH值为7.2(2)硫酸镁溶液将22.5g七水合硫酸镁(MgSO4·7H2O)溶于水中,稀至1000ml(3)氯化钙溶液将27.5g无水氯化钙溶于水中,稀至1000ml。
(4)氯化铁溶液将0.25g六水合氯化铁(FeCl3·6H2O)溶于水,稀至1000ml。
(5)盐酸溶液(0.5mol/L)将40ml浓盐酸溶于水, 稀至1000ml。
(6)氢氧化钠溶液(0.5mol/L)将20g氢氧化钠溶于水, 稀至1000ml。
(7)葡萄糖—谷氨酸标准溶液将葡萄糖和谷氨酸在103干燥1小时后,各称取150mg 溶于水中,移入1000ml容量瓶中稀至标线,临用前配制。
水质-五日生化需氧量(BOD5)的测定中华人民共和国国家环境保护标准HJ 505—2009代替GB/T 7488-1987水质五日生化需氧量（BOD5）的测定稀释与接种法警告：丙烯基硫脲属于有毒化合物，操作时应按规定要求佩带防护器具，避免接触皮肤和衣服；标准溶液的配制应在通风柜内进行操作；检测后的残渣残液应做妥善的安全处理。
1 适用范围本标准规定了测定水中五日生化需氧量（BOD5）的稀释与接种的方法。
本标准适用于地表水、工业废水和生活污水中五日生化需氧量（BOD5）的测定。
方法的检出限为0.5mg/L，方法的测定下限为2mg/L，非稀释法和非稀释接种法的测定上限为6mg/L，稀释与稀释接种法的测定上限为6000mg/L。
2 规范性引用文件本标准内容引用了下列文件中的条款。
凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 7489 水质溶解氧的测定碘量法GB/T 11913 水质溶解氧的测定电化学探头法HJ/T 91 地表水和污水监测技术规范3 方法原理生化需氧量是指在规定的条件下，微生物分解水中的某些可氧化的物质，特别是分解有机物的生物化学过程消耗的溶解氧。
通常情况下是指水样充满完全密闭的溶解氧瓶中，在（20±1）℃的暗处培养5d±4h 或(2+5)d±4h(先在0～4℃的暗处培养2d，接着在(20±1)℃的暗处培养5d，即培养(2+5)d)，分别测定培养前后水样中溶解氧的质量浓度，由培养前后溶解氧的质量浓度之差，计算每升样品消耗的溶解氧量，以BOD5 形式表示。
若样品中的有机物含量较多，BOD5 的质量浓度大于6mg/L，样品需适当稀释后测定；对不含或含微生物少的工业废水，如酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存的废水或经过氯化处理等的废水，在测定BOD5 时应进行接种，以引进能分解废水中有机物的微生物。
生化需氧量（BOD5）测定
一、原理
生化需氧量是指在规定的条件下，微生物分解存在于水中的某些可氧化物质，主要是有机物质所进行的生物化学过程中消耗溶解氧的量。
分别测定水样培养前的溶解氧含量和20±1℃培养五天后的溶解氧含量，二者之差即为五日生化过程中所消耗的溶解氧量（BOD5）。
对于某些地面水及大多数工业废水、生活污水，因含较多的有机物，需要稀释后再培养测定，以降低其浓度，保证降解过称在有足够溶解氧的条件下进行的。
其具体水样稀释倍数可借助于高锰酸钾指数或化学需氧量（COD cr）推算。
对于不含或少含微生物的工业废水，在测定BOD5时应进行接种，以引入能分解废水中有机物的微生物。
当废水中存在难于被一般生活污水中的微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时，应接种经过驯化的微生物。
二、仪器
1、恒温培养箱
2、5-20L 细口玻璃瓶
3、1000—2000mL 量筒
4、玻璃搅棒：棒长应比所用量筒高长20㎝。
在棒的底端固定一个直径比量筒直径略小，并带有几个小孔的硬橡胶板。
5、溶解氧瓶：200-300mL，带有磨口玻璃塞并具有供水封用的钟形口。
6、宏吸管：供分取水样和添加稀释水用。
三、试剂
1、磷酸盐缓冲溶液：将8.5g 磷酸二氢钾（KH2PO4），21.75g 磷酸氢二钾（K2HPO4），33.4g 磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O）和1.7g 氯化铵（NH4Cl）溶于水中，稀释至1000mL。
此溶液的PH 值应为7.2。
2、硫酸镁溶液：将22.5g 硫酸镁（MgSO4·7H2O）溶于水中，稀释至1000mL。
3、氯化钙溶液：将27.5g 无水氯化钙溶于水中，稀释至1000mL。
4、氯化铁溶液：将0.25g 氯化铁（FeCl3·6H2O）溶于水，稀释至1000mL。
5、盐酸溶液（0.5mol/L）：将40 mL（ρ=1.18g/ mL）盐酸溶于水，稀释至1000mL。
6、氢氧化钠溶液（0.5mol/L）：将20g 氢氧化钠溶于水，稀释至1000mL。
7、亚硫酸钠溶液（C1/2 Na2SO3=0.025 mol/L）：将1.575g 亚硫酸钠溶于水，稀释至1000mL。
此溶液不稳定，需每天配制。
8、葡萄糖—谷氨酸标准溶液：将葡萄糖（C6H12O6）和谷氨酸钠（HOOC—CH2—CH2—CHNH2—COOH）在103℃干燥1h 后，各称取150mg溶于水中，移入1000 mL 容量瓶内并稀释至标线，混合均匀。
此标准溶液临用前配制。
9、稀释水：在5-20L 玻璃瓶内装入一定量的水，控制水温在20℃左右。
然后用无油空气压缩机或薄膜泵，将此水曝气2-8h，使水中的溶解氧接近饱和，也可以鼓入适量纯氧。
瓶口盖以两层经洗涤晾干的纱布，置于20℃培养箱内放置数小时，使水中的溶解氧量达到8mg/L。
临用前于每升水中加入氯化钙溶液、氯化铁溶液、硫酸镁溶液、磷酸盐缓冲溶液各1mL，并混合均匀。
稀释水的PH 值应为7.2，其BOD5应小于0.2 mg/L。
10、接种水：可选用以下任一方法，以获得适用的接种液。
（1）城市污水，一般采用生活污水，在在室温下放至一昼夜，取上层清液使用。
（2）表层土壤浸出液，取100g 花园土壤或植物生长土壤，加入1L 水，混合并静置10min ，取上清液供用。
（3）用含城市污水的河水或湖水。
（4）污水处理厂的出水。
（5）当分析含有难于降解的废水时，在排污口下游3-8km 处取水样作为废水的驯化接种液。
如无此种水源，可取中和或经适当稀释后的废水进行连续曝气、每天加入少量该种废水，同时加入适量表层土壤或生活污水，使能适应该种废水的微生物大量繁殖。
当水中出现大量絮状物，或检查其化学需氧量的降低值出现突变时，表明适用的微生物已进行繁殖，可用作接种液。
一般驯化过程需要3-8 天。
11、接种稀释水：取适量接种液，加于稀释水中，混匀。
每升稀释水中接种液加入量生活污水为1-10 mL；表层土壤浸出液为20-30mL；河水、湖水为10-100mL。
接种稀释水的PH 值应为7.2，其BOD5值宜在0.3-1.0 mg/L 之间为宜。
接种稀释水配制后应立即使用。
四、测定步骤
1、水样的预处理
（1）水样的PH 若超出 6.5-7.5 范围时，可用盐酸或氢氧化钠溶液调节至近于7，但用量不要超过水样体积的0.5%。
若水样的酸度或碱度很高，可改用高浓度的碱或酸进行调节中和。
（2）水样中含有铜、铅、锌、铬、镉、砷、氰等有毒物质时，可使用经过驯化的微生物接种液的稀释水进行稀释，或增大稀释倍数，以减少毒物的浓度。
（3）含有少量游离氯的水样，一般放置1-2h，游离氯即可消失。
对于游离氯在短时间内不能消散的水样，可加入亚硫酸钠溶液，以除去之。
其加入量的计算方法是：取中和好的水样100 mL，加入1+1 乙酸10mL，10%（m/v）碘化钾溶液 1 mL，混匀。
以淀粉溶液为指示剂，用亚硫酸钠标准溶液滴定游离碘。
根据压硫酸钠标准溶液消耗的体积及浓度，计算水样中所需要加入亚硫酸钠溶液的量。
（4）从水温较低的水域中采集的水样，可遇到含有过饱和溶解氧，此时应将水样迅速升温至20℃左右，充分振摇，以赶出过饱和的溶解氧。
从水温较高的水域或废水排放口取得的水样，则应迅速使其冷却至20℃左右，并充分振摇，使与空气中氧分压接近平衡。
2、水样的测定
（1）不经稀释水样的测定：溶解氧含量较高、有机物含量较少的地面水，可不经稀释，而直接以虹吸法将约20℃的混匀水样转移至两个溶解氧瓶内，转移过程中应注意不使其产生气泡。
以同样的操作使两个溶解氧瓶充满水样，加塞水封。
立即测定其中一瓶溶解氧。
将另一瓶放入培养箱中，在20±1℃培养 5 天后，测其溶解氧。
（2）需经稀释水样的测定
稀释倍数的确定：地面水可由测得的高锰酸盐指数乘以适当的系数求出稀释倍数（见下表）
高锰酸盐指数（mg/L）系数
<5
5-10 0.2、0.3
10-20 0.4、0.6
> 0.5、0.7、1.0
工业废水可由重铬酸钾法测得的COD 值确定。
通常需作三个稀释比，即使用稀释水时，由COD 值分别乘以系数0.075、0.15、0.225，即获得三个稀释倍数；使用接种稀释水时，则分别乘以0.075、0.15 和0.225，获得三个稀释倍数。
稀释倍数确定后按照下述方法之一测定水样:
①一般稀释法：按照选定的稀释比例，用虹吸法沿筒壁先引入部分稀释水（或接种稀释水）于1000 mL 量筒中，加入需要量的均匀水样，再引入稀释水（或接种稀释水）至800mL，用带胶板的玻璃棒小心上下搅匀。
搅拌时勿使搅棒的胶板露出水面，防止产生气泡。
按不经稀释水样的测定步骤，进行瓶装，测定每天溶解氧和培养5天后的溶解氧量。
另取两个溶解氧瓶，用虹吸法装满稀释水（或接种稀释水）作为空白，分别测定 5 天前、后的溶解氧含量。
②直接稀释法：直接稀释法是在溶解氧瓶内直接稀释。
在已知俩个容积相同（其差小于1mL）的溶解氧瓶内，用虹吸法加入部分稀释水（或接种稀释水），再加入根据瓶容积和稀释比例计算出的水样量，然后引入稀释水（或接种稀释水）至刚好充满，加塞，勿留气泡于瓶内。
其余操作与上述稀释法相同。
在BOD5测定中，一般采用叠氮化钠改良法测定溶解氧。
如遇干扰物质，应根据具体情况采用其它测定法。
溶解氧的测定方法附后。
五、计算
1、不经稀释直接培养的水样
BOD5（mg/L）=C1-C2
式中：C1——水样在培养前的溶解氧浓度（mg/L）；
C2——水样经5 天培养后，剩余溶解氧浓度（mg/L）。
2、经稀释后培养的水样
BOD5（mg/L）=[（C1-C2）—（B1-B2）f1]∕f2
式中：C1——水样在培养前的溶解氧浓度（mg/L）；
C2——水样经5 天培养后，剩余溶解氧浓度（mg/L）；
B1——稀释水（或接种稀释水）在培养前的溶解氧浓度（mg/L）；
B2——稀释水（或接种稀释水）在培养后的溶解氧浓度（mg/L）；
f1——稀释水（或接种稀释水）在培养液中所占比例；
f2——水样在培养液中所占比例。
六、注意事项
1、测定一般水样的BOD5时，硝化作用很不明显或根本不发生。
但对于生物处理池出水，则含有大量硝化细菌。
因此，在测定BOD5时也包括了部分含氮化合物的需氧量。
对于这种水样，如只需测定有机物的需氧量，应加入硝化抑制剂，如丙烯基硫脲（ATU，C 4H8N2S）等。
2、在两个或三个稀释比的样品中，凡消耗溶解氧大于 2 mg/L 和剩余溶解氧大于1mg/L 都有效，计算结果时应取平均值。
3、为检查稀释水和接种液的质量，以及化验人员操作技术，可将20mL葡萄糖-谷氨酸标准溶液用接种稀释水稀释至1000mL，测其BOD5，其结果应在180-230mg/L 之间。
否则，应检查接种液、稀释水或操作技术是否存在问题。
