04 实验四 植物DNA的提取和鉴定(十六烷基三甲基溴化铵,CTAB)

CTAB（⼗六烷基三甲基溴化铵）⼗六烷基三甲基溴化铵别称西曲溴铵、溴棕三甲基铵、溴烷铵，鲸熔三甲基溴化铵；CTAB；CTMAB；HTAB；CTABr；分类季铵盐分⼦式 C16H33(CH3)3NBr分⼦量 364.446熔点: 250-237℃⽔溶性 13 g/L (20°C)纯度(含量) ＞99%性质本品呈⽩⾊或浅黄⾊结晶体⾄粉末状，易溶于异丙醇，可溶于⽔,震荡时产⽣⼤量泡沫，能与阳离⼦、⾮离⼦、两性表⾯活性剂有良好的配伍性。

具有优良的渗透、柔化、乳化、抗静电、⽣物降解性及杀菌等性能。

本品化学稳定性好，耐热、耐光、耐压、耐强酸强碱。

⽤途本品为天然、合成橡胶、硅油和沥青乳化剂；合成纤维、天然纤维和玻璃纤维的抗静电剂、柔软剂；护发素的调理剂；相转移催化剂；乳液起泡剂、表⾯活性剂，分析试剂，涤纶真丝化剂，⽪⾰加脂剂，它还⽤于助焊剂、焊锡膏⽣产⾥起表⾯活性剂作⽤，活性强，对亮点、虚焊、焊电饱满都有⼀定作⽤。

CTAB法提取DNA试剂：1）2×CTAB 提取液（PH 8.0）：2% CTAB，1.4MNacl，0.02MEDTA，0.1MTris-cl，0.2%巯基⼄醇。

即称取CTAB 2 g加蒸馏⽔40ml，加1M Tris-cl（PH8.0）10ml，0.5M EDTA（PH 8.0）4ml和5M NaCl 28ml,待CTAB溶解后⽤蒸馏⽔定容到100ml（提取前加⼊2%的巯基⼄醇，100ml加0.2ml巯基⼄醇）2）1M Tris-cl（PH 8.0）100 ml:12.11g Tris碱；ddH2O ，80ml；HCl，4.9 ml三者混匀充分溶解后，滴加浓盐酸调PH⾄8.0，定容⾄100ml3）0.5M EDTA（PH 8.0） 100ml：在80ml⽔中加⼊18.01g EDTANa2.2H2O搅拌溶解，⽤NaOH调PH⾄8.0（约2gNaOH颗粒），定容⾄100ml4）5M NaCl 100ml：称取29.22g NaCl ，⽤ddH2O定容到100ml5）3M NaAc 10ml：称取2.46g NaAc，⽤ddH2O定容到10ml操作步骤：1、称取1.0g幼嫩的叶⽚，在研钵中加⼊液氮预冷，将叶⽚放到液氮中研磨均匀，直⾄全部研磨⾄粉末，转⼊1.5ml离⼼管中，加⼊600 ul 65℃预热的CTAB溶液（⽤前加⼊2%的巯基⼄醇）2、将装有CTAB和样品的EP管放⼊65℃⽔浴，约1h3、冷却后，加⼊600ul 的酚：氯仿：异戊醇(25:24:1=300:288:12)，混匀，12000rpm，离⼼15min4、吸上清，装⼊⼀新的EP管5、加⼊600ul 氯仿：异戊醇（24:1=576:24），12000rpm。

CTAB法提取植物基因组DNACTAB法提取植物基因组DNACTAB法原理CTAB（Cetyl trimethyl ammonium bromide），⼗六烷基三甲基溴化铵，是⼀种阳离⼦去污剂，可溶解细胞膜，能与核酸形成复合物，具有从低离⼦强度溶液中沉淀核酸的特性。

当降低溶液盐浓度到⼀定程度（0.3 mol/L NaCl）时，CTAB-核酸的复合物从溶液中沉淀，通过离⼼就可将其与蛋⽩，多糖类物质分开，在经过有机溶剂抽提，去除蛋⽩，多糖，酚类等杂质。

最后通过⼄醇或异丙醇沉淀DNA，⽽CTAB溶于⼄醇或异丙醇⽽除去在⾼离⼦强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋⽩质和多聚糖形成复合物，不能沉淀核酸。

CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出，因此，在将其加⼊冰冷的植物材料之前必须预热，且离⼼时温度不要低于15℃。

另外，它还能保护DNA不受内源核酸酶的降解。

主要试剂与溶液的配制：PVP（聚⼄烯吡咯烷酮K30）巯基⼄醇氯仿︰异戊醇（24︰1）异丙醇70%⼄醇Tris-苯酚RNaseA⽆⽔⼄醇CTAB 溶液：CTAB——20g/LNaCl（58.44）——1.4 mol/L（81.816g）EDTA（292.25）——10 mmol/L（2.9225g）Tris（121.14）——100 mmol/L（12.114g）pH 8.01×TE 缓冲液：EDTA（292.25）——1 mmol/L（0.29225g）Tris（121.14）——10 mmol/L（1.2114g）pH 8.0NaAC溶液：NaAC（82.03）——3mol/L（246.09g）pH 4.0植物总DNA的提取1、取适量⽢薯新鲜叶⽚，⽤液氮迅速研磨，中间加PVP（聚⼄烯吡咯烷酮K30）少许，成粉末后转⼊10mL的离⼼管中，放⼊液氮或-80℃冰箱储存（在研磨样品时，研的细和研的粗，提出的DNA量可以相差⼏倍，所以，在液氮保护的很好的情况下尽量多研磨⼏次）。

关于CTAB法提取基因组DNA，原理CTAB法原理CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。

在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。

通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。

CTAB提取缓冲液的经典配方Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；NaCl 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，在于液相中；CTAB 溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。

用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。

用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。

蛋白分子溶于酚相，而DNA 溶于水相。

使用酚的优点：1.有效变性蛋白质；2抑制了DNase的降解作用。

缺点：1.能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly(A)RNA。

2.不能完全抑制RNase的活性。

氯仿的作用？氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。

最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。

（酚易溶于氯仿中）用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。

异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。

另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。

植物DNA的提取与测定一、目的随着基因工程等分子生物学技术的迅速发展及广泛应用，人们经常需要提取高分子量的植物DNA，用于构建基因文库、基因组southern 分析、酶切及克隆等，这是研究基因结构和功能的重要步骤。

本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA 的原理并掌握CTAB 提取DNA 的方法，进一步了解DNA 的性质。

二、原理细胞中的DNA 绝大多数以DNA-蛋白复合物（DNP）的形式存在于细胞核内。

提取DNA 时，一般先破碎细胞释放出DNP，再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质，最后用乙醇把DNA 从抽提液中沉淀出来。

DNP与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。

以NaCl 溶液为例：RNP在0.14mol/L NaCl中溶解度很大，而DNP 在其中的溶解度仅为纯水中的1％。

当NaCl 浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP 的溶解则随之不断增加。

当NaCl 浓度大于1mol/L 时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2 倍，因此通常可用1.4mol/L NaCl 提取DNA。

为了得到纯的DNA 制品，可用适量的RNase 处理提取液，以降解DNA 中搀杂的RNA。

关于植物总DNA 的提取主要有两种方法：1．CTAB 法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB）：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB 与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB 与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB 能溶解于乙醇中。

2．SDS 法：利用高浓度的阴离子去垢剂SDS（十二烷基磺酸钠，Sodium dodecyl sulfate, 简称SDS）使DNA 与蛋白质分离，在高温（55～65℃）条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的方法使蛋白质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。

十六烷基三甲基溴化铵亲水基一、引言十六烷基三甲基溴化铵（简称CTAB）是一种常见的阳离子表面活性剂，具有优良的表面活性、乳化性、分散性等性能，广泛应用于各个领域。

本文将对CTAB的性质、应用、制备与纯化、发展趋势等方面进行探讨，以期为相关人员提供参考。

二、十六烷基三甲基溴化铵的基本性质1.分子结构CTAB的分子结构由长链烷基和三个甲基组成，其中一个甲基带有溴原子。

其分子式为C19H40BrN，相对分子质量为309.3。

2.亲水基性质CTAB分子中含有季铵盐基团，具有较强的亲水性。

在水溶液中，CTAB分子会离解成阳离子，与水分子形成氢键，使其具有良好的溶解性。

3.溶解性CTAB在水、醇等极性溶剂中具有良好的溶解性。

随着温度的升高，溶解度逐渐增大。

此外，CTAB在不同浓度的溶液中，溶解度也有所不同。

三、应用领域1.表面活性剂CTAB作为阳离子表面活性剂，具有良好的表面活性，可用于制备洗涤剂、清洁剂等日常用品。

2.乳化剂CTAB在油水体系中具有良好的乳化性能，可用于制备乳液、涂料等产品。

3.分散剂CTAB能有效分散固体颗粒，提高颗粒在水性体系中的稳定性，广泛应用于造纸、陶瓷、建材等行业。

四、产品制备与纯化1.制备方法CTAB的制备方法主要有两种：一是烷基化反应，二是季铵化反应。

烷基化反应是将长链烷基溴化物与氢氧化钠反应生成CTAB；季铵化反应是将长链烷胺与氢氧化钠、溴化钠反应制备CTAB。

2.纯化工艺CTAB的纯化工艺主要包括重结晶、溶剂萃取等。

重结晶是将CTAB溶液加热、冷却、过滤得到纯品；溶剂萃取则是利用CTAB在不同溶剂中的溶解度差异，进行多次萃取以提高纯度。

五、发展趋势与展望1.市场需求随着科技的进步和环保要求的提高，CTAB在各个领域的应用将持续扩大，市场需求不断增长。

2.技术创新为满足环保、节能等要求，CTAB的制备工艺和应用技术将不断优化和创新，包括绿色合成、高效应用等方面。

3.环保要求未来，CTAB的生产和应用将更加注重环保，致力于降低能耗、减少污染，实现可持续发展。

植物基因组dna的提取实验报告植物基因组DNA的提取实验报告。

植物基因组DNA的提取是分子生物学实验中的一项重要步骤，对于研究植物的遗传特性和基因表达具有重要意义。

本实验旨在通过提取植物细胞中的DNA，为后续分子生物学实验提供基础支持。

在本次实验中，我们选择了小麦叶片作为实验材料，采用CTAB法提取植物基因组DNA，并对提取的DNA进行质量评估。

首先，我们收集了新鲜的小麦叶片样品，并将其置于液氮中迅速冷冻保存，以保持DNA的完整性。

接着，将叶片样品磨成细末状，并加入预冷的CTAB提取液中，进行细胞破裂和DNA的溶解。

随后，通过酚/氯仿提取法分离DNA与蛋白质，最终得到DNA的沉淀物。

在实验过程中，我们注意到了一些关键的操作细节。

首先，样品的冷冻保存和研磨过程需要迅速进行，以防止DNA的降解。

其次，在加入CTAB提取液后，充分混合样品并保持恒温，有助于细胞破裂和DNA的溶解。

最后，在进行DNA的沉淀时，需要注意避免将上清液一同转移，以保证提取得到的DNA纯度。

提取得到的DNA样品经过紫外分光光度计检测，结果显示其纯度较高，吸光比值（A260/A280）约为1.8，符合DNA的纯度要求。

随后，我们进行了琼脂糖凝胶电泳实验，观察到明显的DNA条带，并通过对照DNA分子量标准品的迁移情况，初步评估了提取得到的DNA片段大小。

通过本次实验，我们成功地提取到了小麦叶片样品中的基因组DNA，并对其质量进行了评估。

下一步，我们将利用提取得到的DNA样品，开展进一步的分子生物学实验，包括PCR扩增、基因克隆等，以深入研究小麦的遗传特性和基因表达。

本次实验为我们提供了可靠的DNA样品，为后续实验奠定了坚实的基础。

总之，植物基因组DNA的提取是分子生物学研究中的重要步骤，本次实验通过CTAB法成功提取了小麦叶片样品中的DNA，并对其进行了质量评估。

提取得到的DNA样品具有较高的纯度和完整性，为后续实验提供了可靠的基础支持。

实验四植物DNA的提取一、实验目的掌握CTAB法从植物叶片提取DNA的原理和方法。

采用CTAB法从植物叶片中提取基因组DNA，并进行纯度分析。

二、实验原理1、核酸提取的基本原理核酸是生物有机体中的重要成分，在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。

核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两大类，在真核细胞中，前者主要存在于细胞核中，后者主要存在于细胞质及核仁里。

在制备核酸时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放出来。

在浓氯化钠溶液(1～2 mol／L)中，DNA核蛋白的溶解度很大，RNA核蛋白的溶解度很小；而在稀氯化钠溶液(0.14 mol／L)中，DNA核蛋白的溶解度很小，RNA核蛋白的溶解度很大。

因此，可利用不同浓度的氯化钠溶液将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品中分别抽提出来。

分离得到核蛋白后，需进一步将蛋白等杂质除去，常采用的去除蛋白的方法有3种：①用含异戊醇的氯仿振荡核蛋白溶液，使其乳化，然后离心除去变性蛋白质，此时蛋白质凝胶停留在水相和氯仿相中间，而DNA溶于上层水相。

用两倍体积的无水乙醇溶液将DNA钠盐沉淀出来。

如果用酸性乙醇或冰乙酸来沉淀，得到的是游离的DNA。

②用十二烷基硫酸钠(SDS)等去污剂使蛋白质变性，与核酸分离，从而从材料中直接提取出DNA。

③用苯酚处理，然后离心分层，DNA溶于上层水相，蛋白变性后则停留在酚层内。

吸出上面水层，加两倍体积的无水乙醇溶液，得到白色纤维状DNA沉淀。

反复使用上述方法多次处理DNA核蛋白溶液，就能将蛋白等杂质较彻底地除去，得到较纯的DNA制品。

为了彻底除去DNA制品中混杂的RNA，可用RNA酶处理。

生物材料中含有的脂肪物质和大部分的多糖，在用盐溶液分离核蛋白和用乙醇或异丙醇分级沉淀时即被除去。

在DNA提取、制备的过程中，核酸极不稳定，许多因素可破坏其完整结构：①化学因素，核酸的结构在pH值4.0～11.0间较稳定，pH值在此范围外就会使核酸变性降解，故制备过程应避免过酸过碱。

利用CTAB法提取植物基因组DNA植物基因组DNA提取是分子生物学领域中常用的技术之一。

目的是为了获取高质量的DNA样品，以便进行PCR、测序、基因克隆以及染色体制备等实验。

目前，CTAB法是植物基因组DNA提取中广泛采用的方法之一。

本文将介绍利用CTAB法提取植物基因组DNA的步骤及注意事项。

1. 准备植物组织样品首先需要准备好待提取的植物组织样品，这些样品可以是叶子、花、芽、根等。

样品应该分别收集、标记，冷藏保存并尽快进行提取。

2. 样品研磨取一小段样品，用液氮将其冷冻，然后用研钵和研杵将其研磨成细碎的粉末状。

如果样品过多，则可以用离心管研磨器等仪器进行批量高效研磨。

3. 细胞壁裂解将磨细的植物组织加入CTAB裂解缓冲液中，加热至65℃，开启混合器磁子，同时混合2-3分钟左右，以破坏细胞壁，释放出DNA。

4. 除去蛋白质加入一定量的氯仿，并短暂的混合均匀，待混合物静置后，可以观察到混合液结成两层。

上层为水相，在此基础上加入同体积的异丙醇，沉淀出DNA进行洗涤和离心。

离心后，上清液含有蛋白质，可以废弃，而下沉淀可以进行枸橼酸溶解。

5. 获取DNA加入枸橼酸缓冲液后，可以分别进行洗涤和沉淀。

最后，通过乙醇提取，可以得到纯度较高的基因组DNA样品。

注意事项：1. 必须严格控制植物组织样品的数量，避免混入过多的杂质干扰提取效果。

2. 在DNA分离过程中，所有试剂、试管和磨具等物品都必须干燥无水，以免水分对提取质量产生干扰。

3. CTAB裂解缓冲液中的NaCl浓度和pH值的调节必须准确，其浓度和pH值直接关系到DNA的结晶和浓度。

4. 在进行DNA纯化过程中，必须注意所有材料的稳定性和纯度，同时要充分保护目标DNA，避免DNA被降解。

总之，CTAB法提取植物基因组DNA是一种安全、高效、可靠的方法。

在实际操作中，应充分掌握其原理、步骤和注意事项，以获取高质量的DNA样品，为后续的实验打下良好的基础。

实验十二植物中DNA的提取及鉴定实验十二植物中DNA的提取及鉴定一.实验目的1.学习掌握从植物中提取DNA的方法2.学习掌握从植物中分离核酸的原理和方法二.实验原理Ⅰ植物基因组DNA 的提取（CTAB法）植物组织中绝大部分是核DNA，它和组蛋白、非组蛋白结合在一起，以核蛋白（即染色质或染色体）的形式存在于细胞核内。

CTAB(十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide，简称CTAB)：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中(0.7mol/L NaCl)是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度(0.3mol/L NaCl)时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB 与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇中。

在DNA提取过程中必须始终注意以下几个关键问题：（1）DNA的二级结构和双链易受多种因素（如强酸、强碱、加热、低盐浓度、有机溶剂、酰胺类、尿素等）的影响引起双链解开，即“变性”，因此抽提时避免使用变性的条件。

（2）抑制内外源DNase的活力。

DNase就象一把刀，它能把大分子的DNA切成碎片，所以要加以杜绝，现可以通过多种途径来做到这一点：a、低温操作；b、调节pH，使偏碱（pH8.0）；c、抽提液中加表面活性剂；d、加螯合剂（EDTA）除去酶的铺助因子（Mg2+），使酶活性丧失。

（3）防止化学降解。

如过酸或过碱以及其它化学因素，会使DNA降解，一般综合考虑，取pH8.0左右为宜。

（4）防止物理因素降解。

如温度太高或机械张力剪切等，DNA分子特别大，其分子量可达1012道尔顿，极易被机械张力拉断，甚至在细管中稍急一些的流动也会使DNA断裂，所以在抽提过程中要特别注意这一点，操作过程要尽量简便、温和、减少搅拌次数，也不要剧烈摇动。

（5）植物的次生代谢物（主要是胞质内的多酚类或色素类化合物）对核酸提取有干扰作用。

ctab法提取植物基因组dna[指点] CTAB法提取植物基因组DNA这种方法是由Murray 和Thompson(1980)修改而成的简便方法。

CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中((0.7 mol/L NaCl)是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度(0.3 mol/L NaCl)时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白，多糖类物质分开。

最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA，而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去。

一材料、试剂和仪器1 材料新鲜的组织材料或-80?冻存的材料2 试剂(1)2×CTAB溶液(2)氯仿/异戊醇(24:1)(3)RNaseA 10mg/ml(4)乙醇或异丙醇(5)β-巯基乙醇(6)氯仿/异戊醇(25/24/1)(7)70%乙醇3. 仪器: 离心机，恒温水浴, 台式高速离心机，电泳装置二、实验程序1.在2mL离心管中，加入500μl的2×CTAB和20 μlβ-巯基乙醇, 65?预热。

2嫩的组织材料1-2g,用蒸馏水冲洗干净，再用灭菌ddHO冲洗2次，放入经液氮预冷的研2钵中，加入液氮研磨至粉末状，用干净的灭菌不锈钢勺转移粉末到预热的离心管中，总体积达到1mL混匀后置65?水浴中保温45-60min，并不时轻轻转动试管。

注:冻存材料直接研磨，绝对不能化冻。

而且粉末应在化冻前转移否则内源性Dnase有可能降解基因组DNA。

3加等体积的氯仿/异戊醇，轻轻地颠倒混匀，室温下10 000rpm离心10 min，移上清至另一新管中。

4向管中加入1/100体积的RNase A溶液，置37?20-30min。

5加入2倍体积的100%乙醇或0.7倍体积异丙醇，会出现絮状沉淀，-20?放置30 min或-80?放置10min，12 000rpm离心10-15min回收DNA沉淀。

6 用70%乙醇清洗沉淀两次，吹干后溶于适量的灭菌ddH2O中。

十六烷基三甲基溴化铵ph检测方法
十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）是一种阳离子表面活性剂，常
用于生物化学实验室中。

在进行CTAB的pH检测时，可以采用以下
方法：
1. pH试纸法，将pH试纸条浸泡在含有CTAB的溶液中，根据
试纸变色来判断溶液的pH值。

这种方法简单快捷，适用于快速初步
判断溶液的酸碱性，但精确度较低。

2. pH计法，使用数字式pH计仪器，将电极插入CTAB溶液中，通过仪器显示的数字读数来确定溶液的pH值。

这种方法精确度高，
适用于科研实验室和工业生产中对溶液pH值精确要求较高的情况。

3. 酸碱滴定法，使用酸碱滴定法来测定CTAB溶液的pH值。

首
先将CTAB溶液加入酸碱指示剂，然后滴加酸碱溶液直至指示剂的颜
色发生转变，记录所需的酸碱溶液用量，根据滴定结果计算出溶液
的精确pH值。

在进行pH检测时，需要注意以下几点：
确保使用的pH试纸、pH计或滴定试剂的准确性和灵敏度。

在进行pH检测前，确保CTAB溶液充分搅拌均匀，以确保取样的均匀性。

在进行pH检测时，注意安全操作，避免溶液溅出或接触皮肤和眼睛。

总的来说，针对十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）的pH检测，可以根据实际需求选择合适的方法进行检测，并严格遵循操作规程，确保检测结果的准确性和可靠性。

拟南芥T-DNA插入突变体的鉴定实验目的1.通过实验学习并掌握用CTAB来提取DNA的方法。

2.了解CTAB的成分及作用。

3.学习PCR的原理并掌握其方法。

4.学习琼脂糖凝胶电泳的原理与方法。

实验原理植物组织中绝大部分是核DNA，它和组蛋白、非组蛋白结合在一起，以核蛋白（即染色质或染色体）的形式存在于细胞核内。

CTAB(十六烷基三甲基溴化铵，简称CTAB)：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中(0.7mol/L NaCl)是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度(0.3mol/L NaCl)时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇中。

DNA是遗传信息的载体和基本遗传物质，它在遗传变异、代谢调控等方面起着重要作用，是分子生物学和基因工程研究的对象，但无论是研究植物DNA的结构和功能，还是开展外源DNA的转化、转导的研究，首先要做的就是从植物组织中提取天然状态的高分子量的纯化DNA。

T-DNA，转移DNA（transferred DNA ），是根瘤农杆菌Ti质粒中的一段DNA 序列,可以从农杆菌中转移并稳定整合到植物基因组。

人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，获得转基因植株。

除用于转基因以外，T-DNA插入到植物的基因中可引起基因的失活，从而产生基因敲除突变体；T-DNA大多为单拷贝插入，使其利于进行遗传分析。

PCR基本原理：聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，简称PCR，是一种分子生物学技术，用于在体外快速扩增DNA，具有类似细胞内DNA的复制过程:由一对引物介导，通过温度的调节，使双链DNA变性为单链DNA、单链DNA能与引物复性（退火）成为引物-DNA单链复合物、以及在dNTPs存在下DNA聚合酶能使引物沿单链模板延伸成为双链DNA（引物的延伸）；这种热变性-复性-延伸的过程，就是一个PCR循环；一般通过20-30个循环之后，就可获得大量的要扩增的DNA 片段。

CTAB配方及植物DNA提取方法主要试剂的配制参考（美）萨姆布鲁克（Sambrook，J.）等.分子克隆实验指南（下册）配置如下[94]：（1）0.5 mo1/L EDTA(pH 8.0)：称取EDTA-Na2 18.61 g，加80 mL双蒸水，磁力搅拌器上剧烈搅拌。

加入7 mL 10 mo1/L NaOH 调至pH 8.0再用双蒸水定容到100 mL，在1.03×105Pa下高压灭菌20 min。

（2）5 mol/L NaCl溶液：称取NaCl 29.22 g，溶解于90 mL的双蒸水，加热到80℃溶解，冷却，再用双蒸水定容100 mL，在高压灭菌20 min。

（3）10 mol/L NaOH溶液：称取40.00 g NaOH溶于80 mL的双蒸水，搅拌，定容到100 mL。

（4）1 mol/L Tris-HC1溶液(pH 8.0)：称取12.114 gTris碱，溶于80 mL的双蒸水，加入浓HC1 4.2 mL，调整PH值到8.0，加水定容到100 mL，高压灭菌20min。

（5）10%CTAB（m/v）：称取CTAB 10.00 g，溶解于80 mL的双蒸水，加热促进溶解，加双蒸水定容到100 mL，室温保存。

（6）5 mo1/L KAc溶液(pH 4.8和6.5)：分别称取KAc晶体49.07 g，溶于80 mL的双蒸水，再用冰乙酸调至pH 4.8和6.5，加双蒸水定容到100 mL，在1.03×105Pa下灭菌20 min。

4℃保存。

（7）3 mo1/L NaAc·3H2O溶液(pH 5.2)：称取NaAc晶体20.412 g溶解于约30 mL 的双蒸水，用冰乙酸调至pH 5.2，加双蒸水定容到50 mL，高压灭菌20 min。

4℃保存。

（8）提取缓冲液（0.4 mol/L葡萄糖，3%PVP，2％β-巯基乙醇）250 mL：称取葡萄糖19.817 g、PVP 7.50 g，加水溶解并定容到250 mL，在1.03×105Pa下灭菌20 min，β-巯基乙醇现用现加。