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凝胶过滤层析

凝胶过滤层析

持柱床面平整；
洗脱时流速不可太快或太慢；
透析袋中的液体不可装满，否则会将透析袋
胀破。
生物化学与分子生物学教研室
六、实验结果
磷酸盐的鉴定
试剂量
透析前杯内 蒸馏水 透析后杯内 蒸馏水
钼酸铵试剂
氨基萘酚磺酸试剂
反应结果
15滴 10滴
2滴 2滴
3滴 3滴
无 蓝色
生物化学与分子生物学教研室
蛋白质的鉴定
生物化学与分子生物学教研室
实验八
凝胶过滤分离高铁血红蛋白与 高铁氰化钾及透析技术
生物化学与分子生物学教研室
一、实验目的
掌握凝胶层析的原理
通过血红蛋白脱盐实验，初步掌握凝 胶层析技术 了解凝胶层析的应用
生物化学与分子生物学教研室
二、实验原理
凝胶过滤层析：
是利用具有网状结构凝胶的分子筛作用， 根据被分离物质的分子大小不同来进行分 离，也称分子筛层析、排阻层析。
层析管洗净、排出管中气泡
关闭出口
固定在铁架上 加入缓冲液没过砂芯
关闭出口
将凝胶缓缓注入管内
打开出口
自然沉降至柱床高度达20cm左右 不可露出床面 盖滤纸
生物化学与分子生物学教研室
装柱要求:
连续
均匀 无气泡
无分层
床面平整
生物化学与分子生物学教研室
3. 平衡
层析柱稳定后接储液瓶，打开出 口，用两倍于床体积的缓冲液洗脱平 衡(5-10min )，不可露出床面，关闭 出口
生物化学与分子生物学教研室
蛋白质的鉴定
试液量 透析前杯内蒸 馏水 透析后杯内蒸 馏水 透析袋内溶液 15%三氯醋酸 反应结果
40滴 40滴 10滴

凝胶过滤层析脱盐

凝胶过滤层析脱盐

2.点击“方法”， 打开界面，点击界 面左下方选项，分 析输入参数。
39
点击“方法”，再 点击下方的“采样 控制”，将采样结 束时间改为180分 钟，点击“采用”。
40
记录图谱 保存路径
点击“电压范 围”及“时间 范围”调整电 压值范围1~10 和时间值范围 0~10。（放大 查看）
下端柱头结构
密封圈调节螺帽 的作用： 旋松时密封圈 直径缩小，便于 取出；旋紧时密 封圈被压扁，直 径变大，防止柱 体漏液。
滤膜 密封圈 垫圈
密封圈调 节螺帽
17
二 . 层析柱的安装
洗净层析柱，垂直固定在柱架上:
18
层析柱的安装
旋松密封圈调节螺丝 取下柱头。检查滤膜 是否存在，将柱头装 进玻璃柱体内。
37
操 作 步 骤
将数据采集器通道1 （或通道2）的导线 按颜色分别接在紫 外检测仪背面“记 录仪”的接口上， 要接牢固。
打开电脑，双 击桌面的“N 2000 在线生化 工作站”，选 择通道，进入 工作站界面。
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3.点击“数据采 集”，进入层析 图谱界面
1.点击“实验信 息”，输入相关 的信息
四. 检测仪器的准备

打开紫外检测仪，预热。按照“N 2000 生化工作 站使用方法”及“核酸蛋白检测仪使用方法”连 接导线、设置参数，调整好仪器。点击“基线查 看”观察基线。
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样品的准备：
用20ml 0.02mol/L, pH6.5磷酸缓冲液溶 解CHOM沉淀。若溶解后的溶液混浊，要 用滤纸滤去不溶物。收集滤液上 Sephadex G-25凝胶层析柱脱盐。
紧上 密紧 封柱 圈头 调螺 节帽 螺后 丝记 。住 旋
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三. 装 柱

凝胶过滤层析简介

凝胶过滤层析简介

凝胶
层析柱
加样洗脱
再生保存
柱的选择 柱的装填
同样直径的层析柱 同样长度的层析柱 同样体积的层析柱 理想的层析柱
长层析柱比短的分辨率高； 直径大的比小的分辨率高； 层析柱长的比短的分辨率高。 直径与长度之比是1：25-1：100
常用的支持物有棉花、玻璃纤维、玻璃珠、垂熔玻璃等。 空柱中应留约1/5的水或溶剂。 不断搅拌下使胶粒均匀沉降，使不发生凝胶分层和胶面倾斜。
测定分子量
当Kd=1时，洗脱体积Ve=V0+Vi，为全渗入。 当Kd=0时，洗脱体积Ve=V0，为全排阻。
0＜Kd＜1时，洗脱体积Ve=Vo+KdVi，为部分渗入。
|分类与性质
凝胶
分类性质
凝 胶 含大量液体的具三维网状开孔弹性结构的多聚体结构，
一般制成球状颗粒。
性
能 多孔、亲水、惰性、稳定、色谱性能好
凝胶过滤层析技术
凝胶过滤层析技术 content
凝胶过滤的基本原理
凝胶分类与性质 凝胶过滤的基本操作
凝胶过滤层析的应用
|基本原理
原理
分子
洗脱体积
分配系数
凝胶过滤法又称为分子筛层析、凝胶 层析或排阻层析,是利用凝胶 的网状结构根据分子大小进 行分离的一种方法。凝胶过
Services 滤所用的介质是由交联葡萄
| 基本操作
凝胶
层析柱
加样洗脱
再生保存
凝胶再生 凝胶保存
仅使用过一次的凝胶柱，通常进行更新平衡后 即可再次使用； 湿法：洗净的凝胶悬浮于蒸馏水和缓冲液中，应加入 适量的防腐剂如氯仿、0.05％NaN3或20％乙醇等，不 先用水反复进行逆向冲洗，再用缓冲液进行 然微生物将生长。 平衡，平衡毕，即可重复使用 干法：用浓度逐步升高的乙醇洗净凝胶，使其脱水收 把凝胶倒出，用低浓度的酸或碱按其预处理 缩，再抽干乙醇，用60-80℃的暖风吹干，在室温下 方法进行，处理后重新装柱即可再行使用 保存。 半缩法：是过度法，用60%-70%的乙醇使凝胶部分脱 水，然后封口，4 ℃保存。

实验一凝胶过滤层析分离蛋白质PPT课件

实验一凝胶过滤层析分离蛋白质PPT课件
7
（1）层析系统的基本组成
固定相 + 流动相
固体物质 / 固定于固体物质的成分
可以流动的物质： 如水和各种溶媒
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待分离混合物（A、B）随流动相通过固定相
由于理化性质差异，与两相发生相互作用（吸附、 溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含 量对比）不同
与固定相相互作用力越弱的组分，随流动相移动时 受到的阻滞作用小，移动速度快
CuSO4 碱性
肽键
紫 红色
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四、实验结果
绘制洗脱结果示意图，并分析所得结果
五、讨论
下次实验：
《碱性磷酸酶的提取及其比活性的测定》 时间：4月18日上午9：00开始
30
2019/12/14
.
31
注意：
防止床面干涸，可适当补充蒸馏水
26
5. 加样
① 加样前打开出口，使床面的蒸馏水流出，正好露 出床面时，立即关闭出口（将干未干）
② 用滴管将混合样品(0.6ml，即血红蛋白和溶菌酶 各0.3ml)缓缓沿柱内壁小心加于床表面
③ 打开出口，使样品进入床内，直到床面重新露出, 立即加入1~2倍于样品体积的蒸馏水
分配层析法 各组分在流动相和固相中的分配系数不同
离子交换层 固定相是离子交换剂，各组分与离子交换
析法
剂亲和力不同而分离
亲和层析法 固定相只能与一种待分离组分专一结合， 以此和无亲和力的其它组分分离
凝胶层析法 固定相是多孔凝胶，各组分的分子大小不 同，因而在凝胶上受阻滞的程度不同
11
按操作形式不同分类
吸水能力，每g干胶吸水量的10倍
数字愈小,交联度越大,被筛分物质的分子量也愈小
17
例： Sephadex G-50：

凝胶过滤层析

凝胶过滤层析

因此分子的正常Ｋav值0~1之间,这种由小 到大的顺序决定了物质流出的顺序。
排阻极限： 是指不能进入凝胶颗粒孔穴内部 的最小分子的分子量。
排阻极限代表一种凝胶能有效分离的最大分 子量。
第二节 凝胶介质的分类和性质
1） 葡聚糖凝胶 ① G类葡聚糖（Sephadex） ② LH-亲脂型葡聚糖 ③ Sephacryl
凝胶过滤原理示意图
凝胶层析的几个概念
外水体积（Vo）：是指凝胶柱中凝胶颗粒周围空间的体积，也就是凝胶颗粒间液体流 动相的体积。 内水体积（Vi）：是指凝胶颗粒中孔穴的体积，凝胶层析中固定相体积就是指内水体 积。 基质体积（Vg）：是指凝胶颗粒实际骨架体积。 柱床体积（Vt）：是指凝胶柱所能容纳的总体积。 洗脱体积 （Ve）：样品中某组分洗脱下来所需洗脱液的总体积。
（2） 琼脂糖凝胶
商品名 Sepharose（瑞典）
1）2B,4B等型号，数字代表颗粒中琼脂糖的百 分含量，数字越大，分离的范围越小 2）与1，3－二溴异丙醇反应生成交联琼脂糖， 稳定性提高；
Bio－gel A(美国）
一般有A0.5, A1.5等型号，数字×106代表分 离的分子量极限；
与葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶相比，琼脂糖凝 胶机械强度和筛孔稳定性好，洗脱速度可以快些
对于凝胶层析，分配系数实质上表示某个组分在内水 体积和在外水体积中的浓度分配关系。
Ｋav＝（Ｖｅ－Ｖｏ）／(Ｖt － Vo)
它只与被分离物质分子的大小和凝胶颗粒孔 隙的大小分布有关，而与柱的长短粗细无 关，也就是说它对每一物质为常数与柱的 物理条件无关。
（1）Ｋav = 0时,Ve = Vo,意味着该分子完全被排 阻于凝胶颗粒之外,全部分布于流动相里,在固定相 分布为0,而最先流出。

层 析PPT演示课件

层 析PPT演示课件
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主要机理是分子筛效应,当被分离物质 流经凝胶柱时,因各组份的分子大小不同,在 凝胶受到的阻滞作用有差异,从而造成各组 分在凝胶柱中的迁移速度不同得到分离。
3
色谱历史 古罗马人分析混合染料（类似辐射纸色谱）
1903（1906）年，Michael Tswett提出色谱法 1931年，Kuhn采用柱色谱分离了类胡萝卜素 1941年，Martin和Synge提出分配色谱法 1944年，Martin等又提出纸色谱法 1952年，Martin和James发明了气液色谱法 1955年，第一台商品气相色谱问世，标志着现 代色谱分析的建立 1956年，Stahl系统研究了薄层色谱法(TLC)
层析
CHROMATOGRAPHY
1
掌握：层析的概念、一般原理 凝胶层析的基本原理 装层析柱的过程及装柱要求
熟悉：层析技术的分类 凝胶层析的特点 凝胶的结构与性质
了解：凝胶的选择 柱、样品、洗脱液的选择 凝胶的保存
2
一.概述
层析Chromatography(色谱),利用混合 物中各组分的物理化学性质间的差异(溶解 度、分子极性、分子大小、分子形状、吸 附能力、分子亲合力等) ，使各组分在支持 物上集中分布在不同区域，借此将各组分 分离。
10
.离子交换层析 （ion-exchange chromatography ） ----利用离子交换剂与各组分之间的离子亲和
力不同而进行层析分离的方法。
.凝胶层析（gel chromatography） ----利用不同组分之间分子大小不同，在通过
凝胶介质时所受到的阻滞作用的差异而进 行分离的方法。
其固定相也可有两种状态，一种是以 固体作为吸附剂的固定相，另一种是以涂 布在固体载体表面的液体作为固定相。

第七章层析分离技术2——凝胶过滤层析

第七章层析分离技术2——凝胶过滤层析
特点：
（1）介质不带电荷, 具有化学惰性，不与被分离物 质发生化学反应，条件温和，不会使物质变性；
（2）色谱介质不需再生,可反复便用； （3）分离效率高，回收率较高； （4）广泛应用于生物大分子的初级分离，脱盐等。 （5）分辨率较低，需采用细长柱。 （6）经过凝胶过滤色谱后样品被稀释，上样前需
显影响 其分离效果不受去污剂、促溶盐类、变性剂等影响 能在多种有机溶剂存在下使用
②Superdex
根据分级范围不同，可分为若干型号（见表5.6，P80）， 其中，数字越大，孔径越大。 prep grade 颗粒较大。
Superdex peptide Superdex 30 prep grade Superdex 75、200 （ prep grade ）
根据交联之前母胶中琼脂糖的含量不同，Sepharose CL系 列凝胶也有三种类型：Sepharose CL-2B、Sepharose CL4B和Sepharose CL-6B。
特点
Sepharose CL系列凝胶在颗粒直径、分级范围方面与Sepharose系 列完全相同
在pH稳定范围、机械强度（流速）及温度稳定性等方面得到了很 大的改进
二、凝胶过滤介质
2. 凝胶介质的种类
按基质组成主要可以分为 ：
葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、聚苯乙烯 -二乙烯苯凝胶、二氧化硅凝胶，以及由两种物质混合 形成的如琼脂糖-葡聚糖混合凝胶、聚丙烯酰胺-葡聚糖 混合凝胶等。
按凝胶过滤层析能达到的柱效和分辨率又可分为：
标准凝胶介质：颗粒尺寸较大（一般为100~250 μm），机
（1）葡聚糖凝胶（Sephadex ） G-数字 联度越大，分级范围越小。）
凝
胶 过
（2）琼脂糖凝胶

实验六凝胶过滤层析

实验六凝胶过滤层析
实验 六 凝胶过滤层析
一 实验原理
凝胶层析是将样品混合物通过一定孔径的凝胶固定相， 由于在层析过程中样品不同的蛋白质具有不同的洗脱， 使不同的分子量的组分得以别离的层析方法。凝胶层 析的别离过程是在装有多孔物质如交联聚苯乙烯、多 孔玻璃、多孔硅胶、交联葡聚糖等填料的柱中进展的。
填料颗粒含有许多不同大小的孔隙。这些孔隙对于溶 剂分子而言是很大的，他们可以自由扩散出入。对于 溶质分子而言，如果分子大小适宜时，那么可以不同 程度地往孔隙中扩散，大分子量的溶质分子只能占有 较小的孔隙，而小分子量的溶质分子除能占住大孔隙 外，还可以占有另外一些起更小的孔隙。
其定量关系符合以下公式：
Ve=Vo+KV1 Ve：某一溶质的洗脱体积 Vo：层析柱的外水体积 Vi：层析柱的内水体积 K：某一溶质的分配系数
二试剂和器材
1．试剂
Sephadex G-75 0.005M PBS 兰色葡聚糖 样品溶液
二试剂和器材
2．器材 〔1〕带夹套层析柱：φ：h=1:24 〔2〕加样器 〔3〕分部收集器 〔4〕核酸蛋白检测仪 〔5〕小玻棒
三 操作步骤
2 层析柱的选择 对于大分子量化合物的分级别离，要求
柱床体积大于样品体积25倍以上，最高 可达100倍，层析柱的径高比也在25100之间。为了减少温度对别离蛋白质 活性的影响，层析柱外加夹套，通入低 温循环水，以保持低温。
三 操作步骤
3 凝胶柱的装填和凝胶床的检查 将层析柱垂直固定，层析柱预装1/5的平衡溶液，再将适当浓度
三 操作步骤
5 洗脱与收集 为了防止柱床体ห้องสมุดไป่ตู้的变化，造成流速降低及重复
性下降，整个洗脱过程应始终保持一定的操作压。 流速不能过快且要稳定。洗脱液的成分不应改变。 洗脱液采用分部收集器收集，以核酸蛋白检测器 检测洗脱峰。

第五章-凝胶过滤层析

第五章-凝胶过滤层析
2
第五章 凝胶过滤层析 第一节 概 述
凝胶过滤具有的优势 : （1）凝胶介质不带电荷，具有良好的稳定性，分离条件温 和，回收率高，重现性好； （2）通常情况下，溶液中存在各种离子、小分子、去污剂、 表面活性剂、蛋白变性剂等不会对分离产生影响，层析还能 在不同pH、温度下进行； （3）应用范围广，能分离的物质相对分子质量的覆盖面 宽，从几百到数百万，因此既适用于分子量较低的寡糖、寡 肽、聚核苷酸等生物小分子的分离，也适用于蛋白质、多糖、 核酸等大分子物质的纯化； （4）设备相对简单、易于操作、分离周期短、连续分离时 层析介质不需再生即可反复使用。
3
第五章 凝胶过滤层析 第二节 原 理
一、凝胶过滤的概念
不同的溶质因不同程度进入介质而在液相中停留的时间不同, 凝胶的孔径和溶质分子大小的关系决定了层析时该溶质在层 析柱中的保留时间，不同的物质因保留时间不同而分离.
4
第五章 凝胶过滤层析 第二节 原 理
凝胶色谱分离原理
5
第五章 凝胶过滤层析 第二节 原 理
7
第五章 凝胶过滤层析 第二节 原 理
2.分子量低于分级范围下限的分子被称为全渗透分子，它们 完全进入凝胶颗粒网孔内部，洗脱时所受阻力最大，流程也 最长，最后从层析柱中被洗脱； 3.分子量在分级范围内的分子被称为部分渗透分子，它们依 据分子大小不同程度的进入凝胶颗粒内部的，是该凝胶介质 的有效分离对象。 如果两种物质分子量均大于凝胶介质分级范围的上限，或者 均小于分级范围下限，它们就无法通过层析而分离。
二、生物分子的相对分子质量、分子大小和形状
每一种特定的凝胶介质都有特定的分子量分级范围，分级范 围是凝胶介质的重要参数。 根据其分级范围，可以将溶质分子分为三类： 1.分子量大于分级范围上限的分子被称为全排阻分子，它们 完全被排阻在凝胶颗粒网孔外，从颗粒间隙中通过，所受阻 力最小，流程也最短，首先从层析柱中被洗脱下来；
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工作范围 （肽与蛋 白）D
<700
<1500
<5000
150020000
300070000
4000150000
Sepharose：琼脂糖凝胶 Bio-Gel A
15.0
5000300000
20.0
5000500000
Bio-Gel P：聚丙烯酰胺凝胶分子筛
Sephacryl：用N，N-亚甲双丙烯酰胺交联的葡聚糖凝 胶
注2:数字显示光吸收A读数(可变量程读数模式)
当A量程开关选定在0-1.0A档时，此时数显板上显示 和读数即为光吸收A的实际读数，如显示为080即表示 为0.80A。
当A量程开关切换在其它量程位置时，则数显光吸收 A读数为:
A量程选定在0-2.0档时，数显读数×2=实际光吸收读数 A
A量程选定在0-1.0档肘，数显读数×1=实际光吸收读数 A
（三）凝胶柱的平衡
通过2-3倍柱床容积的洗脱液使柱床稳定，然后在凝胶 表面上放一片滤纸或尼龙滤布，以防将来在加样时凝 胶被冲起，并始终保护凝胶上端有一段液体。
（四）加样
1.准备好部分收集器、核酸蛋白检测仪及记录仪
2.打开柱上端的螺丝帽塞子，吸出层析柱中多余液体直 至与胶面相切。沿管壁将细胞色素C样品溶液5mL小 心加到凝胶床面上，应避免将床面凝胶冲起，打开下 口夹子，使样品溶液流入柱内，同时收集流出液，当 样品溶液流至与胶面相切时，夹紧下口夹子。按加样 操作，用1mL洗脱液冲洗管壁2次。最后加入3－4mL 洗脱液于凝胶上，旋紧上口螺丝帽，柱进水口连通恒 压瓶，柱出水口与核酸蛋白质检测仪比色池进液口相 连，比色池出液口再与自动部分收集器相连（如图）。 （五）洗脱
Kd=0 Kd=1 0<Kd<1 Kd>1
优点：
a. 条件温和 b.操作简便 c. 损失少回收率高 d. 层析 柱可反复使用
凝胶的类型：
Sephadex: 交联葡聚糖
G-10
G-15
G-25
G-50
G-75
G-100
G-150
G-200
吸水量
1.0
1.5
2.5
5.0
7.510.0来自（g/g干凝 胶）2．定位，
将“顺/逆”键置于“顺”或“逆”状态，按“手 动”键，使试管架转至终点，这时报警器工作，报 警指示灯亮，然后将“顺/逆”键置于“逆”或 “顺"状态，本仪器就会自动地对准第一个试管(在 “顺"状态，第一臂试臂为最内的那根。在"逆"状态， 第一臂试管为最外的那根)。如滴管口没对准第一 根试管只要松开换节臂调整螺钉，使滴臂口对准第 一根试管即可。
6、上述5个步骤结束后，就可以在层析柱上加样。当 样品经层析柱分离，通过检测后，就能通过记录仪 给出所需样品吸收的图谱。
7、测试完毕，必须切断电源，并用蒸馏水清洗样品池 和尼龙管。
注l:记录仪光吸收A读数
当采用l0mV量程记录仪时，记录仪的满量程读数对应 于A量程开关所对应的A读数范围。如A量程开关选定 在0-0.5A时，则记录仪满量程光吸收A读数为0.5，当 记录笔指示在记录纸一半 (50%刻度)位置时即为0.25A。
（二）装柱
1.装柱前，必须用真空干燥器抽尽凝胶中空气，并将 凝胶上面过多的溶液倾出。
2.先关闭层析柱出水口，向柱管内加入约1/3柱容积的 洗脱液，然后边搅拌，边将薄浆状的凝胶液连续倾入 柱中，使其自然沉降，等凝胶沉降约2-3cm后，打开柱 的出口，调节合适的流速，使凝胶继续沉集，待沉集 的胶面上升到离柱的顶端约5cm处时停止装柱，关闭 出水口。
实验十 凝胶过滤层析纯化 细胞色素C
一、目的要求
1.学习和掌握凝胶过滤层析分离蛋白质的 原理与方法。
2.通过凝胶过滤柱层析对细胞色素C进行纯 化
二、原理
凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析。是利用 具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物 质的分子大小不同来进行分离。
Vt=Vo+Vi+Vg Ve=Vo+KdVi Kd=(Ve-Vo)/Vi
四、操作方法
（一）凝胶的选择与处理
1.凝胶及柱的选择 根据细胞色素C的分子量选择Sephadex G100。选用 1.5cm×60cm的柱子。
2.凝胶的处理 凝胶型号选定后，将干胶颗粒悬浮于5-10倍量的蒸馏水 或洗脱液中充分溶胀，溶胀之后将极细的小颗粒倾泻 出去。自然溶胀费时较长，加热可使溶胀加速，即在 沸水浴中将湿凝胶浆逐渐升温至近沸，1-2小时即可达 到凝胶的充分胀溶。加热法既可节省时间又可消毒。
洗脱收集
部分收集器、核酸蛋白检测仪
凝胶的保存方法
0.02%叠氮钠或0.002%洗必泰
应用
a. 分离蛋白质 b. 脱盐 c. 蛋白质分子量的测定
三、仪器的使用－核酸蛋白检测仪及 部分收集器的操作方法
记录仪
1、在仪器使用前，首先检查检测器，电源和记录仪 三部份电路连接是否正确，插上电源插头。
2、接通记录仪电源开关，使电源开关拔到“通”指 示灯亮。记录仪有两档走纸速度，每小时3厘米和 每小时12厘米，可根据记录仪说明书调换不同的 走纸速度。
3、将波长旋钮旋到所需波长刻度上，把量程旋钮拔 到100％T档。
4、按下ON电源箱面板上的电源开关，此时记录仪 指针从零点开始向右移动某一刻度，调节“光量” 旋钮使指针停留在记录仪大约中间位置5mV左右数 字显示为50左右。仪器开机稳定时间大约在1小时 左右，待基线平直后，可加样测试。
5、把检测器进样口塑料管接到部份收集器上，使层析 柱中的洗脱液通过。透光率为"0"厂家巳调好，光密 度A要调零，量程开关拔到100％T，调节光量旋钮， 使记录仪指针在100mV数字显示为100，即透光率为 100%。把量程开关拔到“A"挡，缓慢调节A调零旋 钮，使记录仪指示在"0"位，数字显示为“0"。
凝胶及柱的选择
•凝胶的处理及装柱
凝胶干粉的溶胀（热溶 胀）、浮选、抽气、装 柱、蓝色葡聚糖检查、 平衡
装柱时要注意操作压。
装柱的两种方法：
a.手工操作
1/3床体积水→加入少许凝胶积起1-2 厘米凝胶床→打开出水口→连续缓慢 加入凝胶
b.电动搅拌下的装柱法
（如图4-9）
样品上柱
分析用量：柱床体积的1—2% 制备用量：柱床体积的20—30%
部分收集器的操作方法
1．将“手/自”框内的键置于自动状态，按“定”和 “停”;使定时时间为零，放开“停”按“快”或 “慢”(“定”仍按着)至所需的定时时间，放开"慢" 和“定”，再按一下"停"设定定时时间工作就完毕。 若要查看设置时间，则只需按一下“定”键，就能 显示上一次所设时间，若要以秒显示走时时刻，则 需按下“秒”键。