人LMP-1基因腺病毒重组体构建及其在骨髓间充质干细胞的表达

人脂联素基因重组腺病毒的构建与鉴定李丙蓉;郑宏庭;邓华聪;郑丹;刘金波;兰丽珍;程伟【期刊名称】《重庆医科大学学报》【年(卷),期】2010(35)11【摘要】目的:构建含有人脂联素基因apM1的重组腺病毒载体,制备能表达人脂联素蛋白的重组腺病毒,为脂联素用于体内外干预动脉粥样硬化奠定基础。

方法:自质粒pGEM-T-apM1上扩增两端带有SalⅠ和Hind Ⅲ酶切位点的全长apM1基因,将PCR产物和穿梭质粒pShuttle-CMV经SalⅠ和Hind Ⅲ双酶切后,连接、转化、筛选,进行PCR鉴定后送双向测序。

将鉴定正确的重组质粒pShuttle-CMV-apM1用PmeⅠ酶切使其线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转BJ5183菌,进行细菌内同源重组,筛选、鉴定、扩增,PacⅠ酶切后用LipofectamineTM2000转染低代数的HEK293包装细胞,进行包装出毒。

结果:重组穿梭质粒pShuttle-CMV-apM1经PCR和测序鉴定正确,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组成功,转染293细胞进行包装,产生的病毒经鉴定正确,并且无具有复制能力的腺病毒存在,生物安全性高。

结论:成功的制备了apM1基因重组腺病毒,可进一步用于脂联素干预动脉粥样硬化的研究。

【总页数】5页(P1676-1680)【关键词】apM1基因;腺病毒;同源重组【作者】李丙蓉;郑宏庭;邓华聪;郑丹;刘金波;兰丽珍;程伟【作者单位】重庆医科大学附属第一医院内分泌科【正文语种】中文【中图分类】Q781【相关文献】1.人脂联素基因重组腺病毒对内皮细胞MCP-1和ICAM-1表达的影响 [J], 王桂杰;冷吉燕;卢新卫;张婧;葛媛媛2.人白细胞介素32γ基因重组腺病毒载体的构建及鉴定 [J], 李松林;朱妍妍;李霏;尹元琴3.人脂联素基因重组腺病毒对内皮细胞丙二醛和超氧化物歧化酶水平的影响 [J], 李丙蓉;郑丹;邓华聪;兰丽珍;郑宏庭4.携带人脂联素基因重组腺病毒的构建及表达 [J], 陈闽;何姜;刘小莺;黄敬泽;王林曦;刘礼斌5.人神经菌毛素-1基因重组腺病毒的构建及鉴定 [J], 郑见宝;耿智敏;陈强;王林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

人乳铁蛋白腺病毒载体的构建及细胞表达韩增胜;李健;高大威;李青旺【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2008(47)6【摘要】将人乳铁蛋白基因与腺病毒基因组骨架质粒重组,在293细胞中包装重组腺病毒颗粒,获得真核细胞表达的栽体pAd-hLTF.以pcDNA3X为模板,PCR扩增hLTF基因,腺病毒穿梭栽体pshuttle-cmv与hLTF重组为pshuttle-cmv-hLTF:再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组为pAd-hLTF质粒:脂质体法将重组pAd-hLTF质粒转染HEK 293细胞.包装成重组腺病毒颗粒.Western blot和ELISA法测定细胞中hLTF基因的表达.结果表明,pAd-hLTT质粒转染293细胞后,7～10 d 后,获得细胞裂解液,将细胞裂解产物再次接种新鲜的293细胞,3～5 d后,80%以上的细胞变圆、膨胀、漂浮.Westem blot和ELISA结果显示,上清液中有hLTF基因的表达,为重组人乳铁蛋白的体外表达及其功能分析奠定了基础.【总页数】4页(P629-632)【作者】韩增胜;李健;高大威;李青旺【作者单位】燕山大学环化学院生物技术与丁程系,河北,秦皇岛,066004;燕山大学环化学院生物技术与丁程系,河北,秦皇岛,066004;燕山大学环化学院生物技术与丁程系,河北,秦皇岛,066004;燕山大学环化学院生物技术与丁程系,河北,秦皇岛,066004【正文语种】中文【中图分类】Q513+.2;S852.65+9.1;Q782【相关文献】1.HBV细胞毒性T细胞抗原表位单链三聚体在真核细胞中的表达及其腺病毒载体的构建 [J], 周伯平;袁静;张红梅;陈心春;黄瑛;Lybarger Lonnie;李美忠;聂广;乐晓华;王火生2.重组腺病毒载体介导人乳铁蛋白对宫颈癌干样细胞增殖与凋亡的影响 [J], 张霞;都治香;王娜;孟亚丽;3.重组腺病毒载体介导人乳铁蛋白对宫颈癌干样细胞增殖与凋亡的影响 [J], 张霞;都治香;王娜;孟亚丽4.重组腺病毒CXCL12基因表达载体的构建及其转染间充质干细胞后对其Runx2基因表达的影响 [J], 汪伟;宁宇;许海甲;侯煜东;郑伟;董洁;李章华;邹季5.人碱性成纤维细胞生长因子腺病毒表达载体的构建及其在人脐静脉内皮细胞中的表达 [J], 郭伶俐;邢新;刘刊;韩妲丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

EBV-LMP1基因杆状病毒表达载体的构建及其在昆虫细胞中的表达林勇平;吴淑华;杨英;汤郡;马桂璋【期刊名称】《热带医学杂志》【年(卷),期】2003(3)2【摘要】目的构建EBV LMP1基因的杆状病毒重组供体质粒 ,包装重组LMP1的杆状病毒 ,感染昆虫细胞进行表达。

方法先将已克隆的LMP1cDNA与线性化的pFASTBACHTb进行连接 ,使pFASTBACHTb LMP1与DH1 0BAC感受菌进行转座重组 ,利用抗性及蓝白斑筛选重组Bacmid/LMP1克隆 ,提取Bacmid/LMP1转染昆虫细胞Sf9包装杆状病毒 ,利用病毒感染Sf9细胞进行蛋白表达 ,通过免疫荧光、SDS PAGE和Western blot检测表达情况。

结果获得了重组LMP1的杆状病毒 ,细胞能表达出与LMP1单抗结合的蛋白 ,分子量为 63kDa左右 ,细胞可直接分泌LMP1蛋白至上清。

结论LMP1能在昆虫细胞中获得良好表达。

【总页数】5页(P142-145)【关键词】LMP1;杆状病毒表达系统;昆虫细胞【作者】林勇平;吴淑华;杨英;汤郡;马桂璋【作者单位】广州医学院微生物与免疫教研室;病毒基因工程国家重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R739.63【相关文献】1.猪流感H1N1亚型NP基因杆状病毒表达载体构建及其在昆虫细胞中的表达 [J], 段博芳;张利仙;段纲;董俊;叶玲玲;周晓黎;徐志斌;艾军2.日本血吸虫翻译控制肿瘤蛋白基因的杆状病毒表达载体构建和在昆虫细胞中的表达 [J], 王海;胡少敏;黄艳;吕刚;吴忠道;余新炳3.构建具有巨细胞病毒(CMV)启动子的杆状病毒高效表达载体并利用其在鸡胚原代细胞中表达eGFP基因 [J], 宋姗姗;葛菁萍;李梅;高冬妮;金丽颖;安琦;平文祥;楼庄伟4.人IGF-1基因重组杆状病毒表达载体的构建及在sf9细胞中的表达 [J], 孙丽翠;王雅梅;闫豫东;张静宜;司杨;王民;祁雅慧5.谷氨酸脱羧酶65重组杆状病毒表达载体的构建及其在昆虫细胞中的表达 [J], 陈盛强;刘启才;林勇平;孙卫文因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

重组人RAMP-1基因腺病毒载体的构建及鉴定石蓓;宋付凯;赵然尊;刘志江;龙仙萍;盛瑾【期刊名称】《遵义医学院学报》【年(卷),期】2010(33)4【摘要】目的构建携带人受体活性修饰蛋白-1(RAMP1)基因的腺病毒表达载体,为进一步深入研究RAMP1的功能奠定基础.方法通过基因工程技术将RAMP1基因克隆到穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV中;I-Ceu I+I-Sce I双酶切穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV-RAMP1,将回收的GFP-CMV-RAMP1片段,亚克隆至腺病毒骨架载体pAdxsi得到重组腺病毒质粒;重组腺病毒质粒酶切线性化后应用脂质体法转染293细胞进行包装扩增,得到重组腺病毒Ad-RAMP1并进行PCR鉴定及滴度测定.结果构建的重组穿梭质粒pShuttle-GFP-CMV-RAMP1双酶切后,得到0.8kb(RAMP1)和5.1kb(pShuttle-GFP-CMV)两个片段;重组腺病毒质粒pAdxsi-GFP-CMV-RAMP1用XhoI酶切得到7个片段,而作为对照的空腺病毒质粒只得到6个片段;重组腺病毒Ad-RAMP1 PCR鉴定可见阳性扩增条带;病毒滴度检测达4.5×1011PFU/ml.结论成功构建了携带人RAMP1基因的重组腺病毒载体,为进一步研究RAMP1的功能研究奠定了基础.【总页数】3页(P330-332)【作者】石蓓;宋付凯;赵然尊;刘志江;龙仙萍;盛瑾【作者单位】遵义医学院附属医院,心内科,贵州,遵义,563000;遵义医学院附属医院,心内科,贵州,遵义,563000;遵义医学院附属医院,心内科,贵州,遵义,563000;遵义医学院附属医院,心内科,贵州,遵义,563000;遵义医学院附属医院,心内科,贵州,遵义,563000;遵义医学院附属医院,心内科,贵州,遵义,563000【正文语种】中文【中图分类】R512.36【相关文献】1.人白细胞介素32γ基因重组腺病毒载体的构建及鉴定 [J], 李松林;朱妍妍;李霏;尹元琴2.双表达人Arid5a及报告基因eGFP的重组腺病毒载体的构建及鉴定 [J], 王顺娟;夏海滨3.人PPARγ基因过表达重组腺病毒载体的构建及鉴定 [J], 李腾;李琼;严国强;储佳佳;沈小丹;温见炳;黄起壬;钟荣梅4.人转录因子 PU ．1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定 [J], 刘晨阳;颜文杰;王敏;孙文逵;苏欣;施毅5.人PPARγ基因过表达重组腺病毒载体的构建及鉴定 [J], 李腾;李琼;严国强;储佳佳;沈小丹;温见炳;黄起壬;钟荣梅;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

力生长因子重组腺病毒载体构建及其在成骨细胞中的表达邱敏;唐丽灵【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2010(014)037【摘要】背景:研究表明,力生长因子(mechano-growth faotor,MGF)能激活卫星细胞,促进成肌细胞增殖.在治疗肌损失、预防心肌损伤和修复神经损伤等方面有重要的作用.机械拉伸可使成骨细胞表达MGF,但是MGF对骨组织生理生化行为的影响机制尚不清楚.目的:应用携带MGF基因的重组腺病毒载体转染成骨细胞,观察MGF在成骨细胞中的表达.方法:将MGF基因插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,构建pAdTmck-MGF重组体.pAdTrack-MGF与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183菌中进行同源重组,生成重组腺病毒质粒pAdEasy-MGF.脂质体介导pAdEasy-MGF转染293A细胞,包装成整的重组腺病毒Ad/MGF.用Ad/MGF感染原代培养的大鼠成骨细胞,荧光示踪计数法测定感染效率,RT-PCR法对重组腺病毒感染结果进行鉴定.结果与结论:实验构建的重组腺病毒载体Ad/MGF 滴度可达8.5×108pfu/mL.Ad/MGF能高效感染体外培养的Wistar大鼠成骨细胞并表达目的基因,当感染复数为100时,感染效率最高.说明实验构建的Ad/MGF重组腺病毒可在大鼠成骨细胞中有效表达.【总页数】5页(P6847-6851)【作者】邱敏;唐丽灵【作者单位】重庆大学生物工程学院"生物流变科学与技术"教育部重点实验室,重庆市400044;重庆大学生物工程学院"生物流变科学与技术"教育部重点实验室,重庆市400044【正文语种】中文【中图分类】R318【相关文献】1.大鼠血小板衍生生长因子C重组腺病毒载体的构建及在内皮祖细胞中的表达 [J], 李锋;罗文军;唐博;陈以宽;孙建明;付健2.血管内皮生长因子121和骨形态蛋白2双基因共表达重组腺病毒载体的构建及鉴定 [J], 钟声;刘丹平;刘素伟;李晓禹;李谌;李媛3.人血管生成素1和血管内皮生长因子165重组腺病毒载体构建及目的基因表达[J], 刘铁连;谢宇锋;盛伟华;缪竞成;单云波;胡志清;井莹莹;杨吉成4.小鼠角质化细胞生长因子及其受体的重组腺病毒表达载体的构建 [J], 陈力;黎檀实5.转化生长因子-β3基因重组腺病毒载体的构建及表达 [J], 邱林;吴清华;肖军;李明勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

潜伏膜蛋白1基因真核表达载体的构建及其在鼻咽癌细胞中的表达刘晓佳;谭宁;田晶;曾思恩【期刊名称】《蚌埠医学院学报》【年(卷),期】2014(39)5【摘要】Objective:To construct a eukaryotic expression vector containing latent membrane protein 1 ( LMP1 ) and to detect its expression in human nasopharyngeal carcinoma CNE2 cells. Methods:The cDNA segment encoding LMP1 from human nasopharyngeal carcinoma cell line C15 was acquired and cloned into a eukaryote expression vector pEGFP-C1 after double digestion. The recombinant vector was identified by restriction enzyme analysis and nucleotide sequence determination. The eukaryotic expression plasmid pEGFP-C1-LMP1 was transiently transfected into CNE2 cells. The location and expression of LMP1 was detected by laser scanning confocal microscope. Results:Digested with SalⅠand BglⅡ,the recombinant vector was examined by agarose gel electrophoresis,and the result was in accordance with the anticipated objective strap size. The LMP1 was correctly inserted into pEGFP-C1;the sequencing results were identical with those reported in GenBank. GFP-LMP1 could be detected in both cell membrane and cytoplasm of CNE2. Conclusions:Recombinant plasmid pEGFP-C1-LMP1 is constructed successfully in vitro,which can also express in the cytoplasm of CNE2 in human nasopharyngeal carcinoma.%目的：构建真核细胞中表达潜伏膜蛋白1(LMP1)基因的增强荧光表达载体,观察其在鼻咽癌细胞中的表达。

人心肌营养素-1重组腺病毒载体的构建、纯化及表达张正丰;廖维宏;杨青峰;李红运【期刊名称】《第三军医大学学报》【年(卷),期】2003(25)17【摘要】目的构建人心肌营养素 1重组腺病毒载体 ,以期用于神经系统退行性疾病及损伤的在体研究。

方法构建穿梭质粒pDC3 16 huCT1和pDC3 16 eGFP ,CsCl梯度离心制备高纯度的病毒基因组质粒pBHloxdeltaE1,3Cre、pHG14 0。

培养2 93细胞 ,CaCl2 法质粒共转染 2 93细胞构建并筛选腺病毒AdCMV huCT1和AdCMV eGFP。

病毒原液转染 2 93细胞及NIH3T3细胞 ,PCR、RT PCR及免疫组化鉴定。

CsCl梯度离心纯化病毒 ,空斑试验检测病毒滴度。

纯化病毒注入大鼠颈脊髓 ,RT PCR及免疫组化检验AdCMA huCT的在体表达。

结果采用双质粒共转染 2 93细胞Cre loxP位点同源重组方法构建了E1和E3缺失的含MCMV启动子、外源基因和SV40PloyA的AdCMV huCT1和AdCMV eGFP载体。

经过PCR、RT PCR和免疫组化证实腺病毒载体构建成功。

病毒经过CsCl梯度离心纯化后 ,AdCMV huCT1滴度达到3 .0× 10 1 0 pfu。

RT PCR及免疫组化显示AdCMV huCT1在大鼠脊髓中特异性表达。

结论构建并纯化了体外及体内高效表达的AdCMV huCT1。

【总页数】5页(P1531-1535)【关键词】心肌营养素—1;重组腺病毒;基因治疗【作者】张正丰;廖维宏;杨青峰;李红运【作者单位】第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第三研究室【正文语种】中文【中图分类】R373.1;R392.11【相关文献】1.人内皮型一氧化氮合成酶基因重组腺病毒载体构建及其在人血管平滑肌细胞的表达 [J], 兰勇;王玉琦;符伟国;李大军2.人Nanog基因重组腺病毒载体的构建及其在人脐带间充质干细胞中的表达 [J], 孙靖;徐哲;钱茜;严家来;陈圆;张徐;高硕;钱晖;许文荣3.人神经营养素-3受体基因的扩增及其重组腺病毒载体的构建 [J], 王俊梅;曾园山;刘然义;吴立志;薛刚;黄嘉凌;黄必军;黄文林4.人LIM矿化蛋白1基因腺病毒重组表达载体构建及在犬骨髓间充质干细胞中的表达 [J], 蒲超;倪卫东;高仕长;邱宇5.人源性神经营养素-6成熟肽基因融合表达载体的构建及表达产物的纯化 [J], 张承武;蔡青松;李自成;翟朝阳;郑煜因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。