免疫比浊法工艺模板

免疫比浊法反应曲线免疫比浊法反应曲线是一种常用的实验方法，用于检测免疫反应和测定抗原或抗体的浓度。

该方法的原理基于抗原与抗体结合所形成的免疫复合物对光的散射或吸收现象。

通过测量吸光度或比浊度的变化，可以确定免疫反应的程度以及样品中抗原或抗体的浓度。

免疫比浊法反应曲线通常由一系列不同浓度的标准溶液构成，这些标准溶液中含有已知浓度的抗原或抗体。

反应曲线上的吸光度或比浊度值与标准溶液中抗原或抗体的浓度成正比关系。

这种关系可以用来推断未知样品中抗原或抗体的浓度。

免疫比浊法实验的步骤如下：1.准备标准溶液：根据需要的浓度范围，制备一系列标准溶液。

通常选择具有已知浓度的抗原或抗体来制备标准溶液。

2.反应体系构建：将标准溶液和待测样品分别与适当的抗原或抗体混合。

将混合物孵育（一般为室温或37°C）一段时间，以便允许免疫反应发生并形成免疫复合物。

3.吸光度或比浊度测量：在反应体系孵育完成后，使用比色计或比浊计测量吸光度或比浊度。

比色计测量所用波长通常为450 nm，而比浊计则根据测量要求选择合适的波长。

4.绘制反应曲线：将吸光度或比浊度值绘制成反应曲线。

横坐标表示标准溶液中抗原或抗体的浓度，纵坐标表示对应的吸光度或比浊度值。

5.浓度计算：根据反应曲线上待测样品的吸光度或比浊度值，通过插值计算样品中抗原或抗体的浓度。

根据实验需要，可以采用线性拟合、对数拟合或其他曲线拟合方法。

免疫比浊法反应曲线具有以下特点和应用：1.灵敏度：免疫比浊法可以检测低浓度的抗原或抗体，提供灵敏的浓度测量。

2.特异性：免疫比浊法能够区分目标抗原或抗体与其他物质之间的相互作用，帮助鉴定和定量目标物质。

3.定量性：通过绘制标准曲线，可以将吸光度或比浊度值与抗原或抗体的浓度进行定量关联，从而对未知样品进行浓度测定。

4.应用广泛：免疫比浊法可以用于检测体液中的疾病标志物、药物浓度监测、生物样品的鉴定等多个应用领域。

总结起来，免疫比浊法反应曲线是一种常用的实验方法，可以测定抗原或抗体的浓度。

免疫比浊法生产流程免疫比浊法的生产流程如下：1. 清洗：吸取100μL胶乳微球加入1 mLMES缓冲液中，混匀后17000 rpm离心30min，弃上清，加入1mLMES，用超声波清洗器振散微球团块，每次持续约30s，3~5次。

2. 活化：将NHS粉末和EDCI粉末恢复室温，配制浓度为20mg/mL的NHS活化剂和EDCI活化剂，将适量的NHS和EDCI活化剂加入已清洗的微球中，上下颠倒混匀后再置旋转混匀器上混匀，持续约20~30min。

3. 包被：将已彻底超声振散的微球加入一定浓度的CSFVE2蛋白单抗中，先手动上下颠倒混匀，再置旋转混匀器充分反应。

15000rpm离心10min后弃上清，加入1 mL MES。

4. 封闭：将已彻底超声振散的微球加入100μL封闭液，置旋转混匀器充分反应1h或置2~8℃封闭过夜。

此外，还应注意如下问题：在离心前使标本完全自然形成凝块。

保持样品管的密闭状态。

抽血后2小时内完成离心和冷藏。

血清和血浆需用物理方法尽快与细胞分离。

去除所有可能存在的纤维蛋白和细胞成分，否则会得到假阳性结果。

如果48小时内不能完成检测即应将标本放入-20℃冰箱冻藏。

标本只能复溶一次，检测前须将复溶标本离心处理。

不要用水浴方法复溶标本。

吸取血浆标本时应避免将红细胞层上的白细胞或血小板层吸出。

含有颗粒物质的浑浊血清或血浆标本在检测前须先从原始管内转运出来，并重新离心，原始管中含有分离介质(分离胶)的可以不再离心。

如果标本不在24小时内检测或运送标本时，将标本保存在-20℃或更低温度的环境中。

标本不能溶血。

标准液所用的物质对HIV抗体，乙型肝炎表面抗原和丙型肝炎抗体测试呈阴性反应。

建议各实验室建立自己的正常值范围。

测量的特征值(测量范围、精度、准确度、灵敏度)和多种分析仪的参数将另外提供。

以上信息仅供参考，如有需要建议咨询专业人士。

胶乳免疫比浊法
胶乳免疫比浊法是一种测定血清中抗体水平的方法，又称为“比浊法”或“免疫比浊试验”。

它是由德国医学家莫尔登施塔特博士发明的，在20世纪50年代开始应用于临床实验室检测工作中。

它的原理是通过比较血清中抗体的浓度和浊度来估算出抗体水平。

胶乳免疫比浊法主要分为以下步骤：
1.将标本血清稀释到1:4，然后加入硫酸钠和5%的乳糖溶液，使其混匀；
2.将混合液加入到胶乳中，用磁搅拌机搅拌均匀；
3.将混合物放入温度为52℃-58℃的恒温水浴中，使其浊度变大；
4.将胶乳混合液冷却到室温，放入0.5mol/L硫酸钾溶液中，使其凝固；
5.将凝固的胶乳混合液放入定性比色皿中，添加碘酒精染色液，观察染色结果；
6.根据染色结果计算抗体水平，得出结论。

胶乳免疫比浊法的主要优点是快速、简便、准确，可以准确测定血清中抗体的浓度和浊度，反应时间短，报告时间短，可以很快地提供准确的抗体检测结果，且不需要使用任何复杂的仪器设备，适合在临床实验室实施。

同时，胶乳免疫比浊法也存在一些缺点，如检测过程中需要精确控温，并且胶乳混合液凝固后可能存在粘附现象，影响报告结果的准确性，也可能影响样本的保存，所以在检测过程中要注意避免这些问题的发生。

总而言之，胶乳免疫比浊法是一种快速、准确的血清抗体检测方法，可以帮助医生快速准确地确定病人的病情，为临床治疗提供重要参考。

医疗器械产品技术要求编号：XX测定试剂盒 (免疫比浊法)1.产品规格4 100 测试/盒，1 100 测试/盒。

2.性能指标2.1外观试剂盒整洁完好，文字标记和条码打印清晰。

2.2分析灵敏度试剂盒的分析灵敏度不高于1.0 IU/mL。

2.3准确性试剂盒对质控品的检测结果均值应在质控范围内。

2.4重复性试剂盒对质控品重复检测结果的CV值应不大于10%。

2.5批间差不同批次试剂盒检测结果的批间相对极差应不大于5%。

2.6稳定性取近效期或过效期的试剂盒检测各水平质控品，检测结果均值应在质控范围内。

3.检验方法3.1外观目视检查，应符合2.1的要求。

3.2分析灵敏度以校准液A重复测量20次，计算测量结果的平均值（x）及标准差（s）（公式1），平均值加两个标准差的浓度（x+2s）即为所得的分析灵敏度数值，应符合2.2的要求。

1-n )(s 2∑-=x x i (1)3.3 准确性分别以各水平质控品重复检测试剂盒，每个水平质控品各重复检测3次，计算各水平测量结果平均值，结果应符合2.3的要求。

3.4 重复性以质控品+对试剂盒进行检测，重复检测10次，按照公式（2）计算检测结果的CV 值，应符合2.4的要求。

%100⨯=x s CV (2)式中：CV 为变异系数；s 为标准差；x 为测量值的均值。

3.5 批间差用质控品+分别测试2个不同批号的试剂盒，每个批号测试5次，分别计算每批5次测定的均值i x （i=1,2），按公式（3）、（4）计算批间相对极差（D ），结果应符合2.5的要求。

221x x x C +=……………………………………………………(3) %10021⨯-=C x x x D (4)3.6 稳定性 取近效期或过效期的试剂盒检测各水平质控品，重复检测3次，检测结果应符合2.6的要求。

附件5胱抑素C 测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）注册技术审查指导原则本指导原则旨在指导技术审评部门对胱抑素C 测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）的技术审评工作，同时也为注册申请人注册申报资料的准备及撰写提供参考。

本指导原则是对胱抑素C 测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。

本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。

应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。

本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。

一、适用范围胱抑素C 测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）是指基于透射免疫比浊法原理，利用半自动生化分析仪、全自动生化分析仪对人血清、血浆中的胱抑素C 进行体外定量分析的试剂。

目前胱抑素C 含量的测定方法主要是基于抗原抗体反应的免疫方法，如胶乳免疫比浊法、胶体金免疫比色法、单向免疫扩散法、酶联免疫吸附法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法等，免疫比浊法可分为透射免疫比浊法和散射免疫比浊法。

其中透射免疫比浊法可适用于半自动生化分析仪、全自动生化分析仪，散射免疫比浊法需特定蛋白分析仪。

从方法学上讲，本指导原则仅适用于胶乳透射免疫比浊法, 不适用于散射免疫比浊法。

依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5 号）和《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242 号），胱抑素C 测定试剂（免疫比浊法）管理类别为二类，分类代号为6840。

二、注册申报资料要求（一）综述资料综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、方法学特征、生物安全性评价、研究结果总结以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5 号）和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014 年第44 号）的相关要求。

纤维蛋白（原）降解产物测定试剂盒（胶乳增强免疫比浊法）主要生产工艺及反应体系的研究一、实验目的研究合适的纤维蛋白（原）降解产物的生产工艺和最佳反应体系。

二、实验设计思想纤维蛋白（原）降解产物测定试剂盒（胶乳增强免疫比浊法）原理是样本中的FDP抗原与试剂中的抗体结合，形成抗原抗体复合物，产生吸光度变化，胶乳试剂可特异性的增大该吸光度的变化，增大试剂的灵敏度。

该吸光度变化的高低与样本中的FDP的含量成正比，测定该吸光度，采用与校准品比较，即能得出样本FDP的含量。

三、主要仪器及试剂材料1.D240全自动生化分析仪/雷杜420全自动生化分析仪生产商:南京神州英诺华医疗科技有限公司/深圳雷杜生命科学股份有限公司2.纤维蛋白（原）降解产物校准品FDP含量：84μg/mL生产商：上海捷门生物技术合作公司批号：S2814-1四、实验内容及程序纤维蛋白（原）降解产物测定试剂盒主要生产工艺过程的研制及试剂盒反应体系的建立分为三个部分：生产工艺的研制、试剂盒组成的研制、试剂盒反应体系的建立。

产品拟定标准：线性范围：在拟定线性范围内，相关系数r≥0.99；准确度：测定已知溯源的FDP质控品，相对偏差（Bias%）≤±25%；灵敏度：测定已知溯源的FDP质控品12次，结果CV≤20%；精密度：测定已知溯源的FDP质控品20次，结果CV≤15%。

1.主要工艺描述1.1原液的准备购进商品化的高效价纤维蛋白（原）降解产物抗体致敏胶乳，将其稀释成合适的倍数，作为试剂2备用。

选择合适的缓冲体系，加入一定量的增浊剂和稳定剂作为试剂1备用。

1.2原液的验证购进有溯源的定值校准品，在生化分析仪上，将适量的校准品加入试剂1中，在适宜的条件下，和试剂2反应，根据校准品浓度和吸光度做剂量/响应曲线，得出一条持续上升的平滑曲线，即得到合格的原液。

2.反应体系的组成及其研究2.1购进有溯源并标示有定值的校准品；FDP含量：84μg/ml生产商：上海捷门生物技术合作有限公司批号：?2.2致敏胶乳的准备抗体致敏胶乳：上海捷门生物技术合作有限公司提供用实验室PBS缓冲液（0.1mol/L，PH=7.4）将其倍半稀释，分别稀释成：3.5倍、3倍2.5倍、2倍、1.5倍。

医疗器械产品技术要求编号载脂蛋白C3测定试剂盒(免疫比浊法)1.产品型号/规格及其划分说明1试剂组成试剂1：Tris-HCL缓冲液10mmol/L、氯化钠（NaCl）0.15mol/L、聚乙二醇(PEG)5.0%试剂2：Tris-HCL缓冲液10mmol/L、羊抗人载脂蛋白C3抗体≥65%校准品:冻干粉,单水平：人血清≥70%、目标浓度范围10.0～15.0mg/dL质控品:冻干粉,2水平：人血清≥70%、目标浓度范围：水平1：3.8～6.5mg/dL、水平2：6.0～12.5mg/dL、水平3：8.1～14.5mg/dL1.2型号规格试剂1:2×45mL、试剂2:2×15mL校准品（单水平，选配）：1×1mL；1×2mL；1×3mL质控品（水平1，选配）：1×1mL；1×2mL；1×5mL质控品（水平2，选配）：1×1mL；1×2mL；1×5mL质控品（水平3，选配）：1×1mL；1×2mL；1×5mL。

2.性能指标2.1外观试剂1为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂2为无色至淡黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；校准品为浅黄色或黄色粉末状物质，复溶后为浅黄色或黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；质控品为浅黄色或黄色粉末状物质，复溶后为浅黄色或黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物。

试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。

2.2净含量试剂的净含量应不少于标称量。

2.3试剂空白A340nm下测定空白吸光度应≤0.5000。

2.4准确度与已上市产品进行比对试验：相关系数r≥0.975，在[2.0，6.0]mg/dL区间内测定的绝对偏差应不超过±0.60mg/dL，在（6.0，20]mg/dL区间内测定的相对偏差应不超过±10%。

免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法。

其基本原理是：当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度。

当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。

通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。

抗体（Ab）与可溶性抗原（Ag）反应，形成一定结构的免疫复合物，成为悬浮于反应溶液中的微粒。

在沉淀反应中形成的复合物微粒具有特殊的光学性质，可用仪器检测，提高了检测的速度、灵敏度和易操作性。

免疫比浊测定注意事项：1、抗原或抗体量大大过剩，可出现可溶性复合物，造成误差。

2、应维持反应管中抗体蛋白始终过剩。

3、易受到脂血的影响。

分类1.免疫透射比浊法抗原抗体结合后，形成免疫复合物，在一定时间内复合物聚合出现浊度。

当光线通过溶液时，可被免疫复合物吸收。

免疫复合物量越多，光线吸收越多。

光线被吸收的量在一定范围内与免疫复合物的量成正比。

利用比浊计测定光密度值，复合物的含量与光密度值成正比，同样当抗体量一定时，光密度值也与抗原含量成正比。

本法较单向琼脂扩散试验和火箭电泳等一般免疫化学定量方法敏感、快速简便，但要求免疫复合物的数量和分子量达到一定高度，否则就难以测出。

2.免疫散射比浊法一定波长的光沿水平轴照射，通过溶液使遇到抗原抗体复合物粒子，光线被粒子颗粒折射，发生偏转，光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物颗粒大小和多少密切相关。

散射光的强度与复合物的含量成正比，即待测抗原越多，形成的复合物也越多，散射光也越强。

散射光的强度还与各种物理因素，如加入抗原或抗体的时间、光源的强弱和波长、测量角度等密切相关。

散射比浊法又分为速率散射比浊法和终点散射比浊法。

3.免疫胶乳比浊法胶乳比浊法即是将待测物质相对应的抗体包被在直径为15－60nm的胶乳颗粒上，使抗原抗体结合物的体积增大，光通过之后，透射光和散射光的强度变化更为显著，从而提高试验的敏感性。