下载文档原格式
免疫球蛋白检验方法
一、适用范围
适用于检测人血清、血浆中免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM、IgE）水平。
二、原理
免疫球蛋白的检测利用免疫沉淀反应，配制特异性抗血清与病人标本混合，当IgG、IgA、IgM、IgE抗体形成沉淀时，以比色检测，检测抗体浓度的变化，从而检测血清中免疫球蛋白含量。
三、试剂盒选择
抗体用于免疫球蛋白检测的试剂盒应选择经认证的、适用于检测人免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM、IgE）水平的试剂盒（如ELISA试剂）。
四、仪器使用
根据使用的试剂盒类型，选择适当的仪器，如ELISA仪、比色检测仪等，以便进行免疫球蛋白检测。
五、样本收集
根据使用的试剂盒，收集血清或血浆样本，每次检测取0.5ml样本，如果多次检测，可放置在4℃保存，4℃以下冷冻保存不超过一个月。
六、试剂配制
1．将用于 ELISA 检测的准备好的抗体、病人标本等试剂放置室温，将其涂层板中；
2．按照试剂盒的使用说明，准备其他试剂，并用抗体标本反应
液调整到稀释抗体的浓度；
3．将抗体标本反应液和病人标本混合涂洒到涂层板的检测格中，放置室温反应15分钟；
4．用洗涤液洗涤检测格，然后用抗体反应液复活格中的抗体，放置室温反应10分钟；
5．用洗涤液洗涤检测格，然后用检测液检测抗体，放置室温反应1小时；
6．用洗涤液洗涤检测格，然后用终止液终止反应，放置室温反应30分钟；
7．将涂层板置于比色检测仪中，检测抗体浓度的变化，从而检测血清中免疫球蛋白的含量。
七、报告
根据比色检测仪结果，判定血清中IgA、IgG、IgM、IgE含量，并根据参考值报告免疫球蛋白水平。
免疫实验,对流免疫电泳 ,免疫比浊溶血实验免疫实验是生命科学中非常重要的一种实验技术，它通常用于检测血清中抗体或其它免疫反应分子的含量、识别特定的分子结构，以及鉴定抗原和抗体的交互作用等。
其中涉及到的技术手段也非常繁多，下面我将着重介绍对流免疫电泳和免疫比浊溶血实验这两种技术。
对流免疫电泳是一种利用电泳和抗体-抗原交互作用原理的分析技术。
它可以快速地分离和检测出血清中的不同类型免疫球蛋白。
具体操作步骤如下：首先，将需要检测的血清标本加入一种被分离物抗体浸渍的石蜡条或高分子凝胶中，拍平并等待凝胶凝固。
然后，加上一种被检测的抗原标记物，通常使用放射性同位素、酶或荧光染料作为标记。
当抗体与抗原结合时，这些标记物也随之紧密结合在其上，形成复合物。
随着复合物的形成，它们在凝胶中开始移动，直到其达到与该复合物大小同等的电荷质量比。
然后，加上电场，复合物将沿电场布局在凝胶中，从而形成一条与电场方向大致平行的对流带。
在对应位置破裂凝胶，分析不同样品的对流带，可以快速、准确地确定其免疫球蛋白的种类和含量。
免疫比浊溶血实验是一种利用血清中抗体与相应抗原间的特异性结合作用引起溶血反应析出现象，以检测抗体的含量和活性的实验方法。
在此实验中，我们需要将血清和口香糖酐混合，使其等比例溶解，然后加入一定浓度的相应抗原（通常为红细胞抗原）。
随着抗体与抗原结合，它们最终会形成网状复合物，从而导致红细胞溶解，此过程可观察到裂解和溶解反应的现象。
通常情况下，使用抗人丙型溶血球素（血型试剂）作为抗原，将其加到不同的稀释血清中，通过测量反应光密度，可以得到抗体与抗原之间的复合和溶解反应程度。
免疫比浊溶血实验的优点是检测速度快，灵敏度高，适用范围广泛。
总之，免疫实验技术在生命科学研究中扮演着极为重要的角色，对流免疫电泳和免疫比浊溶血实验是其中的两种典型代表。
我们可以根据自己的需要和实验目的，灵活选择适当的技术手段，以提高实验效率和准确度，为揭示生命科学研究中一些重要的问题提供更加全面和精准的解答。
免疫球蛋白MIgM测定免疫比浊法1.原理分析原理是液相免疫沉淀散射比浊终点测定法。
抗血清用缓冲液稀释后加到一份病人血清中，经过孵育后可以测定抗原抗体复合物产生的散射光。
散射光结果和血清中的IgM浓度成正比。
标本采集：标本采集前病人准备：受检者空腹标本种类：血清或血浆标本要求：取被检者静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。
标本储存：待测标本在2-8℃存放不超过24小时，-20℃不超过三个月，-70℃长期保存。
避免反复冻融。
标本运输：室温运输标本拒收标准：细菌污染、溶血、脂血不能作测定。
试剂6.1试剂名称：免疫球蛋白M检测试剂盒6.2试剂生产厂家：芬兰Orion诊断试剂公司6.3包装规格：60Test/kit6.4试剂盒组成：缓冲液30ml空白缓冲液30ml抗血清试剂0.5ml定标液0.5ml磁卡1张仪器设备：仪器名称：OrionTurboxRplus特定蛋白分析仪仪器厂家：芬兰Orion集团公司仪器型号：Turboxplus8.操作步骤：8.1试剂配制：8.1.1抗血清应用液准备：吸取500ul抗血清加到反应缓冲液中，轻轻混匀，应用液2-8℃可保存12个星期。
8.1.2空白缓冲液：液体待用。
8.1.3定标液：用0.9%NaCL进行1：51稀释。
定标液根据IFCC提供的材料CRM470进行标定。
8.2收集与处理样品：样品用0.9%Nacl进行1：51稀释。
8.3为每一份样本测定准备一份样品空白，同样，为定标液另外准备一份定标液空白。
8.4准备两份定标液测定（定标完成后，标准曲线数据存储在磁卡内。
下次检测如使用同批试剂，可以不必做定标而直接使用磁卡上的定标信息）。
8.6轻轻摇动混匀，室温18-25℃放置30±5分钟。
8.7仪器测试步骤：参见TurboxR特定蛋白分析仪作业指导书。
9.结果计算：仪器直接计算并打印结果。
临床意义：IgM是分子量最大的免疫球蛋白，是一种高效能抗体、能固定补体，具有溶菌、抑菌、中和病毒作用。
免疫散射比浊法和免疫透射比浊法测定免疫球蛋白结果比较刘少华;邓文平;李燕【摘要】目的探讨免疫透射比浊法和免疫散射比浊法测定免疫球蛋白(Ig)水平的关系.方法用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法检测252例健康体检人群的血清Ig,同时测定IgG高、低值水平,分析两种方法测定结果之间的关系.结果健康体检人群中血清IgG水平免疫透射比浊法[(11.46±4.92)g/L]测定与免疫散射比浊法[(11.85±3.72)g/L]测定相比,差异无统计学意义(P>0.05);免疫透射比浊法IgM[(1.51±1.06)g/L],免疫散射比浊法IgM[(1.60±0.91)g/L]和免疫透射比浊法IgA[(2.08±1.51)g/L],免疫散射比浊法IgA[(2.15±1.19)g/L]水平差异均无统计学意义(P>0.01).高、低值IgG用两种方法均可以测定.结论了解免疫功能水平时,测定Ig用免疫透射比浊法和免疫散射比浊法均可,但免疫散射比浊法更有利于病情的监测.%Objective To compare transmission turbidity and scatter turbidity method on measuration of serum immunoglobulin (Ig) levels. Methods Serum Ig concentration was measured by transmission turbidity and scatter turbidity method in 252 healthy people. The high level and low level of IgG were also measured. The relationship between the two methods was analyzed. Results The results showed that the levels ofIgG[(11. 46 ±4. 92)g/L,(11. 85 ± 3. 72)g/L] ,IgM[(l. 51 ± 1. 06)g/L,(l. 60 ± 0.91)g/L] and IgA [(2. 08± 1. 51)g/L, (2. 15 ± 1. 19)g/L] had no significant difference in healthy people(P>0. 05) measured by transmission turbidity and scatter turbidity method. High and low level of IgG can detect by transmission turbidity and scatter turbidity method. Conclusion Transmission turbidity and scatter turbidity method can both be used fordetermination of IgG, while immune scatter turbidity method could be beneficial for evaluation of the disease condition.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2012(041)020【总页数】2页(P2034-2035)【关键词】散射测浊法和比浊法;免疫球蛋白【作者】刘少华;邓文平;李燕【作者单位】重庆市涪陵中心医院检验科,408000;重庆市涪陵中心医院检验科,408000;重庆市涪陵中心医院检验科,408000【正文语种】中文人体免疫球蛋白(Ig)测定，是检查人体免疫功能状态最直接而简单的方法，只有选择好的检测方法才能保证检验结果的准确性。
免疫球蛋白定量的测定方法
免疫球蛋白定量的测定方法，这可真是个超级重要的事儿啊！你知道吗，就好像我们要了解一个神秘宝库里面到底有多少宝贝一样。
先来说说单向免疫扩散法吧，这就像是在一个大平地上，让免疫球蛋白和特定的抗体慢慢扩散开来，然后形成一个个独特的沉淀环，通过测量这些沉淀环的大小，不就能知道免疫球蛋白的量了嘛！是不是很神奇？
还有免疫比浊法，哇哦，这就好像是一场激烈的比赛！让免疫球蛋白和抗体在特殊的环境里“较量”一番，然后通过观察溶液的浑浊程度来判断免疫球蛋白的多少，这多有意思呀！
还有呢，酶联免疫吸附测定法，这简直就是一个精心设计的实验舞台呀！把免疫球蛋白和各种试剂放在一起，通过一系列反应，最后用特殊的方法检测出结果，就像是一场精彩的魔术表演，最后谜底揭晓，我们就知道免疫球蛋白的量啦！
放射免疫测定法也不能落下呀！就如同能看到微观世界的神奇眼睛，利用放射性物质来精确测量免疫球蛋白的量，这是多么高妙的手段呀！
这些方法各有各的特点，各有各的厉害之处，不是吗？它们就像一群各具本领的超级英雄，为了我们的健康而战斗！我们能不好好了解它们吗？免疫球蛋白定量的测定方法真的是太重要了，它们是医学领域的得力助手，帮助医生们更准确地了解病情，为患者提供更好的治疗方案。
我们应该对这些方法充满敬意和感激，它们是守护我们健康的无声卫士啊！。
免疫比浊法检测免疫球蛋白
时间：地点：实验人：
1基本原理：
样本中的IgA、IgG与试剂中的抗IgA和抗IgG的特异性抗体结合，产生不溶性免疫复合物，使得反应溶液产生浊度。
溶液浊度与样本中IgA、IgG的浓度成正比。
在合适的nm处（700nm）测吸光度，通过计算可以得到IgA、IgG的浓度。
2实验材料：
免疫球蛋白A、G（IgA、IgG）测定试剂（试剂1、试剂2）
免疫球蛋白A、G（IgA、IgG）校准品
蒸馏水、血清样本
微量加样枪、ep管（1.5ml离心管）
酶标仪、水浴箱
3实验方法步骤
在酶标管内反应。
从左到右共做6管试剂：
1：IgG试剂1（125µl）+蒸馏水1µl
2：IgG试剂1（125µl）+校准品1µl
3：IgG试剂1（125µl）+样本1µl
4：IgA试剂1（150µl）+蒸馏水3µl
5：IgA试剂1（150µl）+校准品3µl
6：IgA试剂1（150µl）+样本3µl
混匀，37度水浴五分钟。
继续添加试剂，从左到右：
1、2、3：IgG试剂2（42.5µl）
4、5、6：IgA试剂2（50µl）
混匀，37度水浴五分钟。
在OD700nm测取吸光度，记录数据。
4.实验结果：
4.1 IgG蛋白：
空白管吸光度0.051 校准管吸光度1.155 样本管吸光度0.699
IgG校准浓度31.3g/L
待测血清样本中免疫球蛋白含量IgG浓度（g/L）= 0.699-0.051/1.155-0.051 ×31.3=18.4g/L
实验结果偏高，且误差为（18.4-16.0）/16.0 ×100% =15.0%
4.2 IgA蛋白：
空白管吸光度0.049 校准管吸光度0.372 样本管吸光度0.212
IgA校准浓度4.15g/L
待测血清样本中免疫球蛋白含量IgA浓度（g/L）=0.212-0.049/0.372-0.049
×4.15=2.1g/L 实验结果在标准范围内
5实验分析：
5.1 IgG实验校准组数值偏高的原因我们认为可能有以下几点：
●IgG试剂所加的量偏高，但是没有达到过量的程度。
导致更多的抗体与抗原
结合，从而使得有更多的抗原抗体复合物沉淀生成，造成最后算出的校准组IgG浓度偏高。
●IgG实验校准组液体中含有气泡，气泡使得液体的吸光度增加，从而造成最
后算出的校准组IgG浓度偏高。
●抗原抗体复合物沉淀附着在装置内壁，阻碍光线传播，造成吸光度偏大。
●透射比浊法本身灵敏度和精密度均不够理想，所做得的结果方差较大，造成
本次实验校准组吸光度偏大。
●抗原抗体反应需要一定时间和温度，操作过程中可能因为时间限制未能使抗
原抗体完全反应，对实验数据可能会造成一定影响。
5.2免疫比浊法的适合区带？
应采用抗体过量的前带，因为所检测的物质是抗原，希望所加样品中的抗原完全与抗体结合形成微粒，所有的微粒均可吸收酶标仪中透过的光线。
因为吸光度OD值与溶液中颗粒的浓度成正比，而计算时默认颗粒的浓度与样品中所含抗原的浓度相当，所以，只有在抗体含量过量时，才能保证所有抗原都能与抗体结合形成微粒，降低因抗原未完全结合抗体所带来的误差。
5.3加样头在每次加样器加样之前需不需要更换？
如果加样头没有伸入液面以下，或者是没有更换加样头中所加试剂的种类，则不需要更换加样头。
5.4为什么分两次在37。
C水浴加热而非一次?
我们分析认为，在加入抗原之前先进行37。
C保温处理，能够更好的保证抗体正常的生理活性，避免了低温环境下小部分抗体活性降低或者失活对实验的影响，使得实验数据具有更高的准确性。
