下载文档原格式
小鼠脾脏细胞培养与细胞生死状态的鉴别实验目的1. 学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。
2.了解并掌握用组织块贴壁培养法和消化细胞培养法进行动物细胞原代培养的实验方法。
3.学习细胞生死状态鉴别的方法，原理。
实验原理细胞培养指的是在无菌条件下，把动、植物细胞从组织中取出，在体外模拟体内的生理环境，使离体的细胞在体外生长和繁殖，并且维持其结构和功能的一种培养技术。
动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。
从供体获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法称为细胞的原代培养。
当培养的动物细胞生长增殖达到一定密度，形成致密的单层细胞时，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，从一个容器中以1：2或其他比例转移到另一个容器中扩大培养的方法，称为细胞的传代培养。
传代培养的累计次数就是细胞的培养代数。
细胞生死状态的鉴别方法主要是化学染色法和荧光染色法。
活细胞和死亡细胞在生理技能和性质上主要存在以下差异：一、细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性地通过；而细胞死后，细胞膜受损，其通透性增加。
基于此，发展出了以台盼蓝、伊红、苯胺黑、赤藓红、甲基蓝以及荧光染料碘化丙啶或溴化乙啶等为染料鉴别细胞生死状态的方法，上述染料能使死亡细胞着色，而活细胞不被着色。
此外，应用植物质壁分离的性质也可鉴定植物细胞的生死状态。
活细胞的原生质具有选择透过性，死细胞因其原生质的选择透过性已遭破坏，故与高渗透压溶液接触时不产生质壁分离。
二、代谢上的差异：活细胞中新陈代谢作用强，细胞内的酶具有较强的活性和还原能力。
基于此，发展处了以荧光素二乙酸酯（FDA）、荧光素二丙酸酯、荧光素二丁酸酯或荧光素二苯甲酰酯等酯化的荧光素鉴别细胞生死状态的方法，上述酯化的荧光素亲脂性提高，容易被细胞吸收进入，活细胞内的酯酶具有较强的活性，可将酯化的荧光素分解而释放出能发荧光的荧光素，该物质不能自由透过活的细胞膜，积累在细胞内，荧光显微镜下显示有明亮的绿色或黄绿色荧光；而死亡细胞内的酯酶因失去活性，不能分解酯化的荧光素，荧光显微镜下显示不发光。
区别细胞死活的方法细胞死活是生物学家研究细胞活力水平和状态的重要指标，对于评估微生物或细胞繁殖能力、细胞对药物作用与耐药性的反应、细胞功能障碍、细胞毒性研究和诊断实验等都有重要的意义。
近年来，借助现代生物技术的发展，人们发展出了一系列检测细胞死活的方法，有效地区分出细胞的生长和死亡状态。
一、细胞膜活性的检测是区别细胞死活的重要方法。
细胞膜的活性是评估细胞活力的重要指标，可以显示细胞死活。
细胞膜活性可以通过测定细胞膜电位、直接检测细胞膜转运系统活性和监测活细胞特异性指标，如细胞凋亡标志物等来确定。
测定细胞膜电位能直观反映细胞结构的活力水平，是常用的检测细胞死活的方法。
二、一些结构性指标也可以用来区分细胞死活状态，如细胞形态、细胞大小和细胞质组成。
观察活细胞形态，其细胞体形状各异，并具有活动性。
细胞大小可以根据荧光显微镜和流式细胞仪监测，死细胞体积一般小于活细胞体积。
此外，也可以测定细胞质组成，如细胞培养基中活细胞含量远高于死细胞，因此可以通过分析细胞培养基中的活细胞含量来量化评价活细胞的死活。
三、检测细胞代谢特性也是一种常见的检测细胞死活的方法。
细胞代谢特性是衡量细胞活力水平的重要指标，如细胞的糖异构化、蛋白质组合、酶的活性、细胞的ATP水平等均可以用来衡量活细胞的状态。
此外，细胞细胞因子，如细胞因子及表观遗传物质，如mRNA、miRNA等也可以作为调节和检测细胞死活的指标。
四、测定细胞核和其他细胞指标。
细胞死活状态的检测也可以利用细胞核指标来估算，活细胞的细胞核含有较多的染色质和活性核酸，而死细胞核中染色质明显变性，而其他细胞指标如非细胞物质的含量、活性氧的变化、离子通量的变化和细胞内ATP水平的变化也可以用来检测细胞死活。
总之，细胞死活是决定细胞繁殖及功能性状态的关键因素，细胞死活的检测对研究和诊断生物学研究有重要意义。
现代生物技术为探究细胞死活提供了有效的工具，如细胞膜电位检测、细胞结构检测、细胞代谢特性检测和细胞核等技术可以有效地检测细胞死活。
小鼠脾脏细胞原代培养及观察计数【实验目的】1.学习掌握细胞培养的基本原理以及具体方法，并对小鼠脾细胞进行原代培养；2.掌握无菌操作的具体过程及无菌操作台的使用；3.学习掌握染色法鉴别细胞的生死状态的原理及方法；4.学习使用血球计数板对细胞总数及活细胞数进行计数；【实验原理】1.细胞培养细胞培养指的是在无菌条件下，把动、植物细胞从组织中取出，在体外模拟体内的生理环境，使离体的细胞在体外生长和繁殖，并且维持其结构和功能的一种培养技术。
动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。
从供体获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法称为细胞的原代培养。
当培养的动物细胞生长增殖达到一定密度，形成致密的单层细胞时，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，从一个容器中以1：2或其他比例转移到另一个容器中扩大培养的方法，称为细胞的传代培养。
传代培养的累计次数就是细胞的培养代数。
高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的。
但如果把活细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则要方便和简单得多。
被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类揭开生、老、病、死的规律，探索优生、抗衰老和防治各种疾病的途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，使其向有利于人类健康长寿的方向发展。
因此动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。
细胞培养的意义:具有其他生物技术无可比拟的优点；培养条件易改变和控制，便于单因子分析；便于人们直接对细胞内结构、细胞生长及发育等过程的观察；在生物学的各个领域（如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学及病毒学等）已被广泛应用。
细胞培养的局限性：在脱离机体复杂环境下，细胞培养条件与躯体环境有一定距离；观察到的结果有时难以正确反映机体内的状况；细胞培养得到的产物少。
山东大学实验报告2018年5月21日________________________________________ _________________________姓名：丁志康系年级：2016级组别：周一下午科目：细胞生物学实验题目：动物细胞培养及死活细胞鉴别学号：201600140055一、目的要求1.学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。
2.了解并掌握进行动物细胞原代培养的实验方法。
3.了解动物细胞培养的原理及注意事项。
4.学习细胞生死状态鉴别的方法。
5.了解细胞生死状态鉴别的原理。
6.熟悉和掌握各种鉴别细胞生死状态方法的判定特征。
7.掌握细胞计数方法，计算细胞存活率二、实验原理1、细胞培养细胞培养技术指的是在无菌条件下，把动、植物细胞从组织中取出，在体外模拟体内的生理环境，使离体的细胞在体外生长和繁殖，并且维持其结构和功能的一种培养技术，也叫细胞克隆技术。
细胞培养技术可以由一个细胞经过一段时间的培养得到大批的简单的单细胞或极少分化的多细胞，通过细胞培养可以得到大量的细胞或细胞代谢产物。
细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。
细胞培养具有其他生物技术无可比拟的优点：培养条件易改变和控制，便于单因子分析；便于人们直接对细胞内结构，细胞生长及发育等过程的观察。
在生物学的各个领域已被广泛应用。
但细胞培养也存在一定的局限性：细胞的培养是在脱离了机体的外界环境之中，与体内环境存在一定的差别，因此细胞培养过程中观察到的现象有时难以正确反映机体内的状况。
2、细胞死活鉴定细胞生死状态的鉴别方法主要是化学染色法和荧光染色法。
活细胞和死亡细胞在生理机能和性质上主要存在以下差异：①细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性地通过；而细胞死后，细胞膜受损，其通透性增加。
基于此，发展出了以台盼蓝、伊红、苯胺黑、赤藓红、甲基蓝以及荧光染料碘化丙啶（PI）或溴化乙啶（EB）等为染料鉴别细胞生死状态的方法，上述染料能使死亡细胞着色，而活细胞不被着色。
【实验目的】1、回顾细胞培养的有关知识；2、学习小鼠脾细胞的分离技术及简单的细胞培养技术3、掌握无菌操作的具体过程及无菌操作台的使用；4、了解细胞原代培养的基本方法及操作过程；5、学习掌握染色法鉴别细胞的生死状态的原理及方法；6、学习使用血球计数板对细胞总数及活细胞数进行计数；7、学习实验过程的详细描述及实验记录。
【实验原理】细胞培养指的是在无菌条件下，把动、植物细胞从组织中取出，在体外模拟体的生理环境，使离体的细胞在体外生长和繁殖，并且维持其结构和功能的一种培养技术。
动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。
从供体获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法称为细胞的原代培养。
当培养的动物细胞生长增殖达到一定密度，形成致密的单层细胞时，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，从一个容器中以1：2或其他比例转移到另一个容器中扩大培养的方法，称为细胞的传代培养。
传代培养的累计次数就是细胞的培养代数。
高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体的功能活动是十分困难的。
但如果把活细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则要方便和简单得多。
被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类揭开生、老、病、死的规律，探索优生、抗衰老和防治各种疾病的途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，使其向有利于人类健康长寿的方向发展。
因此动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。
细胞生死状态的鉴别方法主要是化学染色法和荧光染色法。
活细胞和死亡细胞在生理技能和性质上主要存在一下差异：①细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性地通过；而细胞死后，细胞膜受损，其通透性增加。
小鼠脾细胞原代培养,死活细胞鉴定山东大学实验报告山东大学实验报告 2013年6月8日姓名陈少坤系年级 2011级生科2班同组者张劲松王洪善科目细胞实验题目小鼠脾细胞原代培养，死活细胞鉴定一、前言细胞培养的概念:多细胞生物的细胞可以被分离出来，然后在体外特殊培养环境中继续存活，并保持其生理、生化特性直接从生物体分离出来，在体外培养过程中尚未分裂、增殖的细胞，称为原代培养细胞。
原代培养细胞在一定条件下可以继续增殖，在数量上大量扩增，这时就成为继代培养细胞。
细胞培养基要满足细胞的生长需要，包括 pH、渗透压、营养和生长因子等，已保证细胞的增殖。
细胞培养皿是特殊制造的使细胞可以贴壁。
细胞培养箱常指二氧化碳培养箱。
它可以提供合适的温度和二氧化碳浓度。
二氧化碳和培养基中的缓冲系统共同作用，保持细胞培养液的酸碱度。
超净台通过将空气进行过滤，为细胞培养的各种操作提供了一个干净的环境，使细胞培养免于细菌和真菌的污染。
细胞培养特点:大量实验材料单一、纯粹细胞类型培养基的成分可控，即生长条件可控/全合成、无血清培养基易于观察易于操作，改造活细胞必需通过控制物质进出细胞膜来保持内部生理环境的稳定性。
细胞死后，细胞膜通透性发生改变，原先不能进入细胞的物质也能够进入细胞。
台盘蓝染料正常情况下被活细胞阻拦在细胞膜外，只有细胞膜受损或者细胞死亡后，才能进入细胞。
因此，活细胞一般不能被台盘蓝染色，而死细胞会被染成蓝色。
伊红和苏木精是最常用的细胞染色剂。
山东大学实验报告山东大学实验报告二、实验目的回顾细胞培养的有关学习分离小鼠脾细胞的技术学习悬浮细胞的计数学习简单的细胞培养技术学习实验过程的详细描述及实验记录三、实验用品试剂:小鼠，70%酒精，蒸馏水， PBS, 细胞培养液，台盘蓝，伊红溶液仪器解剖盘，镊子，剪子，盖玻片，载玻片，显微镜，吸管，血细胞计数器四、实验步骤一、原代培养1.采用颈椎脱臼的方法牺牲小鼠。
2.将小鼠浸泡在 70%酒精中几分钟。
姓名程开源系年级2010级临床医学八年制组别同组者孙琳科目分子细胞生物学目细胞培养与细胞生死状态的鉴别学号201000232012【实验目的】1.学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。
2.了解并掌握用组织块贴壁培养法和消化细胞培养法进行动物细胞原代培养的实验方法。
3.熟练掌握动物细胞传代培养的实验方法。
4.学习细胞生死状态鉴别的方法。
5.了解细胞生死状态鉴别的原理。
6.熟悉和掌握各种鉴别细胞生死状态方法的判定特征。
7.掌握细胞技术方法，计算细胞存货率。
【实验原理】细胞培养指的是在无菌条件下，把动、植物细胞从组织中取出，在体外模拟体内的生理环境，使离体的细胞在体外生长和繁殖，并且维持其结构和功能的一种培养技术。
动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。
从供体获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法称为细胞的原代培养。
当培养的动物细胞生长增殖达到一定密度，形成致密的单层细胞时，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，从一个容器中以1：2或其他比例转移到另一个容器中扩大培养的方法，称为细胞的传代培养。
传代培养的累计次数就是细胞的培养代数。
高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的。
但如果把活细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则要方便和简单得多。
被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类揭开生、老、病、死的规律，探索优生、抗衰老和防治各种疾病的途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，使其向有利于人类健康长寿的方向发展。
因此动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。
细胞生死状态的鉴别方法主要是化学染色法和荧光染色法。
活细胞和死亡细胞在生理技能和性质上主要存在一下差异：①细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性地通过；而细胞死后，细胞膜受损，其通透性增加。
区别细胞死活的方法细胞死活是生物学研究者最常见的技术之一，在研究细胞的死亡机制和存活率方面非常有用。
它的主要功能是帮助研究者更好地了解细胞的死活状态，从而有助于开发治疗某些疾病的新疗法。
本文将主要介绍如何识别细胞的死活情况。
首先，我们可以通过免疫细胞染色技术来识别细胞的死活情况。
通过免疫细胞染色，可以检测细胞表面抗原，从而辨别细胞是否处于活跃状态。
这是一种非常有效的判断细胞活性的方法，效率也比其他方法高得多。
此外，我们还可以通过细胞膜电位测定法来识别细胞的活活性。
当细胞处于活跃状态时，细胞膜电位会显示出异常低的水平，这可以作为判断细胞活性的标准之一。
另外，我们还可以通过细胞膜的胞外/胞内pH值测定，也可以判断细胞的活活性。
当细胞处于活跃状态时，其胞外pH值显示出异常高的水平，而胞内pH值显示出异常低的水平。
此外，我们也可以使用免疫荧光技术来辨别细胞的死活情况。
通过免疫荧光，可以检测细胞内的某些细胞激素，从而判断细胞是否正在死亡。
如果细胞内的激素含量正常，则可以判断该细胞正处于活跃状态。
另外，我们还可以通过真菌抗原快速检测（FAR）技术，来区分细胞是活着还是死了。
这种技术将检测物质从细胞表面抗原中提取出来，然后对抗原进行鉴定，以及判断该细胞是活跃还是死亡。
最后，我们还可以通过外周血细胞汇总定量微板（PBMC）测定法，来判断细胞的死活情况。
这种技术可以鉴别外周血细胞的活活性，通过检测细胞内的特定生物学特征，以及血液样本中的细胞分布情况，来判断细胞的存活率。
总之，以上是几种常用的来识别细胞的死活情况的方法。
它们的共同特点是，都可以有效地帮助研究者识别细胞的死活情况，以便为未来的制药治疗带来帮助。
由于这些技术有着显著的功效，因此在研究细胞死活状态时，研究者都要考虑它们。
一、实验目的1. 掌握细胞培养的无菌操作技术。
2. 学习并掌握动物细胞原代培养和传代培养的实验方法。
3. 了解细胞生死状态鉴别的原理和方法。
4. 熟悉和掌握各种鉴别细胞生死状态方法的判定特征。
二、实验原理细胞培养是指在无菌条件下，将动、植物细胞从组织中取出，在体外模拟体内的生理环境，使离体的细胞在体外生长和繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。
细胞生死状态的鉴别方法主要包括化学染色法和荧光染色法。
活细胞和死亡细胞在生理功能和性质上存在以下差异：1. 细胞膜通透性差异：活细胞的细胞膜具有选择性通透性，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性地通过；而细胞死后，细胞膜受损，通透性增加。
2. 代谢差异：活细胞具有正常的代谢活动，而死亡细胞代谢活动停止。
基于以上差异，我们可以通过以下方法鉴别死活细胞：1. 台盼蓝染色法：活细胞不会被台盼蓝染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。
2. 伊红染色法：活细胞不着色，而死细胞会被染成红色。
3. 荧光染色法：活细胞不发光，而死细胞会发出荧光。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：动物细胞培养液、培养皿、移液枪、吸管、显微镜、台盼蓝染液、伊红染液、荧光染液等。
2. 实验仪器：超净工作台、离心机、细胞培养箱、显微镜等。
四、实验步骤1. 取动物细胞培养液，加入适量的台盼蓝染液，混匀后静置5分钟。
2. 用吸管吸取染色的细胞悬液，滴加在载玻片上，盖上盖玻片。
3. 将载玻片置于显微镜下观察，活细胞不着色，而死细胞被染成蓝色。
4. 取动物细胞培养液，加入适量的伊红染液，混匀后静置5分钟。
5. 用吸管吸取染色的细胞悬液，滴加在载玻片上，盖上盖玻片。
6. 将载玻片置于显微镜下观察，活细胞不着色，而死细胞被染成红色。
7. 取动物细胞培养液，加入适量的荧光染液，混匀后静置5分钟。
8. 用吸管吸取染色的细胞悬液，滴加在载玻片上，盖上盖玻片。
9. 将载玻片置于荧光显微镜下观察，活细胞不发光，而死细胞发出荧光。
广东省部分中学2023高中生物第4章细胞的物质输入和输出重点知识归纳单选题1、植物细胞质壁分离的过程中，细胞不断地失水，水分子穿过细胞膜的方式为（）A．主动运输B．被动运输C．胞吞D．胞吐答案：B分析：水分子跨膜运输方式为自由扩散，属于被动运输。
A、主动运输主要对象是离子和非脂溶性小分子，A错误；B、水分子跨膜运输方式为自由扩散，属于被动运输，B正确；C、胞吞是大分子物质进入细胞内的方式，C错误；D、胞吐是大分子物质运出细胞的方式，如分泌蛋白，D错误。
故选B。
2、下列与细胞物质转运有关的叙述，正确的是（）A．细胞内囊泡运输体现了生物膜的选择透过性B．消耗能量的运输方式一定是主动运输C．协助扩散的方向取决于膜两侧被转运物质的相对含量D．生物大分子都能通过核孔进出细胞核答案：C分析：自由扩散的特点：顺浓度梯度运输、不需要转运蛋白的协助、不消耗能量；协助扩散的特点：顺浓度梯度运输、需要转运蛋白的协助、不消耗能量；主动运输的特点：逆浓度梯度运输、需要载体蛋白的协助、消耗能量。
A、细胞内囊泡运输体现了生物膜的流动性，A错误；B、消耗能量的运输方式可能是主动运输，也可能是胞吞和胞吐，B错误；C、协助扩散物质从高浓度运输到低浓度，运输的方向取决于膜两侧被转运物质的相对含量，C正确；D、并非生物大分子都能通过核孔进出细胞核，如DNA不能由核孔出细胞核，D错误。
故选C。
3、相思子毒素是一种剧毒性高分子蛋白，它能使真核细胞的rRNA发生脱嘌呤反应。
相思子毒素形成过程中，其前体蛋白通过高尔基体运输至液泡，在液泡中加工成熟并储存。
下列有关相思子毒素的推测不合理的是（）A．能使基因的结构发生改变B．其前体蛋白进入液泡依赖膜的流动性C．不属于分泌蛋白D．液泡膜的包被使其不会影响自身的rRNA答案：A分析：分泌蛋白合成与分泌过程：附着在内质网上的核糖体合成蛋白质→内质网进行粗加工→内质网“出芽”形成囊泡→高尔基体进行再加工形成成熟的蛋白质→高尔基体“出芽”形成囊泡→细胞膜，整个过程需要线粒体提供能量。
