2015 动物细胞培养技术实验报告

竭诚为您提供优质文档/双击可除篇一：细胞传代培养实验报告细胞传代培养一.实验目的初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物技术在医学上的应用打下基础。

二、原理从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。

细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。

细胞培养可分为原代培养和传代（继代）培养。

直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。

细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。

所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、ph值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。

三、材料和试剂1、细胞:293细胞株2、试剂：0.25%胰酶、1640培养基（含10%小牛血清）3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml玻璃吸管、酒精灯等四、操作步骤1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。

2、加入1〜2m10.25%胰酶溶液，使板底细胞都浸入溶液中。

3、马上吸走胰酶液，再次加入2ml左右的胰酶，同样马上吸去，再加入几滴胰酶放入培养箱中消化几分钟4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，再按照观察的生长情况确定的传代比例传代5.根据确定的比例来取需要的量(剩余的细胞拿来做细胞计数)，加入4ml左右的培养液6.前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后，将培养板放入培养箱7.收拾整理超净台附：消化液配制方法：称取2.5克胰酶蛋白酶，加入100m110xpbs+纯水溶解到1L,滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。

1. 掌握动物细胞融合的基本原理和方法。

2. 了解细胞融合技术在生物科学领域的应用。

3. 通过实验观察细胞融合现象，验证细胞融合技术的可行性。

二、实验原理动物细胞融合是指两个或多个动物细胞在特定条件下，通过细胞膜的相互接触、融合，形成一个新的细胞。

细胞融合技术广泛应用于基因工程、细胞工程、生物制药等领域。

本实验采用电穿孔法诱导动物细胞融合。

三、实验材料1. 实验动物：小鼠成纤维细胞（小鼠胚胎成纤维细胞或小鼠胚胎成纤维细胞系）。

2. 试剂与仪器：胰蛋白酶、DMEM培养液、Hanks平衡盐溶液、FCS（胎牛血清）、Hepes缓冲液、电穿孔仪、显微镜、细胞培养皿、移液枪、超净工作台等。

四、实验方法1. 细胞培养：将小鼠成纤维细胞接种于培养皿中，在37℃、5%CO2的培养箱中培养至对数生长期。

2. 细胞收集：用胰蛋白酶消化细胞，收集细胞悬液。

3. 细胞洗涤：用Hanks平衡盐溶液洗涤细胞两次，去除未贴壁细胞。

4. 电穿孔：将细胞悬液加入电穿孔仪的电极室中，调整电穿孔参数，进行电穿孔处理。

5. 融合细胞培养：将电穿孔后的细胞悬液加入含FCS的DMEM培养液中，在37℃、5%CO2的培养箱中培养。

6. 观察融合细胞：在显微镜下观察融合细胞的形态变化，记录融合细胞的数量和形态。

五、实验结果1. 细胞融合现象：电穿孔处理后，部分细胞膜发生融合，形成融合细胞。

2. 融合细胞形态：融合细胞呈多核、多倍体状态，细胞质丰富，核膜模糊。

1. 电穿孔法诱导细胞融合的原理：电穿孔法是通过高电压脉冲在细胞膜上形成瞬时孔道，使细胞膜发生融合。

实验结果表明，电穿孔法能够有效诱导动物细胞融合。

2. 细胞融合技术的应用：细胞融合技术在生物科学领域具有广泛的应用，如制备杂交瘤细胞、生产单克隆抗体、基因工程等。

3. 影响细胞融合的因素：电穿孔参数、细胞浓度、培养条件等都会影响细胞融合效果。

本实验中，通过调整电穿孔参数和细胞浓度，获得了较好的融合效果。

实验一动物细胞培养细胞培养是用无菌操作的方法将动物体内的组织(或器官)取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养．使其不断地生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、细胞分化以及细胞衰老等过程的生命现象。

细胞培养的突出优点，一是便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长发育和分化等的影响；二是细胞培养便于人们对细胞内结构(如细胞骨架等)、细胞生长及发育等过程的观察。

因而细胞培养是探索和指示细胞生命活动规律的—种简便易行的实验技术，同时我们也不可忽略的另一个因素，那就是它脱离乐生物机体后的—些变化。

细胞培养技术目前已广泛地被应用于生物学的各个领域。

如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿痛学及病毒学等为此有必要使学生在细胞培养方面得到一些初步的感性知识，了解动物细胞培养的基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，对原代细胞与传代细胞有一个基本概念。

本实验分两次进行．即清洗与消毒和传代细胞的培养与观察。

Ⅰ清洗与灭菌一、实验目的能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。

二、实验原理清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。

体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。

细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。

清洗后的玻璃器皿，不仅要求干净透明，无油迹，而且不能残留任何物质。

如有毒的化学物质，哪怕残留0．1个，也可能影响细胞生长。

灭菌手段的选择十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。

假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。

以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。

三、实验材料、用品材料：无臭氧型紫外灯，微孔滤膜(直径25)：孔径为0．22μm，微孔滤膜(直径90)：孔径为0．22 μm，过滤器(直径25)。

药品：70％或75％酒精，0．1％新洁尔灭，煤酚皂溶液(来苏儿水)，0．5％过氧乙酸，乳酸，37％甲醛，高锰酸钾，NaOH，盐酸，重铬酸钾，浓硫酸(工业)，DEPC水[体积分数0．1％的焦炭酸二乙酯(diethylpyroearbonate)]。

动物细胞培养技术[适用对象] 环境科学专业[实验学时] 4学时一、实验目的掌握小白鼠细胞的培养技术，掌握显微镜直接计数法统计已知体积的培养基中的细胞数目。

二、预习与参考参考实验指导书，结合实验特色查阅相关文献资料进行实验设计。

三、实验内容1.取5个月龄的小白鼠一只，以最快的速度把小白鼠处死，处死之后应尽快对组织进行提取。

2.将小白鼠细胞放入培养基中培养，然后放入恒温培养箱培养。

3.拿出培养皿使用直接计数法统计已知体积的培养基中的细胞数目。

四、主要设备功能和材料清单恒温培养箱。

培养皿。

小白鼠。

五、实验要求正确使用显微镜，掌握培养计数法统计细胞数目。

六、实验报告要求1、根据实验要求，在实验时间内到实验室进行实验时，一边测量，一边记录实验数据。

报告要求准确、美观。

2、在实验中，如果发生实验测量数据与事先的计算数值不符，甚至相差过大，此时应该找出原因，不能不了了之。

同时要把通过实验所测量的数据与计算值加以比较，如果误差一般5％以下。

3、在报告的最后要完成指导书上要求解答的思考题。

七、思考题1.比较平板计数法与显微镜计数法的不同？2.培养基在培养箱中培养需要注意哪些事项？八、实验成绩评定办法本门实验课程考核成绩占课程总成绩的30％，考核分实验预习、实验过程操作、实验报告和实验技能等四个方面，其成绩计算为预习实验（包括资料搜集）占10%、实验过程操作（包括实验流程、调试过程）占25％、实验报告（包括原理描述、数据记录、实验结果和效果）占25％、实验技能考核（包括解决问题的能力）或考试占40％。

凡考核不及格者，应参加补考或重修。

动物细胞培养实验方案一、实验目的：1.掌握动物细胞的培养技术；2.了解动物细胞的生长特点和培养条件要求；3.学习观察和分析动物细胞的形态变化和生长状态。

二、实验器材与试剂准备1.器材：细胞培养器皿（如培养皿、蜡烛罩、CO2培养箱等）、离心机、显微镜、细胞计数板、计时器等；2.试剂：细胞培养基、培养液添加剂（如酶、抗生素等）、PBS缓冲液、生长因子、染色剂等。

三、实验步骤1.细胞培养基的配制：按照制定的配方将培养基粉末加入适量的无菌去离子水中，搅拌均匀后，进行高温高压灭菌，冷却后分装至培养器皿中；3.细胞处理和接种：将收集到的组织先用PBS缓冲液洗涤，然后使用细胞裂解酶或胰酶等消化酶消化组织，使细胞分散，处理成单个细胞后，用细胞计数板计数，并将细胞悬液接种到预先准备好的培养器皿中；4.细胞培养条件的控制：将培养器皿置于CO2培养箱中，设定适当的温度（通常为37℃）、湿度和CO2浓度（通常为5%），并保持稳定；5.细胞培养的观察和记录：观察培养皿中细胞的形态变化和生长状态，记录细胞的外观、增殖情况、易于观察的指标等；6.细胞的子培养和冻存：当细胞达到一定密度时，可以进行子培养，即将细胞从一个培养皿中转移到新的培养皿中，以促进细胞的增殖和保存细胞生物资料。

此外，也可以将分散的细胞加入由培养液和冻存剂组成的试管中，通过冷冻的方式保存细胞，并用于后续的实验。

四、实验控制与常见问题的解决1.环境控制：细胞培养箱中的温度、湿度和CO2浓度的调整应尽量保持稳定；2.培养基的配制：根据细胞培养物的不同，可以选择不同配方的培养基，确保培养基的质量符合要求；4.洗涤步骤：组织或细胞的洗涤步骤应轻柔，避免对细胞的损伤；5.细胞的接种量：对于粘附性细胞，接种量应适当，以避免细胞过度堆积或过度稀释。

五、实验结果和分析观察培养皿中细胞的生长状态、细胞数量以及形态的变化，记录生长状态、增殖情况和其他可以观察到的指标，并进行数值化分析和统计。

实验十五动物细胞培养技术及其应用一．实验目的通过本实验使学生掌握细胞培养、细胞检测和细胞表达等成套技术的原理和方法。

二. 实验内容1.培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏等基本技术；2.细胞生长曲线测定、细胞活性检测等常用技术；3.细胞污染检测方法与技术；4.病毒在细胞中的感染与增殖、重组病毒异源蛋白的细胞表达等实用技术。

三．实验用品1. 材料：Sf 细胞、Hi5 细胞等2. 器材：CO2培养箱、超净工作台、倒置显微镜、培养基抽滤装置、电泳仪、离心机、pH计、液氮罐（含液氮）、水浴锅、温度计、培养瓶、血清瓶、5 ml和10 ml 移液管、不锈钢移液管筒、大小不锈钢饭盒、酒精灯、吸耳球、血球计数板、96孔板、24孔板、无菌冻存管、离心管、记号笔、一次性过滤器、微量加样器、精密pH试纸、酒精棉球等3. 试剂与药品：Grace培养基、胎牛血清、甘油、DMSO、双抗（青霉素、链霉素）100 u/ml、Hank’s液、胰蛋白酶、台盼蓝、液氮、分析纯无水酒精、95%医用酒精、Tris碱、硼酸、EDTA、琼脂糖粉（电泳用）、dNTPs、Taq酶、支原体检测试剂盒、DNA提取试剂盒DNeasy Blood & Tissue kit （Qiagen）等。

四．实验方法与步骤（一）培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏1. 缓冲液及培养基配制Hank’s液：KH2PO4 0.06g，NaCl 8.0g，NaHCO3 0.35g，KCl 0.4g，葡萄糖1.0g，Na2HPO4·H2O 0.06g，加H2O至 1000ml，高压灭菌。

4℃下保存。

胰蛋白酶液：称取0.25克胰酶蛋白酶（活力为1：250），加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。

4%台盼蓝染液：称取台盼蓝4克，加双蒸水至100 ml。

MTT溶液：MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液或无酚红的Hank’s液中。

实验一：实验器材准备【实验原理】细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。

一般标准的细胞培养室应包括配液室、准备室和培养室。

三室既相互连接又相对独立，各自完成培养过程中的不同操作。

【实验目的】①培养室的设置和设备。

②无菌概念和无菌操作要领。

【操作步骤】1．实验室设置（1）配液室（2）准备室（3）培养室培养室内要完全密闭，保持恒定的温度，在设计上要注意以下几点：①培养室的位置最好设在阴面，阳光不能直接照射的地方，防止室内温度增高。

②天花板的高度不要超过2米，以保证紫外灯的有效杀菌效应，③门一般用拉门，以防止空气流动。

④天花板、地板和四周墙壁要光滑无死角，要镶瓷砖或涂油漆，这样设计，一是便于清洗和消毒，另外也不易在墙角堆积灰尘。

2．实验室常用设备（1）准备室的设备①双蒸馏水蒸馏器：制备双蒸水。

②酸缸：盛洗液，浸泡玻璃器具。

③干燥箱：洗涤完的玻璃器皿用干燥箱烘干。

④高压锅：玻璃器皿、解剖用具、部分液体、塑料器具等灭菌。

不同物品其有效灭菌压力和时间不同。

⑤储品柜1：放置未消毒物品。

⑥储品柜2：放置已消毒物品。

准备室注意事项：①预防蒸馏器被烤干。

②勿将酸液溅到衣物或地面。

③勿将高压锅排气阀和安全阀堵塞。

④已消毒物品应与未消毒物品分柜存放。

（2）配液室的设备①天平（扭力天平和电子天平）：称量用②pH计。

③磁力搅拌器。

（3）细胞培养室的设备①超净工作台：超净工作台的种类很多，有单面单人、单面双人、双面双人或双面四人等，其工作原理是利用鼓风机，使通过高效滤气的空气，徐徐通过台面，这样使工作环境中具无菌而均匀的空气。

根据层流方式的不同，超净工作台主要分为水平层流式和垂直层流式两种，基本原理大致相同，都是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器，由此送出的洁净气流从一定的均匀的断面风速通过无菌，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。

但两种净化台的气流方向不同。

动物细胞培养、计数、冷冻和复苏实验报告由于本次实验分三天进行，日期分别为10月31日（周一）、11月2日（周三）、11月4日（周五），实验内容分别为动物细胞培养、结束，动物细胞冷冻以及最后的动物细胞的复苏，又因为冷冻和复苏可视为连续环节，故本报告分成两个部分来记录本次实验，具体内容如下：I. 动物细胞的培养和计数一、实验目的由动物细胞表达和合成的蛋白质除了具有正确的氨基酸序列之外，在加工过程中还能以正确的方式进行折叠和修饰，且大多能以天然形式分泌到培养基中，从而确保了所生产的蛋白质具有与天然产物一致的生物活性、免疫原性和体内寿命，这些特点使得动物细胞成为工业化生产诊断和治疗用生物产品的理想宿主，如各类重组蛋白质和单克隆抗体等。

另外，目前方兴未艾的组织工程、干细胞工程等也是和细胞培养技术密切相关的，因此，可以说细胞培养技术是细胞工程、组织工程等研究领域的基础。

本实验的目的是让学生学习和了解动物细胞培养的基本操作，以及相关的细胞培养前准备工作、细胞培养的环境条件和其他有关注意事项；用血球计数板对培养瓶中的细胞进行计数以及用台盼蓝计细胞的存活率。

二、基本原理动物细胞与组织培养是从动物体内取出细胞或组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使离体的细胞或组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术，是动物细胞工程的基础。

体外培养可分为原代培养和传代培养，原代培养是指将机体取出的细胞或组织进行实效培养的过程，这样的细胞称为原代细胞，原代细胞通常只能培养10－50代左右即退化死亡；由原代细胞通过变异、分化等手段筛选出来具有无限次代培养能力的细胞群称为细胞系，这类细胞的培养称为传代培养。

体外培养的细胞根据其生长方式，主要可分为贴附型细胞和非贴附型细胞两类，贴附型细胞必须贴附在某一固相表面才能生存和生长，非贴附型细胞可在培养液中悬浮生长，因而也叫悬浮型细胞。

动物细胞培养与微生物培养有很大不同，这主要是因为动物细胞无细胞壁，且大多数哺乳动物细胞只有附着在固体或半固体表面才能生长。

细胞培养技术实验报告细胞培养技术实验报告细胞培养技术是现代生物学研究中不可或缺的重要手段之一。

通过细胞培养技术，研究人员可以在实验室中培养和研究各种类型的细胞，以便更好地了解细胞的结构、功能和生理特性。

本文将从细胞培养的原理、培养基的配制和培养条件的控制等方面，详细介绍细胞培养技术的相关内容。

一、细胞培养的原理细胞培养的原理是将细胞从生物体中分离出来，置于含有适当营养物质的培养基中，提供适宜的温度、湿度和气体环境，使细胞能够在体外生长和繁殖。

细胞培养的关键是培养基的配制，培养基中必须包含细胞所需的营养物质，如氨基酸、糖类、维生素等，同时还需要添加生长因子、激素和抗生素等物质，以促进细胞的生长和增殖。

二、培养基的配制培养基的配制是细胞培养中的重要环节。

不同类型的细胞需要不同的培养基，因此在进行细胞培养实验时，需要根据具体的细胞类型选择适当的培养基。

一般来说，培养基主要包括基础培养基和补充物两部分。

基础培养基是指提供细胞生长所需的基本营养物质的培养基，如DMEM （Dulbecco's Modified Eagle Medium）、RPMI 1640（Roswell Park Memorial Institute 1640）等。

补充物则是指在基础培养基中添加的各种生长因子、激素和抗生素等物质。

常见的补充物有胎牛血清、胰岛素、转铁蛋白、乳酸等。

在配制培养基时，需要注意各种成分的浓度和比例。

浓度过高或过低都会对细胞的生长和增殖产生影响。

此外，培养基的pH值也是一个重要的参数，一般细胞培养的pH值在7.2-7.4之间。

三、培养条件的控制细胞培养的成功与否，除了培养基的配制外，还与培养条件的控制密切相关。

培养条件主要包括温度、湿度和气体环境等方面。

温度是细胞培养中最重要的因素之一。

不同类型的细胞对温度的要求有所不同，一般来说，人类体细胞的培养温度为37摄氏度，而某些动物细胞则需要较低的温度，如鸟类细胞的培养温度为25摄氏度。

姓名：XX 系年级：2013级XX班学号：201300XXXXXXX实验题目:动物细胞培养同组者: XXXXX动物细胞培养技术【实验目的】1.学习掌握细胞培养的基本原理以及具体方法，并对小鼠脾细胞进行原代培养；2.掌握无菌操作的具体过程及无菌操作台的使用；3.学习掌握染色法鉴别细胞的生死状态的原理及方法；4.学习使用血球计数板对细胞总数及活细胞数进行计数，计算细胞存活率；【实验原理】（一）. 动物细胞培养技术动物细胞培养技术是指从动物体内取出组织或细胞，在体外模拟动物体内的生理坏境，在无菌，适当温度和一定的营养条件下，使之生存，生长和繁殖，并维持其结构和功能的方法。

细胞培养的意义:⑴.具有其他生物技术无可比拟的优点；⑵.培养条件易改变和控制，便于单因子分析；⑶.便于人们直接对细胞内结构、细胞生长及发育等过程的观察；⑷.在生物学的各个领域（如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学及病毒学等）已被广泛应用细胞培养的局限性：（1）.在脱离机体复杂环境下，细胞培养条件与躯体环境有一定距离；(2).观察到的结果有时难以正确反映机体内的状况；(3).细胞培养得到的产物少。

培养细胞的生存条件有水的质量、无菌环境，最适温度、渗透压、气体条件、最适PH、营养条件和培养基质等。

细胞培养的方法：1. 原代培养：直接从生物体内获取细胞，组织或器官，进行体外培养直至第一次传代为止。

2. 传代培养：当培养的细胞增殖达到一定密度之后，则需要再做培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1:2或其他比例转移到另一个容器中的扩大培养。

原代细胞培养的方法有：单层细胞培养法和组织块培养法细胞传代培养包括：贴附生长细胞的传代：洗细胞——酶消化——接种——观察悬浮生长细胞的传代：A.直接传代 B.离心传代单层培养细胞的生长过程分为：游离期，吸附期，繁殖期，维持期，衰退期培养细胞的形态分型：A. 贴附型 B.悬浮型（二）. 细胞死活鉴定细胞生死状态的鉴别方法主要是化学染色法和荧光染色法。

2015动物细胞培养技术实验报告一、实验目的1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。

2、学习并掌握细胞传代培养的方法。

3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。

二、实验原理细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。

动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。

由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。

动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。

原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。

传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。

高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。

被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。

三、细胞培养相关设施及材料1、细胞培养室无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。

孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。

制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。

储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。

清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。

2、细胞培养常用基本设施：荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。

《细胞工程实验技术》（动物细胞培养部分）目录实验一实验器材的清洗、包装和消毒 (2)实验二常用的仪器设备介绍 (3)实验三常用动物细胞培养用液的配制 (4)实验四组织块原代培养、传代培养及生物学检测 (6)实验五心肌细胞的原代培养、传代培养及培养细胞的常规检查 (8)实验一实验器材的清洗、包装和消毒一、实验目的1、掌握细胞培养常用实验器材的清洗要领、清洗步骤和注意事项。

2、掌握细胞培养常用器材的包装要领和要求。

3、掌握正压滤器的安装、使用和拆除方法及操作注意事项。

二、实验用品以组为单位包装物品1、量筒（100mL、500mL）2、大、小烧杯3个3、1000mL容量瓶×14、移液管1mL×3(灭菌)5、（100mL、250mL、500mL）盐水瓶、（500mL）广口瓶×各4(灭菌)6、眼科剪刀、眼科镊子各2把(灭菌)7、细胞培养瓶×3(灭菌)其它：饭盒、青霉素瓶、牛皮纸、离心管、滴管、注射器、磁棒、绳、标签纸等杂干。

三、实验内容（一）清洗1、要领：浸泡、刷洗、酸泡。

2、步骤：洗衣粉浸泡12h→刷洗→流水震荡冲洗15~20遍→漓水→蒸馏水洗荡2次→37℃烘干→待包装。

3、注意事项：(1)使用后的器材要立即投入水中。

(2)器皿内要充满液体，不得有气泡。

(3)器材要用流水震荡干净。

（二）包装1、大的器材如：量筒、广口瓶、培养皿、吸管等要包装。

2、小的器材如：注射器、剪刀、镊子放入饭盒。

3、注意事项：(1)包装时手指与器材接触面积要小，手指不能触及器材使用端。

(2)封闭器材使用端，标记器材手持端。

(3)小包装(4)玻璃管道口加棉花。

（三）湿热消毒：高压灭菌锅消毒四、作业1、清洗的要求为何较高？你认为该如何保证器皿中无杂质？2、器材包装有何要求？3、实验二常用的仪器设备介绍一、实验目的了解动物细胞培养中常用仪器设备的使用方法、注意事项和保养方法二、实验用品1）超净工作台2）自动双重纯水蒸馏器3）高压蒸气灭菌器4）过滤器5）电热恒温干燥箱6）二氧化碳培养箱7）冰箱8）倒置显微镜三、实验内容1、了解超净工作台的工作原理2、自动双重纯水蒸馏器结构、使用注意事项。

细胞培养的实验报告细胞培养的实验报告引言：细胞培养是生物学研究中常用的技术手段之一，它可以为我们提供大量的细胞供应，从而进行各种实验研究。

本实验旨在通过细胞培养技术，观察细胞的生长和分裂情况，并探究不同培养条件对细胞生长的影响。

实验材料与方法：1. 细胞培养基：含有营养物质、生长因子和抗生素的培养基。

2. 细胞培养器：培养细胞的容器，如培养皿、细胞培养瓶等。

3. 细胞培养物：实验中使用的细胞株。

4. 培养箱：提供适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度。

5. 显微镜：观察细胞生长和形态的工具。

实验步骤：1. 准备培养基：按照说明书的要求，将培养基与适量的培养液混合均匀。

2. 细胞接种：将细胞株取出，加入培养基中，并使用移液器进行充分混合。

3. 培养条件调节：将培养器放入培养箱中，设置适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度。

4. 观察细胞生长：每隔一段时间，用显微镜观察细胞的生长情况，并记录细胞数量和形态变化。

5. 细胞分裂观察：在细胞生长到一定程度后，进行细胞分裂观察，记录细胞分裂的时间和方式。

6. 培养条件对比：将不同培养条件下的细胞生长情况进行对比分析，探究不同条件对细胞生长的影响。

结果与讨论：通过实验观察，我们发现细胞在培养基中能够良好地生长和分裂。

在适宜的培养条件下，细胞数量逐渐增多，并呈现出正常的形态。

细胞分裂的时间和方式也符合细胞生长的规律。

而在不适宜的培养条件下，细胞生长受到抑制，数量较少且形态异常。

进一步的对比分析发现，温度、湿度和二氧化碳浓度是影响细胞生长的重要因素。

过高或过低的温度会导致细胞代谢异常，影响细胞的生长和分裂。

湿度过高则容易导致细菌和霉菌的滋生，对细胞生长产生不利影响。

而二氧化碳浓度的调节则与细胞的酸碱平衡和呼吸有关，过高或过低的浓度都会对细胞的生长产生负面影响。

结论：细胞培养技术是一种重要的生物学研究手段，通过合理调节培养条件可以实现细胞的良好生长和分裂。

本实验通过观察细胞在不同培养条件下的生长情况，发现温度、湿度和二氧化碳浓度对细胞生长具有重要影响。

动物细胞观察实验报告动物细胞观察实验报告细胞是构成生物体的基本单位，而动物细胞是构成动物体的基本组成部分。

为了更好地了解动物细胞的结构和功能，我们进行了一次细胞观察实验。

实验材料和方法：我们选取了鸡蛋作为实验材料，因为鸡蛋的蛋白质含量高，适合细胞观察。

首先，我们将鸡蛋清倒入一个容器中，然后用酒精棉球擦拭鸡蛋清表面，以保证实验的卫生和准确性。

接下来，我们用一根细长的针在鸡蛋清中刺破一个小孔，将鸡蛋清挤出并放入显微镜玻片上。

然后，我们将玻片放入显微镜下进行观察。

实验结果：在显微镜下观察，我们可以清晰地看到动物细胞的结构。

首先，我们看到了细胞质，它是细胞内的胶状物质，包含了各种细胞器。

细胞质呈现出淡黄色，有一定的粘稠度。

在细胞质中，我们还观察到了一些颗粒状的结构，这些颗粒被称为线粒体，是细胞内的能量合成中心。

接着，我们注意到了一个圆形的结构，它位于细胞的中央，被称为细胞核。

细胞核是细胞的控制中心，包含了遗传物质DNA。

在细胞核周围，我们还观察到了一层薄膜，被称为核膜。

核膜起到保护细胞核的作用，同时还能控制物质的进出。

除了细胞核和细胞质，我们还看到了一些细长的管状结构，这些结构被称为内质网。

内质网是细胞内的运输系统，能够将物质从一个部位运送到另一个部位。

在内质网的表面，我们还观察到了一些颗粒状的结构，这些颗粒被称为核糖体。

核糖体是蛋白质合成的场所，能够将RNA转化为蛋白质。

此外，我们还发现了一些细小的泡状结构，这些泡状结构被称为溶酶体。

溶酶体是细胞内的消化器官，能够分解各种有害物质和废物。

通过观察溶酶体的形态和数量，我们可以判断细胞的代谢活跃程度。

实验讨论：通过这次细胞观察实验，我们对动物细胞的结构和功能有了更深入的了解。

细胞是生命的基本单位，不同的细胞结构和功能决定了不同细胞的特点和功能。

动物细胞具有较为复杂的结构，包含了细胞质、细胞核、内质网、溶酶体等多个组成部分，它们相互协调合作，共同维持着细胞的正常运作。

细胞培养实验报告
细胞培养是一种常见的实验技术，用于细胞生物学和生物医学研究中。

通过细胞培养，可以对细胞进行观察、实验和研究，从而更好地理解细胞的生物学特性和生理功能。

在本次实验中，我们进行了细胞培养实验，并得到了一些有意义的结果和结论。

首先，我们准备了所需的培养基、细胞培养器具和细胞样本。

在实验过程中，我们严格按照操作规程进行操作，保证了实验的准确性和可靠性。

在培养细胞的过程中，我们注意了细胞的密度、培养基的配比、培养条件的控制等因素，保证了细胞的正常生长和稳定性。

接着，我们对培养的细胞进行了观察和实验。

我们观察到细胞在培养基中呈现出良好的形态和生长状态，细胞的数量也在逐渐增加。

通过显微镜观察，我们发现细胞的形态和结构都符合正常的细胞特征，没有出现异常情况。

在实验中，我们还对细胞进行了染色、免疫分析等实验，得到了一些有意义的结果。

最后，我们对实验结果进行了分析和总结。

我们得出了一些关于细胞生长、分化、代谢等方面的结论，这些结论对于我们进一步研究细胞生物学和生物医学具有一定的指导意义。

同时，我们也发现了一些实验中存在的问题和不足之处，为今后的实验工作提出了改进和完善的建议。

综上所述，本次细胞培养实验取得了一些有意义的结果和结论，对于我们的研究工作具有一定的参考价值。

在今后的工作中，我们将进一步完善实验方案，提高实验技术水平，不断深入研究细胞的生物学特性和生理功能，为生物医学研究做出更大的贡献。

动物细胞培养实验设计1.实验目的本实验旨在研究动物细胞在体外培养条件下的生长情况，并探究培养基、培养温度和培养时间对细胞增殖和存活率的影响。

2.实验材料-细胞培养物（如人体肺癌细胞株A549）-培养基（如DMEM）-胎牛血清（FBS）-无菌PBS缓冲液-1%无菌青霉素/链霉素混合液-0.25%胰酶/EDTA溶液-无菌培养皿-离心管-显微镜-倒置显微镜-培养箱3.实验步骤3.1细胞传代-使用0.25%胰酶/EDTA溶液处理细胞培养物，使其分离成单个细胞。

-计算损失率和细胞数，根据所需的细胞数目进行传代。

3.2细胞计数-取适量的细胞悬液，并使用显微镜在计数室或倒置显微镜下进行细胞计数。

确保计数的精度和准确性。

3.3细胞培养基配制-使用DMEM培养基作为培养基，添加适量的胎牛血清（一般为10%）和1%无菌青霉素/链霉素混合液，制成DMEM完全培养基。

-为对照组，不添加药物或其他试剂。

3.4细胞处理-将细胞悬液均匀分配到不同的无菌培养皿中。

-添加适量的DMEM完全培养基，使细胞完全覆盖。

-将培养皿置于培养箱中，设置适当的培养温度（一般为37°C）。

3.5细胞观察和评价-在不同的培养时间点（如24小时、48小时和72小时），取出培养皿中的细胞悬液。

-使用显微镜观察细胞形态，评估细胞生长和形态变化。

3.6细胞增殖分析-使用显微镜或自动细胞计数器计算细胞数目。

-根据细胞数目的变化，计算细胞增殖速率和倍增时间。

3.7细胞存活率分析-使用PBS缓冲液将细胞悬液洗涤一次，去除培养基。

- 使用0.4%尝试性胺蓝（Trypan Blue）染色液染色，染色时间不超过3分钟。

-使用显微镜观察和计数染色细胞和非染色细胞的数目，计算细胞存活率。

4.数据分析根据实验结果，绘制细胞增殖曲线图和细胞存活率曲线图。

使用适当的统计方法分析数据，比较不同培养条件下的细胞增殖和存活率差异。

5.结论根据实验结果，得出不同培养条件对细胞增殖和存活率的影响结论。

第1篇一、实验目的1. 掌握细胞培养的基本原理和方法；2. 了解细胞培养过程中的无菌操作和细胞传代技术；3. 观察细胞在体外培养过程中的生长和变化。

二、实验原理细胞培养是将细胞从生物体中取出，在体外模拟生物体内环境，使其在适宜的条件下生长、繁殖和传代。

细胞培养技术是生物学研究的重要手段，广泛应用于医学、生物工程等领域。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：小鼠脾脏细胞、胰蛋白酶、细胞培养液、DMSO（二甲基亚砜）、培养瓶、移液器、细胞计数板、显微镜等。

2. 仪器：超净工作台、细胞培养箱、离心机、冰箱等。

四、实验步骤1. 细胞复苏：将冷冻保存的细胞复苏，解冻后用移液器吹打均匀，加入适量培养液，调整细胞浓度；2. 细胞接种：将复苏后的细胞接种于培养瓶中，放入细胞培养箱培养；3. 细胞传代：待细胞长满培养瓶后，用胰蛋白酶消化细胞，调整细胞浓度后，重新接种于新的培养瓶中；4. 细胞观察：定期观察细胞生长情况，记录细胞形态、数量和生长速度；5. 细胞冻存：将细胞传代后，取适量细胞加入DMSO，冷冻保存。

五、实验结果与分析1. 细胞复苏：复苏后的细胞呈圆形，细胞膜完整，无碎片；2. 细胞接种：接种后的细胞在培养箱中生长良好，细胞形态规则，细胞间连接紧密；3. 细胞传代：传代后的细胞生长迅速，细胞数量逐渐增加；4. 细胞观察：细胞在体外培养过程中，形态、数量和生长速度逐渐稳定。

六、实验结论1. 成功掌握了细胞培养的基本原理和方法；2. 掌握了细胞培养过程中的无菌操作和细胞传代技术；3. 观察到细胞在体外培养过程中的生长和变化。

七、实验讨论1. 细胞培养过程中，无菌操作至关重要，应严格遵循无菌操作规程；2. 细胞传代时，应选择合适的胰蛋白酶浓度和消化时间，以减少对细胞的损伤；3. 细胞培养过程中，应定期观察细胞生长情况，及时调整培养条件，以保证细胞生长良好。

八、实验总结本次实验成功进行了细胞培养，掌握了细胞培养的基本原理和方法，为后续的细胞学研究奠定了基础。

竭诚为您提供优质文档/双击可除动物细胞传代培养实验报告篇一：细胞传代培养实验报告细胞传代培养一.实验目的初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物技术在医学上的应用打下基础。

二、原理从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。

细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。

细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。

直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。

细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。

所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、ph值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。

三、材料和试剂1、细胞：293细胞株2、试剂：0.25％胰酶、1640培养基（含10％小牛血清）3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml玻璃吸管、酒精灯等四、操作步骤1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。

2、加入1~2ml0.25％胰酶溶液，使板底细胞都浸入溶液中。

3、马上吸走胰酶液，再次加入2ml左右的胰酶，同样马上吸去，再加入几滴胰酶放入培养箱中消化几分钟4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，再按照观察的生长情况确定的传代比例传代5.根据确定的比例来取需要的量（剩余的细胞拿来做细胞计数），加入4ml左右的培养液6.前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后，将培养板放入培养箱7.收拾整理超净台附：消化液配制方法：称取2.5克胰酶蛋白酶，加入100ml10xpbs+纯水溶解到1L，滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。

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二、原理从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。

细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。

细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。

直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。

细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。

所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、ph值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。

三、材料和试剂1、细胞：293细胞株2、试剂：0.25％胰酶、1640培养基（含10％小牛血清）3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml玻璃吸管、酒精灯等四、操作步骤1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。

2、加入1~2ml0.25％胰酶溶液，使板底细胞都浸入溶液中。

3、马上吸走胰酶液，再次加入2ml左右的胰酶，同样马上吸去，再加入几滴胰酶放入培养箱中消化几分钟4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，再按照观察的生长情况确定的传代比例传代5.根据确定的比例来取需要的量（剩余的细胞拿来做细胞计数），加入4ml左右的培养液6.前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后，将培养板放入培养箱7.收拾整理超净台附：消化液配制方法：称取2.5克胰酶蛋白酶，加入100ml10xpbs+纯水溶解到1L，滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。