精选结核病的实验室诊断资料
- 格式:ppt
- 大小:18.05 MB
- 文档页数:79
结核病实验室检查结核病是一种严重的传染病,通常由结核分支杆菌引起。
这种病菌会侵入肺部并引起肺结核,而也可以通过血液传播到其他部位,如淋巴、骨髓和肝脾等。
在许多地方,特别是在发展中国家,结核病仍然是一种普遍的疾病,因此及早诊断和治疗至关重要。
结核病实验室检查是确诊结核病的一种重要方法。
结核病实验室检查通常涉及多种类型的检测,例如:1.酸杆菌检测结核分支杆菌是酸杆菌,因此酸杆菌检测是一种常用的实验室检查方法。
该方法不需要复杂的设备并且具有高度的特异性和灵敏度。
患者的样本可以是咳嗽的痰液、唾液或肺组织,也可以通过胃镜获得胃肠液。
如果酸杆菌检测呈阳性,则可以确诊结核病。
但是,该方法也存在一些局限性,例如在一些情况下不能检测出结核分支杆菌,如某些菌株可以耐受某些药物。
2. 结核抗体检测结核抗体检测是另一种可以用于诊断结核病的实验室检查方法。
该方法通常使用ELISA(酶联免疫吸附试验)或其他类似方法检测患者的血清中是否存在结核抗体,如果测试结果呈阳性,则表示患者可能感染了结核分支杆菌。
但是,结核抗体检测的结果可能会出现假阳性或假阴性的情况,这限制了其在临床实践中的应用。
3.结核病PCR检测PCR检测是检查抗原核酸序列的一种方法。
由于PCR技术可以扩增极微量的DNA,并且非常特异和灵敏,因此可以检测出非常小的感染量。
在结核病中,PCR检测可以用于检测结核分支杆菌的DNA,以确认病原体的存在。
但是,该方法对样本中的DNA污染非常敏感,因此必须进行严格的实验室操作和质量控制。
总之,结核病实验室检查是确诊结核病的一种重要方法。
这些测试方法都具有不同的优缺点,并且结果可能受到许多因素的影响。
因此,必须在临床实践中综合考虑这些方法的结果和临床表现,以取得最佳的诊断结果。
同时,实验室技术人员必须受过专业培训,严格遵守操作规程,以确保准确诊断和最佳治疗效果。
1.结核分枝杆菌鉴定方法1. 1萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查目前萋尼氏抗酸染色痰涂片显微镜检查是我国结核病实验室使用最为普遍的方法,其操作简单快捷,特异性高,设备要求低,但是灵敏度较低,不能及时发现病人。
1.2 发光二极管荧光显微镜(LED荧光显微镜)发光二极管荧光显微镜管利用二极管光源,延长了显微镜使用寿命,不需要暗室,且价格低廉,可以提高涂片的阳性检出率。
目前在国内应用评估结果显示灵敏度较明场显微镜明显提高,已在部分区县开始使用。
1.3 交叉引物恒温扩增结核病诊断技术在恒定温度下,特殊的引物和特异性探针在酶的作用下,反应体系在一个密闭的反应管内反应。
扩增反应一般不超过一个小时,最短半小时。
目前应用玻璃化试剂,稳定性好,便于运输。
目前在国内区县级应用评估。
1.4 夹层杯结核病诊断方法将痰标本(或其它标本)用专用消化灭活液充分消化,完全暴露并保留抗酸杆菌,通过自动离心涂片机(或半自动制片染色机)对消化后的标本进行充分集菌。
直接在夹层杯装置中进行抗酸染色,取出基片或膜片置于普通显微镜进行观察。
夹层杯法操作方便快捷,便于标准化操作,通过消化灭活,安全性改善,阳性检出率也比直接涂片法大大提高。
夹层杯的装置有沉降式和虑过式,适用于不同工作量的医疗机构。
1.5 环介导等温扩增方法采用2对引物在等温条件下即可完成DNA的扩增,扩增结果通过肉眼观察荧光进行判定,诊断是否为结核病。
同时整个反应体系采用封闭系统减少了工作区域扩增子的污染,整个反应过程只需一个小时即可完成,通过肉眼观察荧光判读结果。
2.结核分枝杆菌培养方法2.1 固体培养培养是结核病诊断的精标准,也是获得分离菌株开展耐药检测的前提,我国结核病实验室最常用的是固体罗氏培养法,包括简单法和中和离心法。
虽然培养是诊断的精标准,但是花费时间长,需要4-8周时间。
2.2 液体培养液体培养通过添加生长刺激剂,改变检测方法提高检测灵敏度等方式缩短了阳性报告时间。
结核病的实验室诊断方法结核病实验室检查主要有;涂片染色显微镜检查、分枝杆菌分离培养、分枝杆菌药物敏感性试验、分枝杆菌菌种鉴定、分枝杆菌基因分型、分枝杆菌血清学及核酸扩增检测等。
细菌学检查细菌学检验结果的准确性首先取决于标本的质量。
正确地采集、转送标本,是直接影响检验结果的重要因素和取得准确结果的前提。
各种标本(痰液、血液、伤口分泌物和各种感染组织等)采集时应充分考虑到选择恰当合理的时问,考虑到可能存在的病原菌的性质,按要求采集标本,这样可使标本包含细菌,并为后续检验步骤打下良好的。
合格的痰标本在低倍镜视野里上皮细胞应<10个,白细胞数应>25个。
涂片染色显微镜检查根据我国结核病防治规划的要求,对咳嗽、咳痰>13周或有咯血或血痰的肺结核可疑症状者,应留取3份痰标本(夜间痰、清晨痰和即时痰)进行痰涂片抗酸染色检查。
即时痰为病人就诊时咳出的痰液:清晨痰为清晨深咳出的痰液;夜间痰为就诊前1天晚睡前咳出的痰液。
留取的痰液标本常规涂片后,进行要尔-尼尔逊氏染色法(ziehl-Neelen)染色。
分枝杆菌分离培养结核分枝杆菌是兼性需氧菌,最适生长温度为37℃,最适pH为6.5~7.2。
分枝杆菌分离培养检查法,是结核病确诊最可靠的方法。
是获得纯培养物进行菌种鉴定、药物敏感性试验以及其他生物学研究的。
当前,我国普遍采用改良L-J(改良罗氏)培养基来分离培养结核分枝杆菌。
通常情况下,当每1ml标本中微生物含量达102~3CFU(菌落形成单位)时,即可培养阳性。
分枝杆菌快速培养检查是使用分枝杆菌快速培养仪(MIGT、BacT/A1err、ESP),通过测定细菌生长代谢检测分枝杆菌生长情况的方法。
在进行分枝杆菌快速培养检查时,标本接种前的祛污染处理,必须严格按照系统说明书中给定的方法进行。
孵育检测过程中系统报告阳性时,相应标本的培养液必须首先进行抗酸染色镜检,发现抗酸菌后方可发出阳性报告。
分枝杆菌药物敏感性试验分枝杆菌药物敏感性试验对于结核病人合理的药物选择、合适的药物剂量以及针对耐药病人的预防控制具有积极的作用。
耐多药结核病的实验室诊断条件:因耐多药结核分枝杆菌的生物危险性,1)需P2及以上实验室,目前我院实验室条件基本具备即将投入运行,2)日常培养及涂片用的生物安全柜滤膜已超出使用年限,工作人员生物安全得不到保障,应定期予以更换。
耐多药结核分枝杆菌主要以结核分枝杆菌体外药物敏感性测定作为其诊断依据。
因此其基础是培养,只有培养出阳性结核分枝杆菌才能进一步通过结核分枝杆菌体外药物敏感性测定诊断是否为耐多药结核分枝杆菌。
1.已进人临床常规应用的测定方法:目前包括绝对浓度法、比例法及应用BACTEC460、BACTEC 960、BacT/ ALERT 3D、ESPII等仪器系统快速检测结核分枝杆菌的药物敏感性。
其中:绝对浓度法以最低抑菌浓度或以无生长为终点作为判断标准,是我国目前普遍采用的方法;比例法以是否能够抑制99%的细菌生长作为判断标准,是世界卫生组织推荐使用的方法;后四种仪器方法则是比例法的特化,其特点是以细菌的代谢过程指示细菌生长状况。
2.处于研究探索阶段的测定方法:此类方法很多,抗性比例法、Etests法、噬菌体生物扩增法、液体变色培养基测定法、荧光素酶测定法、硝酸盐还原试验等。
3分子生物学方法对结核分枝杆菌耐药性检测已有一些进入临床检测。
基因突变是引起抗结核药物耐药性的最主要的原因。
多种以PCR为基础的分子生物学技术用于检测与耐药相关基因的突变,作为快速耐药性检测方法在实验室或临床得到开展。
这些方法具体包括:主要是DNA序列分析法,聚合链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP),另外还包括基因芯片技术、异质性双链构象分析、变性梯度凝胶电泳、线性探针杂交技术、RNA/RNA错配检测技术和分子灯塔技术等。
由于结核分枝杆菌的耐药性与基因突变的确切关系未完全阐明,检测耐药相关基因的分子生物学方法虽然能快速准确地检测到耐药相关基因的突变,但由于判断药物敏感性时存在固有的缺陷,检测结核分枝杆菌耐药性的基因型鉴定法不能完全替代表型鉴定法。
一、结核菌检查痰中找到结核菌是确诊肺结核的主要依据。
痰菌阳性说明病灶是开放性的(有传染性)。
若排菌量多(每毫升10万条以上),直接涂片检查易呈阳性,为社会传染源。
厚涂片法能提高发现率。
荧光显微镜检查适用于大量标本快速检查。
无痰或儿童不会咳嗽,可采用清晨的胃洗涤液查找结核菌。
成人可用纤支镜检查或从冲洗液中查找结核菌。
痰菌量较少(每毫升1万条以下),可用集菌法。
培养法更为精确,除能了解结核菌有无生长繁殖能力,并可作药物敏感试验和菌型鉴定。
结核菌生长缓慢,使用改良罗氏培养基,一般需4-8周始能报告。
使用含14C的棕榈酸作碳源底物的7H12培养基测量细菌代谢过程中所产生14C的量,即可推算出标本中是否含有抗酸杆菌(BACTEC法),在5-7天即可报告,比一般培养法缩短了时间,且可作药物敏感试验和菌型鉴定,但缺点是标本可因污染而影响检查结果。
将标本在体外用聚合酶链反应(PCP)方法,使所含微量结核菌DNA得到扩增,用电泳法检出。
1条结核菌约含1fgDNa ,40条结核菌即可有阳性结果。
此法不用体外预培养,特异性强,2天可出报告,快速、简便,还可以作菌型鉴定,但时有假阳性或假阴性。
二、影像学检查胸部X线检查不但可早期发现肺结核,而且可对病灶部位、范围、性质、发展情况和治疗效果作出判断,对决定治疗方案很有帮助。
除荧光透视和X线摄片处,必要时还可采用点片或特殊体位(如前弓位)摄片、体层摄片及支气管造影等。
摄片结合透视能提高诊断的准确性,可发现肋骨、纵隔、膈肌或心脏遮盖的细小病灶,并能观察心、肺、膈肌的动态。
荧光缩影X线检查适用于集体肺部健康检查。
肺结核的常见X线表现有:纤维钙化的硬结病灶(斑点、条索、结节状,密度较高,边缘清晰),浸润性病灶(云雾状、密度较淡、边缘模糊)干酪性病灶(密度较高、浓度不一)和空洞(有环形边界的透光区)。
肺结核病灶一般在肺的上部、单侧或双侧,存在时间较长,常有多种性质不同的病灶混合存在和肺内播散迹象。