实验九

实验九-重氮盐的制备及其反应实验九 重氮盐的制备及其反应一、实验目的1．掌握重氮化反应的原理和重氮盐的制备方法 2．掌握放氮反应的原理和操作方法3．掌握偶合反应的原理及偶氮化合物的制备方法二、实验原理重氮盐通常是伯芳胺在过量无机酸（常用盐酸和硫酸）的水溶液中与亚硝酸钠在低温作用而制得：ArNH 2NaNO 2HXArN 2+X -H 2O NaX低温++2+2+在制备重氮盐时，应注意以下几个问题：⑴ 严格控制在低温。

重氮化反应是一个放热反应，同时大多数重氮盐极不稳定，在室温时易分解，所以重氮化反应一般都保持在0~5℃进行。

但芳环上有强的间位取代基的伯芳胺，如对硝基苯胺，其重氮盐比较稳定，往往可以在较高的温度下进行重氮化反应。

⑵ 反应介质要有足够的酸度。

重氮盐在强酸性溶液重比较不活泼；过量的酸能避免副产物重氮化合物等的生成。

通常使用的酸量要比理论量多25%左右。

⑶ 避免过量的亚硝酸。

过量的亚硝酸会促进重氮盐的分解，会很容易和进行下一步反应所加入的化合物（例如叔芳胺）起作用，还会使反应终点难于检验。

加入适量的亚硝酸钠溶液后，要及时用碘化钾淀粉试纸检验反应终点。

过量的亚硝酸可以加入尿素来除去。

⑷ 反应时应不断搅拌。

反应要均匀地进行，避免局部过热，以减少副产物。

制得的重氮盐水溶液不易放置过久，要及时地用于下一步的合成中。

最常见的重氮盐的化学反应有下列两种类型：⑴ 作用时放出氮气的反应。

在不同的条件下，重氮基能被氢原子、羟基、氰基、卤原子等所置换，同时放出氮气。

例如，桑德迈耳（Sandmeyer ）反应：ArN 2+Cl -CuCl 过量浓盐酸ArCl +N 2在实际操作中，往往将先制备的、冷的重氮盐溶液慢慢地加到冷的氯化亚铜的浓氢卤酸溶液中去，先生成深红色悬浮的复盐。

然后，缓缓加热，使复盐分解，放出氮气，生成卤代芳烃。

⑵ 作用时保留氮的反应，其中最重要的是偶合反应。

例如重氮盐与酚或叔芳胺在低温时作用，生成具有Ar —N=N —Ar ＇结构的稳定的有色偶氮化合物。

实验九不饱和聚酯树脂的制备
实验九的目的是制备不饱和聚酯树脂。

实验所需材料和设备：
1. 碳酸二乙酯
2. 丁二酸
3. 甲酸
4. 醇解剂（例如甲醇）
5. 原动力
6. 烧杯
7. 漏斗
8. 温度计
9. 磁力搅拌器
10. 醇解反应器
实验操作步骤：
1. 在醇解反应器中加入适量的丁二酸和甲酸，将醇解器放在烧杯上用原动力加热，使其保持在60-70℃的温度范围内。

2. 在另一个烧杯中加入适量的碳酸二乙酯，并在磁力搅拌器上搅拌。

3. 将碳酸二乙酯逐渐加入到醇解反应器中的酸溶液中，同时持续搅拌。

4. 在加入完碳酸二乙酯后，继续搅拌反应溶液，直到反应完全进行并生成不饱和聚酯树脂。

5. 关闭热源后，将反应溶液冷却至室温并过滤掉杂质。

6. 将得到的不饱和聚酯树脂进行涂敷或储存使用。

注意事项：
1. 操作时需戴好防护手套、安全眼镜等个人防护装备。

2. 醇解反应需要保持适当的温度，避免超过70℃。

3. 反应前要确保所有设备和材料的清洁和干燥。

4. 操作过程中要小心避免碰撞、溅洒和吸入有害物质。

5. 实验结束后，要对实验废液进行正确的处理。

实验九硫酸亚铁铵的制备硫酸亚铁铵的制备一、实验目的1.学习复盐硫酸亚铁铵的制备方法。

2.练习和巩固水浴加热，蒸发浓缩，结晶，减压过滤等基本操作。

3.学习用目视比色法检验产品的质量等级。

二、实验原理硫酸亚铁铵(NH4)2Fe(SO4)26H2O, 俗称摩尔盐，为浅绿色晶体，易溶于水，难溶于乙醇。

在空气中比亚铁盐稳定，不易被氧化，在定量分析中常用于配制亚铁离子的标准溶液。

常用的制备方法是先用铁与稀硫酸作用制得硫酸亚铁，再用FeSO4与(NH4)2SO4在水溶液中等物质的量相互作用生成硫酸亚铁铵，由于复盐的溶解度比单盐要小，因此溶液经蒸发浓缩、冷却后，复盐在水溶液中首先结晶，形成(NH4)2Fe*****晶体。

Fe + H2SO4 = FeSO4 + H2↑FeSO4 + (NH4)2SO4 + 6H2O = FeSO4 (NH4)2*****产品中主要的杂质是Fe3+，产品质量的等级也常以Fe3+ 含量多少来衡量，本实验采用目视比色法进行产品质量的等级评定。

将样品配制成溶液，在一定条件下，与含一定量杂质离子的系列标准溶液进行比色或比浊，以确定杂质含量范围。

如果样品溶液的颜色或浊度不深于标准溶液，则认为杂质含量低于某一规定限度，这种分析方法称为限量分析。

三、仪器和试药仪器：锥形瓶、烧杯、量筒、蒸发皿、表面皿、玻棒、漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、酒精灯、电炉、石棉网、铁架台、铁圈、托盘天平、滤纸、pH试纸、温度计、水浴锅。

试药：H2SO4 (3molL-1)、乙醇(95%)、BaCl2溶液(25%)、NaOH（40%）、KSCN (25%)、K3Fe(CN)6 (0.1molL-1)、(NH4)2SO4 (s)、铁屑。

四、实验内容1.铁屑的净化（除去油污）：用台秤称取2.0g铁屑，放入150mL锥形瓶中，加入20mL10%Na2CO3溶液, 加热煮沸除去油污。

倾去碱液，用水洗铁屑至中性。

( 如果用纯净的铁屑，可省去这一步)。

实验九空气中二氧化碳及氧气含量的测定
一、空气中二氧化碳含量的测定（实验书上第103-104页）
二、空气中氧气含量的测定
（1）实验装置（如图6-31所示）
1.注射器（50 mL）；
2.细铁丝燃烧匙；
3.红磷；
4.集气瓶；
5.水
图6-31 空气中氧气含量的测定装置
（2）实验操作步骤
①在盛有少量水的集气瓶外壁划一条线做上记号。

②细铁丝燃烧匙穿过集气瓶塞，用药匙取一定量的红磷置于燃烧匙上，在酒精灯上点燃，迅速插入瓶中并盖紧胶塞，观察有大量白烟和黄色火焰。

③等白烟沉落并溶于水之后，用装满水的注射器扎进瓶子，观察注射器中的水在大气压的作用下自动注入瓶内，直至不再自动注入水为止，再划上水面的记号。

上述实验仪器的代用品还可用于初中氧气的制取与性质、电解水实验、氢气的制取与性质、二氧化碳的制取与性质、一氧化碳的制取与性质等实验。

实验九闪光融合临界频率值实验一.实验目的我们的眼睛如果受到一个间歇频率较低的光刺激时，就会产生一亮一暗的闪烁感觉，这种频率较低的闪光刺激所产生的忽明忽暗的感觉为光的闪烁，随着闪烁频率的不断增加，闪烁感觉逐渐消失，我们的眼睛会感到的是一个完全稳定的或连续的光，这称为闪光的融合。

闪烁刚刚达到融合时的光刺激间歇频率值称为闪光融合临界频率（Critical flicker frequency，缩写为CFF）值，它是融合和闪光的平均值。

CFF值越高，说明眼睛对时间上明暗变化的分析能力越强，大脑的认知水平越高，正因为如此，CFF值的高低目前已成为检测人的疲劳及注意程度等的主要指标，人越疲劳，CFF值越低。

本实验的目的是：通过实验使学生掌握CFF值的测定方法及仪器的使用方法。

二.实验仪器EP403亮点闪烁仪三.实验内容测定闪光融合临界频率（CFF）四.仪器原理EP403亮点闪烁仪由被试观察部分和主试操作部分组成。

被试观察部分：观察孔，内有一个闪动的光源为视标，改变亮点颜色的旋钮和调节亮点闪烁频率的旋钮。

主试操作部分：可从频率表中显示闪变频率值。

可测量不同背景光强、亮黑比、亮点强度或不同的亮点颜色的闪烁频率值。

五.实验步骤与方法1.接通电源，电源220V，50Hz，后面板数码管亮，三只发光管之一亮；2.选择呈现亮点颜色红、黄、绿，在后面板左角，任取一种；3.用渐增法测量融合阈值由被测试者改变频率值，将前面板的频率旋钮顺时针方向转动，使频率缓慢上升，当被测试者感到光点闪烁消失，应立即停止转动调节频率旋钮，并向主试人报告“不闪了”，主试者记录下此时频率表上的频率值，即是融合阈值。

每个被测试者测3次。

4.用渐减法测量闪变阈值由被测试者改变频率值，将前面板的频率旋钮逆时针方向转动，使频率缓慢降低，直到被测试者开始感到闪烁时，应立即停止转动调节频率旋钮，并向主试人报告“闪了”，主试人记录下此时频率表上的频率值，即为闪变阈值。

实验九_抗酸染色一、实验目的：1.了解酸性染料的作用原理和特点；2.掌握抗酸染色的基本操作方法；3.学会酸性染料的染色方法，掌握酸性染料的分类、特点及选择；4.通过本实验培养出精细而准确的实验技能，并能够分辨正常颜色和染色后的颜色；5.了解并掌握镜检技术在细胞观察中的应用。

二、实验原理：抗酸染色法是利用对脱水后的细胞或组织制备的切片进行染色，其染色过程遵循酸性染料彩色原理，使细胞核和染色质染上颜料。

其中具有代表性的有嗜酸性颜料伊红和剔除剂法制备的石蕊碱和石蕊素，它们的红色染料，可使细胞核、细胞质及细胞间质染色，是一种直观、精细并广泛应用的组织染色方法。

三、实验材料：1.琼脂片；2.异丙醇、95%乙醇、70%乙醇、蒸馏水；3.深蓝色对氨基苯基丙酸、酸琥珀酸、对甲氧基苯丙酸三种酸性染料；4.柠檬酸水解液、蓝酸肉汤pH7.0、苏木精、酒精碘洗液、甲苯、间苯酚溶液；5.常规玻璃器皿、巴氏杯刀、显微镜。

四、实验步骤：1.用异丙醇将琼脂片脱水，紧接着，用95%乙醇进行脱水，然后再用70%乙醇进行脱水，每步处理时间均为10分钟，脱水后的琼脂片加蒸馏水进行洗涤。

2.将某种细胞涂片放在洗涤后的琼脂片上。

样品按次序加入柠檬酸水解液不超过2滴。

在某些细胞中，应加入稍多的柠檬酸水解液，使细胞膜脆性。

然后用蒸馏水冲洗琼脂片。

3.用不同的酸性染料粘稠溶液冲洗样品，操作时要均匀涂抹并确保干燥。

4.将石蕊素/石蕊碱染色标本放入甲苯中2×3分钟、2×1分钟再放入间苯酚溶液中1×1分钟，然后离开溶液用酒精碘洗涤。

再用100%酒精冲洗落紫液中的沉淀。

5.将干燥的染色标本滴一滴蓝酸肉汤pH7.0，然后用苏木精染色1－3分钟。

洗涤、脱水、透明化。

直到涂片样品透明无色。

6.用显微镜观察染色切片。

可能需要使用适当的镜头，在细胞和细胞核旁边的区域能找到更好的颜色区分。

用高倍镜或油浸镜仔细观察。

五、实验注意事项：1.异丙醇、乙醇有毒，应戴手套，加强通风。

试验九配合物与沉淀——溶解平衡一．实验目的：1．加深理解配合物的组成和稳定性;了解配合物形成时特征2．加深理解沉淀—溶解平衡和溶度积的概念;掌握溶度积规则及其应用3．初步学习利用沉淀反应和配位溶解的方法,分离常见混合阳离子4．学习电动离心机的使用和固—液分离操作二．实验原理：配合物石油形成体又称为中心离子或原子与一定数目的配位体负离子或中性分子;以配位键结合而形成的一类复杂化合物,是路易斯Lewis酸和路易斯Lewis碱的加合物;配合物的内层与外层之间以离子键结合,在水溶液中完全解离;配位个体在水溶液中分步解离,其类似于弱电解质;在一定条件下,中心离子;配位个体和配位个体之间达到配位平衡;例：Cu2++ 4NH3——CuNH342+相应反应的标准平衡常数Kf Q; 成为配合物的稳定常数;对于相同类型的配合物Kf Q数值愈大就愈稳定;在水溶液中,配合物的生成反应;主要有配位体的取代反应和加合反应例：FeSCN n3++ ===FeF63-+ nScn-HgI2s + 2I-==HgI42-配合物形成时,往往伴随溶液颜色、酸碱性即PH;难溶电解质溶解度,中心离子氧化还原的改变等特征;2．沉淀—溶解平衡在含有难溶电解质晶体的饱和溶液中,难溶强电解质与溶液中相应离子间的多相离子平衡;称为：沉淀—溶解平衡;用通式表示如下;AnBns == mA n+ag + nB m-ag其溶度积常数为：Ksp Q A m B n==cA n+/c Qm cB m-/c Qn沉淀的生成和溶解;可以根据溶度积规则判断：J Q> Ksp Q有沉淀析出、平衡向右移动J Q= Ksp Q 处于平衡状态、溶液为饱和溶液J Q< Ksp Q无沉淀析出、或平衡向右移动,原来的沉淀溶解溶液PH的改变,配合物的形成发生氧化还原反应;往往会引起难溶电解质溶解度的改变;对于相同类型的难溶电解质;可以根据其Ksp Q的相对大小判断沉淀的先后顺序,对于不同类型的难溶电解质,则要根据计算所需测定试剂浓度的大小来判断测定的先后顺序;两种测定间相互转换的难易程度,要根据沉淀转化反应的标准平衡常数确定;利用测定反应和配位溶解;可以分离溶液中心某些离子;实验内容与数据处理四．思考题1．比较FeCl4-,FeNCS3-和FeF63-稳定性; 2．比较AgNH32+,AgS2O323-和AgI-的稳定性3．试计算·L-1Na2H2Y溶液的pH4．如何正确地使用电动离心机。

实验九细菌的生化鉴定一、实验目的1、了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法；2、掌握糖发酵试验、淀粉实验、吲哚实验、M.R.及V. P的原理、方法及相应培养基的制备方法。

3、了解细菌在培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义；4、掌握以上实验的用途。

二、实验原理各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。

由于细菌特有的单细胞原核生物特性，这种差异就表现得更加明显。

不同细菌具有不同的酶系统，故不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类物质的能力不同，它们对物质的代谢谱和分解产物也就不同，细菌的这种代谢特点可供鉴别细菌之用。

用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应，其在菌株的分类鉴定中具有主要意义。

1、糖发酵实验不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。

其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。

酸的产生可利用指示剂来判定。

在配制培养基时预先加入溟甲酚紫［P HS . 2 （黄色）一6 . 8 （紫色）] ，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。

气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。

发酵后产生的有机酸：乳酸、醋酸、丙酸等（溴甲酚紫变色范围pH5.2~6.8, pH<5.2黄色，pH>6.8紫色）；发酵后产生的气体：甲烷、氢、二氧化碳等（杜氏小管内有气泡，产气漂浮）。

2、M.R.及V.P实验很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4 . 2 以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。

因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 （红色）-pH6 . 2 （黄色）。

若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH 仍在6 . 2 以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。

实验九酵母菌的计数一、实验目的1. 了解酵母菌计数的方法和步骤。

2. 练习从样品中筛选出有效的酵母。

3. 熟练掌握血球计数板的使用方法和计算准确菌落数的技巧。

二、实验原理酵母比细菌大，通常直径在3-5um左右。

因此，酵母计数需要使用高倍显微镜和血球计数板。

血球计数板具有网格状的结构，格子大小为1mm x 1mm，每个格子被分成16个小方格，靠着板子底部的深度为0.1mm。

在这样的板子上，可以计算出每个小方格中的数量，进而计算出酵母菌落数。

三、实验步骤1. 酵母菌培养液制备取一小瓶酵母菌液（1ml/瓶）和50ml的培养基置于培养瓶中，摇晃好进行稀释。

2. 稀释酵母菌液使用吸管和15ml的试管来进行酵母菌液的稀释。

取出大约0.5ml的酵母菌液放入试管中，使用吸管加入5ml的无菌蒸馏水，进行混合。

将10倍的稀释液取出0.5ml，进行第二次稀释。

3. 取样取出10ul的酵母稀释液，加入到血球计数板的中心宫格中。

重复三次。

4. 计数使用高倍显微镜（400×）观察血球计数板，并手动计算每个格子中的酵母菌数量。

计算方法：（每个小方格中酵母菌总数÷ 16） x 10^45. 数据分析计算出平均酵母菌浓度，将结果用来评估样品中酵母菌的含量。

四、实验注意事项1. 所有实验用品都需要在自然环境下进行消毒，并最好使用自动消毒器。

2. 使用高倍显微镜时，需要避免透过培养液的气泡和混沌，以获得清晰的图像。

3. 在计算酵母菌浓度时，需要始终保持准确的记录，并进行计算。

出现微小误差可能会有较大的影响。

4. 进行实验时需要着实考虑消除外因因素。

五、实验数据处理与分析在实验中，首先需要从样品中筛选出有效的酵母，并进行稀释。

稀释后的酵母菌液，需要使用吸管加入到试管中，并定期混合。

取10ul的酵母稀释液，加入到血球计数板的中心宫格中（使用不同液体的试管不同），所得数据如下表：| 每个小方格中的酵母菌数量 ||----------|--------------|| 1 | 9 || 2 | 12 || 3 | 15 || 4 | 13 || 5 | 11 || 6 | 16 || 7 | 12 || 8 | 14 || 9 | 10 || 10 | 12 || 11 | 10 || 12 | 11 || 13 | 9 || 14 | 8 || 15 | 16 || 16 | 18 ||----------|--------------|平均酵母菌浓度：（每个小方格中酵母菌总数÷ 16）X10^4 = (154÷16) X 10^4 = 9.63 X 10^4/ml。