碘化丙啶PI染色液(1mgml)

100×PI染色液使用说明书货号：SL7091规格：1ml保存条件：-20度保存，有效期1年。

产品内容：产品内容SL7091100×PI染色液（1mg/mL）SL7090-1ml说明书1份产品简介：碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种常用的细胞核荧光染料，作为一种溴化乙锭（EB）的类似物，能够嵌入碱基之间实现与DNA结合。

这种结合没有或者几乎无序列倾向性，大约每4-5个DNA碱基对结合一个染料。

PI也能与RNA结合，需要用核酸酶处理来区分DNA和RNA染色。

水溶液中PI的最大激发/发射波长是493/636nm。

一旦与核酸结合，荧光信号明显增强20-30倍，最大激发波长向红色波段迁移~30-40nm，最大发射波长向蓝色波段迁移~15nm，从而使其最大激发/发射波长变为535/617nm。

PI的摩尔吸光系数相对比较低，但是其具有足够大的斯托克司频移来同时检测核酸DNA和荧光标记抗体，只需要使恰当的滤片。

PI适用于荧光显微镜，共聚焦显微镜，流式细胞仪以及荧光计分析。

PI不能穿透细胞膜而被排斥在活细胞外，但是可以穿过破损的细胞膜而对核染色。

利用这一特性，通常与Calcein-AM、Hoechst33258或Hoechst33342等活细胞荧光探针一起使用，同时对活细胞和死细胞染色和鉴定，用于细胞凋亡相关的研究。

也可以用作多重荧光染色的复染剂，兼容于各种细胞标记技术，包括直接或者间接的荧光抗体检测，mRNA原位杂交，细胞结构特异性的荧光探针检测法以及组织染色。

PI 的单独染色也可以进行细胞周期的检测。

使用说明：可以用PBS稀释到1×使用，或与细胞悬液按照1:100的比例使用。

PI染色操作步骤1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm,5min，弃上清液。

2、加入PBS1ml离心洗涤1次，弃上清。

3、加入2ml预冷的70%酒精，4℃固定30min，或是-20℃固定过夜。

PI染色检测细胞周期1)细胞样品的准备：（1）对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。

用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。

再次收集到离心管内。

1000g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。

对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。

小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。

加入约1毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。

再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50微升左右的PBS，以避免吸走细胞。

轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

（2）对于悬浮细胞：1000g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。

对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。

小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。

加入约1毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。

再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50微升左右的PBS，以避免吸走细胞。

轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

2)细胞固定：将细胞加入到1毫升冰浴预冷70%乙醇中，快速轻轻吹打混匀，4℃固定2小时或更长时间。

固定12-24小时可能效果更佳。

1000g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。

对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。

小心吸除上清，可以残留约50微升左右的70%乙醇，以避免吸走细胞。

加入约1毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞。

再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50微升左右的PBS，以避免吸走细胞。

轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

3)碘化丙啶染色液的配制4)染色：每管细胞样品中加入0.5毫升碘化丙啶染色液，缓慢并充分重悬细胞沉淀，37℃避光温浴30分钟。

随后可以4℃或冰浴避光存放。

FDA-PI双色荧光法检测藻细胞活性的研究实验方案一、藻培养二、细胞悬液的配制在10ml藻细胞液中加入1ml鲁哥氏溶液[8]，于黑暗中放置48h，使细胞固定。

固定后的细胞已全部失去活性，但细胞个体没有破碎分解。

固定后的藻细胞液在3000 r~min-1转速下离心，用培养基重悬3-4次，直到将鲁哥氏溶液清洗干净，溶液变成无色。

重悬后的细胞作为死亡细胞染色检测。

三、单染色法-FDA (双醋酸荧光素) 染色（1）配制溶液：将FDA溶于丙酮中，配成浓度为5 mg.ml-1的溶液，置于4℃冰箱中保存。

染色时将FDA加入到藻细胞液中，使其终浓度为100 μg.ml-1。

（2）活细胞染色：取处于对数增长期的藻细胞液，离心浓缩，蒸馏水清洗1次，加入FDA，在室温黑暗处放置5 min染色；染色后离心，蒸馏水清洗1-2次，最后用蒸馏水悬浮细胞，涂片观察。

（3）死亡细胞胞染色：取上面鲁哥氏溶液固定的死亡细胞按活细胞相同的方法进行染色。

（4）观察：用荧光显微镜观察和拍照（明场和荧光分别拍照，物镜使用20×）。

活细胞被FDA染成亮绿色，当细胞膜受损，荧光素无法在细胞内累积，而使细胞无法发出荧光。

活性高的细胞发出强烈的绿色荧光，活性弱或死亡的细胞发光较弱或不发光。

（5）计数：对（2）、（3）中的发荧光活细胞的数量和总细胞数量进行统计，计算细胞的染色效率。

活性率=染色细胞/观察总细胞个数×100%。

（6）实验重复三次。

四、单染色法-PI (碘化丙锭) 染色（1）配制溶液：PI用DPBS缓冲溶液(Dulbecco’s phosphate buffered saline，Hyclone) 配成浓度为400 μg.ml-1溶液，置于4℃冰箱中保存，染色时终浓度为60 μg.ml-1。

（2）活细胞染色：取处于对数增长期的藻细胞液，离心浓缩，蒸馏水清洗1次，加入PI，在室温下放置5 min染色；染色后离心，蒸馏水清洗1-2次，最后用蒸馏水悬浮细胞，涂片观察。

组织中的细胞周期和凋亡检测方法之一－－PI法schoman无论是肿瘤或其它正常新鲜组织均可用PI（碘化丙啶）的方法来检测，这是一种常见而且便宜的方法。

主要操作步骤如下：1、组织块用0.25%胰酶消化30min－1h。

2、200－400目筛网过滤细胞，获得单细胞悬液。

3、75％乙醇（－20度预冷）固定细胞1h。

4、加入PI（终浓度50ug／ml）和无DNA酶污染的RNA酶（终浓度50ug／ml）1ml染色30min－1h。

5、流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。

注意事项：1、组织消化后使细胞形成单个细胞悬液是本检测方法的关键。

如组织难以消化，可加入适量胶原酶。

另外，消化前，用剪刀将组织剪成小块也不要忘了。

2、细胞可尽量的多准备（at least 100 thousand），这样流式检测方便，结果可靠。

3、每次消化的时间等条件应尽量一致，否则使实验结果CV值偏大。

4、细胞用乙醇固定后可以访置48小时（4度保存）后检测，便于无法立即检测的实验者，对实验结果基本没有影响。

其它也有一些检测凋亡的方法，均有商品化试剂盒。

在此不赘述。

yanzishenyang：我看相关的说明：碘化丙啶（propidium iodide,PI）检测早期死亡细胞膜通透性状态的不同是区分细胞凋亡和坏死的一个重要指标，凋亡细胞在进入最终溶解阶段前，胞膜通透性无明显改变，相对分子质量大的与DNA 结合的荧光染料（如PI）不能时入凋亡细胞内，而相对分子质量小的荧光染料（如Hoechest 3342或33258等）仍能被细胞摄取。

应用流式细胞仪或荧光显微镜可区分和坏死细胞，细胞内DNA出现Hoechest 3342标记而不出现PI标记的为凋亡细胞。

偶得细胞是用PI染色的，经过流氏细胞仪检测出现一个亚二倍体峰，是否能和坏死区别？因为偶用的作用细胞的蛋白本身可以造成细胞膜的损伤，所以PI可以进入细胞，这是否意味着我检测的结果无法区分凋亡和坏死？hdhdhd0000：用PI法识别凋亡时，有一种方法叫SUB-G1法，这种方法需要在染PI前加入适量的破膜剂（磷酸盐－枸橼酸盐缓冲盐），我们称之为PC液，它会让晚期凋亡所形成的DNA小碎片部分出膜而使胞内的DNA总含量减少，从而使流式上的DNA直方图的G0/G1峰前出现一个亚二倍体峰，也就是SUB－G1峰（凋亡峰）！用荧光2的面积做直方图可以清楚的看见凋亡峰，但是要区分APo和Nec需要少量的经验，而在荧光2高度图上，因为是用的是对数，所以可以把凋亡和坏死拉开，凋亡峰在不同的细胞周期特异性细胞凋亡时，都特异性的出现在10的2次方荧光道数处，坏死在10的1次方处，从而可以清楚的分清它们。

碘化丙啶染色步骤
碘化丙啶染色是一种常见的核酸染色方法，在细胞和组织学研究中广泛应用。

其步骤如下：
1.取一定量的细胞或组织标本，用生理盐水或PBS洗涤去除表面杂质。

2.将样本固定在载玻片上，可以使用多种固定剂，如4%聚乙烯醇（PVA）、95%乙醛等。

3.用1%碘化丙啶溶液覆盖标本，染色时间一般为5-10分钟。

4.洗去碘化丙啶染色液，用70%乙醇洗涤10-20秒钟，可重复洗涤2-3次。

5.再用绝对乙醇洗涤10-20秒钟，可重复洗涤2-3次。

6.最后用苯酚溶液清洗数秒钟，然后用苯酚-乙醇（1:1）复制剂液备用。

7.用显微镜观察、拍照或判定分析。

注意事项：
1.碘化丙啶染色液颜色应呈鲜红色，如色泽变深则需要更换新液。

2.在染色前要保证标本充分固定，避免细胞或组织形态失真。

3.洗涤过程中应注意避免样本干燥和爆裂，避免对标本造成损害。

2008/11/09 09:55PI、Hoechst33342均可与细胞核DNA（或RNA）结合。

但是PI不能通过正常的细胞膜，Hoechst则为膜通透性的荧光染料，故细胞在处于坏死或晚期调亡时细胞膜被破坏，这时可为PI着红色。

正常细胞和中早期调亡细胞均可被Hoechst着色，但是正常细胞核的Hoechst着色的形态呈圆形，淡兰色，内有较深的兰色颗粒；而调亡细胞的核由于浓集而呈亮兰色，或核呈分叶，碎片状，边集。

故PI着色为坏死细胞；亮兰色，或核呈分叶状，边集的Hoechst着色的为调亡细胞。

电子天平准确称取1mg 碘化丙啶（propidium iodide，PI）溶于10ml PBS（PH 7.2），成100ug/ml 的储备液，用前等量混合（注意避光）protocol:1、收集细胞，数量需1－2×10E6个（悬浮细胞直接吹起即可，对于贴壁细胞用胰酶消化时，最好用DMEM+胰酶消化,且消化过程中不要去移动瓶子，防止消化所形成的细胞团影响后面的染色及分析），离心，11,000rpm，5min。

2、用1ml 冰冷的PBS重悬后，离心：11,000rpm，5min。

3、用200μl冰冷的PBS重悬后，用加样器混匀后，缓慢的加入含有4ml冰冷的70％乙醇的10ml离心管中，边加边摇匀。

－20℃，过夜。

（或者置4℃，1h后进行下一步）4、1,500rpm，10min，小心弃上清后，用1ml冰冷的PBS重悬，1,500rpm，5min。

小心弃上清。

5、加入含有40μg/ml 的PI，100μg/ml的RNase的PBS溶液500μl，37℃，培养30min －1h。

混匀。

溶液配方：PBS 910μlPI 80μlRNase 10μl共1ml6、过滤，供流式检测。

Hoechst 33342/PI双染色法紫外光激发, Hoechst-PI双染在荧光显微镜下可见4 种细胞形态:活细胞(VN) ,染成蓝色,核呈正常结构;早期凋亡细胞(V A) ,染成蓝色,核呈固缩状或圆珠状;晚期凋亡细胞(NV A) ,也被染成红色,但可见明显的染色质凝集。

碘化丙啶PI溶液的使用方及注意事项
货号：C0080
规格：1ml/1ml×10
保存：-20℃，有效期至少2年
产品说明：
碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂。

它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌入双链DNA后释放红色荧光。

PI不能穿透完整细胞膜，但对凋亡晚期细胞和死细胞的破损细胞膜能够穿透，并使细胞核红染。

PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。

PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm。

常用于流式细胞仪分析和显微镜观察，检测细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)。

本产品为PI水溶液，浓度为1mg/ml。

使用时根据实验不同直接将本产品用相应溶液稀释到工作浓度。

使用方法：（仅供参考）
培养细胞染色
1、取适量PI水溶液加到PBS中，制备成10-50µM（6.7-33.4µg/ml）的PI溶液。

2、将1/10培养基体积的PI溶液加入到细胞培养基中。

3、在37℃培养细胞10-20分钟。

4、用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

5、置于荧光显微镜下观察，激发波长为535nm，发射波长为615nm。

注意事项：
1.PI被普遍认为具有致癌性，操作时应戴手套，并避免交叉污染。

2.本产品需避光，并尽量避免反复冻融。

细胞凋亡（apoptosis）的检测细胞凋亡（apoptosis）是一种由基因控制的细胞自主性死亡方式。

其发生诱因及形态学特征均有别于坏死，与人类免疫系统的发生发展、神经组织发育、器官的形成、肿瘤的发生发展等诸多生物学现象之间有着密切联系，并且是免疫应答过程中免疫细胞的杀伤机制之一。

细胞凋亡的检测技术已成为免疫学检测的一个重要内容。

凋亡细胞具有典型的形态学、生物化学及分子生物学变化，从这些特点出发发展起来的检测方法有形态学鉴定、电泳法、免疫学方法、流式细胞术、原位末端转移酶标记技术、靶细胞DNA片段的定量等。

(一)放线菌酮制备大鼠淋巴细胞凋亡模型【原理及意义】放线菌酮（CHX）是一种蛋白合成抑制剂，可诱导小鼠和大鼠的脾、粘膜免疫系统及淋巴结的淋巴细胞发生凋亡。

此实验旨在体外研究淋巴细胞凋亡的生物学特征。

【材料】１动物：昆明种小白鼠，大鼠。

２试剂：PBS缓冲的4%多聚甲醛或2.5%的戊二醛，放线菌酮（用PBS或生理盐水配成1m g/mL的浓度，除菌过滤，4℃冰箱保存）。

３器材：眼科镊，眼科剪，剪刀，玻片。

【方法】１大鼠用乙醚麻醉后，从腹腔（静脉或皮下）给大鼠注射3mg/kg体重CHX。

２注射2h后，取大鼠脾脏（肠或子宫亦可）等组织，剪成一定大小的组织块，固定于固定液中。

３固定组织经HE染色作光镜检查或电镜检查。

【结果】一般在注射后不久就可在脾及其它粘膜免疫系统出现大量凋亡的淋巴细胞（以Ｂ淋巴细胞为主）。

经HE染色后在光学显微镜下细胞核呈蓝黑色，胞浆呈淡红色。

凋亡细胞在组织中单个散在分布，表现为核染色质致密浓缩，核碎裂等。

坏死组织则呈均质红染的无结构物质，核染色消失。

【注意事项】由于机体内巨噬细胞对凋亡细胞的清除作用，凋亡细胞形成的高峰期在3h左右，在5h后组织内凋亡细胞已经很少，所以取材最好不要超过4h。

另外，放线菌酮的剂量要控制在2～5 mg/kg体重。

制备成功的模型一般比较稳定。

(二)活化诱导的淋巴细胞凋亡检测【原理及意义】活化诱导的淋巴细胞凋亡（AICD）是免疫调节的重要途径之一。

Hoechst/PI双染检测细胞凋亡PI、Hoechst33342均可与细胞核DNA（或RNA）结合。

但是PI不能通过正常的细胞膜，Hoechst则为膜通透性的荧光染料，故细胞在处于坏死或晚期调亡时细胞膜被破坏，这时可为PI着红色。

正常细胞和中早期调亡细胞均可被Hoechst着色，但是正常细胞核的Hoechst着色的形态呈圆形，淡兰色，内有较深的兰色颗粒；而调亡细胞的核由于浓集而呈亮兰色，或核呈分叶，碎片状，边集。

故PI着色为坏死细胞；亮兰色，或核呈分叶状，边集的Hoechst着色的为调亡细胞。

电子天平准确称取1mg 碘化丙啶（propidium iodide，PI）溶于10ml PBS（PH 7.2），成100ug/ml的储备液，用前等量混合（注意避光）protocol:1、收集细胞，数量需1－2×10E6个（悬浮细胞直接吹起即可，对于贴壁细胞用胰酶消化时，最好用DMEM+胰酶消化,且消化过程中不要去移动瓶子，防止消化所形成的细胞团影响后面的染色及分析），离心，11,000rpm，5min。

2、用1ml 冰冷的PBS重悬后，离心：11,000rpm，5min。

3、用200μl冰冷的PBS重悬后，用加样器混匀后，缓慢的加入含有4ml冰冷的70％乙醇的10ml离心管中，边加边摇匀。

－20℃，过夜。

（或者置4℃，1h后进行下一步）4、1,500rpm，10min，小心弃上清后，用1ml冰冷的PBS重悬，1,500rpm，5min。

小心弃上清。

5、加入含有40μg/ml的PI，100μg/ml的RNase的PBS溶液500μl，37℃，培养30min－1h。

混匀。

溶液配方：PBS 910μlPI 80μlRNase 10μl共1ml6、过滤，供流式检测。

Hoechst 33342/PI双染色法紫外光激发, Hoechst-PI双染在荧光显微镜下可见4 种细胞形态:活细胞(VN) ,染成蓝色,核呈正常结构;早期凋亡细胞(VA) ,染成蓝色,核呈固缩状或圆珠状;晚期凋亡细胞(NVA) ,也被染成红色,但可见明显的染色质凝集。

碘化丙啶PI 染色液(1mg/ml)简介：碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种可以嵌合到双链DNA 和RNA 的碱基对中并与之结合的荧光染料，无碱基特异性。

碘化丙啶与双链DNA 结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA 的含量成正比。

细胞内的DNA 被Propidium Iodide 染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA 含量测定，然后根据DNA 含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡的分析。

碘化丙啶PI 染色液(1mg/ml)主要由PI 、破膜剂等组成，经常用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测， 亦可用于区分细胞凋亡和细胞坏死。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、细胞样品的制备：⑴贴壁细胞：① 收集上述细胞悬液到离心管内。

② 4℃离心，使细胞沉到管底。

小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl 培养液，以免吸走细胞。

③ 加入约1ml 提前预冷的PBS ，重悬细胞，并转移至1.5ml 无菌离心管。

④ 4℃离心，使细胞沉到管底。

⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS ，以免吸走细胞。

⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

⑵悬浮细胞：① 4℃离心，使细胞沉到管底。

② 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl 培养液，以免吸走细胞。

③ 加入约1ml 提前预冷的PBS ，重悬细胞，并转移至1.5ml 无菌离心管。

④ 4℃离心，使细胞沉到管底。

⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS ，以免吸走细胞。

⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

2、细胞的固定：加入1ml 冰浴预冷70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃条件下固定2h 或更长时间。

4℃固定12～24h 可能效果更佳。

编号 名称 DA0028 Storage PI Stain(1mg/ml) 1ml -20℃ 避光 使用说明书 1份3、细胞的清洗：①4℃离心，使细胞沉到管底。

②小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl溶液，以免吸走细胞。