碘化丙啶PI染色液(50ugml)

PI染料（碘化丙啶,PropidiumIodide）PI 染料(碘化丙啶, Propidium Iodide)PI 染料(碘化丙啶, Propidium Iodide)描述：PI (碘化丙啶, Propidium Iodide)是⼀种可对DNA染⾊的细胞核染⾊试剂，是⼀种溴化⼄啶的类似物，在嵌⼊双链DNA后释放红⾊荧光。

尽管PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜⽽对核染⾊。

PI经常被⽤来与Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等荧光探针⼀起使⽤，能同时对活细胞和死细胞染⾊。

常⽤于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测，常⽤于流式细胞仪分析。

性质中⽂名称：3,8-⼆氨基-5-[3-(⼆⼄基甲氨基)丙基]-6-苯基啡啶⼆碘；碘化丙啶英⽂名称：3,8-Diamino-5-[3-(diethylmethylammonio)propyl]-6-phenylphenanthridini-um diiodide；Propidium iodide；Propidium diiodide；PI分⼦式：C27H34I2N4分⼦量：668.39CAS：25535-16-4纯度：≥95%（HPLC）PI-DNA较⼤激发波长：535 nmPI-DNA较⼤发射波长：615 nmRNA酶;核糖核酸酶A（⽜胰）DMPA运输与保存⽅法：冰袋（wet ice）运输。

4 ºC避光保存。

使⽤⽅法1.⽤PBS或适当的缓冲液制备10～50µM的PI溶液。

2.将1/10培养基体积的PI溶液加⼊到细胞培养基中（也可以⽤1/10浓度的 PI缓冲液代替培养基）。

3.在37℃培养细胞10～20分钟。

⽤PBS或合适的缓冲液洗涤细胞两次。

4.⽤535nm激发波长，615nm发射波长的滤光器的荧光显微镜观察细胞。

苏丹⿊染⾊液琼斯亮绿染⾊液天狼星红染⾊液⿊⾊素染⾊液肥⼤细胞染⾊液Van Gieson染⾊液核固红染⾊液纤维素染⾊液⾼铁⼆胺-爱先蓝（HID-AB）染⾊液钙盐染⾊液酸性磷酸酶染⾊液幽门螺杆菌染⾊液铜盐染⾊液微⽣物染⾊液吉姆萨染⾊液瑞⽒-吉姆萨染⾊液抗酸染⾊液荚膜染⾊液异染颗粒染⾊液麦格⽒染⾊液⼄型肝炎病毒染⾊液(地⾐红型)鞭⽑染⾊液乳酸棉酚蓝染液芽孢染⾊液(Moeller型)细胞染⾊液上⽪组织染⾊液迪夫快速细胞染⾊液⽹织红细胞染⾊液组织固定液脱钙液脱蜡透明液浸腊脱蜡透明液瑞⽒吉姆萨染⾊试剂盒TIMM染⾊试剂盒甲苯胺蓝O (toluidine blue O)TBO染⾊液氯化⾦溶液Gomori ⽒改良醛复红阿尔⾟蓝染⾊试剂盒FAA固定液FAA固定液(原位杂交⽤）20⽚⿊⾊原位杂交湿盒防脱⽚载玻⽚⼩编：wyf 07.20。

100×PI染色液使用说明书货号：SL7091规格：1ml保存条件：-20度保存，有效期1年。

产品内容：产品内容SL7091100×PI染色液（1mg/mL）SL7090-1ml说明书1份产品简介：碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种常用的细胞核荧光染料，作为一种溴化乙锭（EB）的类似物，能够嵌入碱基之间实现与DNA结合。

这种结合没有或者几乎无序列倾向性，大约每4-5个DNA碱基对结合一个染料。

PI也能与RNA结合，需要用核酸酶处理来区分DNA和RNA染色。

水溶液中PI的最大激发/发射波长是493/636nm。

一旦与核酸结合，荧光信号明显增强20-30倍，最大激发波长向红色波段迁移~30-40nm，最大发射波长向蓝色波段迁移~15nm，从而使其最大激发/发射波长变为535/617nm。

PI的摩尔吸光系数相对比较低，但是其具有足够大的斯托克司频移来同时检测核酸DNA和荧光标记抗体，只需要使恰当的滤片。

PI适用于荧光显微镜，共聚焦显微镜，流式细胞仪以及荧光计分析。

PI不能穿透细胞膜而被排斥在活细胞外，但是可以穿过破损的细胞膜而对核染色。

利用这一特性，通常与Calcein-AM、Hoechst33258或Hoechst33342等活细胞荧光探针一起使用，同时对活细胞和死细胞染色和鉴定，用于细胞凋亡相关的研究。

也可以用作多重荧光染色的复染剂，兼容于各种细胞标记技术，包括直接或者间接的荧光抗体检测，mRNA原位杂交，细胞结构特异性的荧光探针检测法以及组织染色。

PI 的单独染色也可以进行细胞周期的检测。

使用说明：可以用PBS稀释到1×使用，或与细胞悬液按照1:100的比例使用。

PI染色操作步骤1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm,5min，弃上清液。

2、加入PBS1ml离心洗涤1次，弃上清。

3、加入2ml预冷的70%酒精，4℃固定30min，或是-20℃固定过夜。

流式细胞术测定细胞周期一、实验原理碘化丙锭（PI）可以与细胞内DNA和RNA结合,采用RNA抑制剂将RNA 消化后,通过流式细胞术检测到的与DNA 结合的PI的荧光强度直接反映了细胞内DNA 含量的多少。

由于细胞周期各时相的DNA 含量不同,通常正常细胞的G1/G0期具有二倍体细胞的DNA含量(2N),而G2/M期具有四倍体细胞的DNA 含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。

因此,通过流式细胞术PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时,可以将细胞周期各时相区分为G1/G0期,S期和G2/M 期,并可通过Multicycle软件计算各时相的百分率。

值得注意的是, PI不能通过细胞膜完整的细胞(如活细胞和早期凋亡细胞) ,在标本制备时,必须先用乙醇或其他破膜剂增强细胞膜的通透性,才能使PI进入细胞内与细胞内的核酸结合。

乙醇通常为终浓度为70%的冷乙醇。

二、实验准备1、试剂胰酶、PBS、纯乙醇（4℃）、RNase A、Triton X-1002、主要器材300目尼龙过滤网三、实验步骤1、每个样品细胞数不得少于100万。

2、胰酶消化，收集细胞（贴壁细胞）或1000rpm离心5分钟直接收集细胞（悬浮细胞）。

3、4℃ PBS洗一次，将细胞重悬于0.3ml 4℃ PBS，加入0.7ml 4℃的纯乙醇，将枪头伸入液面下，轻轻打入乙醇，轻柔混匀两次，4℃固定过夜。

4、1000rpm离心5分钟，去上清，加入染色缓冲液PI染色缓冲液：50 μg/ml PI0.1 mg/ml RNase A0.05% Triton X-100总体积1ml/样品，37℃孵育40分钟。

5、1000rpm 离心5分钟，小心去除上清，加入1ml PBS，轻柔混匀，300目过滤，上机检测。

碘化丙啶PI 染色液(50μg/ml,含RNase)简介：碘化丙啶染色(PI stain)可以对细胞周期与细胞凋亡进行分析。

碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种可以嵌合到双链DNA 和RNA 的碱基对中并与之结合的荧光染料，无碱基特异性。

细胞凋亡时，流式细胞检测可呈现亚二倍体核型的特征，根据光散射的特点，PI 染色可以区分细胞凋亡和细胞坏死的细胞峰型。

碘化丙啶PI 染色液(50μg/ml,含RNase)主要由PI 、破膜剂、RNase 等组成，经常用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测， 亦可用于区分细胞凋亡和细胞坏死。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、细胞样品的制备：⑴贴壁细胞：① 离心使细胞沉到管底。

小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl 培养液，以免吸走细胞。

② 加入约1ml 提前预冷的PBS ，重悬细胞，并转移至1.5ml 无菌离心管。

③ 离心使细胞沉到管底。

⑵悬浮细胞：① 离心使细胞沉到管底。

② 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl 培养液，以免吸走细胞。

③ 加入约1ml 提前预冷的PBS ，重悬细胞，并转移至1.5ml 无菌离心管。

④ 离心使细胞沉到管底。

⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS ，以免吸走细胞。

2、细胞的固定：加入1ml 冰浴预冷70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃条件下固定2h 或更长时间。

4℃固定12～24h 可能效果更佳。

3、细胞的清洗：① 离心使细胞沉到管底。

② 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl 溶液，以免吸走细胞。

③ 加入约1ml 提前预冷的PBS ，重悬细胞，并转移至1.5ml 无菌离心管。

④ 离心使细胞沉到管底。

编号 名称 DA0023 Storage PI Stain(50μg/ml,含RNase) 10ml -20℃ 避光 使用说明书 1份⑤小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS，以免吸走细胞。

⑥轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

细胞损伤率的测定取培养至对数生长后期的待测菌液，加入2 MIC的大蒜提取物-茶多酚复合物，以蒸馏水代替提取物作为对照组。

37 ℃下150 r/min 摇床培养2 h，3000 r/min离心5 min弃上清，用生理盐水洗涤菌体两次并用生理盐水重新悬浮于同体积的碘化丙啶（propidine iodide，PI）染液中（PI 终浓度为50 μg/mL），置于4 ℃避光孵育30 min后，离心，PBS洗去多余的PI ，再用1 mL PBS重悬，过300目筛后上流式细胞仪检测PI 染色率。

设置未经PI 染色的菌悬液为阴性对照，以经过热处理（70 ℃，10 min）后染色的菌悬液为阳性对照。

原理：PI 细胞活性染色试剂对细胞进行检测。

PI是一种阳离子核酸染料，正常情况下不能进入具有完整细胞膜的活细胞，只有细菌在死亡或凋亡的情况下，生物膜的完整性被破坏后，PI才能掺入细胞的双链核苷酸中。

进入细胞内的PI增多，荧光强度就会增强，根据发出荧光的强弱即PI 染色率即可判断其细胞膜受损伤的程度，从而间接反映细胞的损伤状态。

（2013现代食品科技）脂肪酸组成的测定按照MIDI微生物快速鉴定系统说明书进行。

脂肪酸作为细菌细胞膜的重要组成成分对外界环境的变化十分敏感，常被用作评估微生物生存状态的指标[11]。

细胞膜的膜脂结构对于维持细胞膜的功能及对细胞的生长繁殖也有着十分重要的作用。

而细胞的膜脂结构与所含脂肪酸成分密切相关，脂肪酸组成的改变必然会影响相关膜蛋白活性和膜功能[12]。

通常细胞膜中的不饱和脂肪酸组分多少是与细胞膜的流动性相关的，饱和脂肪酸含量高，则会降低细胞膜的流动性。

细胞膜的流动性是膜结构的基本特征之一，其改变可严重影响细胞功能特性和凋亡通道的诱导效应[13]。

碘化丙啶PI溶液的使用方及注意事项
货号：C0080
规格：1ml/1ml×10
保存：-20℃，有效期至少2年
产品说明：
碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂。

它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌入双链DNA后释放红色荧光。

PI不能穿透完整细胞膜，但对凋亡晚期细胞和死细胞的破损细胞膜能够穿透，并使细胞核红染。

PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。

PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm。

常用于流式细胞仪分析和显微镜观察，检测细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)。

本产品为PI水溶液，浓度为1mg/ml。

使用时根据实验不同直接将本产品用相应溶液稀释到工作浓度。

使用方法：（仅供参考）
培养细胞染色
1、取适量PI水溶液加到PBS中，制备成10-50µM（6.7-33.4µg/ml）的PI溶液。

2、将1/10培养基体积的PI溶液加入到细胞培养基中。

3、在37℃培养细胞10-20分钟。

4、用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

5、置于荧光显微镜下观察，激发波长为535nm，发射波长为615nm。

注意事项：
1.PI被普遍认为具有致癌性，操作时应戴手套，并避免交叉污染。

2.本产品需避光，并尽量避免反复冻融。

DNA含量检测试剂盒（细胞周期）使用说明DNA Content Quantitation Assay(Cell Cycle)货号：CA1510规格：20T/50T保存：-20℃避光保存，一年有效。

产品说明：细胞周期是指连续分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程。

在这个过程中，细胞遗传物质复制并加倍，且在分裂结束时平均分配到两个子细胞中去。

细胞周期又可以分为间期和有丝分裂期，细胞间期常划分为休眠期（G0），DNA合成前期（G1），DNA合成期（S），DNA合成后期（G2），整个周期可表示为G1→S→G2→M。

DNA周期检测可用来反应细胞周期的各个期的状况，即细胞增殖状况。

利用细胞内DNA能够和荧光染料（如碘化丙啶PI）结合的特性，细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同，流式细胞仪检测的荧光强度也不一样。

细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩，核裂解，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。

在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对90°角光散射的能力增加或没有变化。

在细胞凋亡的晚期，前向角和90°角光散射的信号均降低。

因此可以通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化来观察凋亡细胞。

用PI对细胞进行染色，凋亡细胞由于总DNA 量降低，于正常G0/G1细胞群前出现DNA低染细胞群，即G1峰前出现亚二倍体峰（sub-G1）,即细胞凋亡群。

本试剂盒可应用于培养细胞（悬浮、贴壁）的DNA含量（细胞周期）检测。

试剂盒组成：试剂名称CA1510-20T CA1510-50T保存条件RNase A 2.0mL 5.0mL-20℃PI染色液8.0mL20.0mL-20℃避光使用方法：（仅供参考）1、用适当的方法诱导细胞凋亡，同时设立阴性对照组，并收集细胞。

2、用PBS洗涤细胞一次，1500rpm，5min离心收集，调整细胞浓度为1×106/ml,取1ml单细胞悬液。

鱼类种质检验第14部分：DNA含量的测定1 2范围本文件规定了鱼类DNA含量测定的通用方法。

本文件描述了鱼类红细胞DNA含量测定的试剂与材料、仪器和设备、抽样方法和分析步骤。

本文件适用于鱼类种质鉴定与检测。

规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。

其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 18654.2 鱼类种质检验第2部分：抽样方法3 4术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。

试剂与材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。

4.1 磷酸氢二钠（Na2HPO4）。

4.2 二个结晶水的磷酸二氢钠（NaH2PO4•2H2O）。

4.3 生理盐水：0.75% 氯化钠（NaCl）溶液。

4.4 固定液：3份甲醇加入1份冰醋酸，现配现用。

4.5 肝素溶液：浓度为500 IU/mL。

4.6 胰酶：浓度为5 mg/mL。

4.7 核糖核酸酶（RNase）：1 mg/mL。

4.8 碘化丙啶(PI)：浓度为50 g/mL。

4.9 0.1 mol/L磷酸缓冲液(PBS)：Na2HPO412.35 g，NaH2PO4•2H2O 20.3 g，蒸馏水定容至 1 L。

5仪器和设备5.1离心机：转速为5000 r/min，常温。

5.2流式细胞仪。

5.310 mL离心管及试管架。

5.4 5 mL试管及试管架。

5.5 吸管。

5.6 2 mL注射器。

5.7 5号针头。

5.8锦纶筛网（或涤纶筛网）：规格为80孔/cm。

5.9封口膜。

6抽样6.1试验鱼抽样按GB/T 18654.2的规定执行。

6.2样品数量达10尾以上。

6.3用酒精棉球将鱼体尾部待采血部位擦试消毒，用装有少量肝素溶液的注射器在尾动(静)脉处取0.2 mL～1.0 mL血液为试样。

另用注射器在小公鸡（Gallus sp.）翅静脉处取2 mL血液作对照用。

水稻幼苗根尖PI染色一、原理PI：英文名：Propidium iodide 中文名：碘化丙啶染色原理：碘化丙啶(PI)是一种溴化乙啶（EB）的类似物。

PI在540nm波长（绿色光）的激发下，会在600nm（红色光）处发出明亮的荧光。

PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。

它能与细胞壁上的碳水化合物共价结合，对细胞壁进行标记。

Standard confocal laser microscopy was performed using a Leica SP5laser point scanning microscope. propidium iodide was excited using the 488 nm argon laser, and fluorescence emissions were captured between 580 nm and 640 nm for propidium iodide.二、染色过程1 固定：材料置于固定液（50%甲醇+10%醋酸）中，4℃放置至少12h (最长可放置1个月)2 用水清洗材料，置于1%高碘酸溶液中，室温放置40min。

（使细胞壁上的碳水化合物形成醛基）3 用水清洗材料，置于希夫试剂（含PI）1-2h或直至肉眼可见材料染上红色为止（醛基与PI共价结合）希夫试剂(含PI)：焦亚硫酸100mMHCl 0.15NPI 100μg/ml（现加）4 取出样品置于载玻片上，用水合氯醛溶液覆盖样品，室温放置过夜（置于密闭容器中，防止溶液挥发）水合氯醛溶液：水合氯醛4g甘油1mlH2O 2ml5 除去多余水合氯醛溶液，滴数滴Hoyer’s solution，盖上盖玻片，放置3天后显微镜下观察。

Hoyer’s solution：水溶性阿拉伯胶30g水合氯醛200g甘油20gH2O 50ml三、注意事项：（1）由于PI可能具有致癌性，请小心操作。

（2）保存条件：4℃避光保存（3）对人体有刺激性，请注意适当防护。

PI单染检测细胞周期原理：碘化丙啶(Propidium ，简称PI)是一种双链DNA的荧光染料。

碘化丙啶和双链DNA结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA的含量成正比。

细胞内的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA含量测定，然后根据DNA含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡分析。

操作步骤：1、对于悬浮细胞，直接离心收集细胞，弃上清，在4 ℃、1200rmp下用预冷的PBS洗细胞两次；对于贴壁细胞，先用不含EDTA的0.25%的胰酶消化再离心收集细胞；2、加入预冷的70%乙醇（PBS配制），于4℃固定过夜，或-20℃长期固定；3、离心收集细胞，以1 mL预冷的PBS洗细胞一次，加入预冷的PBS重悬细胞，调整细胞浓度为1.0×106，取出100 ul细胞悬液，加入RNase A酶，使RNase A终浓度为1 mg/ml，混匀后37 ℃水浴30 min；4、加入PI综合染色液，使PI终浓度为50 ug/mL，混匀，4℃冰箱避光保存；5、300目尼龙网过滤后，上机检测。

注意事项：1、细胞浓度一定要≧1×106/ml，特别是阴性对照管细胞量要大一些，以便样品电压调节；2、必须保证被检测样品为单细胞悬液；3、如果样品细胞为培养的贴壁细胞，将上清转入离心管（其中含有脱落的凋亡细胞），与不含EDTA的胰酶消化的细胞合并后离心收集细胞；4、在细胞固定时一定要将细胞吹开，吹成单细胞悬液；5、RNAse与PI综合染液分开的原因是RNAse的作用最适温度是37℃，而不是4℃，所以与教材有所不同；6、PI综合染液不能用蒸馏水配，否则细胞全部溶解，造成结果不可靠；7、4℃过夜一般隔天就进行检测，如果想推迟几天测，那就保存在-20℃，有资料显示-20℃可以至少保存一个月；8、70%~75%的酒精都可以用于PI单染固定。