碘化丙啶 PI溶液的使用方及注意事项

100×PI染色液使用说明书货号：SL7091规格：1ml保存条件：-20度保存，有效期1年。

产品内容：产品内容SL7091100×PI染色液（1mg/mL）SL7090-1ml说明书1份产品简介：碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种常用的细胞核荧光染料，作为一种溴化乙锭（EB）的类似物，能够嵌入碱基之间实现与DNA结合。

这种结合没有或者几乎无序列倾向性，大约每4-5个DNA碱基对结合一个染料。

PI也能与RNA结合，需要用核酸酶处理来区分DNA和RNA染色。

水溶液中PI的最大激发/发射波长是493/636nm。

一旦与核酸结合，荧光信号明显增强20-30倍，最大激发波长向红色波段迁移~30-40nm，最大发射波长向蓝色波段迁移~15nm，从而使其最大激发/发射波长变为535/617nm。

PI的摩尔吸光系数相对比较低，但是其具有足够大的斯托克司频移来同时检测核酸DNA和荧光标记抗体，只需要使恰当的滤片。

PI适用于荧光显微镜，共聚焦显微镜，流式细胞仪以及荧光计分析。

PI不能穿透细胞膜而被排斥在活细胞外，但是可以穿过破损的细胞膜而对核染色。

利用这一特性，通常与Calcein-AM、Hoechst33258或Hoechst33342等活细胞荧光探针一起使用，同时对活细胞和死细胞染色和鉴定，用于细胞凋亡相关的研究。

也可以用作多重荧光染色的复染剂，兼容于各种细胞标记技术，包括直接或者间接的荧光抗体检测，mRNA原位杂交，细胞结构特异性的荧光探针检测法以及组织染色。

PI 的单独染色也可以进行细胞周期的检测。

使用说明：可以用PBS稀释到1×使用，或与细胞悬液按照1:100的比例使用。

PI染色操作步骤1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm,5min，弃上清液。

2、加入PBS1ml离心洗涤1次，弃上清。

3、加入2ml预冷的70%酒精，4℃固定30min，或是-20℃固定过夜。

PI染色法检测细胞周期一．实验原理及试剂配置1.实验原理P I , 即碘化丙锭，可以与细胞内DNA 和RNA 结合，采用RNA酶将RNA 消化后, 通过流式细胞术检测到的与DNA 结合的P I 的荧光强度直接反映了细胞内DNA含量的多少。

由于细胞周期各时相的DNA 含量不同, 通常正常细胞的G 1/ G 0 期具有二倍体细胞的DNA 含量( 2N) ,而G 2/ M 期具有四倍体细胞的DNA 含量( 4N) ,而S 期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。

因此，通过流式细胞术P I染色法对细胞内DNA 含量进行检测时，可以将细胞周期各时相区分为G 1/ G 0 期，S 期和G 2/ M 期，并可通过特殊软件计算各时相的百分率。

值得注意的是，PI不能通过细胞膜完整的细胞(如活细胞和早期凋亡细胞) ,在标本制备时, 必须先用乙醇或其他破膜剂增强细胞膜的通透性, 才能使P I进入细胞内与细胞内的核酸结合。

乙醇通常为终浓度为70 %的冷乙醇。

2.试剂配制RNase A，注意分装保存，防止反复冻融。

PI 购自Sigma公司货号P-4170，通常用过滤除菌的PBS配置成500μg/ml的储液避光保存备用，细胞染色时用PBS稀释到50μg/ml。

二．实验步骤1.细胞的收集：将处理好的细胞样品组用含EDTA的0.25%胰酶消化细胞呈单细胞悬液，DMEM+10%FBS终止消化后，200g离心3min沉淀细胞。

2.细胞的固定：将离心收集的细胞用500μL预冷的PBS悬起，200g离心3min沉淀细胞，弃上清，以充分去除残留的FBS和胰酶；加入-20℃预冷的70%乙醇500μL悬浮细胞，于4℃固定30min或-20℃固定过夜。

（此处，加乙醇时应注意边加入变吹起细胞，放置固定时细胞结成团，难以吹散而影响后续的检测）3.RNA的去除：将固定好的细胞，200g离心5min沉淀细胞弃去上清液；500μL预冷的PBS悬浮细胞，200g离心3min沉淀细胞，弃去上清液；用500μL 100μg/ml的RNase A 在37℃下温育30min以充分降解细胞内RNA。

碘化丙啶染色步骤
碘化丙啶染色是一种常见的核酸染色方法，在细胞和组织学研究中广泛应用。

其步骤如下：
1.取一定量的细胞或组织标本，用生理盐水或PBS洗涤去除表面杂质。

2.将样本固定在载玻片上，可以使用多种固定剂，如4%聚乙烯醇（PVA）、95%乙醛等。

3.用1%碘化丙啶溶液覆盖标本，染色时间一般为5-10分钟。

4.洗去碘化丙啶染色液，用70%乙醇洗涤10-20秒钟，可重复洗涤2-3次。

5.再用绝对乙醇洗涤10-20秒钟，可重复洗涤2-3次。

6.最后用苯酚溶液清洗数秒钟，然后用苯酚-乙醇（1:1）复制剂液备用。

7.用显微镜观察、拍照或判定分析。

注意事项：
1.碘化丙啶染色液颜色应呈鲜红色，如色泽变深则需要更换新液。

2.在染色前要保证标本充分固定，避免细胞或组织形态失真。

3.洗涤过程中应注意避免样本干燥和爆裂，避免对标本造成损害。

碘化丙啶PI 染色液(1mg/ml)简介：碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种可以嵌合到双链DNA 和RNA 的碱基对中并与之结合的荧光染料，无碱基特异性。

碘化丙啶与双链DNA 结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA 的含量成正比。

细胞内的DNA 被Propidium Iodide 染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA 含量测定，然后根据DNA 含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡的分析。

碘化丙啶PI 染色液(1mg/ml)主要由PI 、破膜剂等组成，经常用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测， 亦可用于区分细胞凋亡和细胞坏死。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、细胞样品的制备：⑴贴壁细胞：① 收集上述细胞悬液到离心管内。

② 4℃离心，使细胞沉到管底。

小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl 培养液，以免吸走细胞。

③ 加入约1ml 提前预冷的PBS ，重悬细胞，并转移至1.5ml 无菌离心管。

④ 4℃离心，使细胞沉到管底。

⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS ，以免吸走细胞。

⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

⑵悬浮细胞：① 4℃离心，使细胞沉到管底。

② 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl 培养液，以免吸走细胞。

③ 加入约1ml 提前预冷的PBS ，重悬细胞，并转移至1.5ml 无菌离心管。

④ 4℃离心，使细胞沉到管底。

⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS ，以免吸走细胞。

⑥ 轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。

2、细胞的固定：加入1ml 冰浴预冷70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃条件下固定2h 或更长时间。

4℃固定12～24h 可能效果更佳。

编号 名称 DA0028 Storage PI Stain(1mg/ml) 1ml -20℃ 避光 使用说明书 1份3、细胞的清洗：①4℃离心，使细胞沉到管底。

②小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl溶液，以免吸走细胞。

DNA含量检测试剂盒（细胞周期）使用说明DNA Content Quantitation Assay(Cell Cycle)货号：CA1510规格：20T/50T保存：-20℃避光保存，一年有效。

产品说明：细胞周期是指连续分裂细胞从一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂结束所经历的整个过程。

在这个过程中，细胞遗传物质复制并加倍，且在分裂结束时平均分配到两个子细胞中去。

细胞周期又可以分为间期和有丝分裂期，细胞间期常划分为休眠期（G0），DNA合成前期（G1），DNA合成期（S），DNA合成后期（G2），整个周期可表示为G1→S→G2→M。

DNA周期检测可用来反应细胞周期的各个期的状况，即细胞增殖状况。

利用细胞内DNA能够和荧光染料（如碘化丙啶PI）结合的特性，细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同，流式细胞仪检测的荧光强度也不一样。

细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩，核裂解，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。

在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对90°角光散射的能力增加或没有变化。

在细胞凋亡的晚期，前向角和90°角光散射的信号均降低。

因此可以通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化来观察凋亡细胞。

用PI对细胞进行染色，凋亡细胞由于总DNA 量降低，于正常G0/G1细胞群前出现DNA低染细胞群，即G1峰前出现亚二倍体峰（sub-G1）,即细胞凋亡群。

本试剂盒可应用于培养细胞（悬浮、贴壁）的DNA含量（细胞周期）检测。

试剂盒组成：试剂名称CA1510-20T CA1510-50T保存条件RNase A 2.0mL 5.0mL-20℃PI染色液8.0mL20.0mL-20℃避光使用方法：（仅供参考）1、用适当的方法诱导细胞凋亡，同时设立阴性对照组，并收集细胞。

2、用PBS洗涤细胞一次，1500rpm，5min离心收集，调整细胞浓度为1×106/ml,取1ml单细胞悬液。

PI 染色荧光染料PI（碘化丙啶）是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测，英文全称是Propidium Iodide。

它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌入双链DNA后释放红色荧光。

尽管PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。

PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。

PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535 nm 和615 nm。

PI可以用来进行活细胞、死细胞的双重染色钙黄绿素-AM(Calcein-AM)和碘化丙啶(PI)溶液，它们分别可对活细胞和死细胞染色。

Calcein -AM的乙酸甲基酯亲脂性很高，使其可透过细胞膜。

尽管Calcein -AM本身并不是荧光分子，但通过活细胞内的酯酶作用，Calcein -AM能脱去AM 基，产生的Calcein能发出强绿色荧光（激发：490 nm，发射：515 nm）。

因此Calcein -AM仅对活细胞染色。

另一方面，作为核染色染料的PI不能穿过活细胞的细胞膜。

它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光（激发：535 nm，发射：617 nm）。

由于Calcein和PI-DNA 都可被490 nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。

用545 nm 激发，仅可观察到死细胞。

由于不同细胞系的最佳染色条件不同，我们建议个别确定PI和Calcein -AM的合适浓度。

I．试剂Calcein-AMPIII．用荧光显微镜观察细胞形态以HeLa细胞染色为例,请注意不同的细胞种类、不同浓度有不同的观察条件。

根据细胞条件，摸索不同条件下的细胞贴壁情况和试剂浓度的配制等最佳条件。

１．染色溶液的配制1）用1 ml无水DMSO溶解1 mg Calcein-AM，制备成1 mmol/l 的Calcein-AM储备液，-20℃下密闭冷冻保存。

O溶解1 mg PI，制备成1.5 mmol/l的PI储备液（1 mg PI/1 ml 2）用1 ml ddH2O），-20℃下密闭冷冻保存。

PI标记法检测细胞周期1.实验原理：PI染料即碘化丙啶，是流式检测细胞周期应荣最为广泛的荧光染料。

PI能与细胞内的双链DNA和RNA结合，被488nm激光激发后发射红荧光，与核酸结合后其发射荧光信号的能力会提高20~30倍。

PI染料不能自由穿过活细胞完整的细胞膜，标记时需先用乙醇固定细胞，使细胞膜的通透性增加，这样PI染料就能通过细胞膜进入细胞内与核酸结合，标记时需同时加入RNA酶消化细胞内的RNA，使PI只能与细胞内的DNA 结合，反映细胞内DNA的含量，继而通过细胞内DNA的含量确定细胞周期。

后来发展了用低渗的柠檬酸溶液一步标记PI燃料法，细胞在低渗的条件下其细胞膜的通透性增加，PI染料就可以进入细胞膜如细胞内的DNA结合，此法简便，快捷，应用更为广泛。

2.试验步骤PI标记方法一（乙醇固定法）：（1）将需要分析的目标细胞制成单细胞悬液，取2x106细胞，离心沉淀，弃上清。

（2）200μl PBS重悬沉淀于1.5mlEppendorf管中，缓慢加入1ml预冷的（保存于4℃）的70%乙醇固定目标细胞。

充分混匀，4℃静置30min。

（3）离心沉淀，弃上清，200μl适当浓度的PI染液重悬细胞，同时加入RNA酶，充分混匀，4℃静置30min。

（4）离心沉淀，弃上清，200μl流式PBS重悬沉淀，流式上样分析。

PI标记方法二（低渗法）（1）低渗柠檬酸标记液配制：柠檬酸三钠0.25g，TritonX-100(聚乙二醇辛基苯基醚)0.75ml,PI 0.025g，RNA酶0.005g，用双蒸水补足至250ml。

（2）将需要分析的目标细胞制成单细胞悬液，取2x106细胞，离心沉淀，弃上清（3）1ml低渗柠檬酸标记液重悬沉淀，充分混匀，4℃静置30min.（4）离心沉淀，弃上清，200μl流式PBS重悬沉淀，流式上样分析。

3.注意事项检测细胞内DNA含量时必须保证样品内的细胞都是处于单细胞状态，但是在实际样品中经常会出现粘连的双细胞和多细胞团块，而流式细胞仪可能会将粘连在一起的两个二倍体细胞当作是一个四倍体的细胞，如果粘连的细胞较多而没有在分析时排除流式分析时就会得到比实际情况高很多的G2/M期细胞的比例，得到的流式结果就不准确。

Calcein-AM/PI 活细胞/死细胞双染试剂盒说明书货号：CA1630规格：500T保存：-20°C 避光干燥保存，一年有效。

产品内容：名称规格保存Calcein-AM Solution(2mM)50μL -20°C 避光干燥保存PI Solution （1.5mM ）150μL -20°C 避光干燥保存10×Assay Buffer 50mL -20℃保存，经常使用可放在4℃保存。

产品说明：Calcein-AM 是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，发绿色荧光（Ex=490nm,Em=515nm ）。

因其在传统的Calcein （钙黄绿素）基础上引入乙酰甲氧基甲酯（AM ）基团，增加了疏水性，使其能够轻易穿透活细胞膜。

一旦进入细胞后，Calcein-AM （本身不发荧光）被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子Calcein ，从而被滞留在细胞内并发出强绿色荧光。

与其它同类试剂（如BCECF-AM 和CFDA)相比，由于Calcein,AM 细胞毒性极低，是最适合用于活细胞染色的荧光探针，而且不会抑制任何的细胞功能，如增殖和淋巴球的趋化性。

由于死细胞缺乏酯酶，Calcein-AM 仅用于对活细胞的细胞生存能力测试和短期标记。

因此，Calcein-AM 常常与死细胞荧光探针如碘化丙啶（PI ）等联合使用，同时进行活细胞和死细胞的荧光双重染色。

碘化丙啶（Propidium iodide ，PI ）不能穿过活细胞的细胞膜，仅能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA 双螺旋从而产生红色荧光（Ex=535nm,Em=617nm ），因此PI 仅对死细胞染色。

由于Calcein 和PI-DNA 都可被490nm 激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。

而用545nm 激发，仅可观察到死细胞。

本试剂盒的工作原理就在于Calcein-AM 和PI 的双重染料，来进行活细胞和死细胞的双重染色标记，从而进行活细胞和死细胞水平的分析。

水稻幼苗根尖PI染色一、原理PI：英文名：Propidium iodide 中文名：碘化丙啶染色原理：碘化丙啶(PI)是一种溴化乙啶（EB）的类似物。

PI在540nm波长（绿色光）的激发下，会在600nm（红色光）处发出明亮的荧光。

PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。

它能与细胞壁上的碳水化合物共价结合，对细胞壁进行标记。

Standard confocal laser microscopy was performed using a Leica SP5laser point scanning microscope. propidium iodide was excited using the 488 nm argon laser, and fluorescence emissions were captured between 580 nm and 640 nm for propidium iodide.二、染色过程1 固定：材料置于固定液（50%甲醇+10%醋酸）中，4℃放置至少12h (最长可放置1个月)2 用水清洗材料，置于1%高碘酸溶液中，室温放置40min。

（使细胞壁上的碳水化合物形成醛基）3 用水清洗材料，置于希夫试剂（含PI）1-2h或直至肉眼可见材料染上红色为止（醛基与PI共价结合）希夫试剂(含PI)：焦亚硫酸100mMHCl 0.15NPI 100μg/ml（现加）4 取出样品置于载玻片上，用水合氯醛溶液覆盖样品，室温放置过夜（置于密闭容器中，防止溶液挥发）水合氯醛溶液：水合氯醛4g甘油1mlH2O 2ml5 除去多余水合氯醛溶液，滴数滴Hoyer’s solution，盖上盖玻片，放置3天后显微镜下观察。

Hoyer’s solution：水溶性阿拉伯胶30g水合氯醛200g甘油20gH2O 50ml三、注意事项：（1）由于PI可能具有致癌性，请小心操作。

（2）保存条件：4℃避光保存（3）对人体有刺激性，请注意适当防护。