行为学相关实验水迷宫
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小鼠水迷宫实验报告小鼠水迷宫实验报告水迷宫实验是一种常用的行为学实验,用于研究小鼠的空间记忆和学习能力。
通过观察小鼠在水迷宫中的行为表现,可以了解它们对环境的认知和适应能力。
本文将介绍水迷宫实验的设计和结果,并对实验的意义进行讨论。
实验设计:本次实验使用的水迷宫是一个封闭的水池,内部设置了多个通道和一个目标台。
实验过程中,水池中的水被染成不同颜色,以便观察小鼠的行为。
实验开始前,小鼠被训练学会在水迷宫中找到目标台。
训练阶段通常分为两个部分:随机游泳和目标导向。
结果分析:在随机游泳阶段,小鼠被放入水迷宫中,目标台被随机放置在其中一个通道上。
小鼠需要通过探索不同的通道来找到目标台。
观察发现,刚开始的几次尝试中,小鼠的行动较为随机,没有明显的方向性。
然而,随着实验的进行,小鼠逐渐学会了辨别不同通道的特征,能够更快地找到目标台。
在目标导向阶段,小鼠已经具备了一定的空间记忆,它们被放入水迷宫中,目标台被放置在固定的位置上。
观察发现,小鼠在这个阶段表现出了更明显的方向性,它们能够快速找到目标台,并且在后续的实验中能够更加熟练地完成任务。
实验意义:水迷宫实验是研究小鼠学习和记忆能力的重要手段之一。
通过观察小鼠在水迷宫中的行为表现,可以了解其空间认知和适应能力。
这对于理解人类的学习和记忆机制有着重要的意义。
此外,水迷宫实验还可用于评估药物对学习和记忆的影响。
例如,可以给小鼠注射某种药物,然后观察其在水迷宫中的表现。
如果药物对学习和记忆产生了影响,那么小鼠在找到目标台的速度和准确性上可能会有所变化。
这种实验设计可以帮助研究人员评估药物的疗效和副作用,为药物研发提供参考。
总结:水迷宫实验是一种常用的行为学实验,通过观察小鼠在水迷宫中的行为表现,可以了解其学习和记忆能力。
实验结果显示,小鼠在经过训练后能够快速找到目标台,表现出较强的空间认知和适应能力。
水迷宫实验不仅对于基础科学研究有着重要的意义,还可以应用于药物研发和评估。
Morris水迷宫简介Morris水迷宫是英国心理学家Morris于20世纪80年(1981)代初设计并应用于脑学习记忆机制研究的一种实验手段,其在AD研究中的应用非常普遍[3]。
较为经典的Morris水迷宫,测试程序主要包括定位航行试验和空间探索试验两个部分。
其中定位航行试验(place navigation)历时数天,每天将大鼠面向池壁分别从4个入水点放入水中若干次,记录其寻找到隐藏在水面下平台的时间(逃避潜伏期,escape latency)。
空间探索试验(spatial probe)是在定位航行试验后去除平台,然后任选一个入水点将大鼠放入水池中,记录其在一定时间内的游泳轨迹,考察大鼠对原平台的记忆。
自从20多年前Morris水迷宫被发明以来,很多学者都采用此方法研究动物的空间学习记忆能力,并在经典的Morris水迷宫基础上进行了很多改进,如Markowska发现如果在空间探索试验阶段中能让平台间歇性的出现,这样较经典的方案能更加敏感的地测量动物的空间记忆能力。
Arteni采用双平台的水迷宫,轮流升起其中一个平台的方法来测量动物的工作记忆等等。
Morris水迷宫广泛用于啮齿类动物的视觉相关的空间记忆和工作记忆的测量中,但是否适用于测量动物的长时记忆还存在争议。
应用领域Morris水迷宫(Morris water maze, MWM)实验是一种强迫实验动物(大鼠、小鼠)游泳,学习寻找隐藏在水中平台的一种实验,主要用于测试实验动物对空间位置感和方向感(空间定位)的学习记忆能力。
被广泛应用于学习记忆、老年痴呆、海马/外海马研究、智力与衰老、新药开发/筛选/评价、药理学、毒理学、预防医学、神经生物学、动物心理学及行为生物学等多个学科的科学研究和计算机辅助教学等领域,在世界上已经得到广泛地认可,是医学院校开展行为学研究尤其是学习与记忆研究的首选经典实验。
Morris水迷宫其最主要的附件之一就是水池,水池的质量及功能是实验不可却少的部分,在实验中水温的温度是实验的关键,淮北正华生物仪器设备有限公司生产的恒温水池是国内唯一有此功能的,其温度控温,及准确度已达到先进水平。
水迷宫空间探索实验
水迷宫实验是一种利用动物厌水天性,迫使动物寻找水中隐藏可站立平台的实验。
并通过对小鼠寻找平台所花费的时间进行统计分析,判断动物对于空间位置和方向的记忆能力。
该方法是由理查德-莫里斯(Richard Morris)于1981年发明,并在三年后对其实验流程进行了进一步的完善,为了表示对发明者的纪念和尊重,人们把这种实验叫做“莫里斯水迷宫(Morris Water Maze,WMW)”。
水迷宫实验是应用最广泛的研究、评价动物空间学习记忆能力的行为学实验,是研究学习记忆最常用的实验方法之一(如AD模型等)。
水迷宫由圆形的水池、可移动位置并隐藏在水面下的平台、图像自动采集处理系统组成。
水迷宫实验中采用基本的方案一般分为定位航行实验和空间探索实验两个阶段。
定位航行实验(place navigation test)/隐藏平台实(the test of gaining concealed platform):将动物(大鼠)头朝池壁放入水中,放入位置在东、西、南、北四个起始位置中随机选择。
记录动物从放入水中到找到水下平台的时间(秒)。
在前几次训练中,如果找到水下平台的时间超过90秒,则引导动物到平台。
让动物在平台上停留10秒后将大鼠移开、擦干。
必要时将动物(尤其是大鼠)放在150W的白炽灯下5分钟,烤干,再放回笼内。
每只动物每天训练4次,两次训练之间间隔30分钟,连续训练5天。
空间探索实验(spatial probe test):最后一次获得性训练结束
后,在第二天将平台撤除,将动物由原先平台象限的对侧放入水中。
记录动物逃避潜伏时间(即动物入水后第一次找到水下平台的时间)和平台穿越次数。
水迷宫实验报告水迷宫实验报告引言:水迷宫是一种有趣的实验,通过在水中放置障碍物和目标物,观察物体在水中的运动路径,探索水流动的规律和物体受力的情况。
本次实验旨在通过水迷宫的搭建和观察,深入了解水的流动性质以及物体在水中的运动规律。
实验材料与方法:实验材料包括一个透明的水槽、水、各种形状的障碍物和目标物。
首先,在水槽中注入适量的水,使其水平面达到一定高度。
然后,将各种形状的障碍物放置在水槽中,构成一个迷宫。
最后,将目标物放置在水槽的一端,并轻轻推动,观察其在水中的运动轨迹。
实验结果与讨论:通过观察实验中的现象和记录数据,我们得出了以下结论:1. 水的流动性质:在水槽中注入水后,我们观察到水呈现出流动的状态。
水流会绕过障碍物,并沿着较为通畅的路径流动。
这表明水具有一定的流动性质,能够适应环境中的障碍物。
2. 物体在水中的运动规律:我们发现,当目标物被推入水中后,其运动轨迹受到水流和障碍物的影响。
如果水流较强且障碍物较少,目标物会较快地通过迷宫并到达目标位置;而如果水流较弱或者障碍物较多,目标物的运动速度会减慢,甚至在迷宫中迷失方向。
3. 物体受力情况:在水迷宫实验中,我们可以观察到物体受到水流和障碍物的力的作用。
水流对物体产生的推力会影响物体的运动速度和方向。
而障碍物则会对物体产生阻力,使其运动受到限制。
实验结论:通过水迷宫实验,我们深入了解了水的流动性质、物体在水中的运动规律以及物体受力情况。
水的流动性质使其能够适应环境中的障碍物,并形成相对通畅的流动路径。
物体在水中的运动规律受到水流和障碍物的影响,水流的强弱和障碍物的多少会影响物体的运动速度和方向。
物体受到水流和障碍物的力的作用,推力使其运动,而阻力限制其运动。
实验意义与应用:水迷宫实验不仅有趣,还具有一定的实用价值。
通过深入了解水的流动性质和物体在水中的运动规律,我们可以应用这些原理解决实际问题。
例如,在水力工程中,了解水流的规律可以帮助我们设计更加高效的水流系统;在船舶设计中,了解物体在水中的运动规律可以帮助我们设计更加稳定的船体结构。
Morris水迷宫实验标准目录一、实验原理(水迷宫得发展史,以及简单得实验原理与应用领域,以及在我国得发展情况与国内外得主要厂家)二、Morris水迷宫得组成(主要分为硬件与图像采集,软件)三、硬件准则(国内外文献提及到得硬件准则,我们主要针对国内文献提及到得)四、实验流程准则(实验细节)五、统计方法学准则(遵循统计学原理)六、评价指标得准则(实验数据得解释)七、实验适用范围准则(实验适用四个领域,与水迷宫得10个优点)八、实验注意事项以下准则仅供实验参考,行为学实验必须依据自身得实际课题来恰当安排实验。
一、实验原理20世纪80年代初,英国得心理学家Morris与她得同事利用大鼠在盛有水与牛奶混合物得不透明水池中搜索目标物得方法,研究大鼠得海马等脑区受到损害后得学习、记忆与空间定向以及认知能力时取得了令人瞩目得结果。
这种装置不但构思新颖、实验设计合理以及方法简便与实用,而且便于观察与记录动物入水后搜索藏在水下平台所需得时间、采用得策略与它们得游泳轨迹,从而可分析与推断动物得学习、记忆与空间认知等方面得能力。
虽然起初得实验对象为大鼠,但此后该迷宫系统成为评估啮齿类动物空间学习与记忆能力得经典程序,广泛运用于神经生物学、药理学等领域得基础与应用研究中。
它能较客观地衡量动物空间记忆、工作记忆以及空间辨别能力得改变。
因此,这种研究方法很快就引起各国神经科学家得关注,并将此法称为Morris水迷宫法。
国外有许多生产Morris水迷宫得公司,比如说德国得TSE公司,美国得Sandiegoinstruments 公司、德国Biobserve公司、荷兰Noldus等等;20世纪80年代末,中国科学院心理研究所建立了我国第一个Morris水迷宫实验室,并于90年代初建立了Morris水迷宫图像自动采集与处理系统。
国内随后出现了许多Morris水迷宫生产厂家,比如说有上海软隆科技有限公司、安徽正华生物仪器设备有限公司、北京智鼠多宝科技有限公司等等,但就是从国际到国内,Morris水迷宫得硬件设备,软件系统,实验方法,以及实验数据得处理方法都不尽相同,因此,从Morris水迷宫法得发明到现在已有20余年得历史了,应该制定一套比较标准得实验准则了。
Morris水迷宫Morris水迷宫简介Morris水迷宫是英国心理学家Morris于20世纪80年(1981)代初设计并应用于脑学习记忆机制研究的一种实验手段,其在AD研究中的应用非常普遍[3]。
较为经典的Morris水迷宫,测试程序主要包括定位航行试验和空间探索试验两个部分。
其中定位航行试验(place navigation)历时数天,每天将大鼠面向池壁分别从4个入水点放入水中若干次,记录其寻找到隐藏在水面下平台的时间(逃避潜伏期,escape latency)。
空间探索试验(spatial probe)是在定位航行试验后去除平台,然后任选一个入水点将大鼠放入水池中,记录其在一定时间内的游泳轨迹,考察大鼠对原平台的记忆。
、自从20多年前Morris水迷宫被发明以来,很多学者都采用此方法研究动物的空间学习记忆能力,并在经典的Morris水迷宫基础上进行了很多改进,如Markowska发现如果在空间探索试验阶段中能让平台间歇性的出现,这样较经典的方案能更加敏感的地测量动物的空间记忆能力。
Arteni采用双平台的水迷宫,轮流升起其中一个平台的方法来测量动物的工作记忆等等。
Morris水迷宫广泛用于啮齿类动物的视觉相关的空间记忆和工作记忆的测量中,但是否适用于测量动物的长时记忆还存在争议。
实验原理虽然老鼠是天生的游泳健将,但是它们却厌恶处于水中的状态,同时游泳对于老鼠来说是十分消耗体力的活动,他们会本能的寻找水中的休息场所。
寻找休息场所的行为涉及到一个复杂的记忆过程,包括收集与空间定位有关的视觉信息,再对这些信息进行处理、整理、记忆、加固、然后再取出,目的是能成功的航行并且找到隐藏在水中的站台,最终从水中逃脱。
Morris水迷宫系统的组成部分1、恒温游泳池1台,大鼠:直径1.2-2米小鼠0.8-1.6米2、大鼠站台,规格:直径12cm,高度在20~35cm之间3、小鼠站台,规格:直径8cm,高度在20~35cm之间4、电脑及分析软件,提供了路程、时间、百分比、专项指标等40种分析数据,在分析过程中可选择性分析,数据导EXCEL表格方便生物学软件统计。
Morris水迷宫实验一、实验用品的准备:毛巾或电吹风、染料(黑白鼠染料不一样)、细木棍、深泡沫盒二、实验前的准备:1. 在实验前一天晚上,把水迷宫和实验室打扫干净。
a. 水迷宫中动物粪便要处理干净b. 实验室内保证通风、无异味c. 实验过程中,要经常更换池中水,大鼠2-3天,小鼠6-7天。
2. 将水注入水迷宫中,水的高度在高过站台1cm左右(水深参考:大鼠:30CM;小鼠:20CM)。
注:公共平台水迷宫型号是XR-XM101,大鼠水池直径1600cm,池高50cm;小鼠水池直径1200cm,池高40cm;大鼠站台直径为20cm,小鼠为10cm,离池壁30cm。
3. 保持合适水温(参考:大鼠:25±1℃;小鼠:21~22℃),如果水温过低,请使用快速热水器将热水加入水迷宫中,调至合适温度,水迷宫池边有一个温度测量器,可显示池中温度。
4. 实验前三十分钟把动物带入实验室中熟悉环境。
5. 加入合适的染料(黑鼠加色素或牛奶,白鼠清水或黑墨水)到水中,然后打开实验电脑,通过监视系统人工调节光线来达到光的均匀分布。
如果加色素或墨水,拉上窗帘,打开室内灯,如果清水,开灯会反光,则关上室内灯,打开窗帘。
6. 检查标记物是否在固定的位置,整个几天实验中,标记物不可移动,实验人员将动物放入池中后,站到或坐到固定的位置。
三、正式实验步骤:将已经编好号的大鼠/小鼠依次放入水迷宫进行实验,具体操作如下:1. 实验人员A从鼠笼中取出小动物,然后快速放入水迷宫中。
注意:a. 将动物面向池壁放入水中;b. 快速将动物在水平面放下,不可直接扔下去;c. 入水点选4个象限的位置,每个入水点每组都检测,共四轮(按距离站台的远-近-远-近次序);d. 实验人员A把动物放入水迷宫后迅速离开。
2. 实验人员B通过监视系统观测到动物入水的一瞬间,然后快速的按下录象键。
两人配合,最好A喊一声,然后B准备,之后动物入水瞬间按键。
3. 设置录像时间为90s,当动物到达站台保持30s视为找到站台,这时录像自动停止;如果实验人员B通过监视系统观测到动物在规定时间内没有游上站台,马上通知实验人员A 用细木棍引导小动物上站台,让动物在站台上10s熟悉周边环境后取走;如果动物到达平台,未停留规定时间,也须重新在站台上熟悉10s后取走。
Morris水迷宫行为测试
2011.7.5 本实验分为两部分,包括定位航行实验、空间探索实验两个实验程序。
1.定位航行实验
用于测量大鼠对水迷宫的学习能力。
第一天让大鼠自由游泳,上、下午各1次。
第二天开始对各大鼠进行Morris水迷宫测试,Morris水迷宫中安全平台放置一固定象限,离池壁20cm。
在测试前给大鼠头部涂抹黄色的苦味酸作标记,向水迷宫水池中加入适量二氧化钛粉,再加自来水至水面高出安全平台1cm,使池水为不能明显见到安全平台的不透明乳白色。
水温保持在24℃~25℃。
实验室保持安静,窗户遮以不透光窗帘,室内以恒定日光灯照明,亮度均等,水池周围参照物在进行水迷宫试验的几天时间内位置保持不变,大鼠游泳时试验者穿着工作服。
将大鼠面向池壁放入水中,每天测试1次,每只每次测试2分钟,连续5天,记录大鼠寻找并爬上平台所需时间(逃避潜伏期),。
如果大鼠在2分钟内未找到平台,须将其引至平台,这时逃避潜伏期记为2分钟,每次训练后让其在平台上停留15秒。
若大鼠在2分钟之内找到平台,也让其在平台上站15秒,这样结束一次测试。
2.空间搜索实验
用于测量大鼠学会寻找平台后对平台空间位置记忆的能力。
在测试第6天,将安全平台移走,使大鼠在无平台情况下寻找记忆中的平台。
每只大鼠只游2分钟,分别记录第一次经过平台的时间(潜伏期)和每只大鼠在1分钟内经过平台的次数。
小鼠水迷宫实验报告小鼠水迷宫实验报告水迷宫实验是一种经典的行为学实验,被广泛应用于小鼠学习和记忆能力的研究中。
通过让小鼠在一个迷宫中寻找出口,观察其行为表现和学习能力,可以揭示小鼠的空间导航能力和记忆能力的变化。
本文将介绍水迷宫实验的基本原理、实验设计和结果分析。
一、实验原理水迷宫实验基于小鼠对水的恐惧和对出口的寻找能力。
迷宫通常由一个水池和一个隐藏的出口组成。
在水池中加入一定量的水,使小鼠不得不游泳才能找到出口。
为了增加实验难度,迷宫出口位置可以随机改变。
小鼠在迷宫中的行为表现被记录下来,包括逃避水池的时间、路径选择等。
二、实验设计在水迷宫实验中,首先需要训练小鼠熟悉迷宫环境和找到出口的方法。
训练阶段通常分为两个部分:定位训练和空间训练。
定位训练是为了让小鼠学会通过视觉和空间记忆找到迷宫出口,空间训练则是为了考察小鼠的空间导航能力。
在定位训练中,小鼠被放置在迷宫的一个固定位置,并被允许自由探索迷宫直到找到出口。
训练过程中,可以通过声音或光线等方式提示小鼠出口的位置,帮助其建立起空间记忆。
当小鼠能够稳定地找到出口后,进入空间训练阶段。
空间训练中,迷宫出口的位置被随机改变,小鼠需要通过空间记忆来找到正确的出口。
训练过程中,记录小鼠的逃避水池的时间、路径选择等行为指标,以评估其空间导航能力和记忆能力。
三、实验结果分析通过水迷宫实验,可以得到小鼠在学习和记忆方面的表现。
根据实验结果,可以将小鼠分为不同的组别,比如高学习能力组和低学习能力组。
通过对比不同组别的行为表现,可以研究学习和记忆能力的差异。
实验结果显示,高学习能力组小鼠在定位训练中往往能够快速找到出口,并且在空间训练中能够准确找到改变位置的出口。
而低学习能力组小鼠则需要更多的时间来找到出口,有时甚至会出现迷失的情况。
这表明高学习能力组小鼠具有更好的空间导航和记忆能力。
此外,实验结果还显示,经过一段时间的训练后,小鼠的学习和记忆能力会有所提高。
这表明水迷宫实验可以通过训练来改善小鼠的学习和记忆能力。
附3. 大(小)鼠Morris水迷宫
“水迷宫”是由Richard Morris在1984年发明的,随后他阐述了评估学习记忆方法的细节和步骤。
近30年来,在行为神经科学研究中,它成为最常用的验室研究工具之一。
水迷宫实验常被用于啮齿类动物神经认知疾病模型的验证和神经认知治疗可行性的评估。
有相当多的试验者利用水迷宫来评价动物的学习与记忆能力,同时也利用该实验评价水迷宫成绩、神经递质系统、药物作用之间的关系。
通过非常多的应用,水迷宫实验在当代神经科学研究中占据了一个十分重要的位置。
实验将大(小)鼠置于恒温水池中,大(小)鼠会试图找到让自己脱离浸在水中的位置,在池中特定位置放置一个平台,让大(小)鼠通过学习知道平台的位置,之后撤去平台,通过对大(小)鼠空间探索训练与定向航行实验中相关指标的检测分析,评价大(小)鼠的对空间位置学习能力以及记忆能力
一、操作步骤:
1. 使用CLEVER公司行为学观测系统,北京硕林苑科技有限公司的SLY-WMS装置联合分析,水迷宫主要由一圆柱型水池和一可移动位置的站台组成。
水池高70cm,直径160cm,站台直径8cm,水池上空通过一个数字摄相机与计算机相连接。
预先在水池中注入清水,水深40cm,加入炭素墨水/奶粉使池水变为不透明的黑/白色,站台表面为黑/白色,使大(小)鼠不能看到,水面高出站台表面0.5cm。
水温控制在19~21℃,在水池上标定相同一点作为每次实验大(小)鼠的入水点。
2.实验前一天让大(小)鼠自由游泳2min以适应周围环境,从第一天开始,每天训练4次,每次随机选择一个入水点,将大(小)鼠面向池壁放入水中,观察并记录大鼠寻找并爬上平台的路线图及所需时间(逃避潜伏期)。
4次训练大(小)鼠分别从四个不同的入水点入水,如果在120s内未找到平台,需将其引至平台。
这时潜伏期记为120s,每次训练间隔60s,连续4~7天。
3.实验时,将大(小)鼠置于水中,记录逃避潜伏期、轨迹图、各象限游泳距离。
软件操作步骤见说明书。
二、评价指标:
1.总路程(总活动度)即实验动物总的运动路程:与动物自身的游泳速度直接
相关,在相同的时间内,只反映动物的游泳速度的快慢;即路程越长,反映了动物的游泳速度越快。
2.总时间:开始录像到录像结束的总观察时间,即为单次的训练时间,一般现
在为60s。
3.平均速度:总路程/总时间,从中可以看出动物游泳速度的个体差异来,动
物的潜伏期和游泳速度有一定的关系;
4.上台时间(逃避潜伏期):指实验动物每次入水后第一次成功找到站台所需
的时间;成功上台是指在台上逗留时间超过5~10秒钟(可自己定义),如果逗留时间不足5~10秒,则不算上台,潜伏期时间即为训练时间;
潜伏期是morris水迷宫一个很重要的参照指标,它的时间长短也代表着动物空间学习记忆能力的好坏,潜伏期短,预示着动物的学习记忆能力好;但是和动物自身的游泳速度有关,比如有的正常大鼠游泳速度慢些,所以潜伏期比痴呆组动物还长,另外,某些动物放入水中后会左右观望打圈,或者原地不动确定方向后直接游到台上,出现这种现象,说明动物记忆力好,这个现象是很重要的,如果在治疗组动物发现这种情况,是非常好的。
但是由于动物原地不动,这个时候潜伏期的时间可能会长,所以潜伏期并不能作为判断记忆力好坏的最终指标。
5.上台前路程:指实验动物在第一次成功上台前所运动的路程;与潜伏期时间
相关,潜伏期时间越长,上台前路程也就越大;二者之间呈正相关系,所以也间接反映了潜伏期时间的长短,也可以看做是评定动物记忆力好坏的指标之一。
6.上台前平均速度:上台前路程/上台时间;从中可以看出动物游泳速度的个
体差异来,动物的潜伏期和游泳速度有一定的关系;
7.象限活动指数
(1)象限活动距离/时间:实验动物在各象限所活动的距离/时间之和;平台所在象限对侧象限活动的距离/时间越长,反映了动物的空间记忆能力比较好;
(2)中心活动距离/时间:实验动物在水池中心区域内活动的距离/时间之和;啮齿类动物游泳有绕边性和边缘性,而站台是在远离周边靠近水池中心的,如果动物改变了游泳路线在水池中心区域内活动的距离/时间长的话,反映其空间记忆能力好。
相反,动物在水池周边区域内活动的距离/时间长的话,反映其空间记忆能力差。
8.站台穿越次数:指在撤去平台后,在一定的时间内,实验动物穿越原站台位
置的次数。
(穿越一次指进出站台区域各一次);在一定的时间内,动物穿越原站台位置的次数越多,说明其空间学习记忆能力越好。
9.初始角(弧度):指在将实验动物放入水池后,动物的运动轨迹的起始点的切
线与起始点和站台中心连线之间的夹角;
如果初始角的角度越小,说明动物记得站台的位置,直接向站台方向游,反映空间学习记忆能力比较好。
三、注意事项:
1.迷宫周围的物品必须保持固定不变,实验者尽量避免来回走动。
2.水温在实验期间应保持恒定,稳定在19~21℃。
3.实验过程中保持环境安静,光线不宜太强。
参考文献:
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