维生素C的质量标准(控制)研究学院药学院专业临床药学班级 2012级药学姓名王冠峰学号 ************指导教师甘向辉2016年4月27日维生素C的质量标准(控制)研究[摘要]维生素C，具有抗坏血病的作用，所以又被称为抗坏血酸(Ascorbicacid)。
它是人体不可或缺的一种重要营养物质,在新鲜的蔬菜和水果中含量较为丰富。
由于化学结构与糖类十分相似，所以在人体代谢活动中起到重要的作用，包括参与体内一系列生物代谢和反应，促进胶原蛋白和粘多糖的合成，增加微血管的致密性，降低其通透性及脆性，增加机体抵抗力等。
但人体摄入过多时会产生多尿、下痢、皮肤发疹等不良反应，滥用维生素C甚至会削弱人体的免疫能力。
因此，在维生素C药物生产过程中需做好质量控制研究，产品的含量测定也应严格把关。
《中国药典》（2010年版）收载有维生素C原料药及其片剂、泡腾片、颗粒剂和注射剂。
维生素C的含量测定方法有碘量法，2，6—二氯靛酚滴定法，紫外分光光度法等。
目的了解并归纳国内对维生素C原料药及其片剂、注射液的含量测定的方法。
方法以“维生素C 含量测定”和“抗坏血酸含量测定”为检索词对1992 ~ 2012年中国期刊网全文数据库(CNKI) 中的全部文献进行全文检索，对所得有关维生素C含量测定的方法进行归纳。
结果归纳有维生素C原料药5种，片剂4种，注射液6种的测定方法。
结论维生素C及其制剂的含量测定方法种类多样，各有特点，应根据实际检测的需求采用合适的方法。
[关键词] 维生素C；片剂；注射液；含量测定；质量评价方法；标准分析；探索性研究.前言维生素C（又称L-抗坏血酸）是一种酸性的己糖衍生物，是烯醇式己糖酸内脂。
立体结构与糖类相似，可发生氧化与还原互变。
氧化型和还原型都有生物活性。
分子中第二、三两位碳上烯醇羟基的氢容易生成H+而释出，故抗坏血酸虽然不含自由羟基，仍具有有机酸的性质。
在水中的溶解度为0.3g/ml。
熔点190~192℃。
pH=4时氧化还原电位E0=0.166V。
其电离常数PK1=4.17 ，PK2=11.57 。
最大吸收波长245nm（酸性）与265nm（中性）。
在碱性与酸性介质中均能迅速被氧和金属离子氧化成脱氢抗坏血酸（DHAA），脱氢抗坏血酸可进一步氧化成二酮古乐糖酸（DKG）。
【1】维生素C是维持人体生理机能需要的重要营养素，也是人体需要量最大的一种维生素，它具有抗氧化、清除自由基以及促进许多酶和激素形成，有效防止血管脆性，促进铁吸收，提高机体免疫功能等作用。
还具有防治血管硬化、肝胆疾病、过敏性疾病，促进创伤愈合等作用。
【2】由于维生素C对人类非常重要，近年来发展了一些新的测定方法，而经典方法也得到了不少改进。
本文对近二十年来国内维生素C含量测定方法进行了总结。
1维生素C原料药1.1间接光度法实验原理：该方法基于在弱酸性介质中，有盐酸羟胺、碘酸存在下，抗坏血酸还原对氨基苯磺酸与N-1-萘乙二胺盐酸盐混合体系生成的有色物质，体系的最大吸收波长为540nm，工作曲线的线性范围为0.5~ 4.0μg/ml。
方法灵敏度高，选择性好，对药用维生素C中抗坏血酸含量进行测定，结果满意。
1.1.1试剂规格维生素C标准液：10μg/ml ；碘酸钾溶液：20μg/ml ；硫酸：0.125mol/L ；对氨基苯磺酸溶液：2g/L ；盐酸羟胺溶液：2.5g#L ；N-1-萘乙二胺盐酸盐溶液：0.5g/L 。
1.1.2试验方法准确吸取碘酸钾溶液1.0ml 与0.125mol/L硫酸0.8ml混合后加入10μg/ml 维生素C溶液2ml。
用水稀释至5ml，加入2g/L对氨基苯磺酸溶液1. 1ml，2. 5g/L盐酸羟胺溶液1. 0ml，混合物静置25min后，加入N-1-萘乙二胺盐酸盐溶液1.2ml，用蒸馏水稀释至10ml，在540nm波长处测定其吸光度，试验过程中每加入一种溶液，均必须振荡使之混合均匀。
1.1.3吸收曲线按试验方法，在不同的波长下测定吸光度，并做空白试验，结果表明，本体系的最大吸收波长为540nm。
1.1.4样品分析精密称取一定质量的样品，溶解于10g/L草酸溶液中，过滤后用10g/L草酸溶液定容于1L容量瓶中，吸取10ml于100ml容量瓶中，用10g/L草酸溶液稀释至刻度，按试验方法进行测定。
【3】1.2直接碘量法实验原理：抗坏血酸分子中的烯二醇基具有还原性，与I2反应定量地被氧化生成二酮基。
反应式如下：以淀粉为指示剂，用碘的标准溶液滴定抗坏血酸，过量的碘标准溶液与淀粉发生反应使溶液呈蓝色，即达到滴定终点。
1.2.1 含量测定精密称取样品0.2g ，放入250ml 锥形瓶中，加入新煮沸过放冷的蒸馏水100ml ，再加入2mol/L 冰醋酸溶液1ml ，0.5%淀粉指示液2ml ，摇匀，立即用标定过的碘标准溶液滴定，直至溶液呈蓝色在30s 内不褪色为止。
此方法常用作食品或药剂中抗坏血酸含量的测定。
方便实用，但准确度不高，误差较大。
【4】1.3 间接碘量法实验原理：先加过量的碘标准溶液与配制好的维生素C 溶液反应完全，用硫代硫酸钠滴定过量的碘至蓝色刚好消失。
222234622I S O I S O ---+=+相比直接碘量法有如下优点：消除了不溶物吸附作用的影响，缩短了维生素C 溶液与空气的接触时间，避免了碘的挥发对实验结果造成的影响。
【4】1.4 反滴定碘量法药典中常采用将碘溶解在KI 溶液中以增大碘的溶解度。
此实验取20%的KI 溶液5 ml 于250 ml 锥形瓶中，精确量取0.01 mol/L CuSO 4 溶液1 ml 加入锥形瓶中使其充分反应，再加2 ml 淀粉指示液。
VC 液溶于冰乙酸介质中，用其进行滴定至恰使蓝色消失为止。
CuI 2不稳定随即分解为Cu 2I 2 和游离的碘。
2CuSO 4+4 KI=CuI 2+2 K 2SO 42CuI 2= Cu 2I 2+I 2空白试验：取20%的KI 溶液5 ml 于锥形瓶中，加蒸馏水1 ml ，再加10 滴淀粉指示剂溶液，然后用溶于冰乙酸介质中的VC 液进行滴定，边摇边滴定，直至与测定颜色一致为止。
反滴定碘量法的空白实验消除了因KI 中含有碘而产生的系统误差，也消除了人眼对溶液变色的敏感程度不同而对实验造成的误差。
由于样品液能与KI 中本身含有的碘作用，也消除了因KI 中含有的碘产生的误差。
反滴定法比滴定法更准确，但操作较繁琐，适合测定少批量样品。
【4】1.5 2，6-二氯吲哚酚滴定法实验原理：2，6-二氯吲哚酚即为一染料，其氧化型在酸性溶液中显红色，碱性溶液中为蓝色。
当与抗坏血酸反应后，转变为无色的酚亚胺（还原型）。
因此，抗坏血酸可在酸性溶液中用2，6-二氯吲哚酚标准液滴定，至溶液显玫瑰红色时即为终点。
1.5.1 含量测定精密称取约0.0020g VC ，放入50 ml 锥形瓶中，加入新煮沸过的冷蒸馏水10ml，加偏磷酸－醋酸试液5 ml，用二氯吲哚酚标准液滴定，至溶液显玫瑰红色在5 s 内不褪色为止；另取偏磷酸－醋酸试液5.5ml，加水15ml作为空白，用二氯吲哚酚标准液滴定，进行校正。
2，6- 二氯吲哚酚滴定法的专属性较碘量法为高，多用于含维生素C 的制剂和食品的分析。
而且此法不是维生素C 的专一反应，其他还原性物质对测定有干扰。
由于维生素C 的氧化速度远高于其他还原性物质，所以此法必须快速滴定才可减少干扰物质的影响。
【4】2 维生素C片2.1 薄层扫描法《中国药典》2000年版规定维生素C片剂的含量测定用碘量法。
（2010年版中国药典所用同为碘量法）该方法操作比较繁杂，重现性较差，分析周期较长。
实验原理：维生素C具有较强还原性，可使蓝色染料2，6-二氯靛酚钠定量地还原成无色的酚亚胺，而本身被氧化成去氧抗坏血酸。
此反应为维生素C的特征反应。
2.1.1 试纸的制备2，6-- 二氯靛酚钠(DCP-Na) 溶于无水乙醇配成0.05%DCP-Na乙醇溶液的展开缸中浸渍3min，边浸边摇展开缸，使滤纸均匀着色，充分被染料溶液所饱和。
取出悬挂于暗处，晾干后，立即放入干燥器中避光保存，备用。
2.1.2 扫描条件确定在制备的染料试纸上定量点维生素C对照品进行扫描，维生素C在290nm 处有最大吸收，420nm处无吸收，故选择λS= 290nm，λR= 420nm，双波长反射式锯齿扫描。
2.1.3 样品的含量测定取维生素C片10片，研细，精密称取平均片重一片的粉末，放入100ml 容量瓶中，加入缓冲液至刻度，振摇，使维生素C溶解，放置、澄清，用吸液管取3ml，移至10ml 容量瓶中，用缓冲液稀释至刻度。
用5μL定量毛细管点样品溶液与不同浓度的标准液于同一试纸上，然后扫描测定峰面积，由工作曲线法计算维生素C片中的维生素C含量。
【5】2.2高效液相色谱法2.2.1 色谱条件色谱柱phenomene-C18；流动相磷酸盐缓冲溶液( pH=5.8)：甲醇=95：5，流速0.8ml/min；紫外检测器：检测波长254nm；进样：10μL。
2.2.2 供试品溶液与对照品溶液的制备维生素C供试品溶液的制备取本品20片(规格0.1g)，精密称定，研细，取本品1片(约相当于维生素C100mg)，加0.1%的草酸使溶解制成每1ml含0.1mg的溶液，分析前用0.45μm滤膜过滤。
维生素C对照品溶液的制备精密称取维生素C对照品适量，加0.1%的草酸使溶解制成0.1mg/ml的标准溶液。
2.2.3 标准工作曲线的绘制精密称取对照品50.80mg置50ml量瓶中，用0.1%草酸溶液稀释至刻度，精密量取0.5ml，2.5ml，5ml，12.5ml，25ml分别置50ml量瓶中，用0.1%草酸溶液稀释至刻度，制成维生素C标准溶液，用0.45μm滤膜过滤，用微量进样器进样10μL，依次测出峰面积，然后以维生素C标准溶液质量浓度(mg/ml)作自变量，相对应的峰面积作因变量，绘制标准工作曲线。
2.2.4 样品测定分别精密量取供试品与对照品溶液10μL，注入液相色谱仪记录色谱图，测定结果。
【6】2.3差示旋光法实验原理：根据维生素C在不同的pH溶液中旋光度有显著差异，而片剂辅料的旋光度保持不变这一特性，设计用差示旋光法消除辅料的影响，直接测定该制剂的含量。
本法结果准确、操作简便、快速。
2.3.1 差示旋光度与浓度的关系精密称取105℃干燥至恒重的维生素C 6.39g，置50m l量瓶中，加入新沸过的冷水至刻度。
精密量取上述溶液0.4、1.2、2.0、2.8、4.0ml各2份，分别置50ml 量瓶中，1份用新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml的混合液(以下简称醋酸液)稀释至刻度，1份用5%的碳酸氢钠溶液稀释至刻度，以前者为空白，分别测定后者的差示旋光度(△α)，以浓度对差示旋光度作线性回归，结果表明，本品浓度在1-10mg/ml范围内，线性关系良好。
