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H P L C法测定维生素C注射液中维生素C的含量王奇年（江苏省泰州市第四人民医院药剂科 泰州 225300）【摘 要】摘要：目的:考察高效液相色谱法测定维生素C注射液中维生素C的含量的优点。
方法:高效液相色谱法测定维生素C注射液中维生素C的含量（色谱柱：Boston BosChrom Amino 5μm，柱长250mm，柱径4.6mm），流动相：0.01mol·L-1磷酸二氢钾（用磷酸调节pH值至 2.4）-乙腈（30∶70），柱温：35℃，流速：1.0mL·min-1，波长为 246nm。
结果：维生素 C 在9.97～39.88μg·mL-1的浓度范围内有良好的线性关系（r=0.9997）；平均回收率为100.6%，RSD为0.8%。
结论:由于维生素C在波长246nm处有最大吸收峰，确定246nm为本实验的测定波长。
维生素C具有水解性及强还原性，但其在酸性介质中由于受空气中氧的氧化速度减慢及生成单钠盐所以不致发生水解，故本文选取流动相A[0.5%亚硫酸氢钠溶液（用磷酸调节pH值至2.4）]稀释配备维生素C溶液，维持其稳定性。
另外，由于维生素C对光不稳定，故在检验操作及储存中应注意避光处理。
实验表明，本法简便，快速，准确，灵敏度高，回收率高，适合作维生素C的含量测定方法。
【期刊名称】北方药学【年(卷),期】2015(000)009【总页数】2【关键词】高效液相色谱法 维生素C注射液 含量测定1 资料与方法1.1 临床资料：维生素C（vitamin C）在临床上不仅用于眼科、口腔科及外科系统疾病药物治疗而且在心血管系统、消化系统疾病的辅助治疗中十分常用[1]。
维生素C是一种水溶性维生素，不但具有防治坏血酸的功能，还是一种强还原剂，脱氢维生素C的形成是由于分子中2位及3位碳原子的两个烯醇式羟基易解离而释放H+氧化而成[2]。
脱氢维生素C和维生素C共同形成了可逆的氧化还原系统，在人体内发挥着重要的作用：参与了体内的氧化还原反应，保持着谷胱甘肽的还原状态和巯基酶的活性，起到了解毒的作用；还参与体内多种羟化反应，既可以促进胶原蛋白的合成，又可以促进胆固醇的代谢；刺激免疫系统，可抑制病毒的增生，防治感染，阻止致癌物质的生成。
药物分析设计性实验设计方案维生素C及其制剂的含量测定药学2011级（2）班李智（1103501275）李集毅（1103501276）指导教师：***2014 年 4 月高效液相色谱测定维生素C片剂含量一、实验目的1. 掌握一般药物含量测定实验的设计方法2. 掌握维生素C高效液相色谱法含量测定的原理和方法3. 掌握标准曲线法在药品含量测定检验中的运用二、实验器材仪器：岛津高效液相色谱仪,色谱柱C18;电子天平;烧杯,棕色容量瓶（50ml*7）0.145μm滤膜，棕色容量瓶（20ml*2）试剂：维生素C片（0.1g/片）（市售），维生素C标准对照品（0.1mg/ml）;二次蒸馏水，甲醇（0.1mg/ml色谱纯），草酸（分析纯），磷酸二氢钾（分析纯），磷酸氢二钾（分析纯）三、实验原理1. 标准曲线法：采用梯度浓度稀释法，将对照品溶液稀释至不同浓度的待测溶液，制备成标准溶液，用高效液相色谱法按标准进样得样品吸收峰（峰面积），绘制成标准曲线。
2. 将供试品制剂制成规定含量的待测品，进行高效液相色谱测定，对比对照品溶液标准曲线，查看供试品是否符合含量测定要求四、实验内容1色谱条件色谱柱C18，流动相:磷酸盐缓冲溶液(pH=5.18):甲醇=95：5,流速0.18ml/min,紫外检测器,检测波长254 nm,进样10ul。
2供试品溶液与对照品溶液的制备（1）取本品20片(规格0.1g),精密称定,研细,取本品1片(约相当于维生素C100mg)，将待测样品用0.1%的草酸溶解至20ml容量瓶，定容；取上述样品1ml 于50ml的容量瓶中，用0.1%的草酸精确定容，制成每1ml含0.1mg的溶液，分析前用0.145μm滤膜过滤。
（2）维生素C对照品溶液的制备:精密称取维生素C对照品适量,加0.1%的草酸使溶解制成0.1mg/ml的标准溶液。
3 标准工作曲线的绘制精密称取对照品50.80mg置50ml量瓶中,用0.1%草酸溶液稀释至刻度,精密量取0.5ml,2.5ml,5ml,12.5ml,25ml 分别置50ml量瓶中,用0.1%草酸溶液稀释至刻度,制成维生素C标准溶液,用0.45um滤膜过滤,用微量进样器进样10ul,依次测出峰面积,然后以维生素C标准溶液质量浓度(mg/ml)作自变量,相对应的峰面积作因变量,绘制标准工作曲线,标准曲线的相关系数R=0.9999,说明曲线的线性关系良好。
·药品鉴定·2011年9月第8卷第27期高效液相色谱法测定维生素C注射液含量刘国如，刘永锁，陈振玲，王伟，丰廷宗，周毓瑾中国民用航空局民用航空医学中心（民航总医院），北京100023[摘要]目的：建立高效液相色谱法测定维生素C注射液中维生素C含量的方法。
方法：采用Phenomenexluna-NH2分析色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），流动相为磷酸二氢钾缓冲液-乙腈（1∶1，磷酸调至pH3.0）；流速：1.0ml/min；检测波长：245nm。
结果：维生素C的线性回归方程为Y=29560X-21310（r=0.9995），线性范围为5～30μg/ml，平均回收率为98.30%（n=9，RSD为2.1%）。
结论：该方法操作简便，结果准确，可用于测定维生素C注射液中维生素C的含量。
[关键词]高效液相色谱法；维生素C注射液；维生素C；含量测定[中图分类号]R917[文献标识码]A[文章编号]1673-7210（2011）09（c）-050-02 DeterminationofVitaminCInjectionbyHPLCLIUGuoru,LIUYongsuo,CHENZhenling,WANGWei,FENGTingzong,ZHOUYujin CivilAviationMedicineCentre(CivilAviationGeneralHospital),CAAC,Beijing100023,Ch ina[Abstract]Objective:TodevelopaquantitativemethodforthedeterminationofVitaminCinVi taminCInjection.Methods:Phenomenexluna-NH2column(4.6mm×250mm,5μm)wasusedaschromatographiccolumn,amixtureofaceton itrileanddibasicpotassiumphosphatebuffersolution(1∶1,v/v)wasusedasmobilephase,whi chwasadjustedtopH3.0byphosphoricacid,andthedetectionwavelengthwasat245nmwithafl owrateof1.0ml/min.Results:TheregressionequationwasY=29560X-21310(r=0.9995),whichwaslinearoverarangefrom5μg/mlto30μg/ml.Theaveragerecovery was98.30%(n=9,RSD=2.1%).Conclusion:Thismethodissensitive,rapidandaccurate,whic hiscanbeusedfordeterminationofVitaminCinVitaminCInjection.[Keywords]HPLC;Vita minCInjection;VitaminC;Determination维生素C在临床上不仅用于心血管系统、消化系统疾病的辅助治疗，而且在眼科、口腔科和外科系统疾病的药物治疗中也十分常用[1]。
维⽣素C制剂的鉴别、杂质检查、含量测定⽅法综述维⽣素C制剂的鉴别、杂质检查、含量测定⽅法综述维⽣素C制剂的鉴别、杂质检查、含量测定⽅法综述摘要:维⽣素C即L-抗坏⾎酸是⼀种⽔溶性维⽣素，具有多种剂型。
ChP2010收载有维⽣素C原料及其⽚剂、泡腾⽚、颗粒剂、泡腾颗粒剂、注射剂和复⽅制剂维⽣素C银翘⽚。
维⽣素C 银翘⽚系临床常⽤于治疗流⾏性感冒引起的发热头痛、咳嗽、⼝⼲、咽喉肿痛等症状的复⽅制剂，其组份为VitC、⾦银花、桔梗、连翘、对⼄酞氨基酚、芦根等成份，其中V itC易发⽣氧化导致含量显著降低。
根据其结构性质采⽤不同的⽅法对其进⾏鉴别、检查、含量测定。
关键词:维⽣素C制剂;鉴别;检查;含量测定内容:仪器及试剂(1)仪器紫外可见分光光度计;⾼效液相⾊谱仪;分析天平;薄层板;滴定管等。
(2)试剂硝酸银试液、⼆氯靛酚、碘滴定液、亚甲蓝⼄醇溶液、淀粉指⽰剂、草酸、醋酸、盐酸、硫酸等。
⼀维⽣素C⽚【鉴别】1. 与硝酸银的反应:⽅法:精密称取本品适量(约相当于维⽣素C 0.2g),加⽔10ml溶解。
取该溶液5ml，加硝酸银试液0.5ml，即⽣成银的⿊⾊沉淀。
2. 与2,6-⼆氯靛酚反应: ⽅法:取本品适量(约相当于维⽣素C 0.2g)，加⽔10ml溶解。
取该1溶液5ml，加2,6-⼆氯靛酚钠1,2滴，试液的颜⾊即消失。
3. 薄层⾊谱法: ⽅法:取本品细粉适量( 约相当于维⽣素C l0mg)，加⽔10 ml，振摇使维⽣素C溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液;另取维⽣素C 对照品，加⽔溶解并稀释制成l ml 中约含1mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层⾊谱法，吸取上述两种溶液各2uL,分别点于同⼀硅胶GF254薄层板上，以⼄酸⼄酯-⼄醇-⽔(5:4:1)为展开剂，展开，晾⼲，⽴即置紫外光灯(254 nm)下检视。
供试品溶液所显主斑点的位置和颜⾊应与对照品溶液的主斑点相同。
【检查】1. 颜⾊检查:取本品的细粉适量(约相当于维⽣素C 0.1g)，加⽔20ml，振摇使溶解，滤过，滤液照分光光度法在440nm处测定，吸光度不得超过0.07。
维生素C含量的测定(高效液相色谱法)1．原理试样中的抗坏血酸用溶解超声提取后，以离子对试剂为流淌相，经反相色谱柱分别，其中L(+)-抗坏血酸和D(+)-抗坏血酸挺直用配有紫外检测器的液相色谱仪(波长245nm)测定；试样中的L(+)-脱氢抗坏血酸经L-半胱氨酸溶液举行还原后，用紫外检测器(波长245nm)测定L(+)-抗坏血酸总量，或减去原样品中测得的L(+)-抗坏血酸含量而获得L(+)-脱氢抗坏血酸的含量。
以色谱峰的保留时光定性，外标法定量。
2．试剂与设备 (1)试剂偏磷酸(HPO3)n：含量(以HPO3计)≥38% ,(Na3PO4·12H2O),(KH2PO4) ,(H3PO4) ; 85%, (C3H7NO2S)：优级纯，(C19H42BrN)：色谱纯，(CH3OH)：色谱纯。
(2)试剂配制偏磷酸溶液(200g/L)：称取2008(精确至0.1g)偏磷酸，溶于水并稀释至1L，此溶液于4℃的环境下可保存一个月；偏磷酸溶液(20g/L)：量取50mL 200g/L偏磷酸溶液，用水稀释至500mL; 溶液(100g/L)：称取100g(精确至0.1g)，溶于水并稀释至1L, 溶液(40g/L)：称取4g ，溶于水并稀释至100mL，临用时配制。
(3)标准品L(+)-抗坏血酸标准品(C6H8O6)：纯度≥99%, D(+)-抗坏血酸(异抗坏血酸)标准品(C6H8O6)：纯度≥99%。
(4)标准溶液配制L(+)-抗坏血酸标准贮备溶液(1.000mg/mL)：精确称取L(+)-抗坏血酸标准品0.0lg(精确至0.01mg)，用20g/L的偏磷酸溶液定容至10mL。
该贮备液在2～8℃避光条件下可保存一周。
D(+)-抗坏血酸标准贮备溶液(1.000mg/mL )：精确称取D(+)-抗坏血酸标准品0.01g(精确至0.01mg)，用20g/L的偏磷酸溶液定容至10mL。
该贮备液在2～8℃避光条件下可保存一周。
维生素C含量测定方法一、荧光分析法荧光分析法是一种利用荧光物质与维生素C的特异性反应来进行定量测定的方法。
在一定条件下，维生素C能够激发荧光物质的荧光，通过测定荧光强度可以计算出维生素C的含量。
该方法具有较高的灵敏度和选择性，但需要使用荧光物质，且操作较为繁琐。
二、电化学法电化学法是一种利用电化学反应来测定维生素C的方法。
在一定条件下，维生素C可以被氧化或还原，产生电流或电位变化，通过测定这些变化可以计算出维生素C的含量。
该方法具有操作简便、快速、准确度高等优点，但需要使用电极和电解质溶液。
三、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种分离和测定复杂混合物中各组分含量的方法。
维生素C可以通过高效液相色谱法与杂质分离，然后通过紫外检测器或荧光检测器进行检测。
该方法具有高分辨率、高灵敏度、高准确度等优点，但需要使用有机溶剂和复杂的仪器设备。
四、分光光度法分光光度法是一种利用物质吸收光能量特性进行定量测定的方法。
维生素C在特定波长下有吸收峰，通过测定吸收光谱可以计算出维生素C的含量。
该方法具有操作简便、快速、准确度高等优点，但需要使用显色剂和特定波长的光源。
五、滴定法滴定法是一种利用化学反应进行定量测定的方法。
维生素C与特定的试剂发生化学反应，通过滴定操作可以计算出维生素C的含量。
该方法具有操作简便、快速、准确度高等优点，但需要使用特定的试剂和操作技巧。
六、酶分析法酶分析法是一种利用酶的特异性催化作用进行定量测定的方法。
维生素C在特定酶的作用下可以生成产物，通过测定产物可以计算出维生素C的含量。
该方法具有高灵敏度、高准确度等优点，但需要使用特定的酶和试剂。
·28·Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy中国民族民间医药药物研究The Medicine Study高效液相色谱法测定维生素C注射剂的含量赵敏胡付华邵阳市第一人民医院药剂科，湖南邵阳422000【摘要】：目的：建立一种灵敏、准确的高效液相色谱（HPLC）测定维生素C注射剂的方法，并进行分析方法学验证。
方法：采用色谱柱为Xterra RPC18(4.6×150mm，5μm)，柱温为25℃，以0.01mol·L-1（pH为3.5）的磷酸二氢钠为流动相，系统流速为0.6mL·min-1，检测波长为265nm。
结果：该方法的线性范围为50～120μg·mL-1，其标准曲线的相关系数为0.9992，日内RSD为0.87%，其日间RSD为1.03%，加样回收率为100.36%。
结论：此法灵敏、准确、高效，重复性好，可用于注射用维生素C的含量测定。
【关键词】：维生素C；高效液相色谱法；含量测定【中图分类号】R927【文献标识码】A【文章编号】1007-8517 (2010) 04-028-2Determination of vitamin C for injection by HPLCZHAO Min，HU Fu-hua (Department of pharmacy，the First People’s Hospital of ShaoYang city，Shaoyang 422000，China)[ABSTRACT] Objective: To develop a sensitive and accurate High Performance Liquid Chromatography Assay (HPLC) for the quantitative analysis of vitamin C for injection. Method: HPLC for the determination of vitamin C for injection. was performed, using Waters 600 systems on a Xterra RP C18 (4.6×150mm,5μm) column, with the mobile phase of 0.01mol.L-1 dibasic sodium phosphate buffer solution (pH=3.5), at the dectective wavelength of 265nm, with the fl ow rate of 0.6mL·min-1, column temperature at 25℃. Result: According to the chromatographic conditions, sampling the reference mixture, the linear range was 50～120μg·mL-1 and correlation coeffi cient was 0.9992, RSD% of inter-day and within-day precision was 0.87% and 1.03% respectively, Recovery was 100.36%.Conclusion: This method is sensitive， and accurate for determination of vitamin C for injection.维生素C又名抗坏血酸，参与氨基酸代谢、神经递质的合成、胶原蛋白和组织细胞间质的合成，可降低毛细血管的通透性，加速血液的凝固，刺激凝血功能，促进铁在肠内吸收，促使血脂下降，增加对感染的抵抗力，参与解毒功能，且有抗组胺的作用及阻止致癌物质(亚硝胺)生成的作用，其临床用途广泛。
维生素C还具有重要的生化作用，在医药、日用化工、食品、生物等领域有重要的应用价值。
维生素C是烯醇化合物，在水中极易氧化，见光加速分解。
维生素C注射液pH值为5.5～7.0，具有极强的还原性，在碱性溶液中易氧化失效，氧化剂、光、热及金属离子能加速其失效[1]。
因此，温度过高或过低均可加快维生素C的分解，抗氧化剂、温度25℃、pH为5.6～6.0时维生素C注射液最为稳定[2]。
维生素C注射剂含量的测定方法很多，各种方法各有其特点，《中国药典》2005年版二部采用碘量法测含量[3]，此法虽然操作简单，但因制剂中常有还原性物质存在，对此法干扰明显，且由于碘具有挥发性，碘离子易被空气所氧化而使滴定产生误差。
常见的其他滴定法存在滴定终点难以准确判断，分光光度法操作费时，而高效液相色谱法是目前发展较为迅速的一种方法，灵敏度高，选择性好，本试验的目的在于寻找一个准确高效的测定维生素C含量的方法。
2.1色谱条件：色谱柱：Xterra RP C18(150mm×4.6mm，5μm)，以0.01mol·L-1（pH为3.5）的磷酸二氢钠水溶液为流动相，柱温为25℃，系统流速为0.6mL·min-1，检测波长为265nm。
色谱图见图1。
2.2标准曲线的制备：准确称取维生素C对照品10.0mg，0.02mol·L-1焦亚硫酸钠溶液溶解并定容到25mL的容量瓶中[2]，2方法与结果1.1仪器：美国Waters 公司的高效液相色谱仪（包括600泵、2996可变波长紫外检测器），奥立龙868型pH酸碱计上海热电仪器有限公司。
1.2试剂：维生素C对照品：中国药品生物制品检定所，批号：2139C，规格：100mg/瓶；维生素C注射液：山东新华制药股份有限公司，批号：0807122，规格：5mL(1.0g)/支；5%葡萄糖注射液：上海百特医疗用品有限公司，批号：GS0809048，规格：250mL/袋；焦亚硫酸钠（Na2S2O5）：分析纯，上海试四赫维化工有限公司，批号：060512，含量比重≥96.0%；其余试剂均为分析纯。
1仪器与试剂作者简介：赵敏（1972—），女，现供职于邵阳市第一人民医院药剂科，研究方向为药品质量控制与标准。
药物研究The Medicine StudyChinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy中国民族民间医药·29·摇匀，得贮备液，并予避光保存。
准确量取维生素C贮备液6mL和纯水4mL，得对照品A液；取A液5mL和1mL纯水，得对照品B液；取B液4mL和1mL纯水，得对照品C液；取A液2mL和2mL纯水，得对照品D液；取B液1mL和1mL纯水，得对照品E液，从而得5个高中低不同浓度的对照品溶液。
取20μL进样测定。
按“2.1”项下色谱条件进样，测定对照品的峰面积，以浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，进行线性回归，求得维生素C的回归方程为：120μg·mL-1）系列浓度的对照品溶液0.5mL（每个浓度取3份），分别准确加入维生素含量为100μg.mL-1的样品溶液0.5mL中，摇匀，按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算加样回收率。
结果，维生素C的加样回收率为100.36%。
2.5稳定性试验：将“2.2”项下100μg·mL-1维生素C溶液20μL，分别以0、1、2、4、6、8h进样，记录色谱图，峰面积RSD为0.68%，结果表明，供试品溶液在8h内稳定。
2.6重复性试验：取批号为0807122的样品，按含量测定方法配制6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样，记录峰面积，其RSD为0.33%。
2.7样品测定：按“2.1”项下色谱条件，进样3个不同批次的样品含量，结果以标示量计，3批样品批示量含量分别为：100.67%、98.37%、101.01%，均在95%～110%之间。
3讨论图1 维生素C高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatogram of vitamin C维生素C：Y=8.95×103X+7.36×105(r=0.9992，n=5)；结果，维生素C在50～120μg·mL浓度范围内呈良好的线性关系。
2.3精密度试验：按“2.1”项下色谱条件，取“2.2”项下对照品溶液，低（维生素C浓度为60μg·mL-1）、中（维生素C浓度为80μg·mL-1）、高（维生素C浓度为100μg·mL-1）系列浓度分别重复进样3次，于第1d、3d、5d分别考察其日内及日间精密度，测定峰面积。
结果维生素C的日内RSD%为0.87%，其日间RSD%为1.03%。
2.4回收率试验：分别取低（维生素C浓度为80μg·mL-1）、中（维生素C浓度为100μg·mL-1）、高（维生素C浓度为-1根据维生素C的理化性质和特点，本实验考察了不同流动相的组成及不同浓度，不同PH值及温度等对分离效果的影响。
结果确定柱温为25℃，以0.01mol·L-1（pH为3.5）磷酸二氢钠为为流动相，流速为0.6mL·min-1。
但因维生素C极易氧化，故笔者选取0.02mol·L-1的焦亚硫酸钠水溶液稀释配备维生素C对照品溶液维持其稳定性。
另外，维生素C对光不稳定，在储存中应注意避光。
该方法具有灵敏，准确，高效的特点，适合维生素C注射液的检测。
参考文献[1] 陈新谦，金有豫，汤光.新编药物学[M].人民卫生出版社，2003.(15)：630.[2] 郝志耘.维生素C稳定性实验研究[J].牡丹江医学学报，1997，18（1）：13-4．[3] 国家药典委员会编.《中国药典》[S].北京：化学工业出版社，2005．JKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJKJ KJKJKJKJKJKJKJKJK（上接第27页）强体液免疫的作用；白术对免疫系统有较好的免疫增强、免疫调节以及抑菌和强壮作用。
玉屏风散把三味中药有机的结合起来，有明显增强实验动物的抗疲劳作用，增强实验动物的耐低温、耐高温和耐缺氧的作用。
因此，在积极对证治疗、缓解常见症状的同时，玉屏风散能够增强感冒患者调节机体状态，促进机体抗病免疫机能，抵抗外邪，预防和延缓复感时间，在临床应用方面具有较重要的使用价值，应当引起足够的重视。
另外，在运用药物调节感冒患者免疫机能的同时，还要积极培养易感人群的良好生活习惯，正确的疾病观，从而提高抗病能力。
