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华支睾吸虫病诊断技术研究进展作者：曾雪梅张梦玲梁富雄来源：《右江医学》2022年第05期【关键词】华支睾吸虫病;分子生物学诊断技术;联合诊断中图分类号：R532.23文献标志码：ADOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2022.05.013华支睾吸虫病（Clonorchiasis），又称肝吸虫病，是一种由华支睾吸虫寄生于人体胆管内引发胆管病变的人畜共患寄生虫病，主要是食用了含有华支睾吸虫活囊蚴的淡水鱼虾所致[1]。
轻度感染者常无症状或轻度腹痛，个别可因大量成虫堵塞胆总管而出现梗阻性黄疸、胆绞痛，更有慢性严重感染者会出现胆管炎、胆囊炎，甚至引发胆管癌[2]。
在第三次全国人体重点寄生虫病现状调查中，华支睾吸虫病流行区主要分布在华南和东北两大片区，全国华支睾吸虫加权感染率为0.47%，推算感染人数约为598万人，其标化感染率为0.25%，较第一次寄生虫病现状调查（0.33%）和第二次寄生虫病现状调查（0.58%）分别下降了24.24%和56.89%[3]。
由此可见我国在寄生虫病防控方面取得了较为显著的成果。
现阶段我国针对华支睾吸虫病诊断标准有详细规定，可根据流行病史、临床表现、实验室检查等来确诊病例[4]。
笔者对华支睾吸虫病的病原学、影像学、免疫学、分子生物学诊断技术等的最新进展进行介绍，并阐述联合诊断及其优势，为提高华支睾吸虫病的诊断准确度提供参考依据。
1 病原学诊断对人体粪便进行病原学虫卵检测是目前诊断华支睾吸虫病较为常用的方法，其中包括直接涂片法、饱和盐水漂浮法、水洗沉淀法、改良加藤厚涂片法（Kato-Katz法）和醛醚离心沉淀法[5]等。
粪便查虫卵的检测方法准确率和检出率都较高，但需要从较少的粪便中找出虫卵，并且还需要对其形态进行准确辨认，对于轻度感染或早期感染者，其粪排虫卵量少并且排虫卵时间不规律等因素，使得病原学查虫卵难以提高诊断灵敏度。
单次对粪便检测虫卵准确度并不高，甚至需要进行多次粪便涂片镜检才能确诊[6]。
永修集贸市场餐条鱼吸虫囊蚴感染情况调查我省鄱阳湖是世界最大淡水湖，水资源及水产品极为丰富。
鱼类品种繁多，是当地居民的美好食材。
但多种淡水鱼类是复殖目吸虫发育的第二中间宿主，这些吸虫有着相似的生活史［1］。
成虫排出的虫卵经胆汁进入小肠后随粪便排出体外，虫卵入水后被第一中间宿主淡水螺吞食，在螺体内逐渐发育成毛蚴、胞蚴、雷蚴、尾蚴，尾蚴逸出在水中主动钻入鱼虾肌肉内，形成囊蚴。
人类及畜禽就因生食或半生食鱼虾肉内的活囊蚴，导致人和动物的吸虫病的发生。
淡水鱼感染的吸虫囊蚴主要有华支睾吸虫、东方次睾吸虫、台湾次睾吸虫、鸭对体吸虫囊蚴等[2]。
华支睾吸虫病是一种人畜共患病，成虫寄生在人和动物的肝胆管内，可引起原发性胆管性肝癌，胆管炎、胆囊胆管结石、胰腺炎等疾病［3］。
据林金祥等报道，东方次睾吸虫也可感染人，发育为成虫，引起人的腹痛、腹胀、食欲减退、肝区不适等类似华支睾吸虫病的症状，但主要寄生于鸭、鸡、野生候鸟、猫和狗等多种动物的胆囊和胆管内，引起胆囊高度肿大、胆囊和胆管壁增厚发硬，胆囊内出血、溃疡及小结节病变，胆管由于炎症组织增生堵塞、胆汁不能畅流引起食欲下降、体重减轻甚至死亡[4]，给人类健康和畜牧业的发展造成极大影响。
为了解鄱阳湖边城永修县菜市场小型餐条鱼体内吸虫囊蚴感染情况及种类进行调查，旨报导后提高居民对吸虫囊蚴认识，更好地防制患吸虫病的发生。
1.材料与方法1.1动物餐条鱼330尾（购于永修县菜市场来自不同水域的6个摊贩）。
1.2器械带测微尺内光源显微镜、数码相机、搪瓷方盘、眼科剪、眼科镊子、手术刀、载玻片、水果刀。
1.3分组将来自不同水域的6个摊贩出售的餐条鱼共分为6个组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ），每组餐条鱼尾数分别为45、70、50、60、45和60。
1.4鱼肉压片的制作分别将每组餐条鱼洗净放入6个搪瓷方盘中，水果刀去鳞，剪刀去头去尾，手术刀延餐条鱼侧线及顺延背鳍各深划一刀，撕皮，取背部两侧肌肉并分别截成3～5段，各段置载玻片中央，用另一载玻片复盖压片制薄待用。
转载自中国科技信息网
华支睾吸虫病是一种以肝胆病变为主的严重危害人民身体健康的食源性寄生虫病，且近年来在我国该病的发病率明显上升[1]。
珠江三角洲是我国华支睾吸虫的重度流行区，江门市作为珠江三角洲的核心地区，不但人群华支睾吸虫的感
染率较高、感染度也重[2]，它已成为该地区较严重的公共卫生问题。
华支睾吸虫的感染主要是由生食或半生食淡水鱼引起，因此，淡水鱼类感染水平是反应一个地区华支睾吸虫流行程度的重要指标。
为了解目前江门地区淡水鱼华支睾吸虫的感染情况，于2009-04从江门地区属于珠江三角洲的蓬江、新会和鹤山三个区（市）采集淡水鱼进行检查。
现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1 淡水鱼的采集在江门市的蓬江区、新会区和鹤山市三地鱼苗场和鱼塘采集鲩鱼和鳙鱼共770条，当天送回实验室, 立即进行检查。
1.1.2 试剂胃蛋白酶(国药集团化学试剂有限公司,酶活力≥1 200 U/g ,250g/瓶)，盐酸(广州化学试剂厂,分析纯)。
1.2 方法
1.2.1 囊蚴的检查将鱼去除头、鳞、骨和内脏，尽量取净鱼肉，将鱼肉剁碎(每条鱼为1 个样本)，置瓷盆中加入约10 倍体积的人工消化液(盐酸67.4 ml、胃蛋白酶50g，加蒸馏水至10 000ml)，用玻棒搅碎，将鱼肉悬液置37 ℃恒温箱静置12 h 以上，期间多次搅拌使其充分消化。
鱼肉消化物用60目铜筛过滤，除去粗渣，滤液冲洗到500 ml 的量杯内，补充自来水至500ml，静置15～20 min，倒去上层液体再加水至500 ml静置15～20 min，再倒去上层液体，如此重复数次，直至上层液体澄清为止。
弃去上清液，把留取的沉淀倒入玻璃培养皿中，用手持培养皿作回旋动作，使沉渣集中于培养皿中央，置双筒解剖镜下用细针拨开沉渣寻找并计数华支睾吸虫囊蚴。
1.2.2 动物感染用从上述淡水鱼中分离的囊蚴分别经灌胃感染SD大鼠30只，50个囊蚴/鼠。
约42d后剖杀大鼠检虫。
2 结果
2.1 淡水鱼总的感染情况在江门市的蓬江区、新会区和鹤山市三地共检查鲩鱼484条，其中232条检出华支睾吸虫囊蚴，该鱼感染率约为47.93%；合计检出囊蚴1 553个，阳性鱼平均感染度为6.69个/尾。
在蓬江区和新会区共检查鳙鱼(又名大头鱼)286条，其中45条检出华支睾吸虫囊蚴，该鱼感染率约为15.73%；合计检出囊蚴102个，阳性鱼平均感染度为2.27个/尾。
华支睾吸虫感染率，鲩鱼高于鳙鱼，差异有统计学意义（χ2=80.924，P <0.001）。
2.2 三区市间鲩鱼感染情况的比较蓬江区、新会区和鹤山市鲩鱼华支睾吸虫感染情况见表1。
三地区间鲩鱼感染率差异有统计学意义（χ2=217.997，P <0.001）。
鹤山市和蓬江区、鹤山市和新会区比较，鲩鱼华支睾吸虫感染率的差异均有统计学意义（χ2=199.538，150.13；P 均<0.001）。
而蓬江区和新会区的感染率差异无统计学意义（χ2=0.003，P >0.05）。
3 讨论
近年来陈结云、黄骥、刘晓丹、车玉传和梁宝方[3～7]等作者对珠江三角洲大部分地区的淡水鱼华支睾吸虫感染情况进行了调查。
而江门地区位于珠江三角洲西翼，属西江水系，气候温暖多雨，水面广阔，淡水鱼养殖业发达，且华支睾吸虫流行严重，但近年未见有江门市淡
鲩鱼和鳙鱼适生性强，在我国分布广泛，且被大量人工养殖。
它们也是江门地区最常见的食用淡水鱼种，还是制作“鱼生”的主要原料，与当地居民的华支睾吸虫感染密切相关。
此次调查结果显示：江门地区鲩鱼和鳙鱼华支睾吸虫囊蚴的感染率分别为47.93%和15.73%，与近年其他的调查结果[3～7]比较均属于中等水平。
其中，鲩鱼的感染率明显高于鳙鱼，提示鲩鱼是更易感的鱼种，这与其他报导[3～7]的结论基本一致。
而同一种鱼在江门地区的不同市（区）的感染率也可能有所不同，这与各采样地点间淡水鱼的饲养方式、华支睾吸虫卵对鱼塘周围环境的污染程度和鱼的大小等因素的差异有关。
而此次在鹤山市一渔场采集的鲩鱼华支睾吸虫感染率为0%，这种现象在该课题组以往的调查中从未见到，除了上述影响因素外，样本采集的偶然性更可能是较好的解释。
因此，将来有必要在鹤山市的不同地点收集更多的鲩鱼样本进行检查，方能获得较客观的结论。
调查结果可见江门市淡水鱼华支睾吸虫囊蚴感染情况较为严重，同时，结合当地人群感染率较高的实际，因此，应重视该病的防治工作，加强对鱼类养殖和销售的监管，开展广泛的卫生知识宣传教育，增强群众的卫生知识和自我保护意识。
