远芪口服液质量标准研究

远芪口服液质量标准研究

李养学;曾文雪;陈秋谷;林晓燕;毕晓黎;李素梅;胥爱丽

【摘 要】目的：建立远芪口服液的质量控制方法，为评价其质量的优劣提供实验依据。方法：采用薄层色谱（TLC）法对方中黄芪、石菖蒲、白芍、当归进行定性鉴别；采用高效液相色谱（HPLC）法测定细叶远志皂苷的含量。以Agilent HC-C18（4.6mm×250mm，5μm）为色谱柱；柱温25℃，以甲醇-0.05%磷酸为流动相，梯度洗脱；流速为1.0 mL/min，检测波长为210nm。结果：制剂中的黄芪、石菖蒲、白芍、当归具有鉴别特征，阴性无干扰。细叶远志皂苷在0.0955μg/μL~0.9549μg/μL范围内线性关系良好(r=0.9999)，平均回收率为101.05%，RSD=1.51%。结论：该方法简便，且准确度高、重现性良好，可用于远芪口服液的鉴别、质量评价与控制。

【期刊名称】《江西中医药》

【年(卷),期】2016(047)012

【总页数】4页(P60-63)

【关键词】远芪口服液;薄层色谱;高效液相色谱;质量标准

【作 者】李养学;曾文雪;陈秋谷;林晓燕;毕晓黎;李素梅;胥爱丽

【作者单位】广东省中医药工程技术研究院 广州 510095; 广东省中医药研究开发重点实验室 广州 510095;江西中医药大学 南昌 330004;广州中医药大学 广州

510405;广州中医药大学 广州 510405;广东省中医药工程技术研究院 广州

510095; 广东省中医药研究开发重点实验室 广州 510095;广东省中医药工程技术研究院 广州 510095; 广东省中医药研究开发重点实验室 广州 510095;广东省中医药工程技术研究院 广州 510095; 广东省中医药研究开发重点实验室 广州 510095

【正文语种】中 文

【中图分类】R286

远芪口服液是由远志、石菖蒲、黄芪、瓜蒌、当归、茯苓、白芍、珍珠母等八味中药组成，具有豁痰醒神、补气养血的功效，临床用于中风后气血两虚、痰蒙清窍证昏迷患者。经广东省第二中医院多年临床使用证实其疗效胜佳，广泛被患者所青睐，但一直没有完善的质量标准，缺乏定性鉴别和含量测定项目，为了保障其临床用药的有效性和安全性，本研究采用薄层色谱法（TLC），对方中所有药味进行了薄层色谱鉴别研究，最终将黄芪、石菖蒲、当归、白芍薄层色谱鉴别列入标准；采用高效液相色谱法（HPLC-PAD）测定了方中君药远志有效成分细叶远志皂苷的含量并列入标准。

1.1 仪器 Waters e2695型高效液相色谱仪（美国Waters公司，配置Waters

2489 DAD检测器，四元梯度泵，自动进样器，Empower Pro 色谱工作站）；超纯水机（MilliPore Advantage A10，美国）；十万分之一电子分析天平（METTLER TOLEDO XS205，瑞士）；数控超声波清洗器(KQ5200DE，昆山市超声仪器有限公司)；全自动薄层点样仪（CAMAG TLC SAMPlER 4，瑞士）；薄层成像系统（CAMAG TLC VISUALIZER，瑞士）；HH系列数显恒温水浴锅（金坛市科析仪器有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱（DHG-9070A，上海精宏实验设备有限公司）。

1.2 试药 远芪口服液（批号：20151001、20151002、20151003）由广东省第二中医院制剂室提供；远志对照药材（120710-201302）、黄芪对照药材（12974-201312）、石菖蒲对照药材（121098-201105）、当归对照药材（120820-201306）、白芍对照药材（121454-201211）、细叶远志皂苷对照品（111849-201504，含量以95.6％计）由中国食品药品检定研究院提供；含量测定用甲醇为色谱纯（Merck）、水为自制超纯水，其余试剂均为广州化学试剂厂分析纯。

2.1.1 黄芪的薄层鉴别 量取供试品溶液20mL，置分液漏斗，加30mL水饱和的正丁醇振摇提取，分取正丁醇液，重复2次，合并正丁醇液，用30mL氨试液洗涤，重复1次，分取正丁醇液，继续用正丁醇饱和的水30mL洗涤，重复2次，正丁醇液合并，蒸干，加1mL甲醇使溶解，即得黄芪供试品溶液。取1.5g黄芪对照药材，按黄芪供试品溶液制备方法制成黄芪对照药材溶液。按处方不加黄芪制成黄芪阴性对照样品，按照黄芪供试品溶液的制备方法，制成黄芪阴性对照溶液。分别精密吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照溶液各10μL，在同一硅胶G薄层板上点样，展开剂为正丁醇-乙酸乙酯-稀氨水（4∶1∶5）的上层溶液，同时在展开缸的对槽加等量浓氨水，饱和30min以上后展开，取出，晾干后均匀喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘箱中加热至斑点显色清晰。结果表明，远芪口服液供试品色谱中，在与黄芪对照药材色谱相对应的位置上，有相同颜色的斑点，且缺黄芪的阴性对照品在相应的位置上无斑点，见图1。

2.1.2 石菖蒲的薄层鉴别 量取供试品10mL，置分液漏斗，将溶液pH值用稀盐酸调至2～3，加20mL乙醚振摇提取，重复1次，乙醚提取液合并，挥干，加1mL甲醇使溶解，即得石菖蒲供试品溶液。取1.5g石菖蒲对照药材，按石菖蒲供试品溶液制备方法制成石菖蒲对照药材溶液。按处方不加石菖蒲制成石菖蒲阴性对照样品，按照石菖蒲供试品溶液的制备方法，制成石菖蒲阴性对照溶液。分别精密吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照溶液各5μL，在同一硅胶G薄层板上点样，展开剂为环己烷-乙酸乙酯（8∶3），展开，取出，晾干后放置约1h至斑点显色清晰，置于365nm紫外光灯下检视。远芪口服液供试品色谱中，在与石菖蒲对照药材色谱相应的位置上，有相同颜色的荧光斑点，且缺石菖蒲的阴性对照品在相应的位置上无荧光斑点，见图2。

2.1.3 当归的薄层鉴别 取2.1.2项下石菖蒲供试品溶液作为当归供试品溶液。取1g当归对照药材，同2.1.2项下石菖蒲供试品溶液制备方法制得当归对照药材溶液。按处方不加当归制成当归阴性对照样品，按照2.1.2项下石菖蒲供试品的制备方法，制成当归阴性对照溶液。分别精密吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照溶液各10μL，在同一硅胶G薄层板上点样，展开剂为环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（4∶1∶1∶0.1），展开，取出，晾干，置于365nm紫外光灯下检视。远芪口服液供试品色谱中，在与当归对照药材色谱相应的位置上，有相同颜色的荧光斑点，且缺当归的阴性对照品在相应的位置上无荧光斑点，见图3。

2.1.4 白芍的薄层鉴别 量取供试品10mL，通过D101型大孔吸附树脂柱（柱内经约1.5cm，柱高约10cm），用约100mL水洗脱，弃去洗脱液后继续用100mL20％乙醇再洗脱，收集20％乙醇的洗脱液，蒸干，加1mL甲醇使溶解，即得白芍供试品溶液。取1.0g白芍对照药材，按白芍供试品溶液制备方法制成白芍对照药材溶液。按处方不加白芍制成白芍阴性对照样品，按照白芍供试品的制备方法，制成白芍阴性对照溶液。分别精密吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照溶液各10μL，在同一硅胶G薄层板上点样，展开剂为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2），展开，取出，晾干后均匀喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃烘箱中加热至斑点显色清晰。结果表明，远芪口服液供试品色谱中，在与白芍对照药材色谱相对应的位置上，有相同颜色的斑点，且缺白芍的阴性对照品在相应的位置上无斑点，见图4。

2.1 含量测定［8-12］

2.2.1 色谱条件与系统适应性试验 十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱：Agilent HC-C18（250mm×4.6mm，5μm）；以甲醇-0.05％磷酸溶液（60∶40）为流动相；流速：1.0mL/min；检测波长：210nm；柱温：25℃；进样量：10μL。

2.2.2 对照品溶液的制备 取细叶远志皂苷对照品20.28mg，精密称定，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得每1mL含0.7755mg的细叶远志皂苷对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 量取供试品溶液（批号20151001）1mL，置50mL磨口锥形瓶中，

加入10％氢氧化钠溶液25mL，加热回流2h，滤过，滤液用盐酸调节pH值至4～5，用30mL水饱和的正丁醇振摇提取，分取正丁醇液，重复2次，合并正丁醇液，蒸干，加约5mL甲醇使溶解，转移至10mL量瓶中，加甲醇定容，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 阴性对照溶液的制备 取按处方工艺制备取缺远志的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法，制得远芪口服液远志阴性对照溶液。

2.2.5 系统专属性试验 取已制备好的对照品、供试品和阴性对照溶液，分别精密吸取10μL，照前述色谱条件测定。结果显示，细叶远志皂苷的出峰时间约为22min，在细叶远志皂苷的出峰位置，阴性对照无干扰，说明上述方法专属性较好，见图5。

2.2.6 线性关系考察 取已配制的对照品溶液（0.7755mg/μL），分别精密吸取1,2,3,4,5,6mL，置10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得不同浓度的对照品溶液，浓度分别为77.55,155.01,232. 65,310.20,387.75,465.30μg/mL。分别精密吸取已配制的各浓度的对照品溶液各10μL，照照前述色谱条件测定，读取色谱峰峰面积。以细叶远志皂苷的峰面积为纵坐标（Y）、细叶远志皂苷的进样量为横坐标（X）进行线性回归计算，结果回归方程为Y=341000X-27500，r=0.9999（n=6），表明细叶远志皂苷在0.7755μg～4.653μg范围内呈良好的线性关系。

2.2.7 精密度试验 吸取已制备好的供试品溶液(20151001)10μL，照“色谱条件与系统适应性试验”条件测定，依次进样，重复6次，记录细叶远志皂苷峰面积，计算其峰面积RSD值为0.39％，表明该液相色谱仪精密度良好。

2.2.8 稳定性实验 取远芪口服液供试品（批号20151001）1份， 按前述供试品溶液的制备方法制得供试品溶液，分别于0,3,6,9,12,15h进样，照“色谱条件与系统适应性试验”条件测定，读取细叶远志皂苷峰面积，结果其峰面积RSD值为0.58％，结果表明，15h内，按前述方法制备的供试品溶液稳定性良好。

2.2.9 重复性试验 取远芪口服液供试品（20151001），分别取6份，每份1mL，精密量取，按前述供试品溶液的制备方法制得供试品溶液，照“色谱条件与系统适应性试验”条件进行测定，根据标准曲线计算供试品中细叶远志皂苷的含量。结果细叶远志皂苷平均含量为1.5868mg/mL，RSD值为0.62％，表明该测定方法重复性较好。

2.2.10 加样回收率试验 取已知含量（1.5868mg/mL）的供试品（批号20151001）9份，每份0.5mL，精密量取，分为三组，每组分别加入对照品0.3875mg,0.7755mg和1.1633mg，按前述供试品溶液的制备方法制得样品溶液，照“色谱条件与系统适应性试验”条件进行测定，根据标准曲线计算样品中细叶远志皂苷的含量，计算加样回收率，见表1。