红芪片质量标准研究

红芪片质量标准研究

何悦;肖会敏;李予蓉;谢艳华;王四旺

【摘 要】Objective To establish and study the quality standard for Hongqi

Tablets .Methods Astragaloside ,Astragalus mong-holicus and Hippophae

rhamnoides in the preparation were identified by TLC ,respectively .The

content of salidroside in the preparation was determined by HPLC .Results

The TLC of astragaloside ,Astragalus mongholicus and Hippophae

rhamnoides showed good specificity .Salidroside regression equation was

y=2 291 627x+13 360 and r=0 .999 9 in the concentration range of 0 .064-0 .960 mg · mL -1 .The average recovery was 98 .5% ,and its RSD was

0 .7% .Conclusion The standard can be used for the preparation quality

control .%目的建立红芪片的质量标准。方法采用TLC法对制剂中黄芪甲苷、黄芪与沙棘药材进行薄层鉴别；采用 HPLC法测定制剂中红景天苷的含量。结果黄芪甲苷、黄芪与沙棘药材的薄层鉴别具有较好的专属性；红景天苷的回归方程：y＝2291627 x＋13360，r＝0．9999，线性范围为0．064～0．960 mg · mL -1；平均回收率为98．5％，RSD值为0．7％。结论所建立的标准可用于该制剂的质量控制。

【期刊名称】《西北药学杂志》

【年(卷),期】2013(000)005

【总页数】4页(P466-469)

【关键词】红芪片;质量标准;薄层色谱法;高效液相色谱法 【作 者】何悦;肖会敏;李予蓉;谢艳华;王四旺

【作者单位】第四军医大学药物研究所，西安 710032;第四军医大学药物研究所，西安 710032;第四军医大学放射医学教研室，西安 710032;第四军医大学药物研究所，西安 710032;第四军医大学药物研究所，西安 710032

【正文语种】中 文

【中图分类】R927

红芪片主要由红景天、黄芪、沙棘等药材组成。红景天具有治疗心血管疾病、增强机体免疫力、抗辐射、抗应激反应、抗疲劳、抗衰老等药理作用，其主要活性成分为红景天苷等[1-2]。黄芪具有强心、抗心律失常、调节血压、利尿、增强机体免疫功能等多种作用，其主要成分为皂苷类等[3-5]。沙棘中主要含黄酮类化合物(主要为槲皮素、异鼠李素)、多种维生素、沙棘油、脂肪酸，以及丰富的蛋白质和氨基酸等，主要用于咳嗽痰多、消化不良、食积腹痛、瘀血经闭、跌扑瘀肿等[6-7]。对红景天、黄芪、沙棘等采用醇提制成薄膜衣片，为了保证制剂的疗效，对该制剂进行了质量标准的研究。

1.1 仪器 美国Waters高效液相色谱仪(2695分离单元，2996检测器，Empower色谱工作站，配自动进样器)； R 200 D电子分析天平(德国Satorius公司)；超声波清洗器(SK 250 LHC，上海科导超声仪器有限公司)。

1.2 试药 红景天苷对照品(批号110852-200511)、黄芪甲苷对照品(批号110781-200613)、异鼠李素对照品(批号110860-200805)、槲皮素对照品(批号100081-200806)、黄芪对照药材(批号120974-200609)，均购自中国食品药品生物制品检定研究院；红芪片(批号20090905，20090915，20090925，第四军医大学药物研究所研制)。 2.1 黄芪甲苷的薄层鉴别[8] 取本品10片，除去薄膜衣，研细；称取粉末3 g，加甲醇20 mL，加热回流1 h，滤过；滤液加于中性氧化铝柱(100～120目，5 g，内径10～15 mm)上，用体积分数40%甲醇100 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干；残渣加水30 mL使溶解，用水饱和的正丁醇20 mL振摇提取2次，合并正丁醇液；分别用20 mL水洗涤2次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5 mL使溶解，作为供试品溶液；同法制备阴性样品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成质量浓度为1 mg·mL-1对照品溶液。吸取上述3种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以100 mL·L-1硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；紫外光灯(365 nm)下显相同的橙黄色荧光斑点。

2.2 黄芪药材的薄层鉴别[8] 取本品10片，除去薄膜衣，研细；称取粉末2 g，加乙醇30 mL，加热回流20 min，滤过，滤液蒸干；残渣加3 g·L-1氢氧化钠溶液15 mL使溶解，滤过；滤液用稀盐酸调节pH值至5～6，用乙酸乙酯15 mL振摇提取，分取乙酸乙酯液，用铺有适量无水硫酸钠的滤纸滤过，滤液蒸干；残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品溶液。同法制成阴性样品溶液。另取黄芪对照药材2.0 g，同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(10∶1)作为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点。

2.3 沙棘的薄层鉴别[8] 取本品10片，除去薄膜衣，研细；取粉末2 g。置于具塞锥形瓶中，精密加入乙醇100 mL，称定质量，加热回流1 h，放冷，再称定质量，用乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过；精密量取续滤液25 mL，置于具塞锥形瓶中，加盐酸3.5 mL，在水浴(75 ℃)中加热水解1 h，立即冷却；转移至50 mL量瓶中，用适量乙醇洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀；量取30 mL，浓缩至约5 mL，加水25 mL，用乙酸乙酯20 mL提取2次，合并乙酸乙酯液，蒸干；残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。同法制备阴性样品溶液。另取异鼠李素对照品、槲皮素对照品，加甲醇制成质量浓度分别为1 mg·mL-1的混合对照品溶液。吸取上述3种溶液各1 μL，分别点于同一含30 g·L-1醋酸钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2.4 红景天苷的含量测定[8]

2.4.1 色谱条件 C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以甲醇-水(15∶85)为流动相；检测波长为275 nm；流速为1.0 mL·min-1；进样量为10 μL。理论板数按红景天苷峰计算应不低于1 500。

2.4.2 对照品储备溶液的配制 精密称取红景天苷对照品16.00 mg，置于5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，作为对照品储备溶液。

2.4.3 供试品溶液与阴性样品溶液的制备 取本品10片，除去薄膜衣，研细；称取粉末2.0 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 mL，密塞，摇匀，称定质量；超声处理30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。依法制备阴性样品溶液。

2.4.4 线性关系考察 分别精密量取储备溶液0.04，0.10，0.25，0.50和0.60 mL，置于2 mL量瓶中，加甲醇至刻度，质量浓度分别为0.064，0.160，0.400，0.800和0.960 mg·mL-1，分别进样测定。以红景天苷的峰面积(y)对红景天苷的质量浓度(x)做线性回归，得方程：y=2 291 627x+13 360，相关系数r=0.999 9，说明红景天苷的质量浓度在0.064～0.960 mg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系。 2.4.5 精密度实验 取对照品溶液(质量浓度为0.400 mg·mL-1)连续进样6次，测定峰面积积分值。红景天苷的峰面积的RSD值为0.39%。

2.4.6 稳定性实验 取对照品溶液(质量浓度为0.400 mg·mL-1)及供试品溶液(批号20091215)，每间隔一定时间进样1次，红景天苷的峰面积的RSD值分别为0.43%和0.17%，结果表明，红景天苷峰值在12 h内稳定。

2.4.7 重复性实验 按照供试品溶液(批号20091215) 方法操作，分别制备6份供试品，按2.4.1项进行测定。结果红景天苷平均含量为0.16%，RSD值为0.58%。

2.4.8 加样回收率实验 按照供试品溶液(批号20091215，0.16%)方法操作制备，添加对照品，按上述色谱条件进行测定，结果见表1，结果表明本法具有良好的回收率。

2.4.9 红芪片样品测定 取本品10片，除去薄膜衣，研细，称取粉末2.0 g，精密称定，按2.4.3项下制备供试品溶液，按2.4.1项下条件进样分析。结果见表2和图1。

3.1 TLC鉴别 参考文献方法[8]，对红芪片中黄芪甲苷的定性鉴别，使用三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，Rf值在0.5～1.0之间，检出特征斑点，阴性样品对照无干扰，故专属性强，作为本品定性检测指标。对红芪片中黄芪药材的定性鉴别，使用三氯甲烷-甲醇(10∶1)时，Rf值在0.5～1.0之间，检出特征斑点，阴性样品对照无干扰，所以可作为本品定性检测指标。对红芪片中沙棘的定性鉴别，使用甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)为展开剂时，Rf值在0.5～1.0之间，检出特征斑点，阴性样品对照无干扰，鉴于其专属性强，故作为本品定性检测指标，列入质量标准。

3.2 红景天苷的含量测定 参考文献方法[8]，使用流动相甲醇-水(10∶90与20∶80)时，红景天苷与其他物质分离度小，且理论板数小于1 500；使用流动相甲醇-水(15∶85) 时，分离度大于1.5，理论板数大于1 500，且阴性无干扰。因此，可以用作本品定量检测指标，列入质量标准。

本实验既对臣药黄芪及其主要成分黄芪甲苷、沙棘进行了定性研究，又对制剂中君药红景天主要成分红景天苷进行了定量研究，良好地控制了制剂质量，可作为该制剂的质量标准。

【相关文献】

[1] 苑伟，李士博，马迎春，等. 红景天纳米粉对小鼠抗缺氧和抗疲劳作用的实验研究[J]. 西北药学杂志, 2011，26(2):122-123.

[2] 刘孟华，李沛波，苏薇薇. 红景天化学成分及其药理作用研究进展[J]. 中南药学，2006，4(6):463-466.