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输血科疑难交叉配血试验标准操作规程1.目的为规范疑难交叉配血试验操作，保证临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7(2)条款的要求制定本规程。
2.适用范围适用于医疗机构输血科对临床疑难交叉配血受血者，主要是对红细胞ABO血型鉴定困难、红细胞不规则抗体筛选阳性及自身免疫性溶血性贫血(AlHA)患者的交叉配血试验。
3.职责医疗机构输血科技术人员负责疑难交叉配血试验。
4.原理本规程中疑难交叉配血是指受血者ABO血型鉴定困难、红细胞不规则抗体筛选阳性或受血者是自身免疫性溶血性贫血患者等情况下的交叉配血试验。
配血前需确定受血者的ABO血型或红细胞不规则抗体的特异性,选择ABO血型相容的红细胞或红细胞不规则抗体对应抗原阴性的红细胞进行交叉配血试验。
5.所需设备和试剂普通离心机，血型血清学专用离心机，水浴震荡仪，普通显微镜等。
6.检测环境条件室温应控制在18-27°C,湿度应保持30%-70%°7.步骤与方法7.1交叉配血前受血者ABO血型鉴定不确定者执行《ABO疑难血型鉴定标准操作规程》，确定ABO血型后，再选择ABO血型相同或相容的献血者血液进行交叉配血试验。
7.2红细胞不规则抗体筛选阳性时7.2.1随机与库存血中多袋血液进行交叉配血试验，选择交叉配血相合的血液输注。
7.2.2我院库存血中无相合的血液时，应立即联系临床医生说明情况：①上述实际情况；②应送市血液中心进行“疑难配血”，会产生费用，存在配血不成功的可能：③详细告知家属，决定是否送市血液中心。
7.2.3家属同意后，由医生填写“免疫学申请单”，并抽取血样EDTA抗凝血5-10ml,送输血科。
7.2.4输血科联系血液中心，并送血样。
7.3冷型自身抗体或冷型AIHA患者交叉配血试验：执行7.2.2-7.2.4程序8.交叉配血结果判定主侧、次侧交叉配血均无溶血、无凝集，表示配血相合。
对于AlHA患者，已经排除同种抗体的存在，而所有交叉配血又都不相和时，可选择凝集强度弱于自身凝集的血液输注。
输血前检测管理制度为确保我院患者输血治疗的及时和安全，依据《医疗机构临床用血管理办法》、《临床输血技术规范》和《医院临床输血管理制度》，制定符合我院的输血前检测管理制度。
凡新入院患者，除确定住院期间不输血外，必须提前进行输血前各项相关检查，包括血型（ABO、RhD系统）鉴定、不规则抗体筛查、输血前传染性指标检查及血常规，出血病人根据病情做凝血检查。
1血常规检查结果作为是输血前评估及选择输血成份的客观依据。
2输血前检查血型（ABO、RhD系统）鉴定、不规则抗体筛查的标本和备血标本不能同时抽取（急诊用血除外）。
目的：2.1杜绝各种原因（如抽错标本等）导致的血型差错、提高输血安全性（备血标本血型检测结果与输血前血型检测结果核对及时发现错误）。
2.2保证Rh（D）阴性等稀有血型及时预约（中心血站Rh阴性等稀有血型的血制品库存很少或无）。
2.3不规则抗体筛查阳性时血站或输血科有时间给患者筛选出交叉配血相符的血制剂，留存给该患者使用。
3输血前传染病检查（乙肝五项、丙肝抗体、梅毒抗体、艾滋病抗体），并将结果填写到输血治疗同意书及输血申请单上。
门诊病人每次输血都应进行输血前传染病检查。
急诊用血先留取受血者血样，用血后及时将检查结果记录输血治疗同意书并存入病历。
输血前感染筛查不能以快速检测结果为准。
病人拒绝做检查的，在“输血治疗知情同意书”上亲笔写“拒绝做输血前检查，一切后果自负”并签字，以防日后发生医疗纠纷。
4输血科接收到输血申请单和患者血样本后，进行输血前相容性检测。
检测项目包括ＡＢＯ正反定型、ＲｈＤ定型、交叉配血试验。
交叉配血必须采用能检查不完全抗体的实验方法（凝聚胺法或抗人球蛋白法）。
5每次交叉配血前必须复查患者备血标本和献血者的血型，费用由患者承担。
前后血型结果不一致者，不得使用该备血标本进行交叉配血试验，立即通知相关科室负责人，必须重新抽血标本复查血型，并记录在《输血科复查血型与初检血型不符记录表》。
输血前检查的内容和目的输血前检查是确保血液安全的重要步骤，它涉及到一系列严格的测试和筛查，旨在预防潜在的输血反应和传播疾病的风险。
本文将详细介绍输血前检查的内容、目的以及其重要性。
一、输血前检查的内容输血前检查主要包括以下几项内容：1. 血型鉴定：确定受血者的血型，确保供血者的血液与受血者的血型相容，以避免发生严重的输血反应。
2. 血红蛋白浓度测定：评估受血者的贫血状况，确定是否需要进行输血。
3. 血清学检测：检测受血者是否存在针对特定病原体的抗体，如梅毒、肝炎、艾滋病等，以避免疾病通过输血传播。
4. 病毒核酸检测：通过检测血液中的病毒核酸，确定是否存在如乙肝、丙肝、艾滋病等病毒，以便及时发现并处理。
5. 交叉配血试验：确保供血者的血液与受血者的血液相容，预防因血型不匹配导致的输血反应。
二、输血前检查的目的输血前检查的目的是确保血液安全和患者的健康。
通过这些检查，医生可以了解受血者的身体状况，评估其是否适合接受输血，并选择合适的血液制品。
此外，输血前检查还可以发现潜在的传染病，避免疾病的传播，保障患者的权益和安全。
三、输血前检查的重要性输血前检查对于保障患者的生命安全具有重要意义。
首先，严格的输血前检查可以确保血液的安全性，避免因输血而引发的疾病传播。
其次，通过输血前检查，医生可以了解受血者的身体状况，为其提供更加个性化的治疗方案。
最后，输血前检查还可以提高医疗机构的声誉和患者的信任度，有利于医疗工作的顺利开展。
总之，输血前检查是确保血液安全和患者健康的关键环节。
通过严格实施输血前检查，我们可以为患者提供更加安全、有效的医疗服务，预防和减少因输血引发的疾病传播和不良反应。
因此，医疗机构应重视输血前检查工作，严格遵守相关规定和操作流程，确保患者的生命安全和权益。
临床输血前免疫血液学检查————————————————————————————————作者: ————————————————————————————————日期:ﻩ临床输血前免疫血液学检查一、输血前检查的目的和要求输血前检查的目的是选择与患者血型配合的各种血液成分,使之能在患者体内有效地存活,无不良反应,从而达到安全、有效输血的目的。
二、输血前检查的内容输血前检查的内容包括如下几个方面：１.患者的病史和标本等的检查、核对及处理。
2.受血者、献血者AＢO和Rh血型鉴定。
３.不规则抗体的筛选和鉴定。
4.交叉配合试验。
5．血小板输注前的抗体检查和配合试验。
6.交叉配血结果的报告和发血。
(一）受血者的病史和标本等检查、核对及处理1.病史资料和信息受血者的有关资料,包括受血：者姓名、年龄、性别、床号、种族、临床诊断、输血史、药物史、妊娠史,特别是以往输血反应的记录等等,有助于解决有可能出现的血清学问题。
2.标本的要求要求不超过３天的期限,反复输血的受血者更应注意抽取新的标本作配血试验,避免因回忆反应而产生的抗体漏检。
如果患者使用肝素治疗,则应用鱼精蛋白,使标本凝结。
如果患者使用右旋糖酐等治疗，应注意将红细胞作洗涤。
（二）受血者和供血者ＡBO和Rh定型1.ＡＢO定型最适的反应温度为4℃，但在室温反应良好,所以常规的ＡBＯ定型试验仅在室温进行。
(1）定型方法:正、反定型的试管离心方法目前仍被认为是最可信赖的ABO定型方法。
１)定型试剂:有些AＢO血型诊断试剂是以人的血清汇聚而制成的，但必须具备以下条件:第一，高效价(1:128）的ＩgM抗A或抗Ｂ。
第二，具较好的亲和性并不含冷凝集素。
第三,必需具有检测A2，Ａ2B血型的能力。
第四，血清必须通过HIＶ，HＣＶ,HBV等检查或经病毒灭活。
另外一些ABO定型试剂是由来自培养细胞株的单克隆抗体所制成。
2）ＡBO亚型的鉴定:ABＯ亚型的鉴定通常使用下列试剂:抗A、抗B、抗Ａ1、抗Ｈ、抗AIＡ1红细胞、Ａ２红细胞、B型红细胞和O型红细胞。
意外抗体的鉴定在疑难配血中的重要作用摘要：目的鉴定输血患者血清中的意外抗体，提高交叉配血相合率和临床输血安全性。
方法用盐水介质直接离心法、LISS／Coomba卡、经典抗人球方法对870份抗体筛选阳性的血液样本进行抗体鉴定。
结果488份血清中仅有特异性同种抗体，主要为Rh系统抗体300份（61.5%）。
MNS系统抗体104份（21.3%），其中抗-E抗体占Rh系统抗体的73%；382份血清中仅有自身抗体或同时存在同种抗体。
结论抗体鉴定能提高临床配血的相合率，保障输血及时、安全、有效。
关键词：意外抗体；自身抗体；抗体鉴定；交叉配血一、材料与方法1.样本来源：本组血液样本870份，均为鸡西市各医院送检到我室进行疑难配血且抗体筛选阳性的血液样本。
2.仪器与试剂：筛选细胞、谱细胞、抗人球蛋白试剂（anti—IgG）、抗-C、抗-c、抗-D、抗-E、抗-e、抗-M、抗-N、抗-S、抗-s、抗-Pl、抗-Lea、抗-Leb、抗-Jka、抗-Jkb、抗-Fya、抗-Fyb。
由美国immucor公司提供。
LISS／Coombs 卡由达亚美公司提供；日本久保田KA-2200型离心机、血型配血微量定型系统（Di-aMedID-Incubator37SⅠ，ID-Centifuge12SⅡ）、SB-HW-Ⅳ型电热恒温水温箱（北京市医疗设备厂）。
3.方法：采用盐水介质离心法鉴定患者的IgM抗体，采用LISS/Coombs卡、经典抗人球法检测患者的IgG抗体。
二、结果1.意外抗体分布本组488份血清中仅有同种抗体，382份血清中仅有自身抗体或同时存在同种抗体。
仅有同种抗体的488份样本中，抗体特异性为Rh系统抗体300份，占61.5%；MNS系统抗体104份，占21.3%；Lewis系统抗体30份，占6.15%；Kidd系统抗体18份，占3.69%；Duffy系统抗体6份，占1.23%；P系统抗体4份，占0.82%；Ii系统抗体2份，占0.41%；其他24份标本中含有2个或2个以上系统的抗体占4.92%。
输血前免疫血液学检查---疑难配血血液标本的采集及准备1. 输血申请单：必须含有病人、住院号、床号及负责医师的签名。
还应包含申请日期、用血原因及时间、用血种类及数量；年龄、性别、种族、疾病诊断、输血史、妊娠史、输血反应史、有无不规则抗体及血型等。
2. 受血者血样：①认真核对后，方可采集；②血液标本必须收集到有正确标记的带塞子的试管里，且标明病人、住院号、采集日期及采集者；③血液标本应是不抗凝血，以避免纤维蛋白、抗凝剂成分对血清学试验的干扰；④溶血或混入静脉输注液体而致标本稀释的血液标本不得使用；⑤须用输血前3天以采集的血液标本；⑥输血后，病人的血液标本须在4℃至少保存7天，以备重复试验。
⑦用右旋糖酐、聚乙酰吡咯酮（PVP）等大分子物质治疗后采集的血标本（如已标记说明应将红细胞洗涤）。
脂肪乳可干扰配血实验结果，在输用脂肪乳之前应抽取血标本备用3. 献血员血样：①从血袋上附着的血样小辫获得献血员血液标本；②在标本收集管上粘贴血袋上有关血液制品号的条形码标签；③准确核对血袋上及标本管上的。
血清学试验一、受血者试验（一）血型鉴定1. ABO血型鉴定：⑴常规鉴定：①正定型：用抗－A抗－B试剂检测受血者红细胞。
②反定型：用A和B型试剂红细胞检测血清中的抗体。
人ABO血型是由红细胞的抗原和血浆／血清中的抗体所决定，因此正反定型的结果应该一致。
表1 常规ABO正反定型试验正定型反定型血型抗－A 抗－B A BO 0 + + 0＋0 0 + A0 ＋+ 0 B＋＋0 0 AB⑵如果正反定型不一致，则需进一步鉴定。
可在正定型试验中增加抗－A1、抗－AB及抗－H，反定型试验中增加A2、O及自身红细胞。
表2 疑难ABO正反定型试验正定型反定型自身对照抗-A 抗-B 抗-AB 抗-AA1 A2 B O抗-H正定型试验中的抗－AB是用来确认弱A和弱B抗原，抗－A1用于鉴定A亚型，抗－H用于鉴定亚型及孟买型。
反定型试验中的A2细胞是用于鉴定A2亚型。
O细胞用于鉴定是否存在ABO系统以外的同种抗体影响定型，自身对照用于是否存在自身抗体影响定型，如果与O细胞或自身对照为阳性，则定型结果不可靠，必须进一步进行血型鉴定。
⑶如果无法找到正反定型不一致的原因，则只能给病人输注O型红细胞，病人血型可请血液中心血型参比试验室协助鉴定。
⑷ ABO定型不一致的原因：Ⅰ、反定型试验出现弱反应或缺失抗体：新生儿；老人；低球蛋白症的白血病人或淋巴瘤病人（恶性）；使用免疫抑制剂而致低球蛋白的病人；先天丙球缺乏的病人；免疫缺陷者；骨髓移植病人；双胞胎嵌合体。
Ⅱ、弱反应或缺失抗原：A亚型、B亚型或AB亚型；白血病导致A或B抗原减弱，何杰金病有时会抑制抗原表达，与白血病类似；某种疾病（如腹腔癌、胰腺癌）导致血浆中存在大量的型物质，中和抗－A或抗－B抗体，引起正定型为假阴性或弱阳性；洗涤红细胞可解决此问题；获得性B；抗－A或抗－B试剂中存在低频抗原的抗体。
Ⅲ、蛋白或血浆不正常引起的正反定型不符：某些疾病导致球蛋白水平增高引起缗钱状凝集，纤维蛋白原水平的增高也会引起缗钱状凝集，导致假阳性凝集；洗涤红细胞血浆增溶剂（葡聚糖、PVP）也会引起缗钱状凝集。
Ⅳ、其他原因引起的正反定型不符：多凝集：当病人感染细菌或病毒后，病毒或细菌产生的酶使红细胞上掩蔽的T 抗原暴露激活，由于正常人血清中都含有抗－T抗体，因此可与正常人血清产生凝集反应，正定型试验假阳性；冷自身抗体引起的自家凝集反应，正反定型均可出现假阳性；DAT及IAT均阳性。
存在ABO系统的意外抗体，如A2或A2B个体血清中可能存在天然抗－A1，导致反定型试验多出抗体；被检者血清中存在ABO系统以外的同种抗体，反定型时出现假阳性反应；非抗－A及抗－B的抗体与相应抗原形成复合体吸附在红细胞表面，引起正定型非特异性凝集，如抗－B的染料吖啶黄。
2. Rh（D）血型鉴定：⑴ Rh(D)抗原检测原则：①对受血者常规一般只测Rh(D)抗原，而对献血员不仅要检查Rh(D)抗原，并在其为阴性的前提下必须进一步确定是否为弱Rh(D)（即D U）。
② Rh(D)阴性及弱D的受血者只能提供Rh(D)阴性血，不得使用D阳性及弱D的血。
即弱D针对受血者而言为D阴性，而对于供血者而言则为D阳性。
③对直接抗人球蛋白试验阳性的Rh(D)阴性红细胞进行Rh(D)定型时，易引起假阳性反应，因此必须按照试剂生产商的试剂使用说明书要求，增加对照试验。
⑵ Rh（D）抗原检测方法：①试管法；②微柱凝胶法。
（二）、不规则抗体的检测和鉴定：1. 血型不规则抗体检测：必须对有输血史、妊娠史或短期需要接受多次输血者及交叉配血不合者进行抗体筛选试验。
⑴抗体筛选的重要性：有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，并可以在配血前鉴定此意外抗体，获得充足的时间来选择缺少相应抗原的相配合的血，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者病情的延误。
⑵抗体筛选用试剂红细胞：①试剂红细胞必须含有下列抗原：D,C,E,c,e,M,N,S,s,P1,Lea,Leb,K,k,Fya,Fyb,Jka,和Jkb②目前已商品化的试剂红细胞有两种，分别为双人份细胞和三人份细胞组。
两组细胞抗原分布图Rh-Hr Kell Duffy Kidd Lewis P MN Lutheran X g donor D C c E e K k Fya Fyb J ka Jkb L ea Leb P1 M N S s L ua Lub XgaⅠR1R1 + + 0 0 + + + + 0 ＋＋0 + 0 + +++0 + ＋ⅡR2R2 + 0 + + 0 0 + ＋＋＋0 + 0 ＋+ 0 ++ + + 0三组细胞抗原分布图Rh-Hr Kell D uffy K idd L ewis P MN Lutheran X gdonor D C c E e K k FyaFybJkaJkbLeaLebP1 M NSsLuaLubXga1 R1R1 + + 0 0 + + + + 0 0 + 0 + ＋+++0 0 + 02 R2R2 + 0 + + 0 0 + + + + + + 0 ＋0+0+ 0 + +3 rr 0 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 ＋+00+ 0 + +③试剂红细胞是保存在保存液中，一旦用生理盐水或Liss液洗涤后则应该在24小时使用，否则会因污染、抗原丢失导致试验错误。
⑶抗体筛选技术：①技术要求：尽可能多的检测出有临床意义的抗体。
尽可能少的检测出无临床意义的抗体。
尽可能快的完成抗体检测。
②方法选择：每种方法都有自己的特点，适应于不同围及情况。
立即离心盐水试验技术：可以用于检测干扰ABO定型的盐水反应活性抗体，但此方法会检查出无临床意义的抗体，如冷凝集素抗－I及抗－IH等。
但漏检IgG 性质的抗体。
Liss－间接抗人球技术（Liss-IAT）：此方法可以有效的用于检测不规则抗体(IgG性质)，目前市场上见到的微胶柱方法都是Liss-IAT的方法，如澳斯邦(AusBio)的博唯优(BioVue)、达亚美(DiaMed)的ID-卡，以及Immucol的Capture 技术也是Liss-IAT方法。
此方法缺点是无法排除无临床意义抗体的干扰。
酶试验（菠萝酶或木瓜酶）：很少用于输血前检查中的抗体检测，因为酶方法会破坏一些红细胞抗原，如M，N，S，Fya和Fyb, 但酶技术可以增强Rh及Kell 系统的抗体检测。
主要用于MNSs系统的抗体鉴定。
低离子聚凝胺技术（LIP-IAT）：所需试验时间少（3～5分钟）、方法灵敏度高，但由于反应温度为室温，因此无法排除无临床意义抗体的干扰（尤其是室温盐水反应性抗体）。
聚乙二醇-间接抗人球方法（PEG-IAT）:PEG-IAT是很灵敏且有效的检测抗体的方法，可以提高反应的强度，同时此方法可以有效的避免无临床意义抗体的干扰。
⑷自身对照：即使用病人自己的血清和自己红细胞进行抗体检测，有助于确定抗体筛选阳性结果是同种抗体还是自身抗体、或是缗钱引起。
2. 抗体鉴定：在病人血清不规则抗体检查为阳性时，且时间允许的情况下，在交叉配血之前，应该可以进行简单的抗体鉴定试验，确定抗体的特异性，会有助于选择无对应抗原的相合血。
如抗－cE抗体在人群中的相合率为30%。
二、供血者检测从供血中心获得的血液，交叉配血前须进行ABO定型，对于Rh（D）阴性的血液还需确认其非弱Ｄ型，并把检测结果与血袋上的标识相比较，确保一致。
交叉配血一、血液的选择（一）、血型：1、ABO 系统：①全血：必须选择同样血型的全血。
②成分血：选择血型相配的血。
病人血型相合的血浆相合全血相合的红细胞0 0 0,A,B,AB 0Ａ0，A A,AB AＢ0,B B,AB BＡＢ0,A,B,AB AB AB2、Rh系统:①Rh(D)阳性患者可以选择阳性血及阴性血。
②Rh(D)阴性及弱Ｄ患者只能选择Rh(D)阴性血。
3、其他系统：对于已经明确抗体特异性的病人，则应选择缺乏相应抗原的血液。
（二）、储存时间：一般来说，首先使用较旧的血，但以下情况属于例外，需用新鲜血。
1、病人将接受大量的血液（超过自身总血量）。
2、新生儿换血及婴幼儿输血（病人本身血容量小，而用血量又大）。
3、接受定期输血的病人（如地中海贫血病人、肾透析病人、再障病人），使输血间隔时间延长。
（三）、新生儿换血的血液选择：1、Rh(D)新生儿溶血病，选择Rh(D)阴性ABO血型与婴儿和母亲相配合，或O型Rh(D)阴性的洗涤红细胞及AB型血浆，用母血清进行交叉配血。
2、ABO新生儿溶血病，选择ABO血型与婴儿及母亲相配合的且Rh血型与婴儿相同的红细胞及AB型血浆组成的血液使用。
3、其他任何新生儿溶血，选择不含特异性抗体所对应抗原的ABO系统与婴儿相同的血输注。
新生儿溶血病换血用的ABO系统血型相合红细胞选择婴儿血型母血型供血者血型0 0,A,B 0A 0,B 0 A,AB A,0B 0,A 0 B,AB B,0AB0 0A A,0B B,0AB AB,A,B,0二、交叉配血：交叉配血有两个重要作用，其一是确认供血者及受血者的ABO 血型的相合性，其二是可检测出受血者血清中不规则抗体，此抗体可能在抗体筛选试验中由于筛选试剂红细胞缺乏相应抗原而漏检。
（一）主侧交叉及次侧交叉试验：1、主侧交叉：由病人血清及供血者红细胞组成次侧交叉：由病人红细胞及供血者血清组成（由于我市尚未对供血者进行抗体筛选，因此次侧交叉是非常必要的）。
自身对照：病人自身血清及病人自身红细胞组成，自身对照有助于分析解释交叉配血试验中出现的阳性结果。
2、常规配血技术：选择的技术不仅要能检查出不配合的IgM抗体，还必须能检查出尽可能多的不配合的IgG抗体。
最大限度的减少抗体的漏检。
