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发酵豆粕脲酶活性、胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原的测定研究彭辉才1粱明振1’张宏福2(1广西大学动物科技学院,广西南宁530005;2北京畜牧兽医研究所营养学国家重点实验室, 北京海淀区100094摘要:豆粕中最主要的抗营养因子是胰蛋白酶抑制因子、凝集素和大豆抗原;本试验对8种发酵豆粕进行测定,前两者含量极低未检出。
用SDS-PAGE凝胶电泳定性检测大豆抗原中的B一伴大豆球蛋白(B--Conglycinin和大豆球蛋白(Glycinin,6种条带模糊,抗原消失,结果表明,生物发酵是一种有效的钝化抗营养因子的方法。
关健词:胰蛋白酶抑制因子凝集素13一伴大豆球蛋白大豆球蛋白测定发酵豆粕指是通过现代生物发酵技术对原料豆粕进行发酵处理后的产物。
发酵过程中可产生蛋白酶、非淀粉多糖酶和植酸酶等多种酶活,其目的就是消除抗营养因子,把大分子量的大豆蛋白质分解为多肽、寡肽、小肽,从而增加水溶性,提高消化率,利于动物消化吸收。
这些酶把纤维类物质分解为糖,部分糖被转化为乳酸,并产生大量有益微生物,使豆粕转化成高营养价值的功能性饲料。
发酵豆柏可替代日粮中血浆蛋白粉、鱼粉、肠膜蛋白和乳清粉等动物性饲料原料,可替代日粮中控制腹泻的预防性抗生素,大大降低生产成本,减少畜禽养殖对动物性饲料原料的依赖,杜绝动物性饲料原料所带来的疾病传播,提高养殖业的安全与效益。
大豆的抗营养因子有蛋白酶抑制因子(protease inhibitors,大豆凝集素(SBA、大豆抗原、非淀粉多糖(NSP、植酸(phytic acid、单宁、大豆寡糖、脲酶、.大豆异黄酮、大豆皂甙、致甲状腺肿因子、生氰糖甙等。
这些抗营养因子会导致人和动物胰腺肿大、过敏反应、生长缓慢、日粮养分利用率下降以及其他一些不良生理反应。
本试验测定起主要抗营养作用的胰蛋白酶抑制因子、凝集素及大豆抗原中的大豆球蛋白和B一伴大豆球蛋白。
1材料与方法1.1腮酶的测定脲酶活性测定参照国标GB8622--88执行。
大豆蛋白酶解实验方案
一、实验目的
通过大豆蛋白的酶解实验，探究酶解对大豆蛋白的影响，为了解大豆蛋白的营养成分及其应用提供实验依据。
二、实验材料
1、大豆蛋白粉
2、三倍体蛋白酶
3、磷酸盐缓冲液
4、氯化钠
5、紫外分光光度计
6、酶解仪
三、实验步骤
1、称取一定量的大豆蛋白粉，加入适量的磷酸盐缓冲液，搅拌均匀后，调节pH 值至7.0。
2、加入一定量的三倍体蛋白酶，放置于酶解仪中，在恒温下酶解反应。
3、每隔一定时间取少量反应液，加入适量的氯化钠，用紫外分光光度计检测吸光度。
4、反应结束后，用紫外分光光度计检测吸光度，计算大豆蛋白酶解率。
四、数据处理
1、将实验记录表格中的各项数据，制作成折线图，以反映酶解过程中各项指标的变化趋势。
2、计算大豆蛋白酶解率，用酶解前后的蛋白质含量相减，再除以酶解前的蛋白质含量，即可得到酶解率。
3、进行统计学分析，比较不同组的实验结果，确定酶解参数。
五、实验结果
1、折线图反映了各项指标的变化趋势，如酶解时间、酶解温度、酶解剂量等。
2、实验结果表明，随着酶解时间的延长，大豆蛋白的酶解率增加；随着酶解温度的升高，酶解率也随之增加；酶解剂量也对酶解率有影响，但未能达到理想效果。
六、实验结论
1、本实验结果表明，大豆蛋白的酶解是可能的，随着酶解时间、温度和酶解剂量的增加，酶解率增加。
2、大豆蛋白的酶解对其营养成分有一定影响，酶解后可释放部分蛋白质和氨基酸，提高其生物利用度。
3、本实验结果可为大豆蛋白的应用提供参考，也为后续研究提供了实验依据。
预处理对大豆蛋白酶解的影响Ξ钱 方 邓 岩 大连轻工业学院食品科学与生物工程系 116001周 晶 刘海波 宝生物工程(大连)有限公司 116001摘要 以Alcalase碱性内切酶为例,研究了不同热处理温度、时间对大豆蛋白酶解率的影响,实验表明大豆蛋白经100℃, 20min热处理,其相对酶解率达100%。
关键词 预处理 大豆蛋白 酶解率 为了改善大豆蛋白质的品质,提高营养价值,进一步改善其溶解性、起泡性等功能特性,最重要的方法就是将其酶解。
大豆蛋白经水解后其酶解物比氨基酸和蛋白质更易于消化吸收,且促进了乳酸菌、双歧杆菌等人体内有益菌类的生理活性和生长发育,还能改变其溶解性、降低粘度等功能特性〔1〕,这进一步促进了大豆蛋白在食品工业中的应用。
影响大豆蛋白酶解的因素很多,诸如酶的种类、预处理条件、水解条件及酶解物的处理方法等〔2〕。
天然大豆蛋白分子具有紧密的立体结构,由于其酶切位点包藏于蛋白质分子内部,而很难被蛋白酶水解,必须对其进行预处理,使蛋白变性。
蛋白变性方法有很多,其中热处理由于具有经济、设备投资少,且经热变性的蛋白质不易回复等特点而倍受青睐。
但必须采取适当的热变性方式,若加热过度,不但不能促进反而还会阻碍酶对大豆蛋白的水解作用。
为了研究不同热处理方式对酶解速度的影响,这里以Alcalase碱性内切酶为例进行下列实验。
1 实验材料与方法111 实验材料11111 Alcalase Food Grade碱性内切蛋白酶:丹麦NOVO公司11112 大豆分离蛋白:吉林不二公司11113 小牛血清白蛋白(BSA)No.232092mg/ ml:宝生物公司112 实验仪器11211 MC-756型紫外可见分光光度计:上海第三分析仪器厂11212 p HS-3C型精密p H计:上海雷磁仪器厂11213 LD4-2型离心机:北京医用离心机厂11214 电热恒温水浴锅:江苏南通竹行电热恒温四厂11215 恒温干燥箱:上海市跃进医疗器械一厂1131实验方法11311 蛋白质浓度及可溶氮的测定〔3〕1131111 标准蛋白曲线制作将牛血清白蛋白(BSA,№23209)的标准溶液按下表用蒸馏水稀释至0、80、160、240、320、400、480(μg/ml不同浓度。
收稿日期:2005-11-17 修回日期:2005-12-22作者简介:李大明,男,1982年出生,在读硕士,从事植物蛋白酶解及天然级热反应肉味香精的研究。
大豆蛋白酶解的研究李大明,宋焕禄,祖道海北京工商大学化学与环境工程学院 (北京 100037)摘 要:用几种常用蛋白酶对大豆蛋白进行酶解,利用均匀设计安排试验,确定各种酶的最佳酶解条件,并以水解度(DH )为考察标准,选出水解度最大的酶,确定其最佳加酶量和酶解时间。
关键词:大豆蛋白;水解植物蛋白(HVP );水解度(DH );酶解;均匀设计中图分类号:TS201.1 文献标识码:B 文章编号:1672-5026(2006)02-0020-04Study on enzymatic hydrolysis of soybean proteinLi Daming ,Song Huanlu ,Zu DaohaiCollege of Chem ical and Envi ronmental Engi neeri ng ,Beiji ng Technology and B usi ness U niversity (Beiji ng 100037)Abstract :The enzymatic hydrolysis of soybean protein by several normal enzymes is studied.The best condition for enzymatic hydrolysis by experiments uniform designed is confirmed.Making hydrol 2ysis degree (DH )as the standard ,the best adding amounts and hydrolysis time of enzymes whose DH are largest are got.K ey w ords :soybean protein ;hydrolyzed vegetable protein (HVP );hydrolysis degree (DH );en 2zymatic hydrolysis ;uniform designs 大豆蛋白的营养价值很高,含有丰富的优质蛋白质,可以提供充足的人体所需的八种必需的氨基酸以及多种维生素和矿物质等[1]。
大豆蛋白酶解实验方案介绍大豆蛋白酶解实验是一种常用的生物化学实验，旨在通过酶解的方式破坏大豆蛋白结构，从而改变其功能和性质。
本实验方案将详细介绍该实验的步骤和操作要点，并探讨实验的目的、原理以及可能的应用。
实验目的1.研究大豆蛋白酶解的过程及其影响因素。
2.探究酶解对大豆蛋白功能和性质的改变。
3.分析酶解后的产物在食品工业等领域的应用前景。
实验原理大豆蛋白酶解是指利用特定蛋白酶对大豆蛋白进行水解反应的过程。
大豆蛋白是植物蛋白质的一种，具有多种功能和应用价值。
通过酶解，可以改变其结构和性质，进而扩展其应用范围。
大豆蛋白酶解的实验原理如下：1.选择适当的蛋白酶。
常用的蛋白酶包括胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等。
根据目的选择合适的酶种和酶解条件。
2.大豆蛋白的酶解过程。
将大豆蛋白与蛋白酶按照一定比例混合，控制温度、酶解时间等因素，使酶能够与蛋白质发生作用。
3.蛋白酶的作用机制。
蛋白酶通过水解蛋白质中的肽键，将其分解成较小的肽段或氨基酸。
这些肽段和氨基酸的序列、长度和分布方式，会对蛋白质的功能和性质产生显著影响。
实验步骤1.准备工作。
清洗试管、移液器等实验仪器，并消毒处理。
准备好所需的试剂和大豆蛋白样品。
2.酶解液的制备。
根据实验要求，配置适当浓度的蛋白酶溶液。
可以根据大豆蛋白样品的含量和酶解时间的需要，来确定酶解液的浓度。
3.处理大豆蛋白样品。
将大豆蛋白样品溶解或悬浮在适量的缓冲液中，使其均匀混合。
4.酶解反应。
将酶解液和大豆蛋白样品按照一定比例混合，同时控制好反应的温度和时间。
通常情况下，反应温度为37摄氏度，反应时间为2-4小时。
5.反应终止。
在酶解反应完成后，加入适当的试剂或改变环境条件，以终止酶的活性。
常见的方法包括加热、改变pH值等。
6.产物收集和分析。
将酶解后的产物收集，可以采用离心、过滤等方法。
收集到的产物可以进行质谱分析、电泳分析等，以获取其分子量、组成及特性信息。
7.结果记录与分析。
将所有实验数据整理并记录，进行数据分析，比较不同条件下的实验结果，评估酶解效果和产物的特性变化。
大豆蛋白水解物的酶法修饰及其亚铁和钙离子的螯合能力张美玲;赵新淮【摘要】Soybean protein hydrolysates with a degree of hydrolysis of 14. 1% were prepared by hydrolysis of soybean protein isolate with alcalase, and then modified by a plastein reaction in alcohol-water medium. Response surface analysis was applied to optimize the conditions of plastein reaction, when substrate concentration and reaction time were pre-set at 30% and 4 h. The suitable conditions obtained were as following: enzyme addition level of 5. 26 kU/g proteins, volume ratio of ethanol to water of 56. 8% and reaction temperature of 33. 1℃. Some modified products with different reaction extents were prepared in ethanol-water or methanol-water medium, and their chelating activities for iron (Ⅱ) and calcium (Ⅱ) were eval uated. It was found that iron (Ⅱ) chelating activity was increased from the original 39. 8% to 59. 3% while calcium (Ⅱ) chelating activity was enhanced from the original 62. 1% to 76. 6%. The present results suggested that enzymatic hydrolysis coupled with plastein reaction might be served as a new approach to prepare iron soybean protein hydrolysates with better metal chelating activity.%利用碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白制备出水解度为14.1％的水解物,并在醇-水介质中对其进行类蛋白反应修饰.固定底物质量分数30％,反应时间4h,利用响应面分析法对类蛋白反应条件进行优化,得到最优条件为:酶添加量5.26 kU/g蛋白质,乙醇体积分数56.8％,温度33.1℃.在乙醇-水或甲醇-水介质中制备反应程度不同的修饰产物,并评价其对亚铁和钙离子的螯合能力.结果表明,亚铁离子螯合能力由39.8％提升至59.3％,钙离子螯合能力由62.1％提升至76.6％.大豆分离蛋白的酶解以及类蛋白反应修饰,是一个提高金属离子鳌合能力大豆蛋白螯合肽的新技术.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2012(038)012【总页数】5页(P26-30)【关键词】大豆蛋白水解物;类蛋白反应;碱性蛋白酶;醇-水介质;螯合能力【作者】张美玲;赵新淮【作者单位】东北农业大学,乳品科学教育部重点实验室,黑龙江哈尔滨,150030【正文语种】中文天然蛋白质没有展示出食品工业所需要的性质，经过特定的修饰会改变其相应性质［1］，酶水解通常被用来提高蛋白质的功能性及营养性［2］。
碱性蛋白酶水解大豆蛋白过程的拟合及水解产物性质的研究孔祥珍;叶挺;孙灵湘;丁秀臻;华欲飞【摘要】采用Alcalase碱性蛋白酶在50、60℃下以不同酶底比(1∶100、2∶100和3∶100)分别制备水解度(DH)为5％、10％和15％的大豆蛋白水解产物.考察水解反应动力学以及水解产物的DPPH自由基清除率和三氯乙酸可溶性氮含量,并且采用HPLC表征水解产物相对分子质量变化.结果表明:碱性蛋白酶在所考察的条件下水解大豆蛋白,符合指数形式动力学方程;水解产物水解度从5％增加到15％,DPPH自由基清除率和三氯乙酸可溶性氮含量分别由17.07％、16.28％增加到31.84％、64.85％;大豆蛋白经碱性蛋白酶水解至相同水解度时,在同一温度下,随着酶底比的增加,水解产物的DPPH自由基清除率和三氯乙酸可溶性氮含量增加,水解产物中相对分子质量大于10 kD的肽段比例逐渐减小,小于0.5 kD的肽段比例逐渐增大.同一种酶水解同一种蛋白质,虽然水解反应动力学均符合指数形式动力学方程,但是当大豆蛋白被水解至相同水解度时,不同条件下制备的水解产物的性质与结构均有显著性差异.【期刊名称】《中国油脂》【年(卷),期】2015(040)012【总页数】5页(P26-30)【关键词】碱性蛋白酶;水解;拟合方程;水解度;相对分子质量分布【作者】孔祥珍;叶挺;孙灵湘;丁秀臻;华欲飞【作者单位】江南大学食品学院,食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡214122;江南大学食品学院,食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡214122;江南大学食品学院,食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡214122;江南大学食品学院,食品安全与营养协同创新中心,江苏无锡214122;江南大学食品学院,食品安全与营养协同创新中心,江苏无锡214122【正文语种】中文【中图分类】TS229;TQ936蛋白酶水解蛋白质的过程实际上是使蛋白质中的肽键断裂，生成胨、肽等低相对分子质量产物的生化反应过程。
