(精品)细菌生化微量鉴定管实验结果判定说明
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细菌微量生化鉴定管产品介绍通善生物细菌微量生化鉴定管采用全国首创西林瓶包装。
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第1篇一、实验目的1. 了解生化反应在微生物鉴定中的重要性。
2. 掌握常见生化反应的原理和方法。
3. 通过实验,对给定的微生物进行鉴定。
二、实验原理生化反应是指微生物在生长过程中,通过酶的催化作用,将营养物质转化为自身所需的物质,同时产生一些代谢产物。
这些代谢产物可以用来鉴定微生物的种类。
常见的生化反应包括糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验等。
三、实验材料与仪器1. 材料:- 菌种:大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。
- 培养基:葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基(葡萄糖、乳糖或蔗糖)、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂等。
- 试剂:卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等。
- 仪器:酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等。
2. 仪器:- 酒精灯- 接种环- 超净工作台- 恒温培养箱- 高压灭菌锅- 试管- 移液枪- 滴管四、实验方法1. 菌种培养:将菌种接种于葡萄糖蛋白胨水培养基,置于恒温培养箱中培养24小时。
2. 糖发酵试验:- 将培养好的菌种接种于糖发酵培养基(葡萄糖、乳糖或蔗糖),置于恒温培养箱中培养24小时。
- 观察培养基颜色变化,记录发酵结果。
3. 吲哚试验:- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基,置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入吲哚试剂,观察颜色变化,记录结果。
4. 甲基红试验:- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基,置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入甲基红试剂,观察颜色变化,记录结果。
五、实验结果与分析1. 糖发酵试验:- 大肠杆菌:发酵葡萄糖、乳糖,不发酵蔗糖。
- 金黄色葡萄球菌:不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 枯草芽孢杆菌:不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 变形杆菌:发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
2. 吲哚试验:- 大肠杆菌:吲哚试验阳性。
- 金黄色葡萄球菌:吲哚试验阴性。
- 枯草芽孢杆菌:吲哚试验阴性。
- 变形杆菌:吲哚试验阳性。
细菌生化试验1、实验原理(1)细菌生化试验各种细菌所具有的酶系统不尽相同,对营养基质的分解能力也不一样,因而代谢产物或多或少地各有区别,可供鉴别细菌之用。
用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物,从而鉴别细菌的种属,称之为细菌的生化反应。
(2)糖(醇)类发酵试验不同的细菌含有发酵不同糖(醇)的酶,因而发酵糖(醇)的能力各不相同。
其产生的代谢产物亦不相同,如有的产酸产气,有的产酸不产气。
酸的产生可利用指示剂来判定。
在配制培养基时预先加入溟甲酚紫[P HS . 2 (黄色)一6 . 8 (紫色)] ,当发酵产酸时,可使培养基由紫色变为黄色。
气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。
(3)甲基红(Methylred )试验(该试验简称MR 试验)很多细菌,如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸再被分解,产生甲酸、乙酸、乳酸等,使培养基的pH 降低到4 . 2 以下,这时若加甲基红指示剂呈现红色。
因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 (红色)一pH6 . 2 (黄色)。
若某些细菌如产气杆菌,分解葡萄糖产生丙酮酸,但很快将丙酮酸脱梭,转化成醇等物,则培养基的pH 仍在6 . 2 以上,故此时加入甲基红指示剂,呈现黄色。
(4)大分子物质代谢实验.靛基质(口引睬)试验某些细菌,如大肠杆菌,能分解蛋白质中的色氨酸,产生靛基质(叫睬),靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合,形成玫瑰色靛基质(红色化合物)。
硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸(肌氨酸、半肌氨酸等),产生硫化氢,硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐,形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。
为硫化氢试验阳性,可借以鉴别细菌。
明胶液化实验某些细菌具有胶原酶,使明胶被分解,失去凝固能力,呈现液体状态,是为阳性。
淀粉水解试验(在紫外诱变中做,本实验不做)细菌对大分子的淀粉不能直接利用,须靠产生的胞外酶(淀粉酶)将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解为葡萄糖(或麦芽糖),再被细菌吸收利用,细菌水解淀粉的过程可通过底物的变化来证明,即用碘测定不再产生蓝色。
一、实验目的1. 学习细菌分离与培养的基本操作方法。
2. 掌握细菌形态观察、生理生化反应等方法在细菌鉴定中的应用。
3. 提高实验操作技能和微生物学基础知识。
二、实验原理细菌是微生物的一种,具有独特的形态、生理生化特性。
通过观察细菌的形态、生理生化反应等特征,可以鉴定细菌的种类。
本实验主要采用以下方法进行细菌分析鉴定:1. 形态观察:通过显微镜观察细菌的形态、大小、排列等特征。
2. 生理生化反应:通过测定细菌对特定底物的代谢产物、颜色变化等,判断细菌的生理生化特性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等标准菌株;土壤、水、食品等样品。
2. 仪器:显微镜、细菌培养箱、无菌操作台、酒精灯、接种环、培养皿、试管等。
四、实验方法与步骤1. 细菌分离与培养(1)将样品进行无菌处理,制成悬浊液。
(2)取适量悬浊液,分别接种于不同类型的培养基上,如营养琼脂培养基、伊红美蓝培养基等。
(3)将接种后的培养基放入细菌培养箱中,培养适宜时间。
2. 细菌形态观察(1)取适量培养好的细菌,制成悬浊液。
(2)在显微镜下观察细菌的形态、大小、排列等特征。
(3)记录观察结果。
3. 细菌生理生化反应(1)将培养好的细菌接种于不同类型的生理生化试剂中,如糖发酵试剂、吲哚试剂、甲基红试剂等。
(2)观察试剂颜色变化、沉淀形成等反应现象。
(3)记录观察结果。
五、实验结果与分析1. 细菌分离与培养实验结果显示,金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等标准菌株在相应培养基上生长良好,形成典型的菌落。
2. 细菌形态观察显微镜下观察,金黄色葡萄球菌呈球形,单个或成对排列;大肠杆菌呈杆状,单个或成链排列;肺炎克雷伯菌呈球形,单个或成对排列。
3. 细菌生理生化反应金黄色葡萄球菌对葡萄糖发酵呈阳性,吲哚试验、甲基红试验等均呈阴性;大肠杆菌对葡萄糖发酵呈阳性,吲哚试验、甲基红试验等均呈阴性;肺炎克雷伯菌对葡萄糖发酵呈阳性,吲哚试验、甲基红试验等均呈阴性。
细菌生化鉴定检验细菌在新陈代谢过程中进行着各种生物化学反应,由于细菌所具有的酶系不尽相同,对底物的分解能力也不一样,因而其代谢产物也不同。
用生物化学方法检测这些代谢产物,可帮助鉴定细菌,这种生化反应测定方法称为细菌的生化试验。
在临床细菌检验工作中,除根据细菌的形态与染色及培养特性对细菌进行初步鉴定外,还往往利用细菌的生化试验进行进一步的鉴定,细菌的生化试验对绝大多数分离的未知菌属(或种)的鉴定具有重要作用。
因此,掌握细菌生化反应的原理、方法及应用,对于鉴定和鉴别细菌具有重要意义。
细菌的生化试验的基本方法是,将已分离纯化的待检细菌,接种到含有特殊物质和指示剂的鉴别培养基中,通过观察细菌在培养基内的pH值变化,或是否产生某种特殊的代谢产物,来判断细菌的生化反应结果。
1 糖(醇、苷)类发酵试验1.1原理:由于各种细菌含有发酵不同糖(醇、苷)类的酶,故对糖的分解能力及分解糖产生的终末产物各不相同,如有的能分解糖类产酸、产气,有的仅产酸,有的不能分解糖。
故可利用此特点以鉴别细菌。
1.2方法:将分离的纯种细菌,以无菌操作接种到含有指示剂的糖(醇、苷)类发酵培养基中,35℃恒温箱培养18~24 h观察结果。
若用微量发酵管,或培养时间较长,应注意保持湿度,以免培养基干燥。
1.3结果:接种的细菌,若能分解培养基中的糖(醇、苷)类,则培养基中的指示剂呈酸性反应。
若产气.则可使液体培养基中倒管内或半固体培养基内出现气泡,可使固体培养基内有裂隙等现象。
若不分解培养基中的糖(醇、苷)类,则培养基中除有细菌生长外,无其他变化。
1.4应用:发酵试验是鉴定细菌最主要和最基本的试验,特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要。
2 葡萄糖氧化/发酵试验2.1原理:根据细菌在分解葡萄糖的代谢过程中对氧需求的不同,将细菌分为氧化型、发酵型和产碱型三类。
细菌在分解葡萄糖的过程中,必须有氧参加的,称为氧化型。
氧化型细菌在无氧环境中不能分解葡萄糖。
细菌在分解葡萄糖的过程中,可以进行无氧降解的,称为发酵型。
北京索莱宝科技有限公司
第1页,共1页细菌微量生化鉴定管使用说明书
货号:L7710
规格:20支
保存:RT,有效期一年。
产品说明:
一、实验准备:
1、安瓿瓶:从包装盒中取出安瓿瓶,朝易折点(瓶颈上方蓝点)反方向用力折开安瓿瓶;或用砂轮划一圈安瓿瓶瓶颈,然后用力折开安瓿瓶,插入安瓿瓶架中。
如果染菌或变色,则不能使用,重新拿一支。
2、试管:从包装盒中取出试管,插入试管架中。
如果染菌或变色,则不能使用,重新拿一支。
注:折开安瓿瓶时最好包裹纱布,以免划伤手指。
二、接种方法:
1、直接接种:用接种针从平板上挑取已纯化分离的同一菌落接种于需要试验的试管(安瓿瓶)中。
2、菌悬液法:取一内盛2mL 无菌水试管,用接种针从平板上挑取已纯化单个菌落至无菌水中仔细研磨制成0.5麦氏浊度的均一细菌悬液,滴入需要试验的试管(安瓿瓶)中,每管3滴。
注:如内容物为半固体或斜面,请直接穿刺接种。
三、接种完成后放36℃±1℃培养或检测标准中所规定的培养温度。
(建议加盖)产品名称
结果判断
培养时间(h)
阳性
阴性乳糖发酵管黄色紫色或紫灰色18-24。