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细菌鉴定流程细菌鉴定细菌形态学鉴定16S rDNA 鉴定生理生化鉴定一、细菌形态学鉴定1.从-80˚Ϲ冰箱中取出菌株放4˚Ϲ复苏，轻柔混匀后用接种环接一环菌液在培养基平板上划线活化，根据菌株来源选择适宜的培养基。
2.放入培养箱倒置培养，实验室一般采用28˚Ϲ培养，特殊菌株依据该菌最适条件（时间、温度）培养24-48h。
3. 纯化：从活化培养基平板上挑取单菌落继续划板培养。
4. 观察记录菌落形态特征：大小（mm）、形状、干湿、透明度、颜色、边缘整齐还是，，，，，，，形状干湿透明度颜色边缘细菌大小（mm）注意事项：①接种划线应在酒精灯旁边操作②培养时应倒置培养，防止污染二、革兰氏染色1.涂片固定将纯化后的菌株进行革兰氏染色，滴一滴生理盐水于载玻片上，无菌条件下用接种环挑取少量菌落均匀涂布水滴中，使其自然干燥，菌面向上，经火焰固定。
注意事项：菌液涂片时不可过于浓厚，干燥、固定。
固定时通过火焰1~2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
2.染色一般包括初染、没染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：（1）加上结晶紫后，染色1分钟，水洗。
（2）加上碘液染色1分钟，水洗。
（3）加上95%酒精，摇动玻片，根据涂片厚度，脱色约20~60秒，水洗，吸去水分。
（4）加上蕃红后，染色1分钟，水洗。
（5）吸干或在空气中晾干后，油镜镜检。
3.结果观察：革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。
以均匀分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，都常呈现假阳性。
注意事项：①标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。
若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不再出现紫色为止。
②玻片通过火焰温度不能太高。
③碘液变透明，则不能使用。
④水洗时动作要轻，沿载玻片对角线方向用洗瓶冲洗，以免把菌体冲掉。
三、16S rDNA 鉴定（16S rDNA只能鉴定到属，需进行生理生化、药敏实验等鉴定到种）1. 细菌复苏、活化、纯化同细菌形态学鉴定3. 挑取单菌落至少2-3个接到含有1ml灭菌纯水的1.5ml离心管中混匀。
细菌的生理生化鉴定原理细菌的生理生化鉴定原理是通过研究细菌在生理和生化特性上的表现来确定其种属和特征。
这种鉴定方法是通过对细菌的形态学、生长特性、代谢能力和化学成分进行综合分析来实现的。
细菌的形态学特征是鉴定的首要依据之一。
形态学特征包括细菌的大小、形状、结构和染色性质等方面。
比如，革兰氏染色能够将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类，从而提供了重要的区分依据。
此外，细菌的胞外结构如菌落形态、胶囊、鞭毛和纤毛等也是鉴定的重要特征。
生长特性也是细菌鉴定的重要方面。
不同细菌对于温度、pH值、氧气需求和营养要求等环境条件的适应性不同，这些特征可以用来筛选并确认细菌的种属。
比如，某些细菌能够在高温环境下繁殖，而对于大多数细菌来说则无法生长。
此外，细菌在不同培养基上的生长特性也可以作为鉴定的参考依据。
代谢能力是细菌鉴定的重要标志之一。
不同细菌具有不同的代谢特点，通过研究其对特定底物的利用能力和生成产物的特征可以推断细菌的种属和特征。
鉴定方法包括对特定酶活性的检测以及特定代谢产物的分析等。
化学成分也为细菌的鉴定提供了重要线索。
细菌的化学成分主要包括细胞壁、细胞膜和核酸等。
比如，细菌的细胞壁成分可以通过特定染色方法进行检测，如革兰氏染色可以判断细菌是否具有胞壁，并进一步分析细菌的细胞壁组分。
此外，核酸序列分析技术如16S rRNA测序可以用于细菌鉴定，通过比对细菌的核酸序列与数据库中的已知细菌进行比对，可以确定细菌的种属和基因亲缘关系。
细菌的生理生化鉴定方法是综合分析多个指标和依据，通过不同特征之间的关联和差异来进行细菌的分类鉴定。
常用的鉴定方法包括传统的生理生化试验、分子生物学技术以及基于质谱和光谱的分析方法等。
这些方法在细菌鉴定研究中发挥了非常重要的作用，为医学、环境科学和生物工程等领域的研究提供了有效的工具和基础。
一、实验目的1. 掌握显微镜油镜的使用方法。
2. 通过观察细菌的形态结构，了解细菌的基本特征。
3. 熟悉细菌的分类方法，为后续的细菌鉴定工作打下基础。
二、实验原理细菌是微生物的一种，具有个体微小、结构简单、繁殖迅速等特点。
细菌的形态结构主要包括细胞壁、细胞膜、细胞质、核质体等基本结构，以及鞭毛、荚膜、芽孢等特殊结构。
通过观察细菌的形态结构，可以初步判断其种类，为后续的细菌鉴定工作提供依据。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：革兰氏阳性球菌、革兰氏阴性球菌、革兰氏阳性杆菌、革兰氏阴性杆菌。
2. 仪器：显微镜、载玻片、盖玻片、无菌操作台、无菌试管、酒精灯、火柴、镊子、滴管、染色液（结晶紫、碘液、番红）等。
四、实验步骤1. 细菌涂片制作（1）取无菌试管，加入适量的细菌培养液。
（2）用无菌镊子取少量细菌培养液，滴于载玻片上。
（3）用无菌盖玻片轻轻压在细菌培养液上，使细菌均匀分布。
（4）用酒精灯对载玻片进行轻微加热，使细菌固定。
2. 细菌染色（1）用滴管滴加适量的结晶紫染液于载玻片上的细菌涂片上。
（2）染色约1分钟，然后用滴管滴加适量的碘液。
（3）染色约1分钟，用蒸馏水冲洗载玻片上的染色液。
（4）用番红染液复染约1分钟，用蒸馏水冲洗载玻片上的染色液。
3. 细菌观察（1）将载玻片置于显微镜下，调整光圈和焦距，使视野清晰。
（2）观察革兰氏阳性球菌、革兰氏阴性球菌、革兰氏阳性杆菌、革兰氏阴性杆菌的形态结构。
（3）记录观察结果，包括细菌的大小、形状、排列方式、染色特性等。
五、实验结果与分析1. 革兰氏阳性球菌：呈球形，直径约1～2微米，排列成单行、双行或链状。
染色后，菌体呈紫色。
2. 革兰氏阴性球菌：呈球形，直径约1～2微米，排列成单行、双行或链状。
染色后，菌体呈红色。
3. 革兰氏阳性杆菌：呈杆状，直径约0.5～1微米，长度约为2～5微米，排列成单行、双行或链状。
染色后，菌体呈紫色。
4. 革兰氏阴性杆菌：呈杆状，直径约0.5～1微米，长度约为2～5微米，排列成单行、双行或链状。
细菌的形态检查实验报告
《细菌的形态检查实验报告》
在生物学实验室中，细菌的形态检查是一项重要的实验，它可以帮助科学家们
更好地了解细菌的结构和特征，从而为疾病的预防和治疗提供重要的参考依据。
在这个实验中，我们对不同类型的细菌进行了形态检查，并取得了一些有趣的
发现。
首先，我们从不同的环境样本中分离出了一些细菌，并在琼脂平板上进行了培养。
经过一段时间的培养，我们观察到了不同形态的细菌，有的呈现出球状，
有的呈现出杆状，还有的呈现出螺旋状。
这些不同形态的细菌为我们提供了很
多有价值的信息。
接下来，我们对这些细菌进行了染色处理，使用了革兰氏染色和折射染色两种
方法。
通过这些染色方法，我们可以更清晰地观察到细菌的细胞壁结构和形态
特征。
我们发现，一些细菌在革兰氏染色后呈现出紫色或蓝色，而在折射染色
后呈现出粉红色或红色。
这些染色结果为我们提供了更多的信息，帮助我们进
一步了解细菌的特性。
最后，我们利用显微镜对这些细菌进行了观察。
通过放大镜头，我们可以清晰
地看到细菌的形态特征，包括细胞壁、细胞质和细胞核等。
我们发现，不同形
态的细菌在显微镜下呈现出不同的特征，这些特征有助于我们对细菌进行分类
和鉴定。
通过这次形态检查实验，我们对细菌的形态特征有了更深入的了解。
这些了解
为我们进一步研究细菌的生物学特性和病原机制提供了重要的基础，也为我们
今后的科研工作提供了宝贵的参考。
希望通过我们的努力，能够为人类健康和
医学科研做出更大的贡献。
鉴别细菌的方法细菌是一类微生物，其大小范围从0.2到2微米不等，形态多样，有球形、杆状、螺旋形等。
为了识别和鉴别不同的细菌，科学家们发展了许多方法。
本文将介绍几种常见的鉴别细菌的方法。
1. 形态学鉴别法形态学鉴别法是通过观察细菌的形态、大小、形状、胞外结构和运动等特征来进行鉴别的方法。
在实验室中，我们可以使用显微镜观察细菌的形态，分析其细胞壁、荚膜、鞭毛等结构，还可以观察其运动情况。
细菌的形态和结构不同，可以帮助我们鉴别不同的细菌。
2. 生理生化鉴别法生理生化鉴别法是通过检测细菌对不同环境的反应来进行鉴别的方法。
包括细菌对养分、PH值、盐度、气体和温度等环境因素的反应。
例如，某些细菌只能在氧气充足的环境中生长，而另一些细菌只能在无氧环境中生长。
通过观察细菌在不同环境下的生长情况并比较其生理生化特征，可以帮助我们鉴别不同的细菌。
3. 分子生物学鉴别法分子生物学鉴别法是通过检测细菌的DNA序列来进行鉴别的方法。
这种方法通常使用PCR技术将细菌DNA序列扩增，然后通过比较DNA序列的差异来鉴别不同的细菌。
这种方法具有高度的准确性和灵敏度，因此在现代细菌学中被广泛应用。
4. 免疫学鉴别法免疫学鉴别法是通过检测细菌所产生的抗原和抗体来进行鉴别的方法。
抗原是一种可以诱导机体产生免疫应答的分子，而抗体是机体针对外来抗原产生的免疫反应产生的分子。
通过检测细菌所产生的抗原和抗体，可以确定细菌的种类和数量。
鉴别细菌的方法有很多种，不同的方法可以提供不同的信息。
在实际应用中，我们通常需要结合多种方法进行综合分析，才能得出准确的鉴别结果。
细菌鉴定的原理
细菌鉴定的原理是基于细菌的形态特征、生理生化特性和分子遗传特征进行分析和比对。
具体步骤如下：
1. 形态特征鉴定：观察细菌的形态特征，包括细胞形状、大小、颜色等。
常用的方法有显微镜观察、染色和细菌培养。
2. 生理生化特性鉴定：通过检测细菌的生理生化特性，如营养需求、代谢产物和酶活性等，来鉴定细菌种类。
常用的方法有碳源利用能力测试、酶活性检测和药敏试验。
3. 分子遗传特征鉴定：利用分子生物学技术对细菌的基因组进行分析，包括16S rRNA序列分析、全基因组测序和PCR扩
增等。
这些方法能够揭示细菌的亲缘关系和物种分类。
细菌鉴定的原理是通过对细菌的多个特征进行综合分析，从而确定其分类和身份。
由于不同种类的细菌在形态、生理和遗传特征上存在差异，因此通过比对已知的参考菌种和数据库中的细菌数据，可以辨认未知细菌的种属。
细菌鉴定在医学、食品安全、环境监测和农业等领域具有重要应用价值。
细菌生理生化鉴定
细菌生理生化鉴定是通过对细菌在特定生理和生化条件下的反应进行观察和分析，以确定其种类和特性的过程。
这通常包括一系列实验，涉及对细菌代谢途径、酶活性、生长条件等方面的研究。
以下是细菌生理生化鉴定的一些常见方法和实验：
1.形态学观察：
形状：观察细菌的形状，可以是球形（球菌）、杆状（杆菌）、螺旋形等。
结构：使用显微镜检查是否有胞壁、胞膜、纤毛、鞭毛等结构。
2.生理特性：
生长条件：观察细菌在不同温度、pH值和氧气条件下的生长情况。
营养需求：测试细菌对不同营养物质（碳源、氮源、矿物质等）的利用能力。
3.生化反应：
大肠杆菌的IMViC测试：Indole（吲哚）测试、Methyl Red（甲基红）测试、V oges-Proskauer（V-P）测试、Citrate（柠檬酸）测试、
4．氧化还原反应：观察细菌对不同氧化还原指示剂（如甲基红、溴亚甲蓝）的反应，推断其对氧化还原条件的适应性。
5.酶活性测试：
氧化酶：使用氧敏感指示剂观察酶的活性。
淀粉酶：利用淀粉琼脂板，观察菌落周围是否发生淀粉分解带。
蛋白酶：使用明胶板检测细菌对蛋白质的分解能力。
6.抗生素敏感性测试：确定细菌对不同抗生素的敏感性，通过纸片扩散法或肉汤稀释法进行。
7.分子生物学方法：16S rRNA测序：通过测序菌株的16S rRNA基因，进行分子水平的种类鉴定。
8.培养基选择：利用特定培养基，如MacConkey琼脂培养大肠杆菌等，根据细菌在培养基上的生长情况进行初步鉴定。
细菌标本形态学检验形态学检查方法是细菌检验中极为重要的鉴定手段之一，它不仅有助于细菌的初步识别，同时也是决定进行生化反应鉴定的重要步骤。
如痰中的抗酸杆菌、脑脊液中脑膜炎球菌、泌尿生殖道分泌物中的淋球菌等。
通过形态学检查得到初步的诊断。
由于细菌体积小，无色透明，因此利用光学显微镜直接检查只能观察到细菌的动力，对形态、大小、排列方式、染色特性及特殊结构的判定，还须借助于染色标本的观察。
要研究其细菌的超微结构，还需用电子显微镜。
一、不染色标本检查法不染色标本的检查用于观察活菌状态，常用以检查细菌的动力或运动状况。
1．湿片法：用接种环取细菌培养液两环，置于载玻片中央，轻轻覆以盖玻片。
菌液要适量，不可外溢，不可有气泡。
高倍镜下观察。
2．悬滴法：加一小滴菌液在盖玻片中央，在另一凹玻片凹窝的周围涂少量凡士林，将凹面向下，对准盖玻片中央，盖在凹玻片上，迅速翻转玻片，用小镊子轻压，使盖玻片与凹玻片粘紧，密封凹窝边缘。
高倍镜下观察。
3．毛细管法：本法适用于观察厌氧菌动力。
先将待检菌接种在适宜的液体培养基中，经厌氧过夜培养后，以毛细管（长60～70nm ，管径0．5 ～1．0nm ）接触培养物，使菌液进入毛细管中，用火焰封闭毛细管两端，将毛细管固定在载玻片上，镜检。
二、染色标本检查法（一）基本方法细菌胞浆无色透明，不易识别。
常用适宜的染料使细菌着色后，以观察其形态和特殊构造，且可按染色反应进行分类。
1．原理（1）物理吸附作用：由于毛细管现象和渗透作用，使染料进入细胞内被溶解吸收。
此外，细菌等电点较低，pH值2 ～5，在一般情况下细菌带负电荷，易和带正电荷的碱性染料相结合。
（2）化学反应：菌体内某些化合物和染料相结合，发生化学反应使细菌着色，而且不易被脱色剂所脱色。
（3）其他因素：细胞膜的通透性、膜孔的大小、细胞结构完整与否以及培养基成分，染色液中电解质含量、pH值、菌龄等都是影响细菌着色的因素。
2．方法（1）涂片：临床标本大多可直接涂抹在洁净的载玻片上。
细菌形态理化鉴定1形态学特征1.1菌落形态培养到24h后观察平板上单菌落形状、大小、颜色与突起特征。
1.2细胞形态光学显微镜观察菌体的形态、大小、运动性等。
1.3革兰氏染色取无油迹的干净载玻片，滴上一滴无菌蒸馏水，用接种环挑取少许菌苔，于水滴边缘轻轻涂几下。
自然风干，在火焰上通过几次，固定涂片。
滴加结晶紫液，染1min，用水冲净结晶紫液。
滴加碘液冲净残水，并覆盖约lmin。
用水冲去碘液，将片上的水甩干。
滴加95%乙醇液脱色约20-30s，并立即用水冲净乙醇。
用番红液染l-2min。
用水洗净番红，风干，用显微镜油镜观察涂片。
1.4芽孢染色取培养24h左右的菌体涂片、干燥、固定。
滴加3-5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。
用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿使沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。
加热时间从冒蒸汽时开始计时约4-5min。
倾去染液，待载玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。
用蕃红水溶液复染lmin，水洗。
待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。
1.5荚膜染色按常规取菌涂片，空气中自然干燥。
用1%的结晶紫水溶液染色2min。
以20%的硫酸铜水溶液冲洗，用吸水纸吸干残液。
干后用油镜观察。
菌体染成深紫色，菌体周围的荚膜呈淡紫色。
2生理生化特性实验1、尿素酶（Urease）试验有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。
尿素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。
其活性最适pH为7.0。
试验方法：挑取18~24h待试菌培养物大量接种于液体培养基管中，摇均，于36±1℃培养10，60和120min，分别观察结果。
或涂布并穿刺接种于琼脂斜面，不要到达底部，留底部作变色对照。
培养2，4和24h 分别观察结果，如阴性应继续培养至4天，作最终判定，变为粉红色为阳性。
培养基配制方法：蛋白胨：1 g ；NaCl：5 g ；KH2PO4 ：2 g ；葡萄糖1 g ；琼脂：15 g；酚红：0.012g；蒸馏水1000 ml。
除酚红外，溶解上述成分，并调节PH为6.8～6.9，然后加入酚红指示剂，使培养基呈橙黄色，分装，115℃灭菌20min。
待培养基冷至50℃左右，加入预先过滤除菌的20%尿素水溶液，使其终浓度为2%。
试验方法：挑取18~24h待试菌培养物大量穿刺接种于琼脂斜面，不要到达底部，培养1～4d观察结果，如为阴性应继续培养一下，作最终判定，变为粉红色为阳性。
2、氧化酶（Oxidase）试验 氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化酶先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。
试验方法：在琼脂斜面培养物上或血琼脂平板菌落上滴加试剂1~2滴，阳性者Kovacs氏试剂呈粉红色~深紫色，Ewing氏改进试剂呈蓝色。
阴性者无颜色改变。
应在数分钟内判定试验结果。
注意事项：（1）盐酸二甲基对苯撑二胺溶液容易氧化，溶液应装在棕色瓶中，并在冰箱内保存，如溶液变为红褐色，即不宜使用。
（2）铁、镍铬丝等金属可催化二甲基对苯撑二胺呈红色反应，若用它来挑取菌苔，会出现假阳性，故必须用白金丝或玻璃棒（或牙签）来挑取菌苔。
（3）在滤纸上滴加试剂，以刚刚打湿滤纸为宜，如滤纸过湿，会防碍空气与菌苔接触，从而延长了反应时间，造成假阴性。
3、过氧化氢酶的测定过氧化氢酶又称接触酶，能催化过氧化氢分解水和氧。
1．试剂：3－10％过氧化氢（H2O2）2．菌种培养：将测试菌种接种于合适的培养基斜面上，适温培养18－24h。
3．试验方法：取一干净的载波片，在上面滴1滴3－10％的H2O2，挑取1环培养18－24h的菌苔，在H2O2溶液中涂抹，若有气泡（氧气）出现，则为过氧化氢酶阳性，无气泡者为阴性。
也可将过氧化氢溶液直接加入斜面上，观察气泡的产生。
4．注意事项：过氧化氢酶是1种以正铁血红素作为辅基的酶，所以测试菌所生长的培养基不可含有血红素或红血球。
4、甲基红（Methyl Red）试验肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。
挑取新的待试纯培养物少许，接种于通用，培养于36±1°C或30°C（以30°C较好）3~5天，从第二天起，每日取培养液1ml，加甲基红指示剂1~2滴，阳性呈鲜红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黄色。
迄至发现阳性或至第5天仍为阴性、即可判定结果。
甲基红为酸性指示剂，pH范围为4.4~6.0，其pK值为5.0。
故在pH5.0以下，随酸度而增强红色，在pH5.0以上，则随碱度而增强黄色，在pH5.0或上下接近时，可能变色不够明显，此时应延长培养时间，重复试验。
5、V-P试验某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P （+）反应。
平板。
可用于测定的底物种类很多，有单糖、双糖、糖醇、脂肪酸、羟基酸及其他有机酸、醇、各种氨基酸类胺类以及碳氢化合物等。
糖的含量一般为1％，醇类酚类等的含量一般为0.1－0.2％，氨基酸的含量一般为0.5％。
因碳氢化合物不溶于水，可在液体培养基中振荡培养，或加入到45℃的固体培养基中，振荡后立即倒成平板。
有些底物不宜用高压灭菌，可用过滤法灭菌后加入已灭菌的基础培养基中，某些醇类和酚类不必灭菌。
接种和观察结果：菌种最好做成悬液，避免带入少量碳源干扰试验结果。
平板培养用接种环点种，液体培养则用直针接种。
每一测定菌必须接种未加碳水化合物的空白基础培养基作对照。
适温培养2、5、7天后观察，凡测定菌在有碳水化合物的培养基中生长情况，明显超过空白培养基的生长量为阳性，否则为阴性。
假若两种培养基上生长情况差别不明显，开在同一培养基上连续移种3次，如差别仍不明显则以阴性论。
(葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、木糖、甘露醇、纤维二糖、乳糖、麦芽糖、纤维素粉、甘油、甘露糖。
)（1）菌株对碳源的利用Mandel盐营养液[54]：NaNO32.0g/L，K2HPO4 1.5g/L,CaCl21.5g/L,MgSO4 0.3g/L,FeSO4·7H2O 5.0mg/L,MnSO4·H2O 1.6mg/L,ZnSO4·H2O1.4mg/L,CoCl2 0.5mg/L.Mandel盐营养液+2%琼脂+2%碳源。
碳源分别为：葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、蛋白胨水培养基1000mL糖发酵培养基：1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1-2mL，另配20%糖溶液10mL调节pH7.6，115℃灭菌30min，备用。
木糖、甘露醇、纤维二糖、乳糖、麦芽糖、纤维素粉、甘油、甘露糖。
每支试管内装10mL培养基，制成斜面培养基,无菌下接种，每种碳源接种二管，一支不接种做对照，31℃培养。
连续3代移种，生长者为阳性。
（2）菌株对氮源的利用无氮的Mandel盐营养液+2%琼脂上铺无菌滤纸+1%不同的氮源。
氮源分别为：NH4+、NO3-、蛋白胨、酵母膏、尿素，每种氮源制三个斜面，其中一个做对照，无菌条件下接种，31℃培养4d，观察结果。
7、葡萄糖的氧化发酵试验（O-F实验）在细菌鉴定中，糖类发酵产酸是1项重要依据。
细菌对糖类的利用有2种类型：1种是从糖类发酵产酸，不需要以分子氧作为最终受氢体，称发酵型产酸；另一种则以分子氧作为最终受氢体，称氧化型产酸。
前者包括的菌种类型为多数。
氧化型产酸量较少，所产生的酸常常被培养基中的蛋白胨分解时所产生的胺所中和，而不表现产酸。
为此，Hugh和Leifson提出一种含有低有机氮的培养基，用以鉴定细菌从糖类产酸是属氧化型产酸或发酵型产酸。
这一试验广泛用于细菌鉴定。
一般用葡萄糖作为糖类代表。
也可利用这一基础培养基来测定细菌从其他糖类或醇类产酸的能力。
（1）接种：以18－24h的幼龄菌种，穿刺接种在上述培养基中，每株菌接4管，其中2管用油封盖（凡士林：液体石蜡＝1：1混合后灭菌），约加0.5－1厘米厚，以隔绝空气为闭管。
另2管不封油为开管，同时还要有不接种的闭管作对照。
适温培养1、2、4、7天观察结果。
（2）结果观察：氧化型产酸――仅开管产酸，氧化作用弱的菌株往往先在上部产碱（1－2d），后来才稍变酸。
发酵型产酸则开管及闭管均产酸，如产气，则在琼脂柱内产生气泡。
8、糖或醇类发酵试验原理：不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者，或产气或不产气。
可用指示剂及发酵管检验。
有些细菌分解某些糖（醇、苷）产酸（符号：+）、产气（符号：○），培养基由紫（蓝）变黄（指示剂溴甲酚紫或溴百里酚蓝由紫或蓝遇酸变黄的结果），并有气泡；有些产酸，仅培养基变黄；有些不分解糖类（符号：－），培养基仍为紫（蓝）色。
培养基配制：一般细菌常用休和李夫森二氏培养基：蛋白胨：2g ，K2HPO4 :0.2g ，NaCl:5g ，糖（醇、糖苷）：1% ，水洗琼脂：5～6g，蒸馏水：1000mL，PH:6.8～7.0，溴百里酚蓝：1%水溶液3mL(先用少量的95%乙醇溶解后，再加水配成1%水溶液)。
先调PH 后再加指示剂。
芽孢杆菌培养基配制：(NH4)2HPO4:1g ，MgSO4:0.2g ，KCl:0.2g ，酵母膏：0.2g ，糖（醇、糖苷）：1%水洗琼脂：5～6g ，蒸馏水：1000mL ，溴甲酚紫：0.4%乙醇液2mL，PH:6.8～7.0。
先调PH后再加指示剂。
将以上培养基分装试管，培养基高度约为4～5cm ，115℃灭菌20min。
测定的糖（醇、糖苷）类可以包括：葡萄糖、蔗糖、甘露糖、乳糖（1.5%）、半乳糖（1.5%）、D-山梨醇、果糖、阿拉伯糖、麦芽糖、纤维二糖、木糖、水杨苷等。
注意：以上亦可用液体培养基。
接种和观察结果：用18～24h的幼龄菌种，用穿刺针接种于培养基中，适温培养1d，3d，5d后观察，颜色变黄为阳性，不变为阴性；有气泡产生为产气。
结果记录：产酸：+，产气：○，不产酸长气：- 。
法2 试验方法：以无菌操作，用接种针或环移取纯培养物少许，接种于发酵液体培养基管，若为半固体培养基，则用接种针作穿刺接种。
接种后，置36±1.0°C培养，每天观察结果，检视培养基颜色有无改变（产酸），小倒管中有无气泡，微小气泡亦为产气阳性，若为半固体培养基，则检视沿穿刺线和管壁及管底有无微小气泡，有时还可看出接种菌有无动力，若有动力、培养物可呈弥散生长。
本试验主要是检查细菌对各种糖、醇和糖苷等的发酵能力，从而进行各种细菌的鉴别，因而每次试验，常需同时接种多管。
