实验五_细菌的生化实验

一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应的基本原理和实验方法。

2. 掌握常见细菌生理生化反应的检测方法，如糖发酵、吲哚产生、甲基红反应等。

3. 学会通过生理生化反应对细菌进行初步鉴定。

二、实验原理细菌生理生化反应是指细菌在生长繁殖过程中，利用酶催化底物发生的一系列化学反应。

通过检测细菌对特定底物的利用能力、酶的产生以及代谢产物的生成，可以判断细菌的种类和特性。

三、实验材料1. 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。

2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、吲哚试剂、甲基红试剂等。

3. 仪器：酒精灯、接种环、培养皿、试管、试管架、滴管等。

四、实验方法1. 糖发酵实验：将待测菌接种于糖发酵培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。

观察菌落周围是否出现透明圈，判断细菌是否能发酵该糖。

2. 吲哚产生实验：将待测菌接种于蛋白胨水培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。

取培养液滴加吲哚试剂，观察是否产生红色沉淀，判断细菌是否能产生吲哚。

3. 甲基红反应实验：将待测菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。

取培养液滴加甲基红试剂，观察颜色变化，判断细菌是否能产生有机酸。

五、实验结果与分析1. 糖发酵实验结果：- 大肠杆菌：葡萄糖发酵阳性，乳糖发酵阴性。

- 金黄色葡萄球菌：葡萄糖发酵阳性，乳糖发酵阴性。

- 枯草芽孢杆菌：葡萄糖发酵阳性，乳糖发酵阴性。

- 变形杆菌：葡萄糖发酵阳性，乳糖发酵阳性。

2. 吲哚产生实验结果：- 大肠杆菌：吲哚产生阴性。

- 金黄色葡萄球菌：吲哚产生阳性。

- 枯草芽孢杆菌：吲哚产生阴性。

- 变形杆菌：吲哚产生阳性。

3. 甲基红反应实验结果：- 大肠杆菌：甲基红反应阴性。

- 金黄色葡萄球菌：甲基红反应阴性。

- 枯草芽孢杆菌：甲基红反应阳性。

- 变形杆菌：甲基红反应阳性。

根据实验结果，我们可以初步判断：- 大肠杆菌为革兰氏阴性菌，发酵葡萄糖，不产生吲哚和有机酸。

细菌鉴定中常用的生理生化反应生05 边晔 2010030026周四班同组成员：徐竞实验时间 2012年11月15日一、实验目的1.了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法；2.通过不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况，了解细菌碳、氮代谢类型的多样性；3.了解细菌在培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义；4.学习各种接种技术。

二、实验原理1.各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质分解能力也不一样，因而代谢的产物存在差别。

2.细菌的这种代谢特点可供鉴别细菌之用。

（具体原理略）3.用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。

三、实验器材1.仪器和用具恒温培养箱。

试管：每个试验4根试管(3根接种，1根对照)。

接种环、接种针、酒精灯、试管架、记号笔、打火机、杜氏小管。

2.微生物大肠杆菌（Escherichia coli）、变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）、产气杆菌（Enterobacter aerogenes）和未知菌S3的各自悬液。

3.试剂甲基红试剂、V.P.试剂、吲哚试剂。

上次配制的试管培养基（葡萄糖/乳糖发酵培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基，胰蛋白胨水培养基，硫化氢试验培养基，明胶液化培养基，柠檬酸盐培养基），淀粉培养基平板。

四、实验步骤1.培养基配制（上次实验制备）1)葡萄糖/乳糖发酵培养基（用于糖发酵实验）胰蛋白胨 5gNaCl 2.5g水 500ml制法：a)将上述成分混合于水中溶解，矫正pH至7.4—7.6。

b)加葡萄糖/乳糖5g，溶解后加入0.5ml的1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，混匀。

c)分装于60支试管内，每管5ml。

d)每管倒置一个杜氏小管，加盖，115℃灭菌30min。

2)葡萄糖蛋白胨水培养基（用于甲基红和VP实验）蛋白胨 2.5g葡萄糖 2.5g磷酸氢二钾 2.5g蒸馏水500ml制法：a)将上述成分混合于蒸馏水中，加热溶解后，调pH至7.2。

实验五细菌鉴定中常见的生理生化反应一、实验目的。

1)了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。

2)了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。

3)了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。

二、实验原理。

各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。

以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。

1.糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有发酵不同的糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同，产生的代谢产物也不同：有的产酸产气，有的产酸不产气。

指示剂溴甲酚紫，pH5.2黄色—pH6.8紫色，当发酵产酸时，培养基将由紫变黄。

产气可由杜氏小管中有无气泡来证明。

2.甲基红试验（M.R试验）甲基红试验，pH4.4红色～pH6.2黄色，是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。

有些细菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.2以下。

有些细菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使pH升至大约6。

3.Voges-Proskauer试验（伏-普试验，V.P. 试验）伏-普试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。

某些细菌分解葡萄糖成丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。

乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被氧化为二乙酰，二乙酰与培养基中所含的胍基作用，生成红色化合物为V.P.反应阳性。

4.靛基质试验某些细菌，如大肠杆菌，能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质，靛基质与对二甲基氨基苯甲酸结合，形成玫瑰色靛基质。

5.硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐反应，形成黑色的硫化铁沉淀，为硫化氢试验阳性。

6.明胶液化实验明胶在25度以下可维持凝胶状态，以固体状态存在，而在25度以上时明胶就会液化。

细菌的生化试验名词解释细菌是一类微生物，广泛存在于自然界中。

它们是单细胞生物，无真正的细胞核，但却能够执行一系列生化反应。

研究细菌的生化试验是了解细菌的基本生物学特性和进行抗菌药物研发的重要手段。

以下是一些常见的细菌生化试验名词的解释。

1. 嗜热菌试验嗜热菌试验用于检测细菌是否具有耐热能力。

这个试验基于嗜热菌能够在高温环境下生长的特性。

通过将细菌接种在含有特定营养物质的培养基中，并在高温下孵育，观察细菌的生长情况，可以判断其是否为嗜热菌。

2. 酸酶试验酸酶试验用于检测细菌是否能够产生特定的酸酶。

这些酸酶可以将特定的底物分解为酸性产物，从而改变培养基的酸碱度。

通过观察培养基颜色的变化或使用酸碱指示剂，可以判断细菌的酸酶活性。

3. 氧化还原试验氧化还原试验用于检测细菌是否能够对底物进行氧化或还原反应。

这些反应可以生成或消耗氧分子，并产生可见的颜色变化。

通过添加特定的底物和指示剂，可以观察培养基的颜色变化，从而判断细菌的氧化还原能力。

4. 胶原酶试验胶原酶试验用于检测细菌是否能够分解胶原蛋白，一种存在于动物组织中的重要蛋白质。

这个试验基于胶原酶可以将胶原蛋白分解为小分子肽或氨基酸的特性。

通过观察培养基的透明圈或使用特定染料的变化，可以判断细菌是否具有胶原酶活性。

5. 大理石气试验大理石气试验是检测细菌是否具有尿素酶活性的方法。

尿素酶可以将尿素分解为氨和二氧化碳。

这个试验基于细菌产生的氨可与酚红指示剂反应，使培养基呈现鲜艳的红色。

通过观察培养基的颜色变化，可以判断细菌是否具有尿素酶活性。

这些生化试验名词只是细菌研究中的一小部分，不同的试验可以提供不同的信息，从而深入了解细菌的特性。

在细菌学的研究中，这些试验通常与其他分析方法结合使用，以全面了解细菌的生化特性、代谢途径和致病机制，为抗菌药物研发和靶向治疗提供有力的依据。

通过深入研究细菌的生化特性，我们可以更好地理解它们的生存机制，并为人类健康和环境保护提供支持。

细菌的生化实验一、糖的发酵培养基：糖培养基PH7.6的蛋白胨水溶液（蛋白胨1%）（氯化钠0.5%）适量糖，1%1.6%溴甲酚紫酒精溶液 0.1%分装10*100mm小试管，每管3-4ml，内置一密闭端向上的发酵管，10磅10分灭菌。

方法：用接种环取少量纯培养物接种于培养基中，37摄氏度培养18-24小时后观察，一般观察2-3天。

结果：产酸则培养基由兰紫变黄，用“+”表示。

产酸又产气，则培养基变黄，小管内有气泡，用“☉”表示，无变化则培养基仍为兰紫色，管内也无气泡，用“-”表示。

原理：指示剂溴甲酚紫的指示范围为PH5.2-6.8（黄-紫）。

每一种糖（醇）培养基内只含一种糖（醇）的成分，接种进去的细菌若能发酵这种糖，则可产生乳酸，使PH下降，培养及就由兰紫色变为黄色，如果同时还产生CO2、H2、CH4等气体，则小管内留有气泡，如果不能发酵分解这种糖，则培养及不变色也无气泡。

二、靛基质实验培养基：蛋白胨水蛋白胨 1%氯化钠 0.5%蒸馏水适量其中的蛋白胨最好选用含色氨酸较多的多价蛋白胨。

每支小试管分装3-4ml，10磅10分灭菌。

试剂：（欧立希氏试剂）对二甲基氨基苯甲醛 1g纯乙醇 95ml浓盐酸 20ml以上物品依次混合溶解方法：接种细菌于培养基中，37摄氏度培养24-48小时后，取出加乙醚约0.7cm厚，塞紧棉塞后摇震，使乙醚与培养物混匀，静置于试管架内数分钟，待乙醚浮至培养基表面，打开棉塞，沿试管壁慢慢加入靛基质试剂4-5滴，不要摇。

结果：乙醚层现红色为阳性，以“+”表示，不变者为阴性，以“-”表示。

原理：细菌若有色氨酸酶，就能分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质（吲哚）。

靛基质无色，但遇到对二甲基氨基苯甲醛，则可以生成红色的靛基质，以肉眼可见。

三、甲基红实验：培养及：葡萄糖蛋白胨水（PH7.4）葡萄糖 0.5%磷酸氢二钾 0.5%蛋白胨 0.5%蒸馏水适量加热溶解后，分装小试管，每管3-4ml，10磅10分灭菌试剂：0.1g甲基红溶于300ml95%乙醇中，加蒸馏水至500ml方法：接种细菌于培养液中，37摄氏度培养2-4天，取出加M、R试剂3-4滴。

课程名称：微生物学检验技术授课专业：医学检验学时：2学时实验五细菌的生长现象和代谢产物的观察一、实验目的1.掌握观察菌落的方法，细菌在固体、半固体、液体培养基上的生长现象及意义；2.熟悉鉴别细菌常用的生化反应实验原理、方法和结果判断。

二、实验物品㈠菌种：金葡、白葡、柠葡、大肠杆菌、枯草杆菌㈡Culture media：葡萄糖发酵管乳糖发酵管蛋白胨水㈢试剂：靛基质试剂三、实验内容㈠细菌在固体培养基上的生长现象菌落：接种的细菌适当的分开，经一段时间培养后，由1个细菌生长繁殖而形成单一的肉眼可见的细菌集团。

菌苔：当细菌在培养基表面密集生长时，多个菌落融合在一起。

菌落的描述：大小、形状、突起、边缘、表面、透明度、粘度葡萄球菌——光滑型菌落（S）枯草杆菌——粗糙型菌落（R）㈡细菌在液体培养基中的生长现象1．葡萄球菌：混浊生长为兼性厌氧菌，细菌向四周均匀扩散，出现肉眼可见均匀的混浊生长。

2．枯草杆菌：菌膜为专性需氧菌，多生长在液体的表面而形成菌膜。

3．链球菌：沉淀链球菌在生长过程中结成链状而增加了细菌本身的重力，由于重力的作用下沉而形成沉淀。

㈢细菌在半固体培养基中的生长现象:可观察细菌的动力葡萄球菌：沿穿刺线生长(穿刺线清晰)；动力阴性、无鞭毛，培养基清亮枯草杆菌：沿穿刺线扩散生长(穿刺线模糊)；动力阳性、有鞭毛，培养基混浊㈣细菌代谢产物的检查：鉴别细菌附：各种生化试验原理1.单糖发酵试验：细菌分解发酵单糖，可产生酸或气；酸使培养基中的酸性复红变成红色，为阳性。

2．靛基质试验：有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸，生成无色的靛基质（又称吲哚），与滴加的靛基质试剂（对二甲基氨基苯甲醛）生成玫瑰红化合物，为靛基质试验阳性。

3．H2S试验：有些细菌能分解培养基中含硫氨基酸生成H2S，遇到培养基中的亚铁离子，可生成黑色的沉淀，为H2S试验阳性。

四、实验报告记录细菌的生长、生化反应结果；并说明生化反应的原理。

一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应的基本原理。

2. 掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。

3. 熟悉生理生化反应在细菌鉴别中的实际应用。

二、实验原理细菌生理生化反应是指细菌在生长代谢过程中，通过酶催化作用，将底物转化为产物的化学反应。

这些反应能够反映细菌的代谢类型和生理特性，从而用于细菌的鉴定。

常见的细菌生理生化反应包括吲哚试验、甲基红试验、V-P试验、糖发酵试验等。

三、实验材料与仪器1. 菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌、枯草芽孢杆菌。

2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂。

3. 仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管。

四、实验步骤1. 接种：将菌种接种于相应的培养基中，37℃恒温培养箱中培养24小时。

2. 吲哚试验：取少量培养液，加入吲哚试剂，观察颜色变化。

3. 甲基红试验：取少量培养液，加入甲基红试剂，观察颜色变化。

4. V-P试验：取少量培养液，加入V-P试剂，观察颜色变化。

5. 糖发酵试验：将不同糖类培养基分别接种菌种，观察颜色变化。

五、实验结果与分析1. 吲哚试验：大肠杆菌和产气肠杆菌呈现阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌呈现阴性反应。

2. 甲基红试验：大肠杆菌和产气肠杆菌呈现阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌呈现阴性反应。

3. V-P试验：大肠杆菌和产气肠杆菌呈现阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌呈现阴性反应。

4. 糖发酵试验：大肠杆菌和产气肠杆菌对葡萄糖、乳糖和蔗糖均呈现阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌对葡萄糖和乳糖呈现阴性反应。

六、实验结论通过本次实验，我们掌握了细菌生理生化反应的基本原理和实验方法。

通过对吲哚试验、甲基红试验、V-P试验和糖发酵试验的结果分析，我们可以初步判断出大肠杆菌和产气肠杆菌为阳性反应，普通变形菌和枯草芽孢杆菌为阴性反应。

这表明生理生化反应在细菌鉴别中具有重要的实际应用价值。