太平洋牡蛎中Cg-IL-17和Cg-TGF-β的表达及其免疫作用的研究

太平洋牡蛎过敏原精氨酸激酶的分子克隆、表达纯化和免疫原性鉴定赵晓涵，刘文颖，程青丽，谷瑞增，鲁军*，李国明*（中国食品发酵工业研究院，北京市蛋白功能肽工程技术研究中心，北京 100015）摘要：克隆太平洋牡蛎精氨酸激酶（CG-AK）基因，导入大肠杆菌（BL21（DE3））中，然后筛选重组菌株。

通过SDS-PAGE对重组菌株中太平洋牡蛎精氨酸激酶（CG-AK）的诱导表达条件进行探究，经Ni2+亲和层析柱纯化，通过SDS-PAGE、质谱（MALDI-TOF-MS）、圆二色（CD）光谱等方法从相对分子量、一级结构以及二级结构综合鉴定了重组CG-AK的准确性，同时使用SDS-PAGE和Western blot检测重组CG-AK 的表达，并利用酶联免疫吸附（ELISA）对其免疫原性进行鉴定。

成功克隆表达并鉴定了CG-AK，其最佳诱导表达条件为18℃诱导14h，具有良好的免疫原性。

为国内过敏原的标准化生产提供理论支持，也为后续牡蛎过敏疾病的精准诊断、治疗及脱敏方法奠定了良好的分子生物学基础。

关键词：太平洋牡蛎；精氨酸激酶；分子克隆；表达条件；免疫原性；过敏原中图分类号：R392.11/TS201.6 文献标识码：A 文章编号：1006-2513（2021）02-0100-07doi：10.19804/j.issn1006-2513.2021.02.015Cloning，expression，purification and immunogenicity identification of arginine kinase，the allergen from Crassostrea gigasZHAO Xiao-han，LIU Wen-ying，CHENG Qing-li，GU Rui-zeng，LU Jun*，LI Guo-ming*（China National Research Institute of Food & Fermentation Industry，Beijing Engineering Research Center of Protein and Functional Peptides，Beijing 100015）Abstract：The Pacific oyster arginine kinase（CG-AK）gene was cloned into E.coli（BL21（DE3）），and the recombinant strain was screened. The inducible expression conditions of the recombinant CG-AK were investigated by SDS-PAGE. The recombinant CG-AK was purified by Ni2+ affinity chromatography column，which was comprehensively identified from the relative molecular weight，primary structure and secondary structure by SDS-PAGE，mass spectrometry（MALDI-TOF-MS），circular dichroism（CD）spectroscopy. At the same time，SDS-PAGE and Western blot were used to detect the expression of recombinant CG-AK，and enzyme-linked收稿日期：2020-09-17基金项目：国家自然科学基金项目（31671963）；中国食品发酵工业研究院强院工程培育专项（院强院20-功能肽-505）。

长牡蛎SNP标记的开发及多态性检测的开题报告一、研究背景长牡蛎（Crassostrea plicatula）是一种重要的经济贝类动物，广泛分布于我国南海、东海和黄海等沿海水域。

近年来，随着养殖业的发展，长牡蛎的养殖规模逐渐扩大，但因其容易受到疾病和环境等因素的影响，导致生产效益低下。

因此，对长牡蛎进行分子水平的研究，有助于提高其疾病抵抗力和生产性能，进而推动养殖业的发展。

单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphisms，SNPs）是一种广泛存在于基因组中的遗传变异，其基本形式是在同一位置上出现两种或更多等位基因。

近年来，随着高通量测序技术的不断发展，SNP已成为最常用的分子标记。

SNP标记可广泛应用于基因组维度的分析，包括物种鉴定、遗传变异分析、亲缘关系推断、群体结构分析和基因定位等研究领域。

因此，本研究拟利用RAD-seq技术，对长牡蛎进行SNP标记的开发及多态性检测，为长牡蛎遗传多样性和生产性能研究提供基础数据。

二、研究内容1. 样品收集及DNA提取本研究选取长牡蛎为研究对象，从南海、东海和黄海等沿海水域采集长牡蛎样品，利用基因组提取试剂盒对其进行DNA提取，获取高质量的基因组DNA。

2. RAD-seq测序及SNP标记开发通过RAD-seq技术对长牡蛎样品进行高通量测序，利用双端读取的方式获取大量有效数据。

随后，通过应用一系列的生物信息学分析方法，对数据进行处理和过滤，提取出具有高质量的SNP标记。

3. SNP标记的多态性检测利用群体遗传学分析软件，对获得的SNP标记进行多态性检测，包括遗传多样性、基因型频率、杂合度和遗传连锁不平衡等指标的测定。

三、研究意义随着现代化养殖业的发展，对基因组水平的研究越来越受到关注。

本研究将利用RAD-seq技术，对长牡蛎进行SNP标记的开发及多态性检测，为长牡蛎遗传多样性和生产性能研究提供基础数据，进一步推动长牡蛎产业的发展。

牡蛎诺如病毒多样性研究中病毒富集方法的评估郭萍;潘迎捷;喻勇新【摘要】牡蛎作为诺如病毒的载体,含有几乎所有的GI型和大部分GII型诺如病毒.为了有利于牡蛎中诺如病毒多样性的研究,对4种常用于宏基因组测序中病毒富集方法(PEG6000沉淀法、超速离心法、过滤法和直接提取法)进行比较评估,将含有GII.4型诺如病毒基因的慢病毒(Lentivirus)加入阴性牡蛎中作为内参,利用反转录荧光定量PCR计算4种方法处理前后Lentivirus的数量,以回收率作为方法评估的指标,并以16S PCR来验证处理后微生物污染情况.重复本实验得到的两次结果均显示这4种方法回收率无明显差异,直接提取法回收率相对较高,但同时也具有较为严重的微生物污染.综合考虑其仍显示较好的优越性,因此直接提取方法更适用于后期牡蛎诺如病毒多样性研究中RNA的提取.【期刊名称】《生物学杂志》【年(卷),期】2019(036)003【总页数】4页(P104-107)【关键词】诺如病毒;牡蛎;直接提取法;多样性研究【作者】郭萍;潘迎捷;喻勇新【作者单位】上海海洋大学食品学院,上海201306;上海海洋大学食品学院,上海201306;农业部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室,上海201306;上海海洋大学食品学院,上海201306;农业部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室,上海201306【正文语种】中文【中图分类】S963诺如病毒(Norovirus，NoV)，又称为诺瓦克病毒，于1968年在美国俄亥俄州诺瓦克地区的一所学校中暴发的一起流行性腹泻的患者粪便中发现，因此而得名[1-4]。

诺如病毒是单股正链的RNA病毒，属于杯状病毒科，主要分为7个基因类群，其中GI、GII、GIV型诺如病毒可以感染人类[5-6]，由于GIV型诺如病毒没有GI和GII型流行，故一般着重于GI和GII型诺如病毒的研究，在GI和GII基因类群中，又可以分别细分出至少9和21种基因型。

胃癌组织中IL-17、lL-6和TGF-β1的表达及其临床意义孟欣颖;马健;江晨;周长宏【期刊名称】《胃肠病学》【年(卷),期】2011(16)10【摘要】背景:胃癌是常见的消化道恶性肿瘤,慢性炎症在胃癌发生、发展中发挥作用.白细胞介素(IL)-17、IL-6、转化生长因子(TGF)-β1是重要的炎症相关因子,三者在胃癌中的作用尚不完全清楚.目的:探讨胃癌组织中IL-17、IL-6和GF-β1的表达及其临床意义.方法:收集2009年1月～2010年1月青岛市市立医院的50例胃癌患者和26名健康对照者的组织标本,采用免疫组化染色检测IL-17、IL-6和TGF-β1的表达,并分析其与胃癌临床病理特征的关系.结果:胃癌组织中IL-17、IL-6和TGF-β1中-高强度阳性表达明显高于对照组(P＜0.01).胃癌组织中IL-17、IL-6和TGF-β1表达与临床分期、淋巴结转移均相关(P＜0.05),而与患者的性别、年龄、肿瘤大小、分化程度均无关(P＞0.05).胃癌组织中IL-17表达与IL-6、TGF-β1表达呈正相关(P＜0.05).结论:IL-17、IL-6和TGF-β1在胃癌的发生和发展中可能起促进作用,IL-6和TGF-β1可能是IL-17生成的正向调节因子.%Gastric cancer is one of the most common gastrointestinal malignancies. Chronic inflammation is implicated in the development and progress of gastric cancer. Interleukin (IL)-17, IL-6 and transforming growth factor (TGF)-pl are important inflammation related cytokines, but the roles of IL-17, IL-6 and TGF-pi in gastric cancer are still unclear. Aims: To study the expressions and clinical significances of IL-17, IL-6 and TGF-pi in gastric cancer tissue. Methods: Fifty patients with gastric cancer and 26 healthy controls fromJan. 2009 to Jan. 2010 at Qingdao Municipal Hospital were enrolled. The expressions of IL-17, IL-6 and TGF-pl in gastric cancer tissue and control specimens were determined by immunohistochemistry, and their correlations with clinicopathological characteristics of gastric cancer were analyzed. Results: Compared with healthy controls, moderate to high positive expressions of IL-17, IL-6 and TGF-pl were significantly higher in gastric cancer tissue (P<0.01). Expressions of IL-17, IL-6 and TGF-pl in gastric cancer tissue were significantly correlated with tumor stage and lymph node metastasis (f<0.05), but no correlation with gender, age, tumor size and degree of differentiation (P>0.05). Expressions of IL-6 and TGF-pi had positive correlation with that of IL-17 in gastric cancer tissue. Conclusions: IL-17, IL-6 and TGF-pl may have promotive effects in the development and progress of gastric cancer, and IL-6 and TGF-pl may be the positive regulatory factors for genesis of IL-17.【总页数】4页(P593-596)【作者】孟欣颖;马健;江晨;周长宏【作者单位】青岛市市立医院东院区消化内科 266071;青岛市市立医院干保二科266071;青岛市市立医院本部病理科 266071;青岛市市立医院干保二科 266071【正文语种】中文【相关文献】1.血清IL-4、IL-17、IFN-γ及TGF-β在慢性淋巴细胞白血病患者中的表达及其临床意义 [J], 周玉洁2.胃癌组织中TGF-β1、TGF-βRⅡ、Smad2/3和CDC25蛋白的表达及其临床意义 [J], 程志芬;孙凤丹;张金子;李柱虎;崔明花;玄延花3.再生障碍性贫血患者外周血和骨髓中IL-17、IL-23及TGF-β表达水平及其临床意义 [J], 李军;黄可欣;陆培信;宋雪松;马洪喜4.Caveolin-1和TGF-β1在胃癌组织中的表达及临床意义 [J], 张志梅;费素娟;杨聪颖;张昶5.p-STAT3和IL-17在胃炎、胃上皮内瘤变及胃癌组织中的表达差异及临床意义 [J], 高伟;于悦卿;崔佳;赵培;张明明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

蒽对太平洋牡蛎不同发育时期抗氧化酶活*差异*影响
在实验条件下采用生态毒理学和生物化学方法,选用常见的环境污染物多环芳烃蒽(Anthracene),以太平洋牡蛎(Crassostreagigas)为实验材料进行毒理实验.研究了太平洋牡蛎D型幼虫、壳顶幼虫、幼贝和成贝4个不同发育时期中的3种抗氧化酶:超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化*酶(CAT)对蒽胁迫的敏感*.结果表明,在蒽胁迫下,D型幼虫和壳顶幼虫期3种抗氧化酶敏感*均为:POD＞SOD＞CTA;在幼贝和成贝期,其敏感*为:SOD＞CTA,而POD表现出不稳定*.
张培玉,ZHANGPei-Yu(青岛大学环境科学与工程系,青岛,266071)。

文章编号：1673-887X(2023)02-0005-06菌胁迫对近江牡蛎C型凝集素母源免疫传递及抑菌影响王翠丽1，2（1.南宁师范大学地理与海洋研究院，广西壮族自治区南宁530000；2.南宁师范大学北部湾环境演变与资源利用教育部重点实验室，广西壮族自治区南宁530000）摘要为丰富无脊椎贝类母源免疫调控机制研究，文章采用底物显色原位杂交、荧光定量PCR和人工促排等技术，研究了菌胁迫对近江牡蛎（Crassostrea rivularis）C型凝集素（C-type lectin，CTL）母源免疫传递及抑菌影响。

结果表明：CTL定位于成贝卵巢组织的滤泡细胞和卵原细胞中；成贝卵巢组织和成熟卵子中均能检测到CTL转录本；成贝注射金黄色葡萄球菌或大肠杆菌后，卵巢组织CTL mRNA表达量均有一个持续上升过程，注射后12h的CTL mRNA表达量达最高峰，注射后48h大致恢复至空白组水平；成贝注射金黄色葡萄球菌或大肠杆菌12h后，人工促排，与空白组比较，实验组成熟卵子中CTL mRNA相对表达量均显著上调（P<0.05）；抑菌活性实验显示成熟卵子蛋白具有抑菌活性，且抑菌强度随孵育时间的延长和蛋白浓度的增加而增强，但其中的CTL与其抗体结合后，抑菌活性下降，菌存活率显著上调（P<0.05）。

该CTL在近江牡蛎中具有明显的母源免疫传递效应，且成熟卵子中母源CTL具有重要的抑菌活性。

关键词菌胁迫；近江牡蛎；C型凝集素；母源免疫；抑菌中图分类号S985.3+5文献标志码A doi:10.3969/j.issn.1673-887X.2023.02.001Maternal Immune Transmission and Bacteriostatic Effect of Bacterial Stresson C-type Lectin in Crassostrea rivularisWang Cuili1,2(1.Institute of Geography and Oceanography(IGO),Nanning Normal University,Nanning530000,Guangxi Zhuang Autonomous Region,China;2.Key Laboratory of Environment Change and Resources Use in Beibu Gulf(Nanning Normal University),Ministry of Education,Nanning530000,Guangxi Zhuang Autonomous Region,China)Abstract：In order to enrich the research on the maternal immune regulation mechanism of invertebrate shellfish,influence of bacte‐rial stress on C-type lectin maternal immunity transmission and bacteriostasis in Crassostrea rivularis,this paper studied the using technology of substrate chromogenic in situ hybridization,real-time PCR,artificial ovulation promotion.Results showed that CTL was located in follicular cell and oogonia of adult shellfish ovary tissue,ovarian tissue and mature eggs had expressions of CTL tran‐script,after injection of staphylococcus aureus or escherichia coli,relative expressions of CTL mRNA had a continuous rising pro‐cess in the ovary tissue of adult shellfish,relative expressions of CTL mRNA reached the peak after injection12h,and returned to the level of the blank group after48h;after injection12h of staphylococcus aureus or escherichia coli,artificial ovulation promotion was implemented,compared with the blank group,relatives expressions of CTL mRNA were significantly increased in mature eggs of the experimental group(P<0.05),the bacteriostatic activity experiment showed that mature egg protein had bacteriostatic activity,and the inhibition increased with the prolongation of incubation time and the increase of protein concentration,however,after CTL was combined with its antibody,the bacteriostatic activity decreased,and the bacterial survival rates were significantly increased(P< 0.05).The CTL has obvious maternal immune transmission effect,and the maternal CTL has important antibacterial activity in ma‐ture eggs in Crassostrea rivularis.Key words：bacterial stress,Crassostrea rivularis,C-type lectin,maternal immunity,bacteriostasis母源免疫是子代从母体获得的免疫能力，主要通过胎盘、初乳和卵黄等形式由母体传递至子代，在脊椎生物鱼类[1]、两栖类[2]、鸟类[3]、哺乳类[4]，和无脊椎生物甲壳类子代个体发育早期免疫防御过程中发挥重要作用[5，6]。

doi：10.3969/j.issn.1000-484X.2024.01.013·论著/中医中药与免疫·基于IL-17/NF-κB信号通路探讨敦煌医方大补脾汤联合奥沙利铂对胃癌荷瘤小鼠炎症免疫的影响曾元丁苏韫龚红霞牛世伟张晗（甘肃中医药大学基础医学院，甘肃省高校重大疾病分子医学与中医药防治研究省级重点实验室，兰州 730000）中图分类号R285.5 文献标志码 A 文章编号1000-484X（2024）01-0092-05［摘要］目的：研究敦煌医方大补脾汤对胃癌荷瘤小鼠的抑瘤作用以及基于IL-17/NF-κB信号通路探讨大补脾汤联合奥沙利铂对胃癌荷瘤小鼠炎症免疫的影响。

方法：建立MFC胃癌皮下荷瘤小鼠模型，随机分为模型组、奥沙利铂组、大补脾汤高、中、低剂量联合奥沙利铂组［21.58、10.79、5.40 g/（kg·d）］，每组10只，雌雄分笼饲养，接种8 d后开始给药，连续给药14 d；末次给药后次日眼球取血，处死小鼠，摘取肿瘤组织称重，计算抑瘤率；ELISA检测小鼠血清IL-17和IL-6含量，免疫组化（IHC）、RT-qPCR和Western blot分别检测小鼠肿瘤组织IL-17、IL-6、NF-κB和pNF-κB mRNA和蛋白表达。

结果：奥沙利铂组、大补脾汤高、中、低剂量联合奥沙利铂组抑瘤率分别为33.02%、52.92%、46.33%和39.52%，各给药组肿瘤质量均较模型组显著降低（P<0.01），大补脾汤高、中、低剂量联合奥沙利铂组显著高于奥沙利铂组（P<0.01）；与模型组相比，各给药组血清IL-17和IL-6含量、肿瘤组织IL-17、IL-6、NF-κB p65和pNF-κB p65 mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.01，P<0.05）；与奥沙利铂组相比，大补脾汤高、中剂量联合奥沙利铂组血清IL-17和IL-6含量、肿瘤组织IL-17、IL-6、NF-κB p65和pNF-κB p65 mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.01，P<0.05）。

长牡蛎Toll样受体介导的抗病毒相关基因的功能及调控机制研
究
长牡蛎(Crassostrea gigas)是我国重要的海水养殖经济贝类,但夏季大规模死亡事件时有发生,造成的经济损失直接影响了我国牡蛎养殖产业的可持续发展。

已有研究证实,牡蛎疱疹病毒(Ostreid Herpevirus-1,OsHV-1)是造成长牡蛎大规模死亡的重要病原微生物。

因此,深入研究长牡蛎抗病毒免疫防御机制对探索病毒防治方法有重要的意义。

Toll-样受体(Toll-like receptor,TLR)是一类重要模式识别受体(Pattern recognition receptor,PRR),在识别以及清除病原微生物中有重要作用。

TLR信号通路在脊椎动物中研究较为透彻,然而在无脊椎动物的研究中还处于探索阶段。

已有研究发现,在若干无脊椎动物中TLR基因有明显的扩张现象,在基因组中预测到了上百个TLR同源序列(长牡蛎,小头虫,紫海胆),暗示TLR通路在无脊椎动物中可能存在功能分化。

目前关于软体动物TLR信号通路的研究有限,所得结果较为简单零散。

深入了解这些基因在通路中的作用机制有助于我们更好地认识TLR信号通路在抗病毒天然免疫防御过程中的作用。

本研究利用分子生物学和细胞生物学等方法对长牡蛎TLR信号通路关键基因的作用机制进行了探究。

大量研究表明在脊椎动物中TLR通过TIR-TIR结合作用招募接头分子。

我们首先以OsHV-1爆发期表达上调的4个TLR基因为研究对象,通过酵母双杂交文库筛选了可能与之存在相互作用的蛋白。

结果发现,这4个TLR蛋白只有CgTLR-27513筛选到的接头分子蛋白中有TIR结构域,因此我们后续实验则以该。