不同温度下太平洋牡蛎三倍体和二倍体生物能量学比较

大规模诱导生产太平洋牡蛎(Crassostrea
gigas(Thunberg))3倍体的方法比较
李赟;于瑞海;王昭萍;王如才;郑小东
【期刊名称】《高技术通讯》
【年(卷),期】2000(010)011
【摘要】利用6-DMAP和冷休克处理太平洋牡蛎受精卵大量生产牡蛎3倍体苗种用于养殖生产,结果表明,与冷休克相比,6-DMAP处理对胚胎发育存在较大的影响,幼虫孵化率有所下降,但3倍体率则基本稳定在60%以上 ,比冷休克高30%,综合分析认为,6-DMAP可作为比较理想的诱导药剂用于大量培育3倍体苗种的养殖.【总页数】3页(P1-3)
【作者】李赟;于瑞海;王昭萍;王如才;郑小东
【作者单位】青岛海洋大学水产学院,青岛,266003;青岛海洋大学水产学院,青岛,266003;青岛海洋大学水产学院,青岛,266003;青岛海洋大学水产学院,青
岛,266003;青岛海洋大学水产学院,青岛,266003
【正文语种】中文
【中图分类】S9
【相关文献】
1.低渗诱导太平洋牡蛎三倍体以及与其他诱导方法的比较 [J], 孔静;王昭萍;于瑞海;刘剑;张跃环
2.人工诱导长牡蛎Crassostrea gigas(Thunberg)三倍体发生的初探 [J], 林位琅
3.四倍体太平洋牡蛎(Crassostrea gigas Thunberg)自群繁殖的研究 [J], 施坤涛;王昭萍;于瑞海
4.两种方法诱导太平洋牡蛎三倍体在生产上的应用效果 [J], 于瑞海;王昭萍;王如才;田传远;郑小东
5.二倍体和三倍体太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)繁殖前后生化成分及氨基酸组成的比较研究 [J], 孔令锋;王昭萍;于瑞海;王如才
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010673186.2(22)申请日 2020.07.14(71)申请人 厦门世倍海洋科技有限公司地址 361000 福建省厦门市思明区海岸后街54号205室(72)发明人 朱李贤　(74)专利代理机构 北京市炜衡律师事务所11375代理人 许育辉(51)Int.Cl.A01K 61/54(2017.01)A01K 61/17(2017.01)(54)发明名称葡萄牙牡蛎二倍体与太平洋牡蛎三倍体杂交生产异源四倍体的方法(57)摘要本发明公开了一种葡萄牙牡蛎二倍体与太平洋牡蛎三倍体杂交生产牡蛎异源四倍体的方法。

本发明以太平洋牡蛎三倍体作为母本，以全重为目标优选葡萄牙牡蛎二倍体作为父本，通过药物诱导杂交生产出牡蛎异源四倍体。

本方法获得的牡蛎异源四倍体具有广温的特性，其与普通葡萄牙牡蛎或太平洋牡蛎二倍体杂交生产的牡蛎三倍体适合我国南方和北方沿海养殖，推广应用前景广阔。

权利要求书1页 说明书4页 附图1页CN 112535128 A 2021.03.23C N 112535128A1.葡萄牙牡蛎二倍体与太平洋牡蛎三倍体杂交生产异源四倍体的方法，其特征包括以下几个步骤：(a)挑选太平洋牡蛎三倍体作为繁殖母本，挑选普通葡萄牙牡蛎二倍体作为繁殖父本，种贝分别放入种贝培育池进行促熟；(b)太平洋牡蛎种贝促熟至性腺成熟后，取得卵子，并于下一步开始前熟化；解剖促熟后葡萄牙牡蛎二倍体，获得精子，并于下一步开始前激活；(c)将熟化的卵子与激活的精子混合于水中，所述精子与卵子数量比例为5～10：1，控制受精卵密度保持在≤1万个/毫升；(d)观察受精卵发育情况，当第一极体出现50％～75％时，迅速加入细胞松弛素B(0.5～1.0mg/L)或6-二甲基氨基嘌呤(15～30mg/L)处理20～30min；(e)受精卵在药物处理结束后立即清洗并过滤药物，设置孵化密度，放置于黑桶中孵化；当发育至D型幼虫后，筛选幼虫，设置培育密度并放入黑桶培育；待幼虫出现眼点后，投放附着基质。

doi: 10.7541/2021.2019.263三种方法诱导熊本牡蛎三倍体的比较研究李玲蔚 李海昆 于瑞海 马培振 张 哲 王永旺(中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室, 青岛 266003)摘要: 为获得高效的熊本牡蛎的三倍体诱导方法, 分别比较了6-DMAP 、高盐和低盐3种诱导方法在不同的诱导浓度(盐度)、起始诱导时间和持续诱导时间下的卵裂率、孵化率和三倍体率, 同时比较了3种方法获得的幼虫的生长、存活和三倍体率变化情况。

结果表明, 在6-DMAP 诱导组中, 三倍体率和诱导效率分别可达37.97%—58.01%和34.30%—42.50%, 培育期间幼虫的平均存活率27.19%, 生长率13.03 μm/d, 三倍体率降低了24.94%; 在低盐诱导组中, 三倍体率和诱导效率分别可达7.32%—42.25%和2.17%—31.41%, 培育期间幼虫的平均存活率33.92%, 生长率12.71 μm/d, 三倍体率降低了20.64%; 在高盐诱导组中, 三倍体率和诱导效率分别可达7.47%—63.03%和6.58%—49.41%, 培育期间幼虫的平均存活率31.66%, 生长率13.08 μm/d, 三倍体率降低了17.64%。

综合来看, 高盐诱导是诱导三倍体熊本牡蛎的最优方法, 其诱导条件的最佳组合为盐度55, 起始诱导时间受精后15min, 持续诱导时间20min 。

研究为熊本牡蛎的三倍体诱导提供了技术支持, 对熊本牡蛎的多倍体育种具有重要的理论指导意义。

关键词: 熊本牡蛎; 6-DMAP; 高盐; 低盐; 三倍体率中图分类号: S966.9 文献标识码: A 文章编号: 1000-3207(2021)02-0352-08熊本牡蛎(Crassostrea sikamea )属于巨牡蛎属(Crassostrea ), 在中国、日本和韩国的沿海均有分布[1—3], 其独特的口味深受消费者的喜爱,被美国引进并成功地开展了生产养殖[4—6]。

研究简报不同发育期的太平洋牡蛎在不同干露状态下的成活率研究Ξ于瑞海,王昭萍,孔令锋,李　琪,郑小东(中国海洋大学,山东青岛,266003)摘　要:　用太平洋牡蛎的D 形幼虫、壳顶中期幼虫、眼点幼虫、稚贝、幼贝及成体为材料,在8～10℃和20～22℃干、湿环境下干露不同时间对所取样品的成活率进行了比较研究。

实验说明太平洋牡蛎其成体、D 形幼虫、壳顶中期幼虫、眼点幼虫、稚贝及幼贝在低温湿润的条件下干露时间长,成活率高,而在高温干燥的条件下干露相同的时间成活率明显降低。

在温度、湿度相同的条件下,其耐干能力为成贝>眼点幼虫>壳顶中期幼虫>幼贝>稚贝>D 形幼虫。

本实验为太平洋牡蛎幼虫的异地采苗,稚贝和幼贝的长途运输,成贝低温或干露保存提供了一定的科学依据。

关键词:　太平洋牡蛎;干露;成活率中图法分类号:　S966.1 文献标识码:　A 文章编号:　167225174(2006)042617204 太平洋牡蛎(Crassost rea gigas )因生长速度快,出肉率高,营养丰富,具有较高的经济价值,是我国1种重要的养殖贝类。

目前牡蛎随着国内外市场需求的大量增加,促进了我国牡蛎养殖业和加工出口业的发展,因此,加工和养殖单位每年都要购买大量的成贝和幼苗,但由于对干露时间缺乏充分了解,常出现大量死亡现象,造成较大的经济损失;另外由于幼虫培育期较长,附着基运输不便等,一些育苗单位往往需要进行异地采苗,也需要对幼虫的干露时间有所掌握[1]。

而以往对牡蛎各生长阶段不同干露时间下的成活率报道不多,且不够系统和详细,本文探讨了不同温度下、不同湿度下干露不同时间对太平洋牡蛎成贝、幼贝、稚贝及其幼虫成活率的影响规律,为科研提供理论依据,并对育苗、养殖生产和加工单位具有一定指导作用。

1　材料与方法1.1材料1.1.1太平洋牡蛎 太平洋牡蛎成贝、D 形幼虫、壳顶中期幼虫、眼点期幼虫均取自威海市初村文登水产养殖综合育苗基地。

三倍体太平洋牡蛎生产性育苗与养成初报
王昭萍;李贇;王如才;郑小东;于瑞海;田传远;高强
【期刊名称】《海洋湖沼通报》
【年(卷),期】2000()3
【摘要】本文总结了１９９８～１９９９年三倍体太平洋牡蛎育苗与养成情况。

９８年在荣成三４８６３中试基地利用６－ＤＭＡＰ、冷休克及ＣＢ抑制受精卵第二极体释放的方法诱导太平洋牡扳三倍体，其中以６－ＤＭＡＰ效果较好，诱导三倍体率为６０．９％－９０．５％。

共培育三倍体群牡蛎苗种４．１３亿，海上养殖２０００亩。

三倍体群牡蛎的生长明显快于二倍体对照群体，体重增加１５．６５％～４１．８９％。

１９９９年４～８月收获，三倍体群牡蛎比二倍体平均亩增产２０％。

【总页数】6页(P34-39)
【关键词】太平洋牡砺;三倍体;育苗;养成
【作者】王昭萍;李贇;王如才;郑小东;于瑞海;田传远;高强
【作者单位】青岛海洋大学
【正文语种】中文
【中图分类】S968.3
【相关文献】
1.太平洋牡蛎三倍体育苗技术初步分析 [J], 刘景斗;刘溪运
2.太平洋牡蛎三倍体育苗技术初步研究 [J], 王在文
3.太平洋牡蛎三倍体苗种生产性培育试验 [J], 马庆涛;廖烈金;杨晓;李春晓;陈伟洲;郭森记;康叙钧
4.关于太平洋牡蛎的养殖技术之一太平洋牡蛎三倍体育苗技术措施 [J], 秦安庆;王世晔;邵淑芳;葛民兴;关茂贵
5.单体全三倍体太平洋牡蛎育苗技术的研究 [J], 于瑞海;王昭萍;施坤涛;孔令锋;牟宗宝;马化亮
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第54卷 第3期 2024年3月中国海洋大学学报P E R I O D I C A L O F O C E A N U N I V E R S I T Y O F C H I N A54(3):031~039M a r .,2024温度和盐度对长牡蛎 海大1号 二倍体和三倍体幼虫生长与存活的影响❋张海宁1,徐成勋1,李 琪1,2❋❋(1.海水养殖教育部重点实验室(中国海洋大学),山东青岛266003;2.青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室,山东青岛266237)摘 要: 为确定长牡蛎(C r a s s o s t r e a g i ga s ) 海大1号 苗种规模化繁育的最适条件,本研究设置4个温度梯度(20㊁25㊁30和35ħ)和5个盐度梯度(20㊁25㊁30㊁35和40),分析了不同温度和盐度对长牡蛎 海大1号 二倍体和三倍体幼虫生长和存活的影响㊂研究表明,当温度25ħ和盐度30时,长牡蛎 海大1号 二倍体和三倍体幼虫的受精率㊁孵化率和变态率最高㊂不同温度处理下,三倍体幼虫的生长速度和累计存活率始终高于二倍体幼虫㊂随着温度升高幼虫生长速度增加,但存活率下降,在25ħ时三倍体幼虫存活率最高(52.00%ʃ6.56%),温度为30ħ时,三倍体幼虫壳高增长最快(14.82μm ㊃d -1)㊂不同盐度下,三倍体幼虫的生长速度和累计存活率显著高于二倍体幼虫㊂幼虫的存活率随着盐度升高呈先升高再下降的趋势,三倍体幼虫累计存活率在盐度30时最高(52.00%ʃ6.56%);幼虫的生长速度随着盐度升高呈下降的趋势,三倍体幼虫壳高在盐度20时增长最快(18.22μm ㊃d -1)㊂研究结果表明,长牡蛎 海大1号 三倍体幼虫比二倍体幼虫表现出更强的温度㊁盐度的耐受性;长牡蛎 海大1号 三倍体苗种培育的适宜盐度为20~30,适宜温度为20~25ħ㊂本文可为长牡蛎 海大1号 三倍体苗种的规模化繁育提供参考㊂关键词: 长牡蛎;三倍体幼虫;温度;盐度;生长;存活;海大1号中图法分类号: S 968.3 文献标志码: A 文章编号: 1672-5174(2024)03-031-09D O I : 10.16441/j.c n k i .h d x b .20220514引用格式: 张海宁,徐成勋,李琪.温度和盐度对长牡蛎 海大1号 二倍体和三倍体幼虫生长与存活的影响[J ].中国海洋大学学报(自然科学版),2024,54(3):31-39.Z h a n g H a i n i n g ,X u C h e n g x u n ,L i Q i .E f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n t h e g r o w t h a n d s u r v i v a l o f d i p l o i d a n d t r i pl o i d l a r v a e o f P a c i f i c o y s t e r H a i d a N o .1 [J ].P e r i o d i c a l o f O c e a n U n i v e r s i t y of C h i n a ,2024,54(3):31-39. ❋ 基金项目:现代农业产业技术体系项目(C A R S -49);山东省农业良种工程项目(2021L Z G C 027)资助S u p p o r t e d b y t h e A g r i c u l t u r e R e s e a r c h S y s t e m o f C h i n a (C A R S -49);t h e A g r i c u l t u r a l S e e d I m p r o v e m e n t P r o j e c t o f S h a n d o n g Pr o v i n c e (2021L Z G C 027)收稿日期:2022-12-30;修订日期:2023-02-04作者简介:张海宁(1996 ),男,硕士生,主要从事贝类遗传育种研究㊂E -m a i l :1501403997@q q.c o m ❋❋ 通信作者:李 琪(1966 ),男,博士,教授,博士生导师,主要研究方向为海洋贝类遗传育种及繁殖生物学研究㊂E -m a i l :qi l i 66@o u c .e d u .c n 长牡蛎(C r a s s o s t r e a g i ga s )作为全球性重要的经济贝类,具有生长速度快㊁抗逆性强㊁肉质鲜美㊁营养丰富等特点㊂长牡蛎 海大1号 是以生长速度和壳型为选育目标,通过群体选育培育出的新品种[1]㊂然而,长牡蛎 海大1号 与其他传统养殖的二倍体牡蛎一样,由于夏季繁殖期配子排放导致软体部消瘦,无法供应市场㊂与二倍体牡蛎相比,三倍体牡蛎育性相对较差,在繁殖季节也能保持良好的肉质,弥补夏季二倍体牡蛎市场短缺,可以保障全年供应[2]㊂因此,开展长牡蛎海大1号 三倍体苗种的规模化繁育与产业化应用对推动牡蛎养殖产业的发展具有重要意义㊂幼虫培育是牡蛎苗种生产的重要环节,了解幼虫对养殖环境的偏好对于最大限度地提高育苗场的产量至关重要,而环境条件在无脊椎动物幼虫发育中起着至关重要的作用㊂通常情况下,在探究培育幼虫适宜条件时,除食物的质量和数量,需要考虑温度和盐度的适应性[3-4]㊂温度是影响贝类幼虫生长和存活的重要环境因素,高温会导致海洋贝类幼虫大量死亡,而低温则会导致大部分海洋贝类幼虫生长缓慢[5-7]㊂盐度影响幼虫的生理反应,双壳贝类的渗透压调节功能受海水盐度的影响,盐度变化超过其自身调节能力是导致双壳贝类死亡的重要原因之一[8-9]㊂有关温度㊁盐度对贝类生长发育的影响已有大量报道,阐明温度和盐度对长牡蛎(C .g i g a s )[6]㊁岩牡蛎(C r a s s o s t r e a n i p-p o n a )[10]㊁栉孔扇贝(C h l a m y s fa r r e r i )[9]㊁菲律宾蛤仔(R u d i t a p e s p h i l i p p i n a r u m )[11]㊁钝缀锦蛤(T a pe s d o r s a t u s )[12]幼虫及稚贝生长发育的影响,可为优化贝类幼虫培育条件提供基础数据㊂研究幼虫培育的最佳中 国 海 洋 大 学 学 报2024年环境条件有助于提高幼虫的生长和存活,缩短幼虫培育周期的同时降低生产成本㊂本文研究了温度与盐度对长牡蛎 海大1号 二倍体和三倍体幼虫生长和存活的影响,旨在为长牡蛎 海大1号 三倍体苗种规模化扩繁提供理论基础和实践经验㊂1 材料与方法1.1实验材料实验在烟台莱州利滔育苗场进行,所用亲贝为1龄长牡蛎 海大1号 二倍体和四倍体,均取自山东荣成桑沟湾海区㊂挑选壳色性状优良㊁壳型规则㊁外表无损伤的个体作为亲贝,利用流式细胞仪(B e c k m a n C y t -o F L E X )检测亲贝倍性㊂1.2实验设计实验设计4个温度梯度:20㊁25㊁30和35ħ,海水盐度设置为30;设置5个盐度梯度:20㊁25㊁30㊁35和40,水温设置为25ħ㊂水温通过冷水机或加热器控制,使用水温计测定水温㊂低盐海水通过向过滤海水中加入曝气24h 的自来水配制,高盐海水通过向过滤海水中加入海水晶配制,使用盐度计(A T A G O )测量盐度㊂采用解剖法获得长牡蛎 海大1号 二倍体精卵和四倍体的精子㊂取长牡蛎 海大1号 二倍体卵子,260目筛绢过滤后,在砂滤海水中熟化1h ㊂二倍体和四倍体牡蛎的精子于授精前10m i n 挤出备用,授精时将卵液平均分为9份,并分别加入长牡蛎 海大1号 二倍体和四倍体的精子㊂每个实验组设置3个重复㊂1.3日常管理授精后放置于60L 聚乙烯桶中孵化㊂实验过程中每天换水1次,换水量为总体积的1/3,随着幼虫的生长,逐渐增加换水量至1/2㊂饵料以等鞭金藻(I s o c h -r ys i s g a l b a n )为主,后期辅助投喂亚心形扁藻(M a r i n e m i c r o a l g a )和小球藻(C h l o r e l l a v u l ga r i s ),每天投喂3次,投饵量根据幼虫的摄食和水中残饵情况确定㊂各实验组投饵㊁换水㊁充气等操作一致㊂1.4指标测定幼虫孵化后每4天取样一次,每组随机取30个幼虫测量㊂采用五点取样法取样,即从每组内的5个不同位置取样,每个位置取样20m L ,共取样100m L 幼虫,用卢戈氏液固定,在显微镜下测量其壳高㊂同时测定幼虫密度,每次测定后及时对密度进行均等校正,使各组保持一致,以消减密度效应的影响㊂根据初始密度㊁每次调整密度和测定的密度推算幼虫存活率㊂受精率为受精后4h 卵裂数占总卵数的百分比,孵化率为受精24h D 形幼虫占总受精卵数量的百分比,存活率为存活的幼虫数占初始实验幼虫总数的百分比,变态率为变态的幼虫数占附着基投放时实验幼虫总数的百分比㊂1.5数据分析数据统计分析采用S P S S 24.0软件处理,显著性水平设为P <0.05㊂2 结果2.1受精与孵化2.1.1不同温度对长牡蛎 海大1号 二倍体和三倍体受精率与孵化率的影响 25ħ实验组和30ħ实验组的长牡蛎 海大1号 二倍体与三倍体的受精率与孵化率均显著高于20ħ实验组和35ħ实验组(P <0.05),且温度为25和30ħ时二倍体组受精率显著高于三倍体组(P <0.05)(见图1)㊂温度为25ħ时,长牡蛎 海大1号 二倍体组与三倍体组的受精率最高,分别为92.67%ʃ2.52%和85.33%ʃ2.52%;温度为(同一指标具有相同字母表示组间差异不显著(P >0.05),具有不同字母表示组间存在显著差异(P <0.05)㊂S a m e i n d i c a t o r w i t h t h e s a m e l e t t e r m e a n st h a t t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n g r o u p s i s n o t s i g n i f i c a n t (P >0.05),a n d w i t h d i f f e r e n t l e t t e r s m e a n s t h a t t h e r e i s a s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e b e t w e e n g r o u ps (P <0.05).)图1 不同温度下长牡蛎 海大1号 二倍体和三倍体的受精率(a )与孵化率(b)F i g .1 F e r t i l i z a t i o n r a t e (a )a n d h a t c h i n g r a t e (b )o f d i p l o i d a n d t r i p l o i d P a c i f i c o y s t e r H a i d a N o .1 e x p o s e d t o d i f f e r e n t t e m pe r a t u r e 233期张海宁,等:温度和盐度对长牡蛎 海大1号 二倍体和三倍体幼虫生长与存活的影响35ħ时受精率最低,分别为51.67%ʃ2.52%和48.33%ʃ4.16%,且显著低于其他温度组(P<0.05)㊂在相同温度条件下,二倍体组孵化率高于三倍体组但差异不显著(P>0.05),温度为25ħ时,长牡蛎 海大1号 二倍体组与三倍体组的孵化率最高,分别为81.67%ʃ4.55%和76.41%ʃ5.78%;温度为35ħ时孵化率最低,分别为28.80%ʃ4.10%和25.27%ʃ3.91%,且显著低于其他温度组(P<0.05)㊂2.1.2不同盐度对长牡蛎 海大1号 二倍体和三倍体受精率与孵化率的影响盐度为25㊁30和35时,长牡蛎 海大1号 二倍体组受精率显著高于盐度为20和40时(P<0.05);盐度为25㊁30㊁35和40时,长牡蛎 海大1号 三倍体组受精率显著高于盐度为20时(P<0.05),盐度为30和35时二倍体组受精率显著高于三倍体组(P<0.05)(见图2)㊂长牡蛎 海大1号 二倍体组与三倍体组在盐度为30时的受精率最高,分别为92.67%ʃ2.52%和85.33%ʃ2.52%;盐度为20时受精率最低,分别为58.00%ʃ3.00%和59.00%ʃ2.00%,且显著低于其他盐度(P<0.05)㊂盐度为25㊁30和35时,长牡蛎 海大1号 二倍体组和三倍体组孵化率显著高于盐度为20和40时(P< 0.05)㊂盐度为20和35时二倍体组孵化率显著高于三倍体组(P<0.05)㊂盐度为30时 海大1号 二倍体组和三倍体组的孵化率最高,分别为81.67%ʃ4.54%和73.08%ʃ2.07%;盐度为20时 海大1号 二倍体组和三倍体组孵化率最低,分别为55.46%ʃ8.12%和46.27%ʃ3.16%,且显著低于其他盐度组(P<0.05)㊂(同一指标具有相同字母表示组间差异不显著(P>0.05),具有不同字母表示组间存在显著差异(P<0.05)㊂S a m e i n d i c a t o r w i t h t h e s a m e l e t t e r m e a n s t h a t t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n g r o u p s i s n o t s i g n i f i c a n t(P>0.05),a n d w i t h d i f f e r e n t l e t t e r s m e a n s t h a t t h e r e i s a s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e b e t w e e n g r o u p s(P< 0.05).)图2不同盐度下长牡蛎 海大1号 二倍体和三倍体的受精率(a)与孵化率(b)F i g.2F e r t i l i z a t i o n r a t e(a)a n d h a t c h i n g r a t e(b)o f d i p l o i d a n d t r i p l o i d P a c i f i c o y s t e r H a i d a N o.1 e x p o s e d t o d i f f e r e n t s a l i n i t y2.2温度和盐度对幼虫生长的影响2.2.1不同温度对长牡蛎 海大1号 二倍体和三倍体幼虫生长的影响各温度水平下,长牡蛎 海大1号 三倍体幼虫始终保持生长优势,其壳高显著高于二倍体幼虫(P<0.05),且三倍体和二倍体幼虫生长最快和最慢的温度分别为30和20ħ(见图3)㊂当温度为35ħ时,第9天二倍体幼虫全部死亡,第13天三倍体幼虫全部死亡㊂第17天,温度为30ħ时,二倍体与三倍体幼虫的壳高达到最大值,分别为(302.17ʃ17.01)μm和(319.67ʃ14.26)μm;而温度为20ħ时,二倍体与三倍体幼虫的壳高最小,分别为(245.51ʃ17.23)μm和(254.05ʃ16.05)μm㊂2.2.2不同盐度对长牡蛎 海大1号 二倍体和三倍体幼虫生长的影响各盐度水平下,长牡蛎 海大1号 三倍体幼虫始终保持生长优势,三倍体幼虫的壳高显著高于二倍体幼虫(P<0.05),生长最快和最慢的盐度分别为20和40,而盐度25与30两组之间无明显差异(P>0.05)(见图4)㊂第17天,二倍体和三倍体幼虫的壳高均在盐度20时达到最大值,分别为(271.66ʃ20.43)μm和(320.49ʃ19.83)μm;在盐度40时出现最小值,分别为(213.46ʃ18.26)μm和(223.51ʃ27.78)μm㊂2.3温度和盐度对幼虫存活率的影响2.3.1不同温度对长牡蛎 海大1号 二倍体和三倍体幼虫存活率的影响各温度水平下,长牡蛎 海大1号 三倍体幼虫始终保持存活优势,三倍体幼虫的存活率显著高于二倍体幼虫(P<0.05)(见图5)㊂当温度为35ħ时,第9天二倍体幼虫全部死亡,第13天三倍33中 国 海 洋 大 学 学 报2024年(表示差异显著(P <0.05)㊂d e n o t e s s i gn i f i c a n t d i f f e r e n c e (P <0.05).)图3 不同温度下长牡蛎海大1号 二倍体和三倍体的幼虫壳高F i g .3 S h e l l h e i g h t o f d i p l o i d a n d t r i p l o i d l a r v a e o f P a c i f i c o y s t e r H a i d a N o .1 u n d e r d i f f e r e n t t e m pe r a t u r es (表示差异显著(P <0.05)㊂d e n o t e s s i gn i f i c a n t d i f f e r e n c e (P <0.05).)图4 不同盐度下长牡蛎海大1号 二倍体和三倍体的幼虫壳高F i g .4 S h e l l h e i g h t o f d i p l o i d a n d t r i p l o i d l a r v a e o f P a c i f i c o y s t e r H a i d a N o .1 u n d e r d i f f e r e n t s a l i n i t y433期张海宁,等:温度和盐度对长牡蛎 海大1号二倍体和三倍体幼虫生长与存活的影响(表示差异显著(P <0.05)㊂d e n o t e s s i gn i f i c a n t d i f f e r e n c e (P <0.05).)图5 不同温度下长牡蛎海大1号 二倍体和三倍体幼虫的存活率F i g .5 S u r v i v a l r a t e o f d i p l o i d a n d t r i p l o i d l a r v a e o f P a c i f i c o y s t e r H a i d a N o .1 u n d e r d i f f e r e n t t e m pe r a t u r e s 体幼虫全部死亡㊂第17天,二倍体在25ħ时存活率最高为32.67%ʃ4.04%,与在20ħ时无显著差异(P >0.05);三倍体幼虫在25ħ时存活率最高为52.00%ʃ6.56%,与在20ħ时无显著差异(P >0.05)㊂2.3.2不同盐度对长牡蛎海大1号 二倍体和三倍体幼虫存活率的影响 长牡蛎 海大1号 二倍体幼虫存活率在盐度为25时最高,其次为盐度20,盐度40时存活率最低;三倍体幼虫存活率在盐度为30时最高,其次为盐度25,同样在盐度40时存活率最低;盐度为25时,长牡蛎 海大1号 三倍体幼虫存活率高于二倍体幼虫,但差异不显著(P >0.05);盐度为30㊁35和40时长牡蛎 海大1号 三倍体幼虫存活率显著高于二倍体幼虫(P <0.05)(见图6)㊂2.4温度和盐度对幼虫变态率的影响2.4.1不同温度对长牡蛎海大1号 二倍体和三倍体幼虫变态率的影响 长牡蛎 海大1号 二倍体和三倍体在不同实验温度下的变态率如图7所示㊂长牡蛎海大1号 二倍体与三倍体幼虫变态率在25ħ时最高,在30ħ时最低,不同温度之间具有显著性差异(P <0.05)㊂在相同温度下,二倍体幼虫与三倍体幼虫的变态率无显著性差异(P >0.05)㊂2.4.2不同盐度对长牡蛎海大1号 二倍体和三倍体幼虫变态率的影响 长牡蛎 海大1号 二倍体和三倍体幼虫在不同实验盐度下的变态率如图8所示㊂长牡蛎 海大1号 二倍体幼虫和三倍体幼虫变态率在盐度为30时最高,在盐度为40时最低㊂二倍体和三倍体幼虫的变态率在盐度为20㊁25㊁30和40时无显著性差异(P >0.05),在盐度为35时,三倍体幼虫的变态率显著高于二倍体幼虫(P <0.05)㊂3 讨论3.1温度和盐度对长牡蛎海大1号 二倍体和三倍体受精率与孵化率的影响在本研究中长牡蛎海大1号 二倍体和三倍体的受精率与孵化率随着温度和盐度的升高,呈先升高后降低的趋势,这与H a n 等[13]在长牡蛎二倍体中的研究结果一致㊂在低温条件下,受精率与孵化率较低可能与温度影响受精卵内酶的活性有关,低温对其正常分裂分化产生了不利影响[14]㊂水温过高,会导致水中的53中 国 海 洋 大 学 学 报2024年(表示差异显著(P <0.05)㊂d e n o t e s s i gn i f i c a n t d i f f e r e n c e (P <0.05).)图6 不同盐度下长牡蛎海大1号 二倍体和三倍体幼虫的存活率F i g .6 S u r v i v a l r a t e o f d i p l o i d a n d t r i p l o i d l a r v a e o f P a c i f i c o y s t e r H a i d a N o .1 u n d e r d i f f e r e n t s a l i n i ty(同一指标具有相同字母表示组间差异不显著(P >0.05),具有不同字母表示组间存在显著差异(P <0.05)㊂S a m e i n d i c a t o r w i t h t h e s a m e l e t t e rm e a n s t h a t t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n g r o u p s i s n o t s i gn i f i c a n t (P >0.05),a n d w i t h d i f f e r e n t l e t t e r s m e a n s t h a t t h e r e i s a s i gn i f i c a n t d i f f e r e n c e b e -t w e e n g r o u ps (P <0.05).)图7 不同温度下长牡蛎海大1号 二倍体和三倍体幼虫的变态率F i g .7 M e t a m o r p h o s i s r a t e o f d i p l o i d a n d t r i pl o i d l a r v a e o f P a c i f i c o y s t e r H a i d a N o .1 u n d e r d i f f e r e n t t e m pe r a t u r e s 致病微生物滋生,增加耗氧,这可能是影响受精卵孵化的原因之一[15]㊂温度为25~30ħ,盐度为30~35时,海大1号 二倍体组受精率显著高于三倍体组,表明三倍体组受精卵可能存在一定的 受精卵不育 现象[16],Z h a n g 等[17]研究葡萄牙牡蛎三倍体受精卵与二倍体受精卵的卵裂率时也报道了类似结果㊂在本研究(同一指标具有相同字母表示组间差异不显著(P >0.05),具有不同字母表示组间存在显著差异(P <0.05)㊂S a m e i n d i c a t o r w i t h t h e s a m e l e t t e rm e a n s t h a t t h e d i f f e r e n c e b e t w e e n g r o u p s i s n o t s i gn i f i c a n t (P >0.05),a n d w i t h d i f f e r e n t l e t t e r s m e a n s t h a t t h e r e i s a s i gn i f i c a n t d i f f e r e n c e b e -t w e e n g r o u ps (P <0.05).)图8 不同盐度下长牡蛎海大1号 二倍体和三倍体幼虫的变态率F i g .8 M e t a m o r p h o s i s r a t e o f d i p l o i d a n d t r i pl o i d l a r v a e o f P a c i f i c o y s t e r H a i d a N o .1 u n d e r d i f f e r e n t s a l i n i t y中,长牡蛎 海大1号 二倍体在受精与孵化方面的表现优于三倍体㊂在受精和孵化阶段,控制水温在25~30ħ之间,盐度在25~35之间能减少两者之间的差异,提高三倍体的受精率与孵化率㊂3.2温度和盐度对长牡蛎海大1号 二倍体和三倍体幼虫生长与存活的影响贝类苗种培育成功的关键在很大程度上取决于其633期张海宁,等:温度和盐度对长牡蛎 海大1号 二倍体和三倍体幼虫生长与存活的影响生命早期阶段的表现,如胚胎和幼虫阶段㊂随着温度升高, 海大1号 二倍体与三倍体幼虫的生长加快㊂这可能由于水温升高使贝类的新陈代谢与摄食消化等能力提高,从而使得幼虫具有更强的运动能力,生长更迅速[18]㊂值得注意的是,幼虫密度没有作为幼虫生长速率条件实验的一个因素进行检查,幼虫在高温下生长最快可能是由温度和幼虫密度的综合作用导致的㊂在温度对幼虫存活影响方面,三倍体幼虫的存活率显著高于二倍体幼虫,这表明三倍体幼虫的温度耐受性高于二倍体幼虫㊂高温条件下幼虫的高死亡率与之前报道的研究一致[13]㊂温度升高到一定程度,可能会导致水中致病微生物的滋生以及贝类血细胞和酶活性降低,从而对贝类的生长发育以及存活产生不利影响㊂在本研究中,在幼虫发育的整个阶段相对于长牡蛎二倍体幼虫 海大1号 三倍体幼虫表现出明显的生长优势,这可能与基因杂合度增加使得其生长性能得到改良有关[19];长牡蛎 海大1号 三倍体与二倍体相比,染色体组增加可能带来了剂量效应,即三倍体细胞内可能出现更多与生长相关的基因,使其生长速度加快㊂这在香港牡蛎(C r a s s o s t r e a h o n g k o n g e n s i s)[20]㊁美洲牡蛎(C r a s s o s t r e a v i r g i n i c a)[21-22]及扇贝(A r g o p e c t e n v e n t r i c o s u s)[23]等多种双壳贝类中已经证实㊂在本研究中,三倍体幼虫表现出快速生长特性,其有助于在苗种培育阶段缩短育苗周期从而降低养殖成本㊂盐度是影响贝类幼虫环境适应能力的另一个重要的非生物因素,对幼虫的生长和存活具有较大影响㊂迄今为止,已经进行了许多关于盐度对软体动物生产性能影响的研究[24-25]㊂在同等环境下,不同物种有不同的适宜盐度范围㊂在我们的研究中,盐度对生长和存活的影响是显著的,长牡蛎 海大1号 二倍体与三倍体幼虫存活率随着盐度的升高呈先升高再下降的趋势;幼虫的生长速度随着盐度的升高呈下降趋势㊂在以前对长牡蛎 海大1号 二倍体幼虫的研究中也发现了类似结果[26]㊂大量研究表明,盐度变化会对海洋贝类渗透压调节产生影响,进而影响个体的生长发育[27-29]㊂在本研究中高盐条件下生长速度降低,这可能是由于幼虫需要消耗大量的能量来进行渗透压调节,进而导致生长速度减缓㊂在高盐条件下,长牡蛎 海大1号 三倍体幼虫相对于二倍体幼虫表现出明显的存活优势,这可能是由于多倍体的染色体增加,从而进化出了新的功能,使潜在的生态位扩张或对环境变化反应的可塑性增强[30-31]㊂长牡蛎 海大1号 三倍体幼虫表现出得对温度和盐度的高耐受力,这可能与染色体组增加所引起的环境适应性增强有关㊂3.3温度和盐度对长牡蛎 海大1号 二倍体和三倍体幼虫变态率的影响在本研究中,长牡蛎 海大1号 三倍体幼虫相对于二倍体幼虫具有生长快㊁变态时间短的特点㊂在温度实验中,长牡蛎 海大1号 三倍体幼虫与二倍体幼虫的变态率没有表现出明显的差异;而在盐度实验中,在高盐条件下长牡蛎 海大1号 三倍体幼虫相对于二倍体幼虫表现出显著的变态优势㊂总体来看,长牡蛎 海大1号 三倍体幼虫与二倍体幼虫的变态率差异不显著,这说明三倍体幼虫可以正常附着,变态形成稚贝㊂这与在长牡蛎㊁美洲牡蛎㊁香港牡蛎中的研究结果一致[22,32-36]㊂在本研究中,长牡蛎 海大1号 二倍体与三倍体幼虫的变态率受温度与盐度的影响较大,在生产过程中控制温度在25ħ左右,盐度在25~35之间能够有效提高幼虫的变态率㊂4结语为了探究长牡蛎 海大1号 三倍体幼虫对主要环境因子的适应能力,比较研究了温度和盐度对二倍体和三倍体幼虫生长和存活的影响㊂研究显示,长牡蛎 海大1号 三倍体幼虫培育的适宜盐度为20~30,适宜温度为20~25ħ㊂相对于长牡蛎二倍体 海大1号 三倍体在幼虫阶段具有生长快㊁变态时间短的特点,对温度和盐度具有更高的耐受能力㊂长牡蛎 海大1号 三倍体在幼虫阶段表现出的优势有助于提高在牡蛎苗种生产中的效率㊂参考文献:[1]李玲蔚,张哲,马培振,等. 海大1号 长牡蛎规模化人工育苗技术的研究[J].海洋湖沼通报,2017(4):139-144.L i L W,Z h a n g Z,M a P Z,e t a l.S t u d i e s o n t h e t e c h n i q u e s o f l a r g e-s c a l e a r t i f i c i a l r e p r o d u c t i o n o f t h e P a c i f i c O y s t e r H a i d a N o.1 [J].T r a n s a c t i o n s o f O c e a n o l o g y a n d L i m n o l o g y,2017(4):139-144.[2]王昭萍,王如才,于瑞海,等.多倍体贝类的生物学特性[J].青岛海洋大学学报,1998(3):60-65.W a n g Z P,W a n g R C,Y u R H,e t a l.B i o l o g i c a l c h a r a c t e r i s t i c s o f p o l y p l o i d s h e l l f i s h[J].J o u r n a l o f O c e a n U n i v e r s i t y o f Q i n g d a o, 1998(3):60-65.[3] K i n 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r a t o r y f o r M a r i n e S c i e n c e a n d T e c h-n o l o g y(Q i n g d a o),Q i n g d a o266237,C h i n a)A b s t r a c t:I n o r d e r t o p r o m o t e t h e d e v e l o p m e n t o f t h e t r i p l o i d i n d u s t r y o f a n e x c e l l e n t v a r i e t y o f P a c i f i c o y s t e r C r a s s o s t r e a g i g a s H a i d a N o.1 ,a n d o p t i m i z e i t s r e a r i n g c o n d i t i o n s a n d i m p r o v e t h e s u r v i v a l a n d g r o w t h r a t e,t h e e f f e c t s o f d i f f e r e n t t e m p e r a t u r e s a n d s a l i n i t i e s o n t h e g r o w t h a n d s u r v i v a l o f d i p l o i d a n d t r i p l o i d l a r v a e w e r e i n v e s t i g a t e d.F o u r t e m p e r a t u r e s(20,25,30a n d35ħ)a n d f i v e s a l i n i t i e s(20, 25,30,35a n d40)w e r e s e t u p f o r t h e e x p e r i m e n t s.T h e h i g h e s t f e r t i l i z a t i o n,h a t c h i n g a n d m e t a m o r p h o s i s r a t e s o f t h e d i p l o i d a n d t r i p l o i d l a r v a e o f P a c i f i c o y s t e r H a i d a N o.1 w e r e f o u n d w h e n t h e t e m p e r a t u r e w a s25ħa n d s a l i n i t y w a s30.A t d i f f e r e n t s a l i n i t i e s,t h e g r o w t h a n d c u m u l a t i v e s u r v i v a l r a t e s o f t r i p l o i d l a r v a e w e r e s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h o s e o f d i p l o i d l a r v a e.T h e g r o w t h a n dc u m u l a t i v e s u r v i v a l r a t e s o f t r i p l o id l a r v ae w e r e c o n s i s t e n t l y h i g h e r t h a n t h o s e of d i p l o i d l a r v a e a td i f fe r e n t t e m p e r a t u r e s.T h e s u r v i v a l r a t e of t r i p l o i d l a r v a e d e c r e a s e d w i t h t e m p e r a t u r e,r e a c h i ng th e hi g h e s t a t25ħ(52.00%ʃ6.56%).T h e f a s t e s t g r o w t h i n s h e l l h e i g h t o f t r i p l o i d l a r v a e w a s o b s e r v e d a t30ħ(14.82μm㊃d-1).T h e s u r v i v a l r a t e o f t r i p l o i d l a r v a e i n c r e a s f i r s t a n d t h e n d e c r e a s e d w i t hi n c r e a s i n g s a l i n i t y,a n d t h e c u m u l a t i v e s u r v i v a l r a t e o f t r i p l o i d l a r v a e w a s h i g h e s t a t30(52.00%ʃ6.56%).T h e g r o w t h r a t e o f l a r v a e d e c r e a s e d w i t h i n c r e a s i n g s a l i n i t y,a n d t h e s h e l l h e i g h t o f t r i p l o i d l a r v a e g r e w f a s t e s t a t20(18.22μm㊃d-1).I n c o n c l u s i o n,t h e t r i p l o i d l a r v a e o f P a c i f i c o y s t e r H a i d a N o.1 s h o w e d s t r o n g e r t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y t o l e r a n c e s t h a n t h e d i p l o i d l a r v a e.T h e o p t i m u m s a l i n i t y f o r t h e c u l t i v a t i o n o f t r i p l o i d P a c i f i c o y s t e r H a i d a N o.1 r a n g e d f r o m20t o30w i t h t h e m o s t s u i t a b l e v a r i e d b e t w e e n20a n d25ħ.O u r f i n d i n g s p r o v i d e d i m p o r t a n t i n f o r m a t i o n f o r t h e l a r g e-s c a l e b r e e d i n g o f t h e t r i p l o i d s e e d s o f P a c i f i c o y s t e r H a i d a N o.1 .K e y w o r d s:P a c i f i c o y s t e r;t r i p l o i d l a r v a;t e m p e r a t u r e;s a l i n i t y;g r o w t h;s u r v i v a l;H a i d a N o.1责任编辑朱宝象93。

三倍体牡蛎培育原理
三倍体牡蛎培育是一种养殖技术，通过使牡蛎细胞的染色体数目变为三倍体，旨在提高牡蛎的生长速度、抗逆性以及产量。

以下是三倍体牡蛎培育的基本原理：
1. 化学诱导：三倍体牡蛎的培育通常通过化学诱导实现。

在培育过程中，将二倍体牡蛎的卵子暴露在化学诱导剂（例如胱氨酸）中。

这些化学诱导剂能够干扰卵子的有丝分裂过程，导致多余的染色体在卵子中复制，形成三倍体。

2. 杂交：另一种常见的方法是通过二倍体雌性牡蛎的卵子与三倍体雄性牡蛎的精子进行杂交。

这种方法也能产生三倍体牡蛎，因为杂交导致了染色体的加倍。

3. 染色体加倍：通过这些方法，培育出的牡蛎细胞染色体数目由正常的二倍体变成了三倍体。

由于有额外的染色体，这些牡蛎通常具有更强的生长能力和更高的抗逆性。

培育三倍体牡蛎的目标是增加牡蛎的生产性能，提高其抗逆性，同时也可以改良其他性状，比如提高肉质品质。

这种技术的成功应用可以对养殖业产生积极影响，提高牡蛎的经济效益。

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