骨髓细胞化学染色讲义资料53页PPT

原粒≥30-89％
早幼粒>30％
M4 急粒-单
M5 急单 M6 红白血病 M7 巨核白
粒单两系细胞均增生
原幼单>30% 红系>50％且形态异常 原粒(原单)＋早幼粒(幼单)>30％ 原幼巨>30％
急性淋巴细胞白血病(L1)
急性淋巴细胞白血病(L2)
急性淋巴细胞白血病(L3)
急粒未分化型 (M1)
常用取材部位
髂后上棘（较易掌握分寸）
髂前上棘（较易掌握分寸） 胸骨（对向心性病变阳性率高，有一定危险性）
胫骨粗隆（2岁以下小儿）
骨髓涂片检查的内容和方法

低倍镜检查 （1) 观察涂片的取材、制片、染色是否满意 （2）确定骨髓增生程度(Hypercellularity )
有核细胞、巨核细胞
（3）注意有无特殊细胞

油镜检查 （1）有核细胞分类
( Normal rate of cells in different series ) (Normal rate of cells at different stages )
（2）计算：粒∶红=2~4∶1 （3）观察细胞形态有无异常 （4）观察有无特殊细胞及寄生虫

成熟浆细胞 (plasmacyte )
三、常用血细胞化学染色
血细胞细胞化学染色
以细胞形态学为基础，根据化学反应原理，应用骨髓涂片进行固
定、化学反应显色、复染等程序染色，然后在光镜下观察细胞的 化学成分及其变化的一项检验方法
研究血细胞在生理或病理情况下细胞化学成分的变化，有助于了
解各种血细胞的化学组成及病理生理改变
〔血象〕 1.血小板减少,可见异 形、巨大血小板 2.血色素、红、白细

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早幼粒细胞
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1．粒细胞系的正常形态
（3）中幼粒细胞：中幼阶段胞质中开 始出现不同的特异性颗粒，即中性、嗜酸 性和嗜碱性颗粒，藉此可明确地区分出中 性、嗜酸性和嗜碱性中幼粒细胞，其中以 中性中幼粒细胞为主。
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1．粒细胞系的正常形态
中性中幼粒细胞：胞体直径10～18μm， 早期者较大。胞核多偏位，略小于早幼粒 细胞，占细胞体积的2/3～1/2，椭圆形或一 侧开始变平。染色质粗于早幼阶段，呈致 密索块状，早期尚可见核仁轮廓，晚期核 仁消失，核膜明显。胞质染淡红或淡蓝色， 其中充满细小、密集的淡紫红色特异性中 性颗粒，早期尚可见个别残留的嗜天青颗 粒。
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一、造血器官与造血微环境
（一）造血器官 造血细胞包括红细胞、粒细胞、巨核细胞、
淋巴细胞、单核细胞和浆细胞等系统。能 够生成造血细胞并支持其分化、发育和成 熟的器官称为造血器官。各种血细胞在造 血器官内的生成过程称为造血。
在人体发育的不同阶段，主要造血器官是 不相同的。
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1．红细胞系的正常形态
（5）网织红细胞：见第四章第五节。 （6）红细胞：为红细胞系完全成熟的细胞，
见第四章第一节。
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2．幼稚红细胞的异常形态
（1）巨幼红细胞：它是胚胎早期的幼 稚红细胞，出生后仅见于叶酸、维生素B12 缺乏的巨幼细胞性贫血或某些血液病时。 其形态特征是胞体较一般正常幼稚红细胞 为大，胞质丰富，胞核的成熟落后于胞质， 染色质细致、疏松。巨幼红细胞的发育也 有原始、早幼、中幼、晚幼四个阶段，成 熟后为巨红细胞。
染色质受色 核膜 核仁 胞质量 胞质受色 胞质颗粒

Neutrophilic metamyelocyte
胞体：直径10-16μ 胞核：呈肾形，马蹄形、半月形。但其核凹陷不到核直径的一半；
核膜增厚，染色质粗糙，紧密 核仁: 消失 胞浆：量多，浅红色。全胞浆中布满中性特异颗粒。
Neutrophilic stab granulocyte 胞体: 10-15μ，圆形 胞核: 两端钝圆呈带状，弯曲如“S”形、 “U”形 胞浆: 淡粉色
常见病例
各类白血病 各类白血病、增生性贫血 正常骨髓象或某些贫血 再障（慢性型）、粒细胞 缺乏症 再障（急性型）
3）观察巨核细胞 4) 有无异常细胞 5) 选择油镜检查区域
(2)油镜检查：细胞分类计数及形态观察
1) Nucleated cell分类计数：根据细胞多少，分别计数 200或500个细胞，计算各系列细胞及其不同发育阶 段细胞的百分比，并计算粒红比（M：E）
骨髓的细胞学检查
• 骨髓细胞学检查的适应证和一般技术 • 骨髓细胞的分化、发育、成熟及形态特点 • 骨髓象检查 • 细胞化学染色的临床应用
• 骨髓细胞学检查的适应证和一般技术
1. 适应证和禁忌证
（1）适应证：
患者多次检查外周血象有异常 患者有原因未明的肝、脾、淋巴结肿大 诊断某些感染性疾病 看恶性肿瘤患者有无骨髓转移 协助诊断类脂质沉积病 造血干细胞的计数和培养
胞浆:量稍多，部分可有伪足，深蓝，但较原红稍浅， 血红蛋白开始形成，出现在核周围，无颗粒
胞体:直径8-15μm
中幼红细胞
胞核:圆形，居中或稍偏位，占细胞2/3-1/2大小，染色质粗糙 排列成堆，其中有空白出现，如打碎砚墨感，呈车轮状排列， 深紫色，核膜明显，无核仁
缺点
1.造血组织的天然结构已遭破坏，无法 判断红髓、黄髓比例

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2
• 细胞化学染色一般包括固定、显示、复染等步 骤。
• 主要用于：
• 显示细胞或组织的酶、蛋白质、糖类、脂类、 无机盐（如铁）等化学成分的含量及分布状况；
• 研究细胞组织来源及分化程度；为疾病的诊断、 鉴别诊断及治疗提供重要的依据。
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3
中性粒细胞碱性磷酸酶染色 （NAP）
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• ㈢.临床意义：
• ⒈类白血病反应与慢性粒细胞白血病的鉴别诊断：前 者显著增高，阳性率常达90%以上，积分常高于200分； 后者显著减低，积分可感染 时多为正常或稍低。
• ⒊淋巴细胞白血病时常增高；单核细胞白血病时正常 或增高；慢性中性粒细胞白血病时增高，其它各型粒 细胞白血病时减低；白血病伴感染时增高。
Ⅰ级 + 胞浆呈浅灰色，细小蓝 黑色颗粒占胞浆面积的25%～ 50%。
Ⅱ级 ++ 胞浆呈棕色片状沉淀， 小到中等颗粒约占胞浆面积 的50%～75%。
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Ⅱ级 ++ 胞浆呈棕色片状沉淀，小 到中等颗粒约占胞浆面积的50% －75%。
• Ⅲ级 +++ 胞浆充满棕黑色沉淀， 分布均匀，中到大颗粒占胞浆面 积的75%－100%。
• 2. 也可用新鲜配制的六偶氮副品红为重氮盐，配方为： 10ml a-磷酸萘酚钠溶液中加六偶氮副品红50μl，其 NAP阳性反应呈红色颗粒状。六偶氮副品红：4%副品 红（2N盐酸）溶液与4%亚硝酸钠溶液1∶1混合，静置 1min。
• 3. 重氮盐应适量，过量会导致染色失败，出现假阴性； 量不足，则阳性反应较弱。
• ㈠.原理： • 方法一（偶氮偶联法）：在PH9.2~9.8的碱性溶

正常细胞
白血病
红系
（－）
(+++)
粒系 原粒（－）余（＋） （－）或（±）
淋系 （－）或（±）
（＋＋）
单核系 （＋）
（＋＋）
巨核系 （＋＋）
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临床意义
• LPD ；病毒感染正常 • 红白血病 ＋＋＋； MA正常 • 急粒－；急淋＋，颗粒状或块状；急单 ＋＋＋，弥漫性
成熟巨核＋＋＋
鉴别:急粒、急单和急淋，特别是M3和M5。
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（二）苏丹黑B染色
• 临床意义同POX
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（三）中性粒细胞碱性磷酸酶染色 NAP
正常值阳性率10～40％完，整积版PP分T课值件 40～80
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临床意义
• 慢粒 和类白血病反应 • 急粒 、急单 和急淋 • AA 和PNH • 化脓性感染 和病毒感染 • 恶性组织细胞病 反应性组织细胞增生
• 急性粒细胞白血病（+） • 急单和急淋（-）
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（六）α-醋酸萘酚酯酶染色 α-NAE
主要存在于单核系细胞中
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临床意义
• 急单＋＋＋，但被NaF抑制
• 急粒±，不被NaF抑制
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（七）糖原染色（PAS）
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PAS染色反应
•
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三.血细胞的细胞化学染色
细胞化学染色是骨髓涂片进行固定，化学反 应显色，复染等程序染色光学显 微镜下观察
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㈠过氧化物酶染色（POX） 苏丹黑染色（SB）

•骨髓细胞学检验
•7
二.骨髓细胞学检测的方法和内容
•骨髓细胞学检验
•8
1.肉眼观察
取材、 制片、 染色
•骨髓细胞学检验
•9
2.低倍镜检查 判断骨髓增生程度
有核细胞与成熟红细胞的比例，骨髓小粒的结构，五级分类法
计数巨核细胞
低倍镜浏览全片，尤其是片头尾部和边缘，计数全片的巨核细胞数， ITP
观察有无特殊细胞及其他
集成小块状,核仁消失。胞质不透明,深蓝色，有核周 淡染区，不含颗粒。
4.1 红细胞系统
•骨髓细胞学检验
•17
中幼红细胞
（polychromatic normo-blast）：
染色质凝集成团块状或粗索状，似碎砚 状排列，胞质量较多，因内含血红蛋白 逐渐增多，呈不同程度的嗜多色性。
晚幼红细胞（ortho-
5.酸性磷酸酶染色
原理：硫化铅法——血细胞内的酸性磷酸酶在酸性条件下将基质中β-
甘油磷酸钠水解→磷酸钠+硝酸铅→磷酸铅+硫化铵→棕黑色硫化铅沉 淀（细胞质）
临床意义：毛细胞白血病ACP阳性，且不被L-酒石酸抑制；鉴别T淋巴
细胞（阳性）—B淋巴细胞（阴性）；鉴别Gaucher细胞（阳性）— Niemann-Pick细胞（阴性）
分叶核粒细胞
(segmented granulocyte) ：胞核
分叶状，常分为2-5叶，叶与叶之间有细丝相
连或完全断开，核染色质浓集或呈小块状，
染深紫红色。
4.2 粒细胞系统
•骨髓细胞学检验
•21
嗜酸性粒细胞
嗜碱性粒细胞
•骨髓细胞学检验
•22
原淋巴细胞：圆形或椭圆
形，核圆形或椭圆形，偏位。核染色质细 致颗粒状，较原粒细胞稍粗，核仁1-2个， 胞质量少，呈透明天蓝色，无颗粒。

瘤的诊断和分类。
细菌和真菌鉴别
染色技术可以用于鉴别不同类型的 细菌和真菌，对于感染性疾病的诊 断和治疗具有重要意义。
寄生虫鉴定
染色技术可以帮助鉴定寄生虫种类 ，对于寄生虫病的诊断和治疗具有 指导作用。
生物学研究中的应用案例
细胞凋亡研究
染色技术可以用于观察细胞凋亡 的过程，有助于研究细胞死亡的
机制。
准确性
染色结果是否准确反映 了细胞内物质的分布和
含量。
重复性
染色结果是否具有可重 复性，即多次实验结果
是否一致。
特异性
染色方法是否能够特异 性的标记目标细胞或组
织。
敏感性
染色方法能否检测到低 浓度的目标物质。
染色结果的解读与解释
01
02
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04
了解染色原理
熟悉染色方法的原理，有助于 正确解读染色结果。
识别阳性信号
能够识别出染色结果中的阳性 信号，并判断其强弱和分布情
况。
排除干扰因素
排除非特异性染色、背景干扰 等因素对结果的影响。
比较不同样本
将染色结果与正常或已知样本 进行比较，以判断其差异和意
义。
染色结果的应用与推广
科学研究
染色结果可以为科学研究提供 数据支持，帮助揭示细胞生物
学行为的奥秘。
临床诊断
细胞化学染色的种类与 特点
常用细胞化学染色的种类
酸性品红染色
用于显示RNA，常 用于鉴别细胞质。
苏木精染色
用于显示细胞核， 常用于观察染色体 。
福尔根染色
用于显示DNA，常 用于鉴别细胞核。
甲基绿染色
用于显示DNA，常 用于观察染色体。
伊红染色
用于显示RNA和糖 原，常用于鉴别细 胞质和糖原。

样本的保存
样本应保存在适当的温度 和湿度条件下，以确保其 质量和稳定性。
结果的准确性
操作的规范性
在细胞化学染色检验中，应遵循正确的操作步骤和规范，以确保 结果的准确性。
仪器设备的校准
使用的仪器设备应在有效期内进行校准，以确保其准确性和可靠性 。
结果的解读
检验结果应由专业人员进行解读，避免误判或漏判。同时，应定期 对结果进行复核和验证，以确保结果的准确性和可靠性。
目的
细胞化学染色检验主要用于诊断疾病、研究细胞生物学特性、评估治疗效果等 。
历史与发展
历史
细胞化学染色检验技术自19世纪末开始发展，经历了多个阶段，包括手工染色、 半自动染色和全自动染色等。
发展
随着科技的不断进步，细胞化学染色检验技术也在不断改进和完善，如免疫组织 化学染色、荧光染色等新技术的应用，使得检测的灵敏度和特异性得到了显著提 高。
04
结果报告
将分析结果整理成报告，向相 关人员或机构提供准确的实验 数据和结论。
04
细胞化学染色检验应用
在疾病诊断中的应用
肿瘤诊断
通过细胞化学染色检验，可以观 察肿瘤细胞的形态、染色特征和 组织结构，有助于肿瘤的早期发
现和诊断。
感染性疾病诊断
某些细菌、病毒等感染性疾病会导 致细胞发生特异性改变，通过细胞 化学染色检验可以辅助诊断。
染色完成后，进行充分 的洗涤和复染，以提高
染色效果和对比度。
结果观察与解读
01
显微镜观察
使用显微镜观察染色后的样本 ，观察细胞形态、染色情况等 。
02
结果记录
对观察到的染色结果进行详细 记录，包括细胞形态、染色强 度、分布等。
03

浆细胞系统 (Plasmacytic Series)
➢ 原浆细胞 ➢ 幼浆细胞 ➢ 成熟浆细胞
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三、常用血细胞化学染色
14
细胞化学染色
过氧化物酶( POX) 非特异性酯酶( NSE) 特异性酯酶 (SE) 糖原染色 (PAS)
中性粒细胞碱性磷酶 ( NAP)
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四、骨髓细胞学检查的临床意义
6
二、正常血细胞形态
7
红细胞系(Erythrocyte Series)
8
粒细胞系(Granulocytic Series)
9
单核细胞系(Monocytic Series)
10
淋巴细胞系(Lymphocytic Series)
11
巨核细胞系 (Megakaryocytic Series)
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骨 髓 细胞学检查
(Bone Marrow Examination)
1
主要内容
➢ 血细胞的生成与发育 ➢ 正常血细胞形态 ➢ 常用血细胞化学染色 ➢ 骨髓细胞检查的临床意义 ➢ 常见血液病血细胞特征 ➢ 急性白血病的MICM分型
2
一、血细胞生成与发育
3
全能干细胞 TotipotentialStemCell
19
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正常骨髓象
1. 增 生 活 跃 2. 粒 红 比 正 常（2－4/1） 3. 粒 系(约40－60％)、红 系(约20％)：
增 生 良 好、 各 阶 段 比 例 适 当 细胞形态无明显异常 4. 巨 核 细 胞: 易见、产 板 巨 多 见 5. 淋 巴（约20％）、单 核（ 约4％） 6.可 见 少 量 非 造 血 细 胞 7. 无 特 殊 细 胞 及 寄 生 虫

骨髓细胞学检查 Bone Marrow Examination
内容
骨髓检查内容与部位 骨髓细胞学检测临床应用
骨髓细胞学检测的方法与内容
血细胞发育过程中形态演变的一般规律 血细胞的正常形态学特征
.
2
内容
血细胞化学染色 细胞免疫分型
细胞遗传学分析
常见血液病骨髓细胞学检查特点
血细胞形态演变的一般规律
形态演变规律 细胞体积 由大到小，但是巨核细胞系相反，早幼粒较原粒大 巨核细胞、浆细胞、单核细胞由圆形或椭圆形到不规则， 淋巴、粒系和红系基本上为圆形不变 量 细胞质 染色 颗粒 大小 由少渐多，淋巴细胞变化不大。 由深蓝变浅，甚至淡红，红系最终为橘红色 从无颗粒（原始细胞）到嗜天青颗粒（早幼粒）在到特异 性颗粒，红细胞一般无颗粒 由大到小，由规则变不规则，甚至分叶，红系形态一直规 则到最终脱；巨核细胞由小到大。 由细致疏松渐变为粗糙、致密或凝集成块，着色由浅变深。 由有到无 由大到小，巨核细胞相反
增生程度 增生极度活跃 增生明显活跃 增生活跃 增生减低 增生极度减低 成熟红细胞: 有核 细胞 1: 1 10: 1 20: 1 50: 1 200: 1 有核细胞均数/高倍 镜视野 >100 50-100 20-50 5-10 <5 常见病例 急慢性白血病 急慢性白血病、增生性贫血 正常骨髓象、增生性贫血 再生障碍性贫血 再生障碍性贫血

多呈椭圆形，直径12-16um。胞核圆形，占细胞的1/2，偏位。 核染色质开始聚集，染深紫红色，可见车轮状排列，核仁基本 消失。胞质量多，呈不透明灰蓝色，近核处有淡染区，有时可 见空泡或少数嗜天青颗粒
.
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浆细胞系
浆细胞（Plasmocyte）