(推荐)《细胞化学染色》PPT课件

【试剂】 ▪ 1%TMB ▪ 亚硝基铁氰化钠饱和溶液 ▪ 1%过氧化氢溶液 ▪ 稀过氧化氢溶液 ▪ 瑞氏染色液
▪ 【操作】 ▪ 1. 取0.1%TMB乙醇溶液lml，加亚硝基铁氰
化钠饱和溶液10ml，溶液呈淡棕黄色。 ▪ 2. 在新鲜干燥的血片上，加混合溶液0.5ml,
放置lmin后，再加稀过氧化氢溶液0.7ml， 染色6min 。 ▪ 3. 瑞氏染液复染15～20min 。 ▪ 4. 油镜镜检。
▪ 【结果】 ▪ （1）粒细胞系： ▪ 原粒细胞多呈阴性反应，也可弱阳性。
▪ 苏丹黑B染色较过氧化物酶染色更敏感， 但特异性不如过氧化物酶染色（极少数急 性淋巴细胞白血病可为阳性）。
M1-SBB(+)
M2-SBB(+)
三、过碘酸一雪夫（PAS)染色
▪ 【原理】
胞浆内存在糖原或多糖类物质（如粘多糖 、粘蛋白、糖蛋白、糖脂等）中的乙二醇 基（CHOH-CHOH）经过碘酸（periodic acid）氧化，转变为二醛基（CHO-CHO ），与雪夫(Schiff )试剂中的无色品红结 合，形成紫红色染料而沉积于胞浆中。该 反应称为过碘酸一雪夫(PAS)阳性反应。
粒逐渐增加。
▪ 早期原粒细胞一般为阴性，少数细小点状 颗粒代表线粒体被染色
▪ 晚期原粒细胞可出现阳性颗粒，其颗粒限 于胞浆的某一区域。
2. 单核细胞系 阳性，颗粒细小，分布弥散，形状不规则 。原单核细胞为阴性。 3．红细胞系、淋巴细胞系均呈阴性反应 4．尼曼一匹克细胞和戈谢细胞均为阳性 反应。
5．苏丹黑B和过氧化物酶染色临床意义相 似，主要用于急性白血病类型的鉴别。
Hale Waihona Puke ▪ 下面介绍几种常用的细胞化学染色 方法
▪ 这些方法学在白血病的鉴别诊断上 具有重要意义。
一、过氧化物酶染色（POX）
（一）四甲基联苯胺法 ▪ 【原理】 粒细胞和单核细胞的胞浆内的
髓过氧化物酶（POX orMPO）分解过氧 化氢，释放新生态氧，使无色联苯胺氧 化成蓝色联苯胺，后者进一步变成棕色 化合物沉着于细胞质内。
【结果】 细胞质内有蓝黑色颗粒者为阳性。
（－） 无颗粒沉着； （±） 颗粒细小 ，分布稀疏； （+） 颗粒较粗，局灶分布； （++） 颗粒粗大，分布较密，占胞质 1/2~2/3； （+++） 颗粒粗大，呈团块分布； （++++） 全部胞质均部满颗粒，可覆盖胞核。
▪ 【临床意义】 ▪ （1）粒系： ▪ POX主要分布在粒细胞和单核细胞内，随
▪ （5）过氧化物酶染色 ▪ 主要用于鉴别急性白血病类型， ▪ 急性髓细胞白血病多呈阳性反应，以M3和
M2型反应最强，MI和M5型反应较弱， ▪ 故有助于区别M3和M5型。 ▪ 急性淋巴细胞白血病呈POX阴性反应，故
为急性髓细胞和淋巴细胞白血病鉴别的重 要指标。
AML-M1
M1 - POX(+)
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二、苏丹黑B染色
【原理】 苏丹黑B (sudan black B , SB )是一种能 溶解于脂肪中的色素染料，可使细胞内的 中性脂肪、磷脂和类固醇着色，即使细胞 内微细结构的脂类物质也能显示出来。
▪ 【试剂】 ▪ 1. 10%甲醛液。 ▪ 2. 苏丹黑B乙醇溶液
▪ 【操作】 ▪ 1．干燥血片或骨髓片在甲醛蒸气中固定。 ▪ 2．自来水冲洗。 ▪ 3．放人染色液中，37 ℃染色30~60min。 ▪ 4．用70%乙醇脱色1~2min，水洗lmin。. ▪ 5．瑞氏染液复染20~30min。
着粒细胞成熟的程度而逐渐增强，中性分 叶核粒细胞为强阳性。
▪ 嗜酸性粒细胞阳性程度最强，其阳性颗粒 比中性粒细胞粗大，有折光。
▪ 碱性粒细胞为阴性。
（2）单核细胞： 原始单核细胞为阴性反应， 幼稚单核细胞和成熟单核细胞呈弱阳性 反应，颗粒细小，弥散分布。
（3）其他细胞 淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞、组织细 胞、巨核细胞均呈阴性反应。 （4）血小板过氧化物酶 主要定位于幼稚型巨核细胞的核膜上，可 作为原巨核细胞的一种标志物，有助于 FAB M7的识别。
【结果】
脂类呈黑色或棕黑色颗粒，定位于细胞浆中 （+） 颗粒很小，细小、稀疏，或胞质局部面积的
1/4有致密的颗粒。 （++）颗粒较少，或胞质面积的1/2出现黑色颗粒。 （+++）颗粒较密，或胞质面积的3/4出现黑色颗粒。 （++++） 颗粒极密，颗粒间无间隙。
▪ 【临床意义】 ▪ 1. 粒细胞系 ▪ 早幼粒及以下阶段随着细胞成熟，阳性颗
细胞化学染色
沧州医专医学技术系 侯振江
▪ 细胞化学染色，是一种以形态为基础，结 合运用化学或生物化学技术对血细胞内各 种化学成分作定位、定性及半定量分析的 方法。
▪ 用于研究血细胞生理、病理和化学结构；
▪ 临床上为某些血液病的诊断、鉴别诊断、 疗效观察、预后监测和发病机制的探讨， 提供重要依据。
▪ 血细胞化学染色的基本要求是在原位 显示细胞成分和结构，反应产物应是 有色沉淀物，具有一定的稳定性。
2、联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧 化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧， 使无色的联苯胺形成蓝色沉淀。
▪ 3、普鲁士蓝法：细胞内、外铁与酸性亚铁 氰化钾作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。
▪ 4、雪夫反应：过碘酸氧化细胞内糖类中乙 二醇基形成乙醛基，醛基与雪夫试剂作用， 使无色品红形成红色沉淀。
▪ 5、金属沉着法
▪ 其他尚有物理学方法，如脂溶性染料染色 （显示脂质）、荧光显示、放射自显影以 及体外活体染色亦常用于临床血液细胞学 诊断。
▪ （三）细胞化学定量
▪ 粗略估量，以染色反应的强弱，受色的深浅 ，人为地区别为阴性和各种程度的阳性。
▪ 百分法，只能反映细胞阳性率，不能反映受 色强弱。
▪ 积分法，是常用的半定量法，将等级估量与 百分率相结合它既反映了细胞阳性率的高低 ，又反映了细胞受色的强弱。
▪ 血细胞化学染色可显示糖原、脂类、 酶、蛋白质等。
血细胞化学染色流程
▪ （一）固定 ▪ 固定有物理法与化学法， ▪ 物理法为干燥和火焰固定， ▪ 化学法最常用的是甲醛、乙醇、
丙酮和醋酸等。
（二）显示
1、偶氮偶联法：利用人工合成的酶底物， 在酶作用下，产生分解产物，再与重氮盐 结合引起偶氮偶联，使其形成不溶性的偶 氮色素，以此证明酶的存在。