细胞化学染色32734 PPT课件

• 在酸性条件下〔pH4.7〕酸性磷酸酶能将 底物〔甘油磷酸钠〕水解，产生－
PO43-，与Pb2+作用生成磷酸铅沉淀， 定位于胞浆中酶活性存在处，再与硫化 铵作用，生成棕黑色的硫化铅沉淀。
• 试剂：
• 1.固定剂：40%甲醛溶液〔福尔马林〕。
• 2. 工作液配制：
• 蒸馏水
37ml
• 0.2mol/L pH4.7醋酸缓冲溶液 6ml
试剂：
• 1.固定剂：1∶9福尔马林乙醇液，即40％甲醛溶液 〔福尔马林〕10ml加无水乙醇90ml混合即得。
• 2.a-磷酸萘酚钠溶液：100mg a-磷酸萘酚钠溶于 100ml0.2mol/L〔pH9.1～9.7〕Tris缓冲溶液中，混 匀后4℃保存。
• 3.Tris缓冲溶液〔0.2 mol/L pH9.2〕：Tris粉〔三羟甲 基氨基甲烷〕2.43g溶于100ml蒸馏水中，加浓盐酸 0.2ml〔0.167ml〕。
Ⅱ级 ++ 胞浆呈棕色片状沉淀， 小到中等颗粒约占胞浆面积 的50%～75%。
Ⅱ级 ++ 胞浆呈棕色片状沉淀，小 到中等颗粒约占胞浆面积的50% －75%。
• Ⅲ级 +++ 胞浆充满棕黑色沉淀， 分布均匀，中到大颗粒占胞浆面 积的75%－100%。
Ⅲ级 +++ 胞浆充满棕黑色沉淀， 分布均匀，中到大颗粒占胞浆面 积的75%－100%。
• 0.15mol/L〔5%〕硝酸铅
1ml
• 0.1mol/L〔3.2%〕β－甘油磷酸钠 2ml
• 3.稀硫化铵溶液〔临用时现配〕：取硫 化铵水剂0.75ml加蒸馏水至50ml。
• 4.甲基绿溶液：1g甲基绿溶于50ml蒸馏

① 定性 ② 半定量 ③ 定量
• 铁染色 • 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 • 过氧化物酶染色 • 苏丹黑染色 • 过碘酸-雪夫反应 • 酯酶染色 • 酸性磷酸酶染色
普鲁士兰染色法（1958郁知非方法） 1.原理:根据BM中含Fe3+与蛋白质结合较疏松，
经稀HCL处理后，呈游离Fe3+。在酸性溶液 中与亚铁氰化钾作用后呈兰绿色，有折光， 圆形颗粒或珠、块状。
广州医科大学附属第二医院学习
• 为什么要做组织化学染色来自• 原始淋巴细胞？• 原始单核细胞？
• 原始粒细胞？ • 其它肿瘤细胞？
• 火眼金睛能辨认 出什么细胞？
细胞化学(或组织化学)是组织学的一个 分支，是在细胞形态学的基础上研究细 胞的生物化学成分、定位、定量及代谢 功能状态的学科。
细胞化学染色
ALP降低 慢粒、恶性组织细胞病 、急性髓系白血病 阵发性睡眠性血红蛋白尿。 MDS正常或减低 。
增高 类白血病 慢性中性粒细胞白血病 细菌感染 再生障碍性贫血
正常 反应性组织细胞增多症
正常 继发性红细胞增多症 继发性血小板增多症
减低 慢性粒细胞白血病 慢性粒细胞白血病 病毒感染
PNH 减低
恶性组织细胞病 增高
4. 染色分级反应
(-)
0分：阴性反应，胞浆中无阳性染色颗粒。
(+)
1分：胞浆少量颗粒或呈弥散浅红色。
(++)
2分：胞浆中含有中等量颗粒或弥散受色。
(+++) 3分：胞浆中有丰富的颗粒或弥散深色，胞核清晰。
(++++) 4分：极丰富粗大颗粒，或弥散深色，胞核不清晰。
NAP积分：NAP反应结果（%）

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【正常血细胞染色反应】
1.粒细胞系统 分化差的原粒细胞为阴性； 分化好的原粒细胞至中性分叶核粒细胞
各阶段均呈阳性反 应，阳性程度随细 胞的成熟逐渐增强。 阳性物呈细颗粒、 均匀红色。
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2.红细胞系统 阴性
3.单核细胞系统 细颗粒状，有时分布于细胞边缘的阳性颗
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2.NAP积分值
油镜下计数100个成熟中性粒细胞（杆状 和分叶）,分别记录其分级情况：
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(-) 0分 (+) 1分 (++) 2分 (+++) 3分 (++++) 4分
阳性率 全部阳性反应细胞之和 积分值 各种阳性程度细胞的分值之和
骨髓增生异常综合征 幼红细胞阳性 再生障碍性贫血 幼红细胞阴性
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2.单核细胞系统 阴性或弱阳性 3.淋巴细胞系统
红细胞系统 巨核细胞系统 阴性 浆细胞 组织细胞
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【临床意义】
临床上是辅助判断急性白血病首选的、最 重要的细胞化学染色
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第二节 常用细胞化学染色方法
过氧化物酶染色 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 过碘酸-雪夫反应 α-醋酸萘酚酯酶染色 铁染色

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分级标准
(-) 0，阴性反应，胞浆中无阳性颗粒。 (+) 1，胞浆中含有少量颗粒或呈弥散浅灰色。 (++) 2，胞浆呈均匀棕黑色或出现较粗的黑色颗粒。 (+++) 3，胞浆中充满棕黑色颗粒，颗粒间有缝隙， 胞 核清楚。 (++++)4，有极丰富的粗大颗粒，充满胞浆，胞核不清晰
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NAP
(坚固盐B)
棕黑色 灰黑色沉淀
40
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（二）正常细胞的染色反应
1.单核系统：原单为阴性/阳性，幼稚、成熟单为强阳 性，且易被NaF抑制（抑制率>50%）。
抑制前阳性率- 抑制后阳性率 氟化钠抑制率=
抑制前阳性率
× 100%
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2.粒细胞系：各期多数为阴性，有时可呈弱阳性，M3呈 阳性，不被NaF抑制。
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（三）临床意义：
1.辅助判断急性白血病类型 pox计数的是100个未知细胞（白血病细胞），并计算其
阳性率。 Pox阳性率＜3%：急淋
Pox阳性率＞3%：急非淋（ANL），M3、M2最强， M4、M1、M5最弱
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急性淋巴细胞 白血病: 原始、幼稚淋 巴细胞呈阴性 POX﹤3％
急性粒细胞白血病:原始粒细胞呈阳性或 阴性，POX>3％
（1）细胞核复染常用苏木素、甲基绿、中性红、沙 黄
（2）细胞质复染常用：伊红、亮绿等
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常用的细胞化学染色项目
Fe：骨髓铁染色（普鲁士蓝染色） NAP：中性粒细胞碱性磷酸酶染色 POX：过氧化物酶染色 SB：苏丹黑染色 PAS：过碘酸－雪夫反应（糖原染色） SE：特异性酯酶染色 NSE：非特异性酯酶染色