实验四凯氏定氮法测定蛋白质含量ppt课件

待接收瓶内液面高于150ml时将接收瓶下移， 使接收管离开液面、用少量H2O冲洗出气口，继 续蒸馏半分钟，然后取下接收瓶，待滴定用。
甲基红乙醇溶液和溴甲酚绿乙醇配溶液指 示剂，颜色由酒红色变成绿色。
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3. 滴定 用0.05mol/LHCl滴定接收瓶内的溶液，滴定至
(暗)灰色时为止，记下消耗HCL的毫升数。
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（3）250ml三角接收瓶中加入2% H3BO3 50ml和 2~3滴混合指示剂，将接收瓶套在蒸馏器的接收 管上，并且让管口浸没在H3BO3溶液中。
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（4）把需要蒸馏的消化管固定在蒸馏器托物架 上，然后按面板上NaOH、H2O开关，分别向消 化管注入蒸馏水（10ml左右）及NaOH溶液（硫 酸用量的5倍,约100ml），然后开启蒸汽开关， 向试管内注入蒸汽、进行蒸馏。
（2）关掉排水阀，打开加热电源，打开冷却 水（自来水开关），打开绿色蒸汽开关（只需 打开任意一组），然后，观察电流表；等电流 表升到4A左右，关掉蒸汽开关。待其回到0A后 再打开蒸汽开关。电流升到4A后再关掉，这样 反复开关（0-10）左右直到蒸汽从塑料管内喷 出，让其喷半分钟左右，关掉蒸汽开关，仪器 进入正常的待机状态。
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【目的】
了解凯氏定氮法测定蛋白质含量的方法、意 义及应用
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【原理】
蛋白质是含氮的有机化合物。蛋白质与硫 酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解 的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨 游离，用硼酸吸收后再以盐酸标准溶液滴定，根 据酸的消耗量计算出氮的含量，然后乘以相应的 换算系数，即得蛋白质的含量。
干燥的消化管中，加入0.2g硫酸铜，6g硫酸钾及
20ml浓硫酸，置于消化炉上小心加热， 待内容物
全部炭化，泡沫完全消失后，加大火力，并保持
管内液体内微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，
再继续0.5h～1h。取下放冷待蒸馏用。
（建议：消化炉温控时间及温度：1阶段选择
温度范围280℃左右，时间为20分钟左右； 2阶段
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3. 用已知浓度的HCl标准溶液滴定，根据HCl消耗的 量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算系数，即得 蛋白质的含量，反应式为：
(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3
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【操作步骤】
基本步骤如下：取样→消化→蒸馏→滴定→计算
1.样品消化
称取适量样品（约相当氮30mg～40mg）,移入
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【结果及计算】
按下列式子计算蛋白含量：
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蛋白质X %＝
式中： X—样品中蛋白质的含量，% V1—样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml； V2—试剂空白消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml； N—硫酸或盐酸标准溶液当量浓度； 0.014—1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数； m—样品的质量（体积），g（ml）； F—蛋白质系数，按16%计算乘以6.25即为蛋白质。 14
测定范围：含氮在0.1～200mg 测定品种：粮食、饲料、食品、乳制品、饮料、 土壤、水、药物、沉淀物和化学品等。
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加入硫酸钾的作用为增加溶液的沸点，硫酸铜为 催化剂，硫酸铜在蒸馏时作碱性反应的指示剂。
混合指示剂在碱性溶液中呈绿色，在中性溶液 中呈灰色，在酸性溶液中呈红色。如果没有溴 甲酚绿，可单独使用0.1%甲基红乙醇溶液。
实验一 凯氏定氮法测定蛋白质含量
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凯氏定氮法
是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。 即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有 机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵 盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收， 再以标准酸滴定，就可计算出样品中的氮量。由 于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白 质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法
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1.有机物中的铵根在强热和催化剂及浓H2SO4作 用下，消化生成（NH4）2SO4，反应式为：
2NH2+H2S04+2H+＝(NH4)2S04
（其中CuSO4做催化剂）
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2.在凯氏定氮仪器中与碱作用，通过蒸馏释放出 NH3，收集于H3BO3 溶液中，反应式为:
(NH4)2SO4+2NaOH＝2NH3↑+2H2O+Na2SO4 2NH3+4H3BO3＝(NH4)2B4O7+5H2O
选择温度范围450℃左右，待颜色变蓝绿色后继续
加热0.5hபைடு நூலகம்1h。
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2.蒸馏 NaOH、H2O注入管口，用橡胶管套如后分别置于 NaOH、H2O盛器桶内，加液时按面板上相应开关， 液体经电磁泵自动流入消化管内，注入毫升数视 标尺所注位置而定。
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蒸馏过程： （1）观察蒸发炉内水位，不能超过不锈钢电 极（如果超过，要先排完水）。