微生物检验中菌落总数的不确定度评定

微生物分析测量不确定度评定一、概述与通常的测量相比较，微生物测量的特点是测量结果相差极大。

与平均值之偏差高达105。

因此用常规的直接根据平均值得到标准偏差的方法显得有些不合理。

通常的做法是取对数以后进行计算。

同样情况可能会出现在增益和衰减的测量不确定度评定中。

由于微生物分析测量结果散发极大，因此仅考虑由散发引起的测量不确定度，其它不确定度来源均可以忽略不计。

二、数学模型测量是直接数微生物菌落总数，所以数学模型为y=x三、单一样品重复测量1 测量结果对同一样品重复测量10次，测量结果列于表一，取10次测量的平均值作为最后测量结果。

2计算过程(1) 列出测量结果x i。

(2) 取对数logx i ，得到对数logx i 的平均值为log 4.72245x = (3) 求残差log log i x x -(i=1，2，…，10)。

(4) 求残差平方和1021(log log ) 3.35169i i x x =-=∑(5) 求平均值的实验标准差1021(log log )3.35169(log )0.193010(101)10(101)ii x x s x =-===--∑。

(6) 求平均值的标准不确定度平均值的标准不确定度等于一倍平均值的实验标准差，所以(log )(log )0.1930u x s x ==(7) 求扩展不确定度如前所述，全部测量过程只有一项不确定度，所以直接由平均值的标准不确定度给出测量结果的扩展不确定度。

取置信概率p=95%，根据自由度n=9，由t 分布表得到包含因子k=2.26。

于是得到扩展不确定度U 95＝k×u(x log )=2.26×0.193=0.4361(8) 取反对数，由logx 坐标换算回x 坐标由于logx 与x 之间的非线性关系，不能直接求扩展确定度U 95的反对数。

因此首先应确定logx 的取值范围为x log =4.7224±0.43614.2864≤x log ≤5.1536再取反对数后，得测量结果x 分布区间为1.9×104≤ x ≤1.4×105(9) 测量结果报告由于测量结果散发极大，不能准确报告测量结果和测量不确定度。

食品微生物学检测中菌落总数测定测量结果的不确定度评定依据JJF1059－1999《测量不确定度评定与表示》、CNAL/AG06《测量不确定度政策实施指南》和CNAL/AR11《测量不确定度政策》分析一、测量方法按照国家标准GB/T4789.2-2003《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》规定的检测程序进行。

检测过程为：1）以无菌操作将检样25g（mL）剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其它稀释液灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做出1：10的均匀稀释液。

固体检样在加入稀释液后，最好置均置器中以8000r/min～10000r/min的速度处理1min，做出1：10的均匀稀释液。

2）用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其它稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均匀，做出1：100的稀释液。

3）另取1mL灭菌吸管，按上条操作方法，做10倍递增稀释，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管。

4）根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2个～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌培养皿内，每个稀释度做两个培养皿。

5）稀释液移入培养皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基（可放置于46℃±1℃水浴保温）注入培养皿约15mL，并转动培养皿使混合均匀。

同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液灭菌培养皿内作空白对照。

6）待琼脂凝固后，翻转平板，置36℃±1℃温箱内培养48h±2h。

7）作平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。

在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。

8）选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。

一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。

分析检测食品中菌落总数检测的不确定度评定刘　黎，徐清溪，肖常国，郑　惠（青岛市黄岛区市场监督管理局，山东青岛 266500）摘　要：本文对标准方法《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》（GB/T 4789.2—2022）的测量不确定度进行了分析与评定。

根据方法的原理和操作步骤建立了相应的数学模型，找出了不确定度的主要来源，计算了每个测量不确定度分量，并对总的不确定度进行了合成。

评价结果表明，培养基、培养温度和时间等是影响测试结果的主要因素，因此相关操作人员需要在试验中注意对各种因素的控制，提高检测结果的准确性。

关键词：不确定度评定；菌落总数；食品Evaluation of Uncertainty in the Detection of Aerobic BacterialCount in FoodLIU Li, XU Qingxi, XIAO Changguo, ZHENG Hui(Qingdao Huangdao District Market Supervision and Administration Bureau, Qingdao 266500, China)Abstract: In this paper, the uncertainty of the determination of the total bacterial count in food by the method of GB/T 4789.2—2022 was analyzed and evaluated. According to the principle and operation steps of the method, a corresponding mathematical model was established to identify the main sources of uncertainty, calculate each measurement uncertainty component, and synthesize the total uncertainty. The evaluation results indicate that culture medium, culture temperature, and time are the main factors that affect the test results. Therefore, relevant operators need to pay attention to controlling various factors in the experiment to improve the accuracy of the test results.Keywords: uncertainty; aerobic plate count; food测量不确定度是评定实验室检测水平的重要指标，常用来表征实验室数据的可靠性，以及评定不同实验室数据间的可比性[1]。

浅析饮用纯净水微生物检验中菌落总数的不确定度检验发表时间：2019-08-15T09:31:21.717Z 来源：《中国医学人文》(学术版)2019年3月下第6期作者：孙宗祥姜勇波蔡路王蕾于丹[导读] 在本文中，首先介绍了引用纯净水微生物检验中菌落总数实验，然后在实验中应用了不确定度检验，对菌落总数进行检验，实验结果表明，不确定度检验的方法具备的简便性是非常好的，适合微生物检验。

哈尔滨市疾病预防控制中心 150056【摘要】在进行微生物检验时，应用不确定度检验的目前还很少，通过此种检验方法的应用，可以有效的提升微生物检验结果的科学性，增强检验结果的可用性。

在本文中，首先介绍了引用纯净水微生物检验中菌落总数实验，然后在实验中应用了不确定度检验，对菌落总数进行检验，实验结果表明，不确定度检验的方法具备的简便性是非常好的，适合微生物检验。

【关键词】引用纯净水；微生物检验；菌落总数；不确定度检验ABSTRACT：In microbial testing，the application of uncertainty testing is still rare. The application of this method can effectively improve the scientificity of microbial testing results and enhance the usability of testing results. In this paper，the total number of bacteria in the microbial test of purified water is introduced firstly，and then uncertainty test is applied in the experiment to test the total number of bacteria. The experimental results show that the method of uncertainty test is very simple and suitable for microbial test.Key words：citing pure water；microbial testing；total number of colonies；uncertainty testing前言：在进行微生物检验时，不确定度是一个重要的参数，与测量结果具有很大的关联性，被测量值的分散性都是通过不确定度的表征来赋予的，而且赋予具备合理性，通过不确定度的正确测量和评定，提升了测量结果分析的有效性。

水质检测中菌落总数测定的不确定度评定摘要：目的：为了减少实验误差，提高检测的精确度，评定水质检测中菌落总数的不确定度，确定水样的置信区间。

方法：对于某一水样，根据GB/T 5750.12—2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标》和CCBLAC/AG05附录规定的方法进行检测，采用对数的平均值评定菌落总数的不确定度。

结果：该水样本次检测结果的置信区间为（1400—1700）CFU/ml。

结论：根据本次检测结果的置信区间说明，当菌落总数的离散程度高时，应该采用对数平均值评定菌落总数的不确定度。

关键词：菌落总数；不确定度由于测量值不可避免地会偏离准确值，因此研究不确定度变得有意义，通过不确定度表示被测量真值所处的量程范围。

在近些年来，不确定度在理化检测相对比较成熟，集中。

然而在微生物检测方面对于不确定度的评定相对较少。

因此针对在水质检测中关于微生物检测以生活饮用水为例评定菌落总数的不确定度，同时采用平均值和对数平均值的方法评定菌落总数的不确定度，比较得出结论。

1、原理与方法1.1、测试原理：不确定度定义为表征合理地赋予被测量值的分散性，与测量结果相联系的参数。

不确定度包括合并标准不确定度和扩展不确定度，通常情况下，不确定度采用扩展不确定度表示。

根据CCBLAC/AG05附录规定进行菌落总数测试要求：每个样品都包含可计算得出数目的微生物；在实验室由不同人员按照规定的测试方法进行一段时间的测试[1]，测试样品是均匀的，每个样品均做平行样，必须由同一测试人员进行操作。

根据GB/T 5750.12—2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标》定义，菌落总数是指水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48小时，所得1ml水样所含菌落的总数[2]。

1.2、测试方法：根据中华人民共和国国家标准GB/T 5750.12—2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标》进行测试。

对于生活饮用水，菌落总数在适宜计数的范围内，应该以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15ml已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋转平皿，使水样和培养基充分混匀，每次检测做一个平行样对照，同时一个平皿倾注营养琼脂培养基作为空白对照。

乳粉中菌落总数的测量不确定度评定摘要：目的菌落总数是重要的卫生质量指标之一, 建立乳粉中菌落总数的测量不确定度评定方法具有非常重要的意义,可以有效客观判定产品卫生质量指标是否真正符合标准。

根据RB/T 151-2016 《食品微生物定量检测的测量不确定度评估指南》、GB 4789.2-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》和JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》作为依据，对乳粉中菌落总数的不确定度来源进行分析, 保证测试样品均匀，每个样品都含可计数的微生物。

[1]每个样品均做平行样，由同一操作员进行操作，测试完成后得到的测试结果取对数。

结果乳粉中菌落总数的扩展不确定度为 0.040(以对数计)。

关键词：乳粉；菌落总数；测量不确定度实验部分1.实验原理[2]食品检样经过处理,在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后,所得每g检样中形成的微生物菌落总数。

2.样品市售奶粉3.仪器设备恒温培养箱SPX-250，YXQ-LS-70A型高温蒸汽灭菌锅，生物安全柜BSC-1000IIA2，无菌均质器SCIENT-11L，电子天平YP120N4.培养基PCA，北京陆桥，2002245.方法与结果分析5.1菌落总数检验过程图，见图1。

图1 菌落总数检验过程图5.2不确定度来源分析不确定度的来源包括重复性(测试环境、培养时间、培养温度、修约、样品的均匀性、取样的重复性、人员的计数)、培养条件(培养时间允差、培养适度的允差)、取样(稀释体积、取样体积)等，根据RB/T 151-2016 《食品微生物定量检测的测量不确定度评估指南》不考虑偏倚，采用统计学的方法评定测量不确定度。

5.3重复测量结果将10个样品的平行检验结果取对数后进行分析，结果见表1。

表1 检验结果及分析[3]5.4再现性标准差为：5.5扩展不确定度5.6报告结果当检测结果的扩展不确定度为 0.040，其样品菌落总数测试结果报告见表2。

微生物检验中菌落总数的不确定度如何评定在ISO/IEC17025《校准和检测实验室能力的通用要求》中明确指
出实验室出具的检测报告应包含有关评定校准或测试结果的不确定度说明，故对测量结果进行不确定度的评定成为检测实验室的重要内容。

下面是yjbys 小编为大家带来的关于微生物检验中菌落总数的不确定度如
何评定的知识，欢迎阅读。

1 .检验方法
依据GB 4789.2-2010 《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》中要求以无菌操作取检样25 g(ml)剪碎放于含有225 ml 灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液中，经振摇或研磨做成1︰10 的均匀稀释样液，按照标准要求制备10 倍系列稀释样品匀液。

根据污染情况的估计，选择2～3 个稀释度，每个稀释度作2 个平皿，每个平皿注入培养
基约15~20 ml，并转动培养皿使混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平板，置36℃±1℃温箱内培养48 h±2 h。

计数后以同稀释度的各平板平均菌落总数报告。

2. 数学模型
设菌落总数为A，检测结果为X，则A=X CFU/g(ml)。

3 .计算不确定度
3.1 在微生物检验中，样品中细菌分布的均匀性和重复测量带来的不确定度是影响检验结果准确度的主要原因，而B 类不确定度分量对合成不确定度影响较少。

按GB 4789.2-2010 《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》中方法，同一样品每个稀释度作两个平衡样，因此可以采用合并样本标准差求检测结果的不确定度见表1。

3.2 从检验结果可知，如直接用贝塞尔公式计算合并样本标准。

废水菌落总数测定结果不确定度评估1. 实验前准备1.1 设备：恒温培养箱、无菌吸管10ml（具0.1ml刻度）、微量移液器、无菌锥形瓶、无菌培养皿1.2 培养基及试剂：平板计数琼脂、无菌生理盐水1.3 因浓缩苹果清汁中一般菌落不容易生长，故用废水作为样品检测。

2. 检测依据及步骤2.1依据：GB4789.2—2010《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》2.2步骤：定量吸取废水，制备成15份均匀的检测样品，每份样品做两个平行样。

↓↓↓↓3. 不确定度来源分析检测步骤主要包括样品的吸取、稀释（移液器）、培养、计数、及结果修约等，由于结果发散性较大的特点，在本次实验中，我们只对样品吸取、重复测定结果的不确定度进行量化分析。

3.1 样品吸取过程中使用刻度吸管体积的相对标准不确定度u rel （V ） 3.1.1 吸管体积校准引入的标准不确定度u （V ）在吸取样品的过程中均使用经检定合格的10ml 刻度吸管，其允许误差为±0.05ml ，故10ml 吸管体积校准引起的不确定度按矩形分布（k=3）为： u 1（V ）=305.0=0.029ml则样品吸取过程中使用刻度吸管体积的相对标准不确定度： u rel （V ）=()V V u =10029.0=0.0029ml 3.2 重复测定结果的标准不确定度菌落总数测定结果不确定度评定3.2.1 对测定结果X 1、X 2分别取对数，得到lg X 1和lg X 23.2.2 每一个样品的残差(在重复性条件下得出n 个观测结果X k 与n 次独立观测结果的算术平均值X 的差)平方和：()221lg lg ∑=-i iX X式中：i X lg —每一个样品测定结果的对数值；X lg —每一个样品测定结果对数的平均值。

3.2.3 根据《JJF —1999测量不确定度评定》中4.3,计算15个样品的合并标准偏差： ()=X S lg ()()()X u XX n m m j ni i lg lg lg 11112=--∑∑==式中：m —测定样品总个数，本次实验共15个；n —对每个样品的独立测定次数，本次实验每个样品平行测定两次。

菌落总数测定不确定度分析作者：聂庆丽樊云霄来源：《中国食品》2021年第21期隨着经济的高速发展和GDP的不断增长以及人们生活水平的不断提高，人们对于饮食的安全性要求也在不断提高。

食品中微生物的检测已经得到了有关部门的高度重视，特别是食品中菌落总数的测定已经被国家列为食品检测的强制检测项目。

因此，菌落总数测定不确定度分析是很有必要的。

为了减少实验误差，提高检测结果准确性，检测实验室应具有并应用评定测量不确定度的程序。

微生物检验的性质决定其无法运用计量学和统计学正确评估测量的不确定度，但我们旨在找出影响不确定度的各个分量，并评估出它们对结果的影响程度，从而作出合适的质量控制。

微生物不确定度的评定主要针对定量测试。

测量的目的是为了得到测量结果是否准确或者有效。

如果报告中只表述测量结果而未给出其可信程度或者可信的范围，则测量结果是不准确的。

判断测量结果是否准确需要多次测量结果的重复性，也就是测量的质量和准确度，这就需要使用不确定度来表示。

文章主要介绍了测量不确定度的方法程序，分析了不确定度来源等。

一、测量方法程序实验室依照ISO《测量不确定度表示指南》2005版分析评估本实验室菌落总数测试的测量不确定度的评定方法与结果。

程序如下：（1）培养基及稀释液配制;（2）样品稀释;（3）样品培养;（4）菌落计数。

二、建立数学模型根据测量原理及计算公式，建立测定不确定度评定所需数学模型：三、不确定度分析来源菌落总数测定主要是称/吸取25g（mL）样品置于盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌袋中，均质，制成1∶10的样品匀液。

用1mL无菌吸管吸取1∶10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管内，混匀，制成1∶100的样品匀液。

以此类推梯度稀释。

选择2-3个适宜稀释度的样品匀液，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平行。

同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

及时将15-20mL冷却到50℃的平板计数琼脂倾注平皿，并混合均匀。