微生物实验报告思考题参考答案 (2)

山东大学实验报告2012年 12 月 4日姓名系年级 2011级生科2班组别四科目微生物学实验题目微生物的生理生化反应微生物的生理生化反应一、【实验目的】1. 证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。

2.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。

3.了解糖发酵的原理和在肠细菌坚定中的重要作用。

4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。

5. 了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。

二、【实验仪器与试剂】菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌培养基：培养基：固体淀粉培养基、固体油脂培养基（大分子水解试验）；葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内装有倒置的德汉氏小管）（糖发酵试验）；蛋白胨水培养基（吲哚试验）；葡萄糖蛋白胨水培养基；试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水、仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管三、【实验原理】1.在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程，由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。

2.淀粉的水解：由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用.胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内.如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精,双糖和单糖；而淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉，在淀粉培养基上培养用碘处理其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈，据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。

3.油脂的水解：在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后观察菌苔的颜色，若出现红色斑点，则说明此中菌可产生分解油脂的酶。

实验9 微生物的分离、接种和培养一、目的与要求(一)掌握微生物各种接种分离方法。

(二)掌握无菌操作的基本环节。

(三)完成定数量的微生物接种任务。

二、原理在自然界中，各种微生物是在互为依赖的关系下共同生活的。

因此，为了取出特定的微生物进行纯培养，必须从中把它们分离出来。

将一种微生物移到另一种灭菌的培养基上称为接种。

分离培养微生物时，要考虑微生物对外界的物理、化学等因素的影响。

即选择该类微生物最适合的培养基和培养条件。

在分离、接种、培养过程中，均需严格的无菌操作，防止杂菌侵入，所用的器具必须经过灭菌接种工具无论使用前后都要经过火焰灭菌，且在无菌室或无菌箱中进行。

三、材料与仪器(一)菌种大肠杆菌、枯草杆菌、金黄葡萄球菌、酵母菌、青霉菌(二)缓冲葡萄糖肉汤培养基试管垂直；缓冲葡萄额肉汤半圆体培养基试管垂直；缓冲葡有糖肉汤固体培养基试管斜面；缓冲葡萄糖肉汤固体培养基平板；察氏培养基试管斜面；寒氏培养基平板。

(三)接种环接种针，接种钩。

镊子、酒精灯、火柴、酒精棉、试管架、浆糊、标签纸、恒温培养箱等。

四、操作方法(一)接种1.接种前的准备工作(1)检查接种工具。

(2)在欲接种的培养基试管或平板上贴好标签，标上接种的菌名、操作者、接种日期等。

(3)将培养基、接种工具和其他用品全部放在实验台上摆好，进行环境消毒。

2.接种方法(1)试管接种方法。

①将菌种试管与待接种的试管培养基依次排列，挟于左手的拇指与食指之间用右手的中指与食指或食指与小指拔出棉塞并挟住;②置试管口于酒精火焰附近;③将接种工具垂直插入酒精火焰中烧红，再横过火焰三次，然后再放入有菌试管壁内，于无菌的培养基表面待其冷却。

④用接种工具取少许菌种置于另支试管中，按定的接种方式把菌种接种到新的培养基上。

⑤取出接种工具，试管口和棉塞进行火焰灭菌。

⑥重新塞上棉塞。

⑦烧死接种工具上的残余菌，把试管和接种工具放回原处。

(2)试管菌种接种到平板培养基的方法。

①左手持平板和试管菌种，右手松动试管棉塞，烧接种工具。

微生物实验思考题微生物学实验是生物学实验中较为复杂和繁琐的一类实验，它涉及到的实验类型和实验方法较多，而且每一种实验类型和实验方法都有其自身的特点和操作要求。

本文将从以下几个方面对微生物学实验中的一些常见问题进行思考和探讨。

一、实验前的准备工作在进行微生物学实验之前，我们需要做好充分的准备工作。

要了解实验的目的、要求和原理，确定所需的实验器材和试剂，并准备好相应的实验用品。

要对实验场所进行清洁和消毒处理，确保实验环境的无菌性。

要根据实验要求选择合适的菌种和培养基，并进行必要的预处理。

二、实验过程中的注意事项1、菌种保藏：在进行微生物学实验之前，需要对菌种进行保藏。

保藏方法应根据菌种的性质和实验要求进行选择。

常用的保藏方法有甘油管藏法、沙土管藏法、液体石蜡法等。

保藏过程中需要注意防止杂菌污染和防止菌种变异。

2、培养基的制备：制备培养基是微生物学实验中的一项基本操作技能。

在制备培养基时，需要注意根据菌种的营养需求和实验要求选择合适的配方和配制方法。

同时，要注意对培养基进行灭菌处理，确保无菌性。

3、接种与培养：在接种和培养过程中，需要注意无菌操作和防止杂菌污染。

接种时需要根据实验要求选择合适的接种方法和接种量，并注意对菌种进行纯化处理。

培养过程中需要注意控制温度、湿度、光照等环境因素，以保证微生物的正常生长和繁殖。

4、观察与记录：在观察和记录过程中，需要注意对微生物的生长情况、形态特征、生化反应等进行仔细观察和记录。

这些信息对于后续的数据分析和实验结果解释非常重要。

5、数据分析与总结：在完成实验后，需要对实验数据进行统计和分析，并将分析结果进行总结。

数据分析可以借助专业的统计软件进行，如SPSS、Excel等。

总结时需要注意对实验结果进行客观评价，并提出改进意见和建议。

三、实验后的整理与思考完成微生物学实验后，需要对实验场所进行清洁和消毒处理，并对实验器材和试剂进行整理和存放。

需要对实验数据进行整理和分析，并将分析结果进行总结和评价。

竭诚为您提供优质文档/双击可除医学微生物学实验报告答案篇一：南医大医学微生物学实验报告总结优化版脓汁和粪便标本中病原菌的检测20xx级xx专业（x）班学号xx姓名xx第x室第x组组员：xx指导老师：xx[摘要]脓汁和粪便标本中有不同的病原菌。

本实验主要探究检测其病原菌的类型并通过一系列的观察与鉴定从而确定其病原菌的名称和性质。

在实践中学习培养基的制备、消毒和灭菌，细菌的分离与培养，细菌群体和个体形态特征的观察，细菌生化反应鉴定等技巧。

从而掌握微生物实验的各种操作方法，培养对微生物实验的兴趣。

[引言]常见的化脓性病原菌有葡萄球菌、链球菌、淋球菌、脑膜炎球菌、肺炎链球菌、结核杆菌、假单胞菌、流感杆菌等。

浓汁标本在做细菌分离培养的同时，均须直接涂片检查，观察是否有典型形态的菌体，芽孢有无，为临床提供最初的诊治依据。

粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌属、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。

粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选择培养基（如ss、伊红美蓝平板、碱性蛋白胨水），尽可能抑制杂菌，以利于病原菌的检出。

本实验通过常规的病原菌检测方法从脓汁标本中分离出黄白两种细菌，均为革兰氏阳性球菌，其中黄色是致病菌——金黄色葡萄球菌，白色是白色葡萄球菌；从粪便标本中分离到紫黑色和粉红色的细菌，均为革兰氏阴性杆菌，其中紫黑色的是大肠埃希菌，粉红色的是痢疾志贺菌。

1实验材料1.1器材打火机油性笔酒精灯接种环接种针污物盘普通冰柜隔水式电热恒温培养箱奥林巴斯cx21型生物显微镜电炉试管（带棉塞）称量纸药勺牛皮纸硫酸纸橡皮筋尺子锥形瓶高压蒸汽灭菌器镊子bo片吸水纸拭镜纸1.2试剂药品普通营养琼脂培养基蒸馏水脓汁标本粪便标本石蜡油生理盐水结晶紫卢戈碘液95%乙醇稀释复红葡萄糖微量发酵管（2支）乳糖微量发酵管（2支）青霉素抗菌素纸片链霉素抗菌素纸片庆大霉素抗菌素纸片血浆福氏志贺菌诊断血清2实验方法与步骤实验的总流程细菌的分离培养细菌纯培养细菌的形态学检查细菌的生化试验细菌的血清学试验、结果分析2.1培养基制备干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌→1）平板培养基：倾注平板10ml→琼脂完全凝固后，平板倒放→4℃冰箱保存备用。

实验1 培养基的配制和灭菌一、目的要求1.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。

2.了解几种灭菌方法，掌握高压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。

3.熟悉菌种分离筛选的前期准备工作及操作方法。

4.每2人一组，每人一份实验报告。

二、实验材料1.药品：酵母粉、蛋白胨、氯化钠、琼脂、葡萄糖、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O、1N HCl、1N NaOH2.设备：高压蒸汽灭菌锅、紫外线灭菌灯、75%酒精棉。

3.材料：天平、药匙、电炉、pH 试纸、烧杯、量筒、5mL、10mL 注射器、玻璃棒、试管、培养基、吸管、移液器（1mL 0.2mL）、牛皮纸、线绳、标签等。

三、实验内容(一) 培养基的配制1．培养基的配制方法和步骤1)称量：按照配方正确称取所需药品放于烧杯中。

2)溶化：在烧杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。

3)调pH 值：用1N NaOH 或1N HCl 调pH，用pH 试纸对照。

4)加琼脂溶化：加热过程要不断搅拌，可适当补水。

5)分装：注意不要污染试管塞或纱布。

6)包扎成捆：用记号笔注明何种培养基。

7)灭菌：在高压锅中， 115 °C 高温灭菌30min。

2．培养基的配制A.富集培养基（液体）：海水2216E 液体培养基（g/L）：蛋白胨5.0，酵母粉1.0，海水1L，pH 8.0。

取50mL 分装250mL 三角瓶后，8 层纱布封口，外包1层牛皮纸，121℃，高温灭菌20min。

B. 2216E 斜面（固体）：海水2216E 液体培养基中加入2%的琼脂粉，加热溶化琼脂，每支试管内。

加入3mL，121℃高温灭菌20min，灭菌后摆斜面。

C. 无菌生理盐水和保种液：生理盐水： NaCl 0.85% 蒸馏水配制。

每支试管加入5mL，盖上试管帽、包扎、121°C 高温灭菌20min。

保种液：生理盐水，加25%甘油D. 碳源优化培养基：以海水2216E 液体培养基（蛋白胨0.5%，酵母粉0.1%，磷酸铁0.01%，人工海水，pH7.6）为基础，碳源分别是：葡萄糖、蔗糖、甘油、柠檬酸钠、乳糖，每种碳源的添加量为1%。

实验六微生物细胞大小的测定一、目的要求1.学会测微尺的使用和计算方法。

2.掌握酵母菌细胞大小测定的方法。

二、基本原理微生物细胞大小, 是微生物的形态特征之一,也是分类鉴定的依据之一。

由于菌体很小, 只能在显微镜下测量。

用来测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。

镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片。

一般将1mm等分为100格（或2mm等分为200格）,每格长度等于0．01mm（即106μm）。

是专用于校正目镜测微尺每格长度的。

目镜测微尺是一块可放在接目镜内的隔板上的圆形小玻片, 其中央刻有精确的刻度, 有等分50小格或100小格两种, 每5小格间有一长线相隔。

由于所用接目镜放大倍数和接物镜放大倍数的不同, 目镜测微尺每小格所代表的实际长度也就不同, 因此,目镜测微尺不能直接用来测量微生物的大小, 在使用前必须用镜台测微尺进行校正, 以求得在一定放大倍数的接目镜和接物镜下该目镜测微尺每小格的相对值, 然后才可用来测量微生物的大小。

三、器材枯草芽孢杆菌染色玻片标本, 目镜测微尺, 镜台测微尺, 显微镜, 擦镜纸, 香柏油等。

四、操作步骤1. 目镜测微尺的标定(1)放置目镜测微尺取出接目镜, 旋开接目镜透镜, 将目镜测微尺的刻度朝下放在接目镜筒内的隔板上（图Ⅳ-4, B）, 然后旋上接目透镜, 最后将此接目镜插入镜筒内（图Ⅳ-4, C）。

(2)放置镜台测微尺将镜台测微尺置于显微镜的载物台上, 使刻度面朝上。

(3)校正目镜测微尺先用低倍镜观察, 对准焦距, 当看清镜台测微尺后, 转动接目镜, 使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行, 移动推动器, 使目镜测微尺和镜台测微尺的某一区间的两对刻度线完全重合, 然后计数出两对重合线之间各自所占的格数（图Ⅳ-6）。

根据计数得到的目镜测微尺和镜台测微尺重合线之间各自所占的格数, 通过如下公式换算出目镜测微尺每小格所代表的实际长度。

目镜测微尺每小格长度（μm）=同法校正在高倍镜和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。

实验一玻璃器皿的准备、常用仪器的使用及培养基的制备[实验目的]1、系统掌握玻璃器皿的准备方法及常用仪器的使用。

2、掌握一般培养基制备的原则和要求，熟悉一般培养基制备的过程。

[实验原理]一、玻璃器皿的无害处理：1、新购置的玻璃器皿因含有游离碱，一般在2%的盐酸溶液中浸泡数小时后再用清水洗净，也可在洗衣粉水中煮30-60min，取出用清水洗净。

2、常用玻璃器皿洗涤时可用鬃刷蘸取洗衣粉刷洗，然后用自来水冲洗干净。

3、带油污玻璃器皿先将倒空的玻璃器皿用10%的氢氧化钠浸泡半小时或放在5%的苏打液内煮两次，去掉油污，再用洗衣粉和热水刷洗。

4、带菌玻璃器皿经121℃高压蒸汽灭菌20min后，趁热倒去内容物，再用洗衣粉水刷洗干净，以水在内壁均匀分布成一薄层而不出现水珠为油垢除尽的标准。

经以上处理的玻璃器皿，可满足一般实验用。

少数实验对玻璃器皿清洁度要求较高，除用上述方法外，还应先用2%的HCl溶液浸泡数10min，再用自来水冲洗，蒸馏水淋洗2-3次。

有的尚需超纯水淋洗然后烘干备用。

二、玻璃器皿的包扎：吸管、平皿、瓶口等的包扎。

三、玻璃器皿的灭菌：分为两种，高压蒸汽灭菌法和干热灭菌法。

高压蒸汽灭菌法是湿热灭菌中应用最为广泛的一种方法。

其原理是依据在一个密闭的高压蒸汽灭菌器中，水的沸点随水蒸汽压的增加而上升，加压是为了提高水蒸汽的温度。

把待灭菌物品放在灭菌器内，当灭菌器内压力为0.1MPa时，温度可达到121℃，一般维持20min，即可杀死一切微生物的营养体及其孢子。

一般的培养基、玻璃器皿、金属用具、实验服、传染性标本等均可用这种方法有效灭菌。

灭菌的温度及时间视灭菌物品中的微生物种类及数量而定。

干热灭菌法也叫热空气灭菌法。

实验室通常使用恒温控制的电热鼓风干燥箱作为干热灭菌器。

此法常用于空的玻璃器皿、金属器具和其他耐高温的物品（如陶瓷培养皿盖、石蜡油、碳酸钙）的灭菌。

其优点是灭菌器皿保持干燥。

但带有胶皮、塑料的物品、液体及固体培养基不能用此法。

微生物实验微生物实验细菌形态观察细菌分布消毒灭菌细菌形态观察一、实验目的1.掌握光学显微镜〔油镜〕的使用及日常维护2.掌握细菌的三种形态3.掌握临床常见细菌的形态及染色4.掌握细菌的特殊结构5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点二、实验原理1. 普通光学显微镜〔油镜〕的使用1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰3. 根据需要调节显微镜亮度2. 普通光学显微镜的维护1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内4.做好使用记录3．微生物知识1．细菌按形态分类：球菌：球形〔包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等〕杆菌：杆状〔包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等〕螺旋菌：螺旋状〔包括螺旋菌、弧菌等〕2．细菌的基本结构细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体3．细菌的特殊结构荚膜：如肺炎双球菌鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。

如：变形杆菌为周毛菌菌毛芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。

原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体真核类：真菌、原生动物、显微藻类非细胞类：病毒、亚病毒5．真菌单细胞：圆形、芽生孢子。

如：酵母菌多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽。

如：霉菌6．白假私酵母菌〔白念〕生物学性状：G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定致病性：皮肤粘膜——鹅口疮、内脏感染、CNS感染微生物学检查：直接涂片、染色后镜检——菌体、芽生孢子、假菌丝7．新型隐球菌生物学性状：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜〔比菌体大1-3倍〕致病性：吸入后侵犯皮肤、粘膜等——慢性炎症和脓肿；侵袭CNS——亚急性或慢性脑膜炎微生物学检查：脑脊液离心后取沉淀、痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体外围有宽厚荚膜为阳性三、实验材料记号笔：1支；大镊子：1支；火柴：1盒；蜡笔：1支；试管架：1个；酒精灯：1个；接种环：1支；Olympus显微镜：1台；显微镜使用记录本：1个四、实验内容1. 观察细菌三种形态1〕球菌链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌〔子弹形〕、脑膜炎双球菌〔蚕豆形〕、四联菌2〕杆菌破伤风杆菌、白喉杆菌〔异染颗粒〕、绿脓杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌3〕螺形菌弧菌——霍乱弧菌；螺菌；螺杆菌——幽门螺杆菌；弯曲菌2. 观察细菌的特殊结构芽胞、鞭毛、荚膜、异染颗粒、钩端螺旋体、幽门螺杆菌3. 绘图葡萄球菌(staphyloccocus)；肺炎双球菌(pneumo coccus)；脑膜炎球菌(meningococcus)；破伤风杆菌〔Clostridium Tantenus〕；霍乱弧菌〔vibrio cholera)；芽胞(spore)；鞭毛〔flagellum)；荚膜(capsule)；钩端螺旋体(leptospira)五、实验结果绘8幅细菌镜下列图，已交。

细菌的形态结构观察实验报告思考题细菌的形态结构观察实验报告引言：细菌是一种微生物，它们广泛存在于自然界中。

了解细菌的形态结构对于研究微生物学和医学等领域具有重要意义。

本实验旨在通过显微镜观察不同种类细菌的形态结构，深入了解它们的特征和分类。

材料与方法：1. 细菌样本：大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌、变形杆菌。

2. 显微镜、载玻片、染色剂（甲基蓝）。

3. 操作步骤：（1）将载玻片用火焰消毒并晾干。

（2）用无菌棉签将细菌样本涂抹在载玻片上。

（3）将涂有细菌样本的载玻片放入甲基蓝溶液中染色，静置2分钟。

（4）用滴水器滴少量水在载玻片上，并用纸巾轻轻吸干水分。

（5）将载玻片放到显微镜下进行观察。

结果与讨论：1. 大肠杆菌大肠杆菌是一种革兰阴性杆菌，通常生长在肠道中。

观察其形态结构可发现，其细胞为长杆状，约2-3微米长，0.5微米宽。

在染色后可见其细胞质为深蓝色，周围有一层较浅的薄壳。

2. 葡萄球菌葡萄球菌是一种革兰阳性球菌，常见于皮肤和黏膜表面。

观察其形态结构可发现，其细胞为球形或卵圆形，直径约1微米。

在染色后可见其细胞呈紫色。

3. 链球菌链球菌是一种革兰阳性链状细菌，常见于喉咙和皮肤表面。

观察其形态结构可发现，其细胞为链状排列的小球体，直径约0.5微米。

在染色后可见其细胞呈紫色。

4. 变形杆菌变形杆菌是一种革兰阴性弯曲杆菌，在水中广泛分布。

观察其形态结构可发现，其细胞为弯曲的杆状体，长度约1-5微米，宽度约0.2微米。

在染色后可见其细胞呈深蓝色。

结论：通过本实验观察，我们可以了解到不同种类细菌的形态结构特征。

大肠杆菌为长杆状，葡萄球菌为球形或卵圆形，链球菌为链状排列的小球体，变形杆菌为弯曲的杆状体。

这些特征对于细菌的分类和鉴定具有重要意义。

思考题：1. 什么是革兰染色？为什么要进行革兰染色？革兰染色是一种常用的细菌染色方法，用于区分细菌的壁层结构。

其原理是将细胞在紫晶中着色后，在碘液中固定着色物质，然后用酒精洗去多余着色物质，在红粉中再次着色。

实验11环境微⽣物的检测_基础⽣物学实验（安徽⼤学研究⽣复试⽤,⽣物⽣命科学）实验⼗⼀环境微⽣物的检测⼀、实验⽬的1.学习从混杂的微⽣物群体中分离纯化微⽣物的⽅法，掌握分离纯化的基本操作技术；2.学会从菌落及培养特征辨别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌四⼤类微⽣物；3.学会好氧、厌氧的微⽣物平板及斜⾯培养的⽅法。

⼆、实验原理从杂居在⼀起的微⽣物群体中获得只含有某⼀种或某⼀株微⽣物的过程称为微⽣物的分离与纯化。

具体的⽅法有1.单细胞挑取法简易单孢⼦分离法是⼀种不需显微单孢操作器，可直接在普通显微镜下利⽤低倍镜分离单孢⼦的⽅法。

它采⽤很细的⽑细管吸取较稀的萌发的孢⼦悬浮液滴在培养⽫盖的内壁上，在低倍镜下逐个检查微滴，将只含有⼀个萌发孢⼦的微滴放⼀⼩块营养琼脂⽚上，使发育成微⼩菌落。

再将微⼩菌落转移到培养基中，即可获得仅由单个孢⼦发育⽽成的纯培养。

2.平板分离法该⽅法操作简便，普遍⽤于微⽣物的分离、纯化。

基本原理包括：（1）选择适合的待分离微⽣物的⽣长条件，例如营养条件、合适的酸碱度、温度和氧等要求或加⼊某种抑制剂造成只利于该微⽣物⽣长，⽽抑制其他微⽣物⽣长的环境，从⽽淘汰⼀些不需要的微⽣物。

（2）微⽣物在固体培养基上⽣长繁殖形成的单个菌落可以是由⼀个细胞繁殖⽽成的集合体。

可以通过挑取单菌落⽽获得⼀种纯培养，获取单个菌落的⽅法可通过稀释涂布平板法或平板划线法等技术完成。

值得⼀提的是从微⽣物群体中经分离⽣长在平板上的单个菌落并不⼀定保证是纯培养。

纯培养的确定除了观察其菌落形态外，还要结合显微镜观察到的个体形态特征后才能确定，有些微⽣物的纯培养要经过⼀系列的分离与纯化过程和多种特征鉴定⽅能得到。

⼟壤是微⽣物⽣活的⼤本营，它所含微⽣物⽆论是种类还是数量上都是极其丰富的。

因此⼟壤是微⽣物多样性的重要场所，是开发微⽣物资源的重要基地，可以从其中分离、纯化得到许多有价值的微⽣物菌株。

本实验将采⽤以下不同的培养基从⼟壤中分离出不同类型的微⽣物。

微生物学大实验班级：姓名：学号：1.培养基的配置及消毒灭菌1.1通用培养基的配制（液体、固体、半固体三种）1.1.1实验目的（1）了解配制微生物培养基的原理和培养基的种类。

（2）掌握配制微生物通用培养基的一般方法和操作步骤。

1.1.2实验原理培养异养细菌最常用的培养基是牛肉膏蛋白胨培养基，它是一种天然培养基。

牛肉膏是牛肉浸液的浓缩物，含有丰富的营养物质，它不仅能为微生物提供碳源、氮源，还含有多种维生素。

蛋白胨是酪蛋白、大豆蛋白或鱼粉等经蛋白酶水解后的中间产物，含有䏡、胨和氨基酸等丰富的含氮素营养物，因此完全能满足大多数异养细菌对营养的需要。

1.1.3材料和器皿（1）试剂：牛肉膏、蛋白胨，NaCl，1mol/LNaOH,1mol/L HCl。

（2）器皿：台秤，玻璃烧杯，搪瓷烧杯，三角瓶，量筒，漏斗，试管，玻璃棒等。

（3）其他：pH试纸，牛角匙，牛皮纸，棉花，纱绳，灭菌锅等。

1.1.4方法和步骤1.配制牛肉膏蛋白胨培养基（1）配方及配量：牛肉膏1.5g，蛋白胨5g，NaCl2.5g，琼脂（固体6g 半固体0.4g 液体不加）蒸馏水500ml（2）称取药品：按照营养基配方与配量分别称取各药品，取少于总量的水于烧杯中，将培养基成分（琼脂除外）逐一加入水中待溶。

（3）加热溶解：将烧杯放在石棉网上，用文火加热，并不断用玻璃棒搅拌，使各药品快速溶解，然后补水至500ml。

（4）调节pH：用1mol/l NaOH 调pH至7.2—7.4.避免调过碱，应缓慢加入，边加入边搅拌，并用pH试纸测酸碱度值。

（5）分装：将配制好的培养基分装到相应的玻璃器皿中，并在固体和半固体培养基中加入琼脂，贴好标签，待灭菌。

1.2加压蒸汽灭菌法1.2.1实验目的懂得加压蒸汽灭菌原理及其安全使用的注意事项。

1.2.2实验原理以加热密封锅体内的水和水蒸气的压力来提高锅体内蒸汽温度而达到对物品灭菌的目的。

1.2.3方法和步骤（1）加水：取出装料桶，往锅内加水至与搁架圈同样高度为止。

微生物学实验报告（格式标准）(生命科学专业)*****目录索引实验一油镜的使用和细菌的简单染色法 3实验二细菌的革氏染色与芽孢染色 5实验三常用培养基的配制7实验四酵母菌霉菌的形态结构观察及酵母死活细胞的鉴别8实验五、微生物大小的测定与显微计数10实验六环境中微生物的检测和分离纯化11实验七细菌鉴定中常用的生理生化反应12实验八（综合实验）化能异养微生物的分离与纯化13课程名称：微生物学实验班级：化生系生命科学本科实验日期：指导教师：黎勇实验一油镜的使用和细菌的简单染色法〔目的要求〕学习并熟练掌握油镜的使用技术；观察细菌的基本形态；学习观察细菌的运动性的基本方法。

〔基本原理〕1. N·A=n·sinα2. D=λ/2N.A3. 目镜可提高放大倍数，但有效放大率取决于镜口率。

已经分辨的物体不放大看不清，未分辨物放得再大也看不清。

4. 用悬滴法或凹玻片法观察细菌的运动性时，可以通过真运动能定向地由一处快速运动来区别于颗粒的布朗运动。

〔器材用具〕显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻片、接种环、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水纸、擦镜纸；细菌、放线菌等固定装片；培养18小时左右的B.subtilis. S.arueus 菌斜面培养物；无菌水、生理盐水。

〔方法步骤〕：（一）油镜的使用镜检装片在中倍（或高倍镜）下找到目的物，并使位于视野正中聚光镜上升到最高位置，虹彩光圈开到最大，镜头转开成八字形在玻片的镜检部位（光斑处）滴一滴香柏油油镜转入正下方侧视小心上升载物台（缩短镜头与装片距离，镜头浸入油中，至油圈不扩大为止镜头几与装片接触）粗调器徐徐下降载物台（密切注视视野，当捕捉到物像时，立即用细调器校正）仔细观察并绘图取出装片，清洗油镜：擦镜纸拭去镜头上的香柏油擦镜纸沾少许二甲苯擦去残留（用手指辅助，迅速拭擦一、二次）用清洁擦镜纸仔细擦干二甲苯（2-3次）。

（二）细菌的简单染色法：涂片干燥火焰固定染色水洗干燥油镜观察（三）细菌运动性的观察取洁净盖玻片，四周涂上凡士林滴加一小滴菌悬液凹玻片的凹窝向下盖于盖玻片上翻转观察〔结果分析〕1、画一圆圈表示视野，选取所观察的微生物绘图，注意特殊结构、形状和排列。

实验一常用玻璃器皿的清洗及包扎一.目的与要求（一）熟悉微生物实验所需各种常用器皿的名称和规格。

（二）学会正确的清洗玻璃器皿的方法和包扎方法二.原理为了包装实验顺利进行，要求把实验用器皿清洗干净，保持灭菌后无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行妥善包扎，试管和三角瓶要做棉塞。

清洗方法根据实验目的、器皿的种类、所盛放的物品、洗净剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同，不同的器皿包扎方法也不同。

三.材料与仪器（一）常用的各种玻璃器皿。

（二）洗涤工具和去污粉、肥皂、洗涤液。

四.操作步骤（一）清洗1.新玻璃器皿的清洗新购置的玻璃器皿均含有游离碱，故应先将其浸于洗液或2%的盐酸溶液中数小时，再用自来水冲洗干净。

2.用过的玻璃器皿的清洗（1）试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯可用瓶刷或海绵沾上肥皂、洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗，然后在用自来水充分冲洗干净。

经洗涤后，若内壁的水均匀分布在一薄层，表示油垢完全洗净，若挂有水珠，则需用洗涤液（或洗液）浸泡数小时，再用自来水充分冲洗，洗涤干净的器皿倒置与铁丝框内或有空心格子木架上，室内晾干。

（2）玻璃吸管、滴管一般用完后应立即用清水和蒸馏水浸泡（或冲洗），免得干燥后难以冲洗干净，如附有污物可用洗液浸泡。

（3）载玻片与盖玻片带有油污的应擦去有无后用热乙醇、丙酮、二甲苯等溶液浸泡10~15min，溶液油垢然后用水冲洗，再用洗涤液浸泡、冲洗，干后置于95%乙醇中保存备用。

（二）玻璃器皿的包扎1.培养皿常用旧报纸或牛皮纸包紧，一般以5~10套培养皿作一包。

包好后进行干热或湿热灭菌，如将培养皿放入金属（不锈钢）筒内进行热灭，则不必用纸包。

2.试管和三角瓶试管管口和三角瓶都需要塞以棉花塞（或泡膜塑料塞），棉花塞的作用是起过滤作用，避免空气中的微生物进入试管或三角瓶。

棉花塞的制作要求使用棉花塞紧贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙，不能过紧也不能过松，长度不少于管口直径的二倍，约2/3塞进管口。

若干支试管用绳扎在一起，在棉塞部分外包裹牛皮纸或2层旧报纸，再扎好。

1实验内容：2显微镜油镜的使用与保护。

3细菌的形态与结构的观察。

4实验目的：5学会显微镜的使用,重点掌握油镜的使用与保护。

6进一步认识细菌的形态，明确细菌的大小与测量单位。

7熟悉细菌的特殊结构。

8实验材料：显微镜、擦镜纸、液体石蜡、消毒液、细菌的基本形态标本、细菌的特殊结构标本。

4实验方法：(1)显微镜油镜的使用与保护显微镜是一种贵重的光学仪器，而油镜又是显微镜的最精密部分，是观察细菌最重要的工具。

因此，要求大家必须熟练地掌握显微镜的使用和保护，尤其是油镜，避免损坏。

1识别油镜:95╳、100╳、HI、OeL。

2对光：自然光用平面反光镜,人工光用凹面反光镜；先用低倍镜对光，次用高倍镜。

对好光源后,染色标本将聚光器升高,光圈放开。

3、调节焦距:选一张细菌染色标本置于载物台上,用推进器固定，用低倍镜先找准物象，再用高倍镜看清物体，于标本上加镜油一滴。

⑴用眼从侧面观察，转动粗螺旋调节器,将油镜头徐徐下降浸入其中,切不可用力过猛，以免损坏油镜。

⑵用左眼从接目镜观察，徐徐向上转动粗螺旋调节器，见模糊物象后，再用细螺旋调节器，直到物象完全清晰为止.4、显微镜的保护：⑴所有的光学部分结构都不能用手指、普通布擦拭，用过的油镜头应立即先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭，再用干擦镜纸擦去二甲苯，以防二甲苯镜头上的固定胶，致使镜片脱落。

⑵显微镜的光学部分应避免日光直射。

避免接触强酸、强硷、氯仿、酒精。

⑶显微镜用毕,将物镜转成品字形并下降集光器和镜筒，用软布擦拭各部件后覆盖于接目镜上，双手端平送入镜箱内。

置于干燥处,以防受潮。

(二）细菌形态观察1、细菌的基本形态；球菌：肺炎球菌、脑膜炎球菌、葡萄球菌、链球菌杆菌:大肠杆菌、炭疽杆菌、结核杆菌、白喉杆菌弧菌：霍乱弧菌2、细菌的特殊结构：荚膜：肺炎球菌、产气荚膜杆菌鞭毛：水弧菌（周毛菌）芽胞：破伤风杆菌（芽胞位于菌体顶端，呈鼓槌状）一、实验内容:3细菌标本片的制备（操作）4革兰染色法（操作）二、实验目的:1进一步了解细菌特殊结构在鉴别细菌过程中的实用意义.2掌握革兰染色的操作法，充分认识革兰染色的临床意义。

实验二微生物显微计数及活菌观察一、血球计数板的使用及酵母菌的显微计数（暗视野）（一）实验目的学习血球计数板的使用。

直接计数法测定样品中酵母细胞数。

（二）实验原理利用血球计数器在显微镜下直接计数是一种常见的微生物计总数的方法。

因为计数器载片和盖片间的容积一定，所以可以根据显微镜下观察到的微生物数目来计算单位体积内微生物总数。

血球计数器是一只特制载玻片。

载片上有两个方格网，每一方格网共分九个大方格，其中间的一个大方格用来做微生物计数，所以又称为计数室。

计数室的刻度一般有两种，一种是每个大方格分成16个中方格，每中方格又分成25个小方格（麦氏血细胞计数板）。

另一种是一个大方格分25个中方格，每个中方格又分成16个小方格（希里格血细胞计数板。

但是不论哪一种，一个大方格，都等分成（25×16或16×25）400个小方格。

（图2－1）因为每个大方格边长为1毫米，载片与盖片间距离为0.1毫米，所以每个计数室（1个大方格）体积为0.1立方毫米。

测出每个中方格菌数，就可以算出一个大方格的菌数，由此推算出1毫升菌液内所含的菌数。

（三）实验材料1. 器材血球计数板、显微镜。

2. 菌种酿酒酵母菌液。

（四）操作步骤1. 血球计数板的操作1） 取一个清洁的血球计数板，将洁净的专用盖玻片放置在计数室上；2） 把在液体培养基上室温培养了24～48h 的酿酒酵母菌悬液进行稀释，以每小格有3～5个酵母菌为宜；3） 摇匀稀释的酵母菌液，用无菌滴管吸取少许菌液，沿盖玻片的边缘滴一小滴（不宜太多），使菌液自行渗入计数室（两个计数室各滴一滴；注意：加菌液时不得使计数室内有气泡），静置5 min ；4） 将计数板放置在显微镜的载物台上，先在低倍镜下找到方格网，然后转到高倍镜下进行观察和计数。

2. 计数方法1） 不同规格的计数板的计数方法略有差异，一个大方格是16个中方格的（16×25），应当数4角4个中方格（即100个小方格）的菌数；一个大方格是25个中方格的（25×16），除取4角4个中方格外，还要数中央一个中方格（即为80个小方格）的菌数。

实验报告酸奶微生物的检测与计数实验目的：对酸奶中的乳酸菌进行初步分离和计数实验原理：酸奶主要以乳酸菌为发酵剂，乳酸菌是一类可发酵糖类，产生大量乳酸的细菌的通称，主要包括乳杆菌属、双歧杆菌属及链球菌属等。

典型的乳酸菌是革兰氏阳性菌，兼性厌氧或厌氧，营养要求严格。

酸奶中主要使用嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌为发酵剂，部分酸奶中还添加有双歧杆菌、嗜酸乳杆菌等益生菌。

中国食品卫生标准规定，酸奶中乳酸菌含量应满足乳酸菌数≥106CFU/g（ml），其中CFU（菌落形成单位）指单位体积中的细菌群落总数，CFU/g指的是每克样品中含有的细菌菌落总数，CFU/ml指的是每毫升样品中含有的细菌菌落总数。

通过稀释涂布平板法，利用MRS培养基，分离得到超市可购酸奶样品中的乳酸菌，以肉眼可见菌落数代表样品活菌数，分析酸奶中乳酸菌含量CFU／g；通过菌落形态的观察，对酸奶中的乳酸菌进行初步分离和计数。

实验材料和用具：1、培养基乳酸细菌培养基（MRS）蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，葡萄糖20.0g，吐温801.0mL，乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，七水硫酸镁0.58g，四水硫酸锰0.25g，琼脂15.0--20.0g，蒸馏水1000mL，pH6.2~6.6，121℃，灭菌15min2、样品光明风味发酵乳：添加保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌、干酪乳杆菌；乳酸菌数≥ 1×106CFU/g达能碧悠风味发酵乳：添加乳双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、乳酸乳球菌；乳双歧杆菌数≥4×107CFU/g养乐多：添加干酪乳杆菌，活菌数≥ 1×108CFU/g3、材料无菌1.5mlEP 管、无菌棉棒、mark 笔4、仪器超净工作台、37℃恒温培养箱、高压灭菌锅、电子天平、微量移液器实验方法与步骤：1) 在超净台中，以无菌操作称取0.1g 酸奶样品，至无菌1.5mLEP 管中，以无菌PBS 定容至1ml，以微量移液器轻轻反复吹打，使之充分混匀，制成1:10样品匀液；2) 以微量移液器吸取100uL1:10 样品匀液，转至装有900ul 无菌PBS 的1.5mLEP 管中，以微量移液器轻轻反复吹打，使之充分混匀，制成1:100 样品匀液；3) 根据步骤2)操作顺序，10 倍系列稀释，获得不同稀释度的样品溶液；4) 根据待测酸奶样品的活菌总数，选择2 个连续的适宜稀释度，各以0.1mL 加入到MRS 平板中进行涂布；5) 在MRS 平板上注明组别、样品、稀释度、姓名、日期，每组6 名同学共同完成3 种不同酸奶，各2 个连续稀释度的涂布；6) 于37℃恒温低氧倒置培养48h；7) 观察MRS 培养基表面菌落形态；8) 菌落计数，计算样品中的CFU/g。

微生实验报告姓名：王晶晖专业年级：2011级生物技术学号：040312011032实验七土壤中微生物的分离和纯化, 微生物的培养特征观察,环境中的微生物结果观察一实验目的1 观察不同微生物在液体，半固体，固体培养基上的培养特征2 观察空气和体表的微生物3 观察土壤微生物并记录菌落特征二实验原理1 微生物的分离纯化的观察纯种微生物的确认2 菌落特征的描述观察菌落的形状和大小、边缘、表面、隆起形状，透明度及培养基的颜色等三实验器材1 培养好的培养基：已接种完并培养好的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板、斜面、液体、半固体培养基四实验结果1、菌落特征描述(填表描述5个菌落):菌株名称菌落特征形状大小（d）颜色表面隆起边缘透明度1 不规则8mm 白色光滑隆起光滑不规则不透明2 圆形3mm 白色光滑隆起光滑不透明3 圆形，有同心圆6mm 白色，中间颜色深光滑隆起光滑边缘半透明，中间不透明4 圆形2mm 白色，有点泛黄光滑不隆起光滑半透明5 不规则6×8mm 白色，泛红光滑隆起光滑半透明2、记录你所做的实验中各种微生物在斜面,液体和半固体培养基中的培养特征。

枯草杆菌固体斜面变形杆菌固体斜面金黄色葡萄球菌固体斜面枯草杆菌液体培养基变形杆菌液体培养基（上）金黄色葡萄球菌液体培养基（右）枯草杆菌半固体培养基变形杆菌半固体培养基金黄色葡萄球菌半固体培养基固体斜面液体培养基半固体培养基枯草杆菌扩展状，有粉红色代谢产物形成薄膜培养基上方有薄膜，穿刺内菌种呈扩展状变形杆菌树状，有分支均匀生长穿刺内菌体均匀分布，白色金黄色葡萄球菌念珠状絮状穿刺内菌体分布不均匀思考题1、不同微生物的菌落特征的主要区别是什么？答：细菌在培养基上的形状、大小、颜色，表面和边缘的光滑程度，透明度等的不同。

2、一个好氧的具周生鞭毛的菌株在半固体和液体培养基中的培养特征是怎样的？答：因为具有鞭毛，所以细菌在半固体培养基中会以接种的位置为中心向周围的培养基扩散生长；又因为是好氧的，所以细菌会在液体培养基上表面生长。

实验一：环境微生物采集与分离09110309 刘佳秀玉一、实验目的1.了解环境与微生物的关系及其多样性；2.学习环境微生物（土壤、水体、人体等）采样的基本方法；3.初步掌握观察微生物的实验方法；4.了解光学显微镜观察的基本操作和油镜头的使用方法；5.了解并熟悉微生物的稀释涂布分离方法与技术；6.树立严格的无菌意识和掌握正确的无菌操作方法。

二、实验内容与方法1.环境微生物样品采集空气中微生物采集：牛肉膏蛋白胨平板和马铃薯培养基，打开皿盖在空气中暴露5min后盖上皿盖（室外和室内各一个）。

2.土壤微生物采集用土壤采样器五点对角取样，混匀，称取1克土壤放入含9ml无菌水的三角瓶中（内含玻璃珠数粒），振荡分散。

3.水体微生物采集与稀释用水样采样器分别取污水和水库水约500ml。

4.土壤微生物样品的稀释1g土壤放入含9ml无菌水的三角瓶中内含玻璃珠数粒），混匀后用加样枪和Tips在Epp管中进行10的倍比稀释成10-2,10-3的梯度样品。

5.水体微生物样品的稀释将污水和洁净水, 分别稀释成10-1,10-2, 10-3等系列。

微量加样枪分别取0.1ml含菌液体放于固体培养基平板表面中央，用无菌的玻璃涂棒将样品液滴均匀涂布分散在平板表面。

土壤样液：10-2,10-3样液（单号组10-2，双号组10-3）1 牛肉膏蛋白胨培养基1 高氏一号培养基1 马铃薯培养基水体样液：库水:10-1，10-2, 塘水:10-2,10-3样液（单号组库水，双号组污水）2 牛肉膏蛋白胨培养基6.培养实验二：口腔微生物的观察一、实验内容与方法1.取样：用无菌牙签在牙缝内反复擦拭几遍，然后将牙签涂布于载玻片上(事先放一小滴水)。

2.制片(单染色法)（1）取样（2）固定（3）沙黄染色2分钟（4）水洗至无色流液（5）吸去残留水（6）酒精灯干燥3.显微镜油镜观察：按照低倍-高倍-油镜的顺序进行观察。

二、实验结果。