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山东大学实验报告2012年 12 月 4日姓名系年级 2011级生科2班组别四科目微生物学实验题目微生物的生理生化反应微生物的生理生化反应一、【实验目的】1. 证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。
3.了解糖发酵的原理和在肠细菌坚定中的重要作用。
4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
5. 了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。
二、【实验仪器与试剂】菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌培养基：培养基：固体淀粉培养基、固体油脂培养基（大分子水解试验）；葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内装有倒置的德汉氏小管）（糖发酵试验）；蛋白胨水培养基（吲哚试验）；葡萄糖蛋白胨水培养基；试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水、仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管三、【实验原理】1.在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程，由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
2.淀粉的水解：由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用.胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内.如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精,双糖和单糖；而淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉，在淀粉培养基上培养用碘处理其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈，据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。
3.油脂的水解：在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后观察菌苔的颜色，若出现红色斑点，则说明此中菌可产生分解油脂的酶。
实验9 微生物的分离、接种和培养一、目的与要求(一)掌握微生物各种接种分离方法。
(二)掌握无菌操作的基本环节。
(三)完成定数量的微生物接种任务。
二、原理在自然界中，各种微生物是在互为依赖的关系下共同生活的。
因此，为了取出特定的微生物进行纯培养，必须从中把它们分离出来。
将一种微生物移到另一种灭菌的培养基上称为接种。
分离培养微生物时，要考虑微生物对外界的物理、化学等因素的影响。
即选择该类微生物最适合的培养基和培养条件。
在分离、接种、培养过程中，均需严格的无菌操作，防止杂菌侵入，所用的器具必须经过灭菌接种工具无论使用前后都要经过火焰灭菌，且在无菌室或无菌箱中进行。
三、材料与仪器(一)菌种大肠杆菌、枯草杆菌、金黄葡萄球菌、酵母菌、青霉菌(二)缓冲葡萄糖肉汤培养基试管垂直；缓冲葡萄额肉汤半圆体培养基试管垂直；缓冲葡有糖肉汤固体培养基试管斜面；缓冲葡萄糖肉汤固体培养基平板；察氏培养基试管斜面；寒氏培养基平板。
(三)接种环接种针，接种钩。
镊子、酒精灯、火柴、酒精棉、试管架、浆糊、标签纸、恒温培养箱等。
四、操作方法(一)接种1.接种前的准备工作(1)检查接种工具。
(2)在欲接种的培养基试管或平板上贴好标签，标上接种的菌名、操作者、接种日期等。
(3)将培养基、接种工具和其他用品全部放在实验台上摆好，进行环境消毒。
2.接种方法(1)试管接种方法。
①将菌种试管与待接种的试管培养基依次排列，挟于左手的拇指与食指之间用右手的中指与食指或食指与小指拔出棉塞并挟住;②置试管口于酒精火焰附近;③将接种工具垂直插入酒精火焰中烧红，再横过火焰三次，然后再放入有菌试管壁内，于无菌的培养基表面待其冷却。
④用接种工具取少许菌种置于另支试管中，按定的接种方式把菌种接种到新的培养基上。
⑤取出接种工具，试管口和棉塞进行火焰灭菌。
⑥重新塞上棉塞。
⑦烧死接种工具上的残余菌，把试管和接种工具放回原处。
(2)试管菌种接种到平板培养基的方法。
①左手持平板和试管菌种，右手松动试管棉塞，烧接种工具。
微生物实验思考题微生物学实验是生物学实验中较为复杂和繁琐的一类实验，它涉及到的实验类型和实验方法较多，而且每一种实验类型和实验方法都有其自身的特点和操作要求。
本文将从以下几个方面对微生物学实验中的一些常见问题进行思考和探讨。
一、实验前的准备工作在进行微生物学实验之前，我们需要做好充分的准备工作。
要了解实验的目的、要求和原理，确定所需的实验器材和试剂，并准备好相应的实验用品。
要对实验场所进行清洁和消毒处理，确保实验环境的无菌性。
要根据实验要求选择合适的菌种和培养基，并进行必要的预处理。
二、实验过程中的注意事项1、菌种保藏：在进行微生物学实验之前，需要对菌种进行保藏。
保藏方法应根据菌种的性质和实验要求进行选择。
常用的保藏方法有甘油管藏法、沙土管藏法、液体石蜡法等。
保藏过程中需要注意防止杂菌污染和防止菌种变异。
2、培养基的制备：制备培养基是微生物学实验中的一项基本操作技能。
在制备培养基时，需要注意根据菌种的营养需求和实验要求选择合适的配方和配制方法。
同时，要注意对培养基进行灭菌处理，确保无菌性。
3、接种与培养：在接种和培养过程中，需要注意无菌操作和防止杂菌污染。
接种时需要根据实验要求选择合适的接种方法和接种量，并注意对菌种进行纯化处理。
培养过程中需要注意控制温度、湿度、光照等环境因素，以保证微生物的正常生长和繁殖。
4、观察与记录：在观察和记录过程中，需要注意对微生物的生长情况、形态特征、生化反应等进行仔细观察和记录。
这些信息对于后续的数据分析和实验结果解释非常重要。
5、数据分析与总结：在完成实验后，需要对实验数据进行统计和分析，并将分析结果进行总结。
数据分析可以借助专业的统计软件进行，如SPSS、Excel等。
总结时需要注意对实验结果进行客观评价，并提出改进意见和建议。
三、实验后的整理与思考完成微生物学实验后，需要对实验场所进行清洁和消毒处理，并对实验器材和试剂进行整理和存放。
需要对实验数据进行整理和分析，并将分析结果进行总结和评价。
竭诚为您提供优质文档/双击可除医学微生物学实验报告答案篇一：南医大医学微生物学实验报告总结优化版脓汁和粪便标本中病原菌的检测20xx级xx专业（x）班学号xx姓名xx第x室第x组组员：xx指导老师：xx[摘要]脓汁和粪便标本中有不同的病原菌。
本实验主要探究检测其病原菌的类型并通过一系列的观察与鉴定从而确定其病原菌的名称和性质。
在实践中学习培养基的制备、消毒和灭菌，细菌的分离与培养，细菌群体和个体形态特征的观察，细菌生化反应鉴定等技巧。
从而掌握微生物实验的各种操作方法，培养对微生物实验的兴趣。
[引言]常见的化脓性病原菌有葡萄球菌、链球菌、淋球菌、脑膜炎球菌、肺炎链球菌、结核杆菌、假单胞菌、流感杆菌等。
浓汁标本在做细菌分离培养的同时，均须直接涂片检查，观察是否有典型形态的菌体，芽孢有无，为临床提供最初的诊治依据。
粪便标本中常见的病原菌有志贺氏菌属、致病性大肠杆菌属、弧菌属、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、艰难梭菌等。
粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选择培养基（如ss、伊红美蓝平板、碱性蛋白胨水），尽可能抑制杂菌，以利于病原菌的检出。
本实验通过常规的病原菌检测方法从脓汁标本中分离出黄白两种细菌，均为革兰氏阳性球菌，其中黄色是致病菌——金黄色葡萄球菌，白色是白色葡萄球菌；从粪便标本中分离到紫黑色和粉红色的细菌，均为革兰氏阴性杆菌，其中紫黑色的是大肠埃希菌，粉红色的是痢疾志贺菌。
1实验材料1.1器材打火机油性笔酒精灯接种环接种针污物盘普通冰柜隔水式电热恒温培养箱奥林巴斯cx21型生物显微镜电炉试管（带棉塞）称量纸药勺牛皮纸硫酸纸橡皮筋尺子锥形瓶高压蒸汽灭菌器镊子bo片吸水纸拭镜纸1.2试剂药品普通营养琼脂培养基蒸馏水脓汁标本粪便标本石蜡油生理盐水结晶紫卢戈碘液95%乙醇稀释复红葡萄糖微量发酵管（2支）乳糖微量发酵管（2支）青霉素抗菌素纸片链霉素抗菌素纸片庆大霉素抗菌素纸片血浆福氏志贺菌诊断血清2实验方法与步骤实验的总流程细菌的分离培养细菌纯培养细菌的形态学检查细菌的生化试验细菌的血清学试验、结果分析2.1培养基制备干粉培养基→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌→1）平板培养基：倾注平板10ml→琼脂完全凝固后，平板倒放→4℃冰箱保存备用。
实验1 培养基的配制和灭菌一、目的要求1.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。
2.了解几种灭菌方法，掌握高压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。
3.熟悉菌种分离筛选的前期准备工作及操作方法。
4.每2人一组，每人一份实验报告。
二、实验材料1.药品：酵母粉、蛋白胨、氯化钠、琼脂、葡萄糖、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O、1N HCl、1N NaOH2.设备：高压蒸汽灭菌锅、紫外线灭菌灯、75%酒精棉。
3.材料：天平、药匙、电炉、pH 试纸、烧杯、量筒、5mL、10mL 注射器、玻璃棒、试管、培养基、吸管、移液器（1mL 0.2mL）、牛皮纸、线绳、标签等。
三、实验内容(一) 培养基的配制1．培养基的配制方法和步骤1)称量：按照配方正确称取所需药品放于烧杯中。
2)溶化：在烧杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。
3)调pH 值：用1N NaOH 或1N HCl 调pH，用pH 试纸对照。
4)加琼脂溶化：加热过程要不断搅拌，可适当补水。
5)分装：注意不要污染试管塞或纱布。
6)包扎成捆：用记号笔注明何种培养基。
7)灭菌：在高压锅中， 115 °C 高温灭菌30min。
2．培养基的配制A.富集培养基（液体）：海水2216E 液体培养基（g/L）：蛋白胨5.0，酵母粉1.0，海水1L，pH 8.0。
取50mL 分装250mL 三角瓶后，8 层纱布封口，外包1层牛皮纸，121℃，高温灭菌20min。
B. 2216E 斜面（固体）：海水2216E 液体培养基中加入2%的琼脂粉，加热溶化琼脂，每支试管内。
加入3mL，121℃高温灭菌20min，灭菌后摆斜面。
C. 无菌生理盐水和保种液：生理盐水： NaCl 0.85% 蒸馏水配制。
每支试管加入5mL，盖上试管帽、包扎、121°C 高温灭菌20min。
保种液：生理盐水，加25%甘油D. 碳源优化培养基：以海水2216E 液体培养基（蛋白胨0.5%，酵母粉0.1%，磷酸铁0.01%，人工海水，pH7.6）为基础，碳源分别是：葡萄糖、蔗糖、甘油、柠檬酸钠、乳糖，每种碳源的添加量为1%。
实验六微生物细胞大小的测定一、目的要求1.学会测微尺的使用和计算方法。
2.掌握酵母菌细胞大小测定的方法。
二、基本原理微生物细胞大小, 是微生物的形态特征之一,也是分类鉴定的依据之一。
由于菌体很小, 只能在显微镜下测量。
用来测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。
镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片。
一般将1mm等分为100格（或2mm等分为200格）,每格长度等于0．01mm（即106μm）。
是专用于校正目镜测微尺每格长度的。
目镜测微尺是一块可放在接目镜内的隔板上的圆形小玻片, 其中央刻有精确的刻度, 有等分50小格或100小格两种, 每5小格间有一长线相隔。
由于所用接目镜放大倍数和接物镜放大倍数的不同, 目镜测微尺每小格所代表的实际长度也就不同, 因此,目镜测微尺不能直接用来测量微生物的大小, 在使用前必须用镜台测微尺进行校正, 以求得在一定放大倍数的接目镜和接物镜下该目镜测微尺每小格的相对值, 然后才可用来测量微生物的大小。
三、器材枯草芽孢杆菌染色玻片标本, 目镜测微尺, 镜台测微尺, 显微镜, 擦镜纸, 香柏油等。
四、操作步骤1. 目镜测微尺的标定(1)放置目镜测微尺取出接目镜, 旋开接目镜透镜, 将目镜测微尺的刻度朝下放在接目镜筒内的隔板上（图Ⅳ-4, B）, 然后旋上接目透镜, 最后将此接目镜插入镜筒内（图Ⅳ-4, C）。
(2)放置镜台测微尺将镜台测微尺置于显微镜的载物台上, 使刻度面朝上。
(3)校正目镜测微尺先用低倍镜观察, 对准焦距, 当看清镜台测微尺后, 转动接目镜, 使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行, 移动推动器, 使目镜测微尺和镜台测微尺的某一区间的两对刻度线完全重合, 然后计数出两对重合线之间各自所占的格数（图Ⅳ-6）。
根据计数得到的目镜测微尺和镜台测微尺重合线之间各自所占的格数, 通过如下公式换算出目镜测微尺每小格所代表的实际长度。
目镜测微尺每小格长度（μm）=同法校正在高倍镜和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。
实验一玻璃器皿的准备、常用仪器的使用及培养基的制备[实验目的]1、系统掌握玻璃器皿的准备方法及常用仪器的使用。
2、掌握一般培养基制备的原则和要求，熟悉一般培养基制备的过程。
[实验原理]一、玻璃器皿的无害处理：1、新购置的玻璃器皿因含有游离碱，一般在2%的盐酸溶液中浸泡数小时后再用清水洗净，也可在洗衣粉水中煮30-60min，取出用清水洗净。
2、常用玻璃器皿洗涤时可用鬃刷蘸取洗衣粉刷洗，然后用自来水冲洗干净。
3、带油污玻璃器皿先将倒空的玻璃器皿用10%的氢氧化钠浸泡半小时或放在5%的苏打液内煮两次，去掉油污，再用洗衣粉和热水刷洗。
4、带菌玻璃器皿经121℃高压蒸汽灭菌20min后，趁热倒去内容物，再用洗衣粉水刷洗干净，以水在内壁均匀分布成一薄层而不出现水珠为油垢除尽的标准。
经以上处理的玻璃器皿，可满足一般实验用。
少数实验对玻璃器皿清洁度要求较高，除用上述方法外，还应先用2%的HCl溶液浸泡数10min，再用自来水冲洗，蒸馏水淋洗2-3次。
有的尚需超纯水淋洗然后烘干备用。
二、玻璃器皿的包扎：吸管、平皿、瓶口等的包扎。
三、玻璃器皿的灭菌：分为两种，高压蒸汽灭菌法和干热灭菌法。
高压蒸汽灭菌法是湿热灭菌中应用最为广泛的一种方法。
其原理是依据在一个密闭的高压蒸汽灭菌器中，水的沸点随水蒸汽压的增加而上升，加压是为了提高水蒸汽的温度。
把待灭菌物品放在灭菌器内，当灭菌器内压力为0.1MPa时，温度可达到121℃，一般维持20min，即可杀死一切微生物的营养体及其孢子。
一般的培养基、玻璃器皿、金属用具、实验服、传染性标本等均可用这种方法有效灭菌。
灭菌的温度及时间视灭菌物品中的微生物种类及数量而定。
干热灭菌法也叫热空气灭菌法。
实验室通常使用恒温控制的电热鼓风干燥箱作为干热灭菌器。
此法常用于空的玻璃器皿、金属器具和其他耐高温的物品（如陶瓷培养皿盖、石蜡油、碳酸钙）的灭菌。
其优点是灭菌器皿保持干燥。
但带有胶皮、塑料的物品、液体及固体培养基不能用此法。
微生物实验微生物实验细菌形态观察细菌分布消毒灭菌细菌形态观察一、实验目的1.掌握光学显微镜〔油镜〕的使用及日常维护2.掌握细菌的三种形态3.掌握临床常见细菌的形态及染色4.掌握细菌的特殊结构5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点二、实验原理1. 普通光学显微镜〔油镜〕的使用1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰3. 根据需要调节显微镜亮度2. 普通光学显微镜的维护1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内4.做好使用记录3．微生物知识1．细菌按形态分类：球菌：球形〔包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等〕杆菌：杆状〔包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等〕螺旋菌：螺旋状〔包括螺旋菌、弧菌等〕2．细菌的基本结构细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体3．细菌的特殊结构荚膜：如肺炎双球菌鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。
如：变形杆菌为周毛菌菌毛芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。
原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体真核类：真菌、原生动物、显微藻类非细胞类：病毒、亚病毒5．真菌单细胞：圆形、芽生孢子。
如：酵母菌多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽。
如：霉菌6．白假私酵母菌〔白念〕生物学性状：G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定致病性：皮肤粘膜——鹅口疮、内脏感染、CNS感染微生物学检查：直接涂片、染色后镜检——菌体、芽生孢子、假菌丝7．新型隐球菌生物学性状：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜〔比菌体大1-3倍〕致病性：吸入后侵犯皮肤、粘膜等——慢性炎症和脓肿；侵袭CNS——亚急性或慢性脑膜炎微生物学检查：脑脊液离心后取沉淀、痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体外围有宽厚荚膜为阳性三、实验材料记号笔：1支；大镊子：1支；火柴：1盒；蜡笔：1支；试管架：1个；酒精灯：1个；接种环：1支；Olympus显微镜：1台；显微镜使用记录本：1个四、实验内容1. 观察细菌三种形态1〕球菌链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌〔子弹形〕、脑膜炎双球菌〔蚕豆形〕、四联菌2〕杆菌破伤风杆菌、白喉杆菌〔异染颗粒〕、绿脓杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌3〕螺形菌弧菌——霍乱弧菌；螺菌；螺杆菌——幽门螺杆菌；弯曲菌2. 观察细菌的特殊结构芽胞、鞭毛、荚膜、异染颗粒、钩端螺旋体、幽门螺杆菌3. 绘图葡萄球菌(staphyloccocus)；肺炎双球菌(pneumo coccus)；脑膜炎球菌(meningococcus)；破伤风杆菌〔Clostridium Tantenus〕；霍乱弧菌〔vibrio cholera)；芽胞(spore)；鞭毛〔flagellum)；荚膜(capsule)；钩端螺旋体(leptospira)五、实验结果绘8幅细菌镜下列图，已交。
细菌的形态结构观察实验报告思考题细菌的形态结构观察实验报告引言：细菌是一种微生物，它们广泛存在于自然界中。
了解细菌的形态结构对于研究微生物学和医学等领域具有重要意义。
本实验旨在通过显微镜观察不同种类细菌的形态结构，深入了解它们的特征和分类。
材料与方法：1. 细菌样本：大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌、变形杆菌。
2. 显微镜、载玻片、染色剂（甲基蓝）。
3. 操作步骤：（1）将载玻片用火焰消毒并晾干。
（2）用无菌棉签将细菌样本涂抹在载玻片上。
（3）将涂有细菌样本的载玻片放入甲基蓝溶液中染色，静置2分钟。
（4）用滴水器滴少量水在载玻片上，并用纸巾轻轻吸干水分。
（5）将载玻片放到显微镜下进行观察。
结果与讨论：1. 大肠杆菌大肠杆菌是一种革兰阴性杆菌，通常生长在肠道中。
观察其形态结构可发现，其细胞为长杆状，约2-3微米长，0.5微米宽。
在染色后可见其细胞质为深蓝色，周围有一层较浅的薄壳。
2. 葡萄球菌葡萄球菌是一种革兰阳性球菌，常见于皮肤和黏膜表面。
观察其形态结构可发现，其细胞为球形或卵圆形，直径约1微米。
在染色后可见其细胞呈紫色。
3. 链球菌链球菌是一种革兰阳性链状细菌，常见于喉咙和皮肤表面。
观察其形态结构可发现，其细胞为链状排列的小球体，直径约0.5微米。
在染色后可见其细胞呈紫色。
4. 变形杆菌变形杆菌是一种革兰阴性弯曲杆菌，在水中广泛分布。
观察其形态结构可发现，其细胞为弯曲的杆状体，长度约1-5微米，宽度约0.2微米。
在染色后可见其细胞呈深蓝色。
结论：通过本实验观察，我们可以了解到不同种类细菌的形态结构特征。
大肠杆菌为长杆状，葡萄球菌为球形或卵圆形，链球菌为链状排列的小球体，变形杆菌为弯曲的杆状体。
这些特征对于细菌的分类和鉴定具有重要意义。
思考题：1. 什么是革兰染色？为什么要进行革兰染色？革兰染色是一种常用的细菌染色方法，用于区分细菌的壁层结构。
其原理是将细胞在紫晶中着色后，在碘液中固定着色物质，然后用酒精洗去多余着色物质，在红粉中再次着色。
实验一、微生物的简单染色思考题
1油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应特别注意些什么？
答:油镜在使用时必须在载玻片与物镜之间滴加镜头油。
油镜使用过程中要注意两点: (1)、使用后镜头的清洁:镜面只能用擦镜纸擦,不能用手指或粗布,以保证光洁度,用完油镜必须进行“三擦”(观察完毕,上悬镜筒,先用擦镜纸擦去镜头上的油,然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯(或者乙醇乙醚溶液)擦去残留的油,最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯,后将镜体全部复原)。
(2)、、观察标本时,必须依次用低、中、高倍镜,最后用油镜。
当目视接目镜时,特别在使用油镜时,切不可使用粗调节器,以免压碎玻片或损伤镜面。
2、使用油镜时,为什么必须用镜头油？
答:在使用普通显微镜时,当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时,由于空气与玻片的密度不同,使光线受到曲折,发生散射,降低了视野的照明度。
若中间的介质就是一层油(其折射率与玻片的相近),则几乎不发生折射,增加了视野的进光量,从而使物象更加清晰。
3、镜检标本时,为什么先用低倍镜观察,而不就是直接用高倍镜或油镜观察？
答:低倍镜视野比较大,能瞧到的范围大,容易找到观察的目标,然后在用放大倍数高的高倍镜或油镜有目的的观察。
实验二、革兰氏染色
(1) 为什么必须用培养24 h以内的菌体进行革兰氏染色?
答:２4h以内的菌体处于活跃生长期,菌体细胞壁具有典型特征,而处于老龄的革兰氏阳性细菌壁结构开始发生变化,染色时会被染成红色而造成假阴性
（2）要得到正确的革兰氏染色结果,必须注意哪些操作？哪一步就是关键步骤?为什么？答:应注意如下几点:
其一,选用活跃生长期菌种染色,老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性;
其二,涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性;
其三,脱色就是革兰氏染色就是否成功的关键,脱色不够造成假阳性,脱色过度造成假阴性
（3）当您对未知菌进行革兰氏染色时,怎样保证操作正确,结果可靠?
答:当要确证未知菌的革兰氏反应时,可用已知菌进行混合涂片,使二者染色条件保持一致,如果已知菌的结果与预期相符,则证明操作操作正确,结果可靠。
实验三、微生物的显微镜直接计数法
1、在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点？
答:1)优点:直观、快速、操作简单。
2)缺点:
不能区分死菌与活菌;
不适于对运动细菌的计数;
需要相对高的细菌浓度;
个体小的细菌在显微镜下难以观察;
实验四、微生物大小的测定
1、在不改变目镜与目镜测微尺,而改用不同放大倍数的物镜来测定同一细菌的大小时,其测定结果就是否相同?为什么？
答:相同;目镜测微尺就是一块圆形玻片,其中央刻有精确等分的刻度,有把5毫米刻成为50等分或把１0毫米长度刻成1０0等分。
测量时,将其放在接目镜中的隔板上来测量经显微镜放大后的细胞物象。
由于在不改变目镜与目镜测微尺,而改用不同放大倍数的物镜来测定同一细菌的大小时,物象的放大倍数与每小格目镜测微尺所代表的长度在变化比例上就是同步的,故而测定结果相同。
实验五、培养基的配置与高压蒸汽灭菌
1、培养基配好后,为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基就是否无菌?为什么要倒置培养?
答:由于配制培养基的各类营养物质与容器等含有各种微生物,因此,已配制好的培养基必须立即灭菌,如果来不及灭菌,应暂存冰箱内,以防止其中的微生物生长系列而消耗养分与改变培养基的酸碱度所带来的不利影响。
将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～4８h,无菌生长即可证明灭菌后的培养基无菌。
倒置培养的主要目的:１)由于重力的作用使培养基表面及次层能富集微生物生长所需的营养物质,利于微生物生长;2)防止空气中微生物的污染培养基及培养物:倒置时平板内的空气就是不流动的,杂菌不会沉降到培养基表面,如果不倒置,很快平板周边会长起杂菌。
3)倒置培养使琼脂里水分不易蒸发出去,而充分的保持琼脂的弹性与细菌容易繁殖与生存的环境。
如果不倒置,大概３天左右培养基就会出现龟裂等水分散失的情况。
而一些落菌等试验,需验证培养基无菌,就要先倒置培养48小时才可作为模板做落菌,水分散失就是很重要的。
2、在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题？为什么?
答:一般而言,培养基的配置要注意如下几点原则:
1)、营养成分的配比:碳源与氮源的比例(C/N)要适当;
2)、适宜的酸碱度(ｐH值):配制培养基时pH的调节;
3)、渗透压:营养物质要有适合的浓度;
4)、培养基不能反复高温灭菌。
５)、称不溶性固形物时,应单独称,若量少的可以与无机盐一起称,但一定要混匀再分装;
6)、一般情况下培养基用自来水配制。
操作细节上则要注意:
1)、称药品用的牛角匙不要混用,称完药品应及时盖紧瓶盖
2)、调pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度
3)、分装时注意不要污染棉塞、试管口,以免染菌。
４)、及时灭菌,以免培养基及容器里的微生物生长繁殖消耗养分、改变酸碱度。
3、高压蒸气灭菌开始之前,为什么要将锅内冷空气排尽?灭菌完毕后,为什么待压力降低“0”时才能打开排气阀,开盖取物。
答:１)在使用高压蒸汽灭菌时,灭菌锅内冷空气的排除就是否完全极为重要,因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压,所以,当水蒸气中含有空气时,在同一压力下,含空气蒸汽的温度低于饱与蒸汽的温度。
2)压力未降至“0”便开盖取物的可能后果:压力锅内压力骤然降低,引起容器中的溶液喷出容器口导致污染或导致人员的烫伤。
实验:化学因素对微生物的影响
1、利用滤纸片法测定化学消毒剂对微生物生长的影响时,影响抑菌圈大小的因素有哪些? 答:微生物的种类;
化学消毒剂的含量;
培养的条件;
滤纸片的大小、厚度;
接种量的大小等。
实验:霉菌的形态观察
1、您主要根据哪些形态特征来区分四种霉菌?
答:1)菌丝特征:青菌与曲霉菌丝与膈;毛霉与根霉则无;
2)菌丝的特化结构:曲霉有足细胞,其它霉菌无;根霉有假根与匍匐枝,其它霉菌无;
３)孢子头特征:青霉的孢子头为扫帚状;根霉与毛霉的孢子头为囊状;曲霉为菊花状孢子头。
实验:四大类微生物菌落形态观察
1、请您从六个方面描述四大类微生物菌落形态的特征。
２、答:总体可从各类微生物菌落的形状、大小、色泽、透明度、致密度、边缘着手描述它们的特征。
实验:细菌特殊结构的染色
1、若涂片中观察到的只就是大量游离芽孢,很少瞧到芽孢囊及营养细胞,您认为这就是什么原因?
答:1)营养缺乏,培养条件不适宜,芽孢杆菌群体形成抗逆体
2)培养时间太长,营养体已大部分形成芽孢且芽孢囊破裂游离出来。
2．组成荚膜的成分就是什么?涂片一般用什么固定方法,为什么?
答:荚膜为粘液状或胶状物质,其成分为多糖、糖蛋白或多肽;因为含水量高,遇热易失水变形,故而固定时采用自然晾干的方法固定。
实验:酸奶
1、如果您利用生牛乳通过细菌自然发酵制造能饮用的酸牛乳,应控制在哪一时期？
答:从牛乳酸败过程中细菌的生态演变过程来瞧,生牛乳的状态经历了几个阶段的变化:
1、牛乳PＨ中性,含丰富的乳糖——＞乳酸ＰH下降;
2、引起蛋白质结块———>抑制了乳链球菌的繁殖
3、乳杆菌能耐受低ＰＨ,发酵乳糖————>ＰＨ更低
4、酵母菌在这低PＨ环境下利用乳酸生长———＞乳糖、乳酸消失,PH上升;
5、假单胞菌、芽胞杆菌能产生蛋白酶,分解凝结的牛乳蛋白,当蛋白质被利用完毕,牛乳的分解也就完成了。
在第三阶段,也就是生牛乳中乳糖被天然微生物充分发酵生成易被人体消化吸收的乳酸的时期,故而应控制在第三阶段。
实验:实验室环境与人体表面的微生物检查
1、比较洗手前后菌落数的变化,谈谈您的体会。
洗手后仍有少量细菌生长,您认为就是什么原因?
答:一般洗手后菌落数变少。
这说明洗手就是防止病菌的一项必要措施。
洗手后仍有少量细菌有可能就是:１)、洗手并不能彻底清除手中粘附的微生物;2)、洗手的用水本身带有微生物;3)、洗手后空气中微生物掉落在手上。
2、说说:a、接种完毕后,接种环的处理方法及其原因;ｂ、实验结束后玻片的处理方法其及原因。
答:a.接种完毕后,接种环应及时灼烧灭菌避免粘附在其上的残余微生物污染四周;
ｂ、实验结束后,包手玻片在内的带菌工具在洗涤前应进行消毒剂,可用3%的来苏尔液或5％的石碳酸溶液浸泡半小时后再行清洗,或高温消毒后再行清洗。
