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组织学制片技术9PPT幻灯片

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组织制片技术2011

组织制片技术2011

第二章
石蜡切片HE染色技术
石蜡切片法包括： 取材和固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包 埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封 片等步骤。 一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本 需要数日，但标本可以长期保存使用，为永久性 显微玻片标本。
一、 取材

取材关键 材料新鲜 保持原有形态：勿使组织块受挤压 组织块力求小而薄 选好组织块的切面 取材部位准确规范 保持材料的清洁 取材时要有详细记录
简便的酒精稀释法：
无论任何浓度的酒精稀释时， 需稀释到多大浓度就取多少毫升酒精，然后用 蒸馏水加至该酒精原有浓度即可。 例：将95%酒精稀释为70%浓度时，则将 95%酒精70毫升倒入量筒中，然后加入蒸馏 水至总量95毫升即可。
5、透明
目的：大多数脱水剂不能和石蜡相混合，透明剂既可以 与脱水剂相混合又能和石蜡相混合，起到桥梁的作 用。当组织中全部为透明剂占有时，光线可以透过， 组织呈现不同程度的透明状态，此种现象称为透明。 在制片过程中，有两次透明。第一次是脱水后、透蜡前 组织块的透明，目的是便于透蜡包埋。 第二次透明是染色后切片的透明，目的是利于光线的透 过便于显微镜的观察。
方法： 将组织块经过二甲苯透明后，投入到已溶化 的石蜡中。在透蜡时必须经过数次纯石蜡（石蜡1、 2、3），使石蜡中存有的剩余透明剂完全去尽， 以免影响切片质量。 时间： 透蜡时间应根据不同组织类型及其大小而定， 基本上与组织固定时间成正比。最好先入1/2石蜡 （含1/2二甲苯），然后入石蜡I、II，总时间不 超过1小时。
4、脱水
目的和原则 组织经固定和洗涤后含有多量水分，因为水分不能和石 蜡或火棉胶等支持剂混合，组织内有极少量的水分存在， 就会妨碍支持剂的渗入，所以必须把组织中的水分彻底 去除。 就是用某些溶剂逐步将组织块吸收的水分臵换出来，以利于 透明剂和石蜡等的渗入，这一过程就叫做脱水，使用的 药品为脱水剂。 脱水的作用：有利于组织的透明和透蜡。有利于组织的永久 保存，水的存在能使组织分解。 这是制片中相当重要的一个步骤，如果这一步骤没有掌握 好，脱水不彻底，就会影响到组织的透明和透蜡。如不 能及时进行各级脱水，材料可以放在70％酒精中保存。

组织学制片技术

组织学制片技术

合固定中液都用它 6重铬酸钾 水溶液呈弱酸性;它为强氧化剂; 不能与酒精等还原剂混合;但与甲醛混合也 不能保存过久一般在12—24小时失去作用; 重铬酸钾固定组织穿透速度快 但必须流水 冲洗
混合固定液 上述某一种单纯固定液不能 将组织内的各种成份保存下来;各种药物均 有选择性;渗透能力也不同;收缩或膨胀也不 相同;因此多配成混合固定液
十组织贴片 贴片方法有三种 1直接贴片法 2伸展器贴片法 3温水漂浮贴片法 十一烤片 十二组织染色 染色的步骤 1组织脱蜡二甲苯11015分钟 2组织脱蜡二甲苯235分钟 3组织进入100%酒精 23分钟
4组织进入95%酒精 23分钟
5组织进入70%酒精 23分钟
如固含有汞的固定液固定的组织必须进入
组织浸蜡的过程和时间 组织浸蜡的全过程必须在60℃的恒温箱中 进行;在恒温箱内放入24个蜡杯;分别放入软 蜡和硬蜡使之熔化;将已透明的组织放入软 蜡浸20分钟;然后移硬蜡浸40分钟;组织体 积的大小与浸蜡的时间有关;请参看组织学 与组织化学一书的34页表格 七组织包埋 组织浸蜡完毕后;要进行石蜡包埋; 石蜡包埋操作过程
1组织进入硬蜡后;开始作包埋准备 2将金属包埋框装好在保温台上 3将熔点为6062℃石蜡置电炉上熔化;温度 控制在65℃左右; 4点燃酒精灯;准备好无齿镊;需作标记的写 好标签; 5包埋开始;将熔化的包埋石蜡温度在65℃ 左右倒入金属包埋框内;倒满为即可; 6用无齿镊从60℃恒温内把浸好硬蜡的
组织取出迅速放入包埋框内;待冷却凝固 石蜡包埋注意事项 1组织从硬蜡中取出放入包埋框内要快;不能 在空间停留过久;否则组织表面上的蜡会被 凝固 2组织包埋时;要确定组织切面和方向 八组织修块 将已凝固的蜡条从包埋框取出;修成蜡块;在 修块时刀子不能挨着组织切下去;蜡块四周 要留0 2cm的蜡边 蜡块修好后放入冰箱中保 存备用

组织学基本技术ppt(共69张PPT)

组织学基本技术ppt(共69张PPT)

显微镜技术
根据光源不同，显微镜分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以
可见光为光源，后者则以电子束为光源。
—、光学显微镜
（一）普通光学显微镜 （三）激光共聚焦扫描显微境
（五）相差显微镜
（七）微分干涉差显微镜
（二）荧光显微镜 （四）暗视野显微镜
（六）偏光显微镜
（八）倒置显微镜
尼康E-600光学显微镜
消 化 分 离 ： 将 组 织 分 离 成 小 块 ， 然 后 利 用 相 应 的 化 学 组涂织片制 ：片将技所术采➢是的随血着液生或命骨科髓学样的品发涂展抹而于不载断玻进片步上的经。瑞氏或姬姆萨染色后的标本。
抗体已失活、浓度过低；
磨片: 用于很药坚硬品的组水织，如溶骨和液牙。将其细胞间质消化溶去，再用机械分离的方
（二）固定
目的：使组织内的蛋白质迅速凝固或
沉淀，防止细胞自溶或组织腐败，尽 量保持组织的原有结构和化学组成。
固定液的种类
单纯固定液 ➢ 4%中性甲醛：用PH7.2-7.4的PBS配制，配制后 密封、 4℃保存，保存时间不超过一个月。适用 HE染色和免疫组化。 ➢ 4%多聚甲醛：用PH7.2-7.4的PBS配制。 ➢ 乙醇混合固定液
尼康E-600光学显微镜
普通光学显微镜由二 部分构成： ①光学部分：包括聚 光镜、物镜和目镜； ②机械部分：包括镜 臂、载物台等。
尼康E800荧光显微镜
荧光显微镜由光源、滤片系 统和显微镜三部分构成。光 源为高压汞灯，用以产生波 长短、能量高的紫外光。 原理：紫外光激发标本中的 荧光物质，使之产生各种不 同颜色的荧光，通过观察荧 光的分布与强弱来测定被检 物质。 研究内容：观察组织、细胞 中有自发荧光或经荧光染料 染色或标记的结构。

最新 组织学制片技术(本科)

最新 组织学制片技术(本科)

5．分离标本：将极小组织块用化学药物的水 溶液浸泡后，溶去其细胞间质，采用机械分 离方法（如振荡、针拨等方式）使之分离成 单个而又完整的细胞，经染色后涂于载玻片 上进行镜检。
6．压片标本：组织经化学药物软化及染色 后，用盖片压封于载玻片上进行镜检的标 本。如运动终板的制作。
7．整装标本：一种是将很小的动物或早期胚 胎经固定、染色后，封固于载玻片上。另 一种是将小动物、胚胎或病变器官经固定 后，保存于固定液中瓶装供肉眼观察用。 可了解胚体的表面立体形态特征及病变部 位与周围组织的毗邻关系。
8．活体标本：如将蛙的口腔粘膜取下放于 载 玻 片 上 ， 迅 速 滴 加 生 理 盐 水 或 Ringer 氏液以观察其纤毛运动。其它如精子运 动亦可按此方法进行观察。
9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定 。2021/ 7/272021/7/27Tuesday, July 27, 2021
16、业余生活要有意义，不要越轨。2021/7/ 272021/7/27July 27, 2021
17、一个人即使已登上顶峰，也仍要 自强不 息。2021/7/272021/7/ 272021/7/272021/7/27
9．血管注射标本： 一种是将树脂类铸形剂经 血管灌注后，用强酸或强碱腐蚀血管周围组织 而制成的血管铸形标本，可瓶装供肉眼观察或 进一步处理后作扫描电镜观察。另一种是将染 料加明胶配制成染色液注入血管内，然后取材、 固定、包埋、切片和封固所制成的组织切片标 本。这类标本主要用于了解血管的走行及其与 所支配组织或器官的相互关系。
（6）调节切片厚度调节器（一般为4~6μm）， 进行切片，切出的蜡片应连续成蜡带。蜡带应完 整无缺，厚度适宜、均匀，无刀痕、颤痕、皱折、 开裂、缺损、松解等。

《组织切片制作》PPT课件

《组织切片制作》PPT课件

编辑课件ppt
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（三）切片制作 1．将洁净的载薄片涂薄层蛋白甘油放人烤片盒内待用。 2．将切割修整好的蜡块用普通刀片先将蜡块的组织切面暴露 出来修平，固定在切片机上的标本台上并拧紧螺旋。 3．蜡块先固定在标本台上切片刀固定于刀台上，拧紧固定刀 的螺丝同时调整刀与蜡块的切片距离使刀与蜡块贴紧后再固定 刀台螺丝，刀的角度为25度角。 4．调节微动装置，调至切片所需厚度（一般为 5μm～7μm）。 5．修材。右手握旋转轮摇把按顺时针方向均匀地摇动直到组 织块切面完整暴露为止。
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2．单纯固定液 乙醇（酒精）、甲醛（福尔马林）、重铬酸钾、苦味酸、锇酸、丙酮、 冰醋酸
（1）乙醇（酒精）（alcohol） 优点： ①价格低，易购买，易溶于水，使用方便，95％浓度，无水乙醇100％； ②市售有两种：100%；95%； ③能硬化组织起固定作用； ④也是一种最常用的脱水剂。
固定液配制：甲醛1份与9份自来水混合即为10％（4%）浓度 的甲醛固定液。
编辑课件ppt
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优点：①渗透力较强；②组织收缩小；③细胞核染色较好。 缺点： ①质量较差的formalin在低温下久存容易产生一种白色的沉 淀物称“三聚甲醛”（付醛），经氧化成为甲酸而使溶液呈 酸性，影响细胞核染色。可在备用甲醛溶液中放入适量的碳 酸钙或碳酸镁，简便的办法可在溶液中投入适量的大理石或 者白色粉笔作为中和剂。 ②酸性福尔马林固定的组织多易产生一种褐色或黑色细颗粒 状物，称为福尔马林色素，在切片上形成黑色小颗粒，不溶 于水和酒精，影响染色效果和切片的观察。
2．染色需要的试剂及染色液的配制：
① 0.5％～1％盐酸—酒精：用于细胞核染色分色。
配制：100ml的70％～80％酒精中加人0.5ml或者1ml的浓 盐酸。

组织切片技术..

组织切片技术..
（10％福尔马林） 。 甲醛渗透力强，固定均匀。但脱水后有较大收缩，在 某些方法中要求中性甲醛，可在原装瓶内放入碳酸镁，pH 为7.6，能长期保持中性。甲醛固定后，通常需在流水中冲 洗24-48小时,否则影响染色效果。
(2) 4％多聚甲醛固定液
最好是动物经灌注固定取材后，继续固定2-24h。该固定剂较 为温和，适用于组织标本的长期保存。
变硬，变脆，因此透明时间应根据组织块大小及质地酌情
而定
注意事项：
1.使用透明剂时，要随时盖紧盖子，以免空气中的水分 进入。 2.更换每级透明剂，动作要迅速，一方面为了不使材料 块干涸，另一方面能避免吸收湿气。 3.在透明过程中，如果材料周围出现白色雾状，说明材
料中的水未被脱净，应退回纯酒精中重新脱水，然后
除与材料的新鲜程度有关外，还取决于最初的固定是否
适当和完全。
固定的目的和作用在于：
① 防止组织自溶和腐败；
② 使细胞内的蛋白质、糖、脂肪等各种成分沉淀保存下来从而
保存细胞的各种组成成分使其保持与生活时相近似的形态和 结构； ③ 因沉淀及凝固的关系，使细胞内不同的成分产生不同的折光 率，造成光学上的差别使原来在生活情况下看不清楚的结构 变得清晰易见，且有的固定剂还有助染作用(如醋酸、苦味 酸)，从而使细胞各部易于染色； ④ 固定剂还兼有硬化作用，使柔软组织硬化而不易变形，有利 于操作。
动物的选择
动物的选择是组织切片取材的第一步,在组织学
中以人的组织为理想，但人的组织不易得到，根据研
究的需要，大都以动物的组织来代替。有些动物的组 织器官比人的组织更为典型，如：猪的肝脏；豚鼠胰 腺、内耳；猫的肋间肌显示运动终板；兔的皮下组织 和肠系膜作活体染色较为理想等。
动物的处死

组织学与胚胎学切片图课件PPT


畸形胚胎切片图
先天性缺陷
介绍常见的先天性缺陷疾病，如 唐氏综合征、先天性心脏病等，
并展示相关切片图。
遗传性疾病
展示遗传性疾病的病理切片图， 如囊性纤维化、镰状细胞贫血等。
胚胎致死性畸形
介绍一些严重的畸形导致胚胎无 法存活的情况，如无脑儿、严重
心脏畸形等。
04
切片图在医学研究中的应用
病理学研究
病理学是研究疾病发生、发展和转归规律的学科，切片图是 病理学研究中常用的工具之一。通过观察切片图，可以了解 病变组织的形态学特征，为疾病的诊断和治疗提供依据。
肝脏组织结构切片图
展示肝脏的肝小叶、肝窦等结构，用于学习肝脏的形态和功能形态和功能。
肺组织结构切片图
展示肺泡、支气管等结构，用于学习肺的形态和功能。
细胞组织结构切片图
01
02
03
细胞膜结构切片图
展示细胞膜的磷脂双分子 层、膜蛋白等结构，用于 学习细胞膜的结构和功能。
切片图的重要性
切片图对于研究生物组织和器官的结构、功能以及发育过程 具有重要意义。通过切片图，可以观察到细胞、组织、器官 的细微结构，为理解生命活动的本质提供基础资料。
切片图的制作过程
取材
选取需要观察的生物组 织或器官，进行固定。
切片制备
将固定后的组织或器官 进行石蜡包埋、切片和
贴片。
染色
对切片进行染色，以便 更好地观察其结构。
观察与成像
通过显微镜观察染色后 的切片，并使用成像设
备记录图像。
切片图的观察与解读
观察要点
注意观察细胞、组织、器官的结 构特点，包括细胞核、细胞质、 细胞器的形态和分布。
解读技巧
结合理论知识，对切片图进行深 入分析，理解其结构与功能的关 系，以及发育过程中的变化。

病理制片和染色技术PPT课件

第47页/共186页
2、AAF液 配制 : 纯酒精85ml+醋酸 5ml+甲醛10ml
第48页/共186页
第27页/共186页
5）尽可能避免使组织膨胀或收缩。 6）能使细胞内的成分（蛋白质）凝固或 沉淀下来。 7）增加细胞内含物的折光程度，易于鉴 别。增加媒染作用和染色能力。 8）使组织变硬，适于制片，但又不使材 料太坚硬而松脆。 9）使组织充分固定，便于保存。
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第二节
介绍几种常见固定液
第2页/共186页
第一章 病理技术的应用范围
第3页/共186页
➢帮 助 临 床 查 明 死 因 （ 原 因 不 明 的 死 亡 ） ➢手 术 后 病 变 标 本 ， 以 明 确 诊 断 （ 临 床 活检） ➢提供教学、科研的资料
第4页/共186页
第一节 组织制片的概述
第5页/共186页
组织制片技术的应用，从1665 年由HOOk发现细胞开始，已有300 多年的历史。最早应用冰冻切片；随 后又进一步利用石蜡的硬度，以石蜡 包埋组织，制成石腊切片；后来又利 用明胶、火棉胶、碳蜡和塑料等物质 的韧性，以其包埋组织而制作切片。
第40页/共186页
6、丙酮
丙酮又名醋酮或本酮，极易挥发、 易燃的无色液体，能与水、醇、氯仿、 醚及多种溶液混合。
第41页/共186页
特性：
1）它可以作固定剂，又可作脱水剂，穿 透速度快，可使蛋白质沉淀凝固，2毫米 以下的组织固定半小时至1小时即可。 2）可引起组织较强的收缩使之变硬，对 核固定不佳。 3）对某些酶的固定很好，如碱性磷酸酶、 酸性磷酸酶等。 4）丙酮一般多与氯化汞、甲醛混合液使 用，先用低浓度丙酮再经高浓度丙酮固定 以减少组织收缩和过度硬化。

组织学技术 PPT课件

取材→速冻→冰冻切片→染色→封固 [3].其他:涂片-血液、磨片-牙、铺片-CT等
。
组织学切片标本制作技术简介
制作光镜组织学标本最常用的方法 是石蜡包埋切片法,即用石蜡把组织块包 起来，使组织变硬，便于切薄。其主要 步骤如下：
2019/11/25
宁夏医科大学组胚（研究生课程）
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1.取材、固定
取材一般在动物死后2小时以内取。 将取下的新鲜的组织块迅速投入固定液 中进行固定。固定液的种类很多，常用 的有：福尔马林、酒精、丙酮及一些混 合固定液。固定的目的在于使组织中的 蛋白质迅速凝固，以停止其死亡前的变 化，从而保持标本的结构接近于其生前 的正常状态。
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宁夏医科大学组胚（研究生课程）
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（三）固定方法
• 1．浸入法（Immersion method）将组织在常温下浸泡在 固定液内，必要时可在低温（ 4℃ ）环境下进行(乙醚不
可入冰箱！！！大火烧毁整个北大药学院；也不得以低碳
经济为由回收酒精！！！大火烧毁整个重医大基础学院)， 固定时间可根据抗原的稳定性以及固定液性质而定，一般在 2-12h之间。
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宁夏医科大学组胚（研究生课程）
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宁夏医科大学组胚（研究生课程）
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一、组织标本的取材
• 1. 来源： 组织标本主要取之于活组织检查标 本、手术切除标本、动物模型标本以及尸体解 剖标本等。前三者均为新鲜组织，后者是机体 死亡2h以上的组织，可能有不同程度的自溶， 其抗原可能有变性消失，严重弥散现象，因此， 尸检组织应尽快固定处理，以免影响免疫组化 标记效果。但有些较稳定性抗原，如HBsAg、 HBcAg等在尸检标本中，抗原显示仍较好。

最新第二章 常规制片技术1幻灯片课件


第一季度目标完成率排名 (一)
省份
宁夏 黑龙江
新疆 吉林 湖南 河北 江苏 深圳 山东 安徽 甘肃 浙江 河南 辽宁 陕西
目标
3520 20000 7000 11760 7350 12100 12350 8200 9510 5900 2850 6980 11600 21050 10850
完成
4460 24410 7400 11710 7300 11560 11460 7535 8480 5050 2400 5790 9600 17055 8350
一季度各区各机型销量
10000 8000 6000 4000 2000
0 华东 华北 东北 华南 西北 西南
880 9G 9T 390
9G
第一季度9G各区提货比例
西北 12% 华南 14%
西南 5%
东北 31%
华东 11%
华北 27%
华东 华北 东北 华南 西北 西南
9G全国各区本仓库存比例
西8北% 西10南%
完成率
126.70% 122.05% 105.71% 99.57% 99.32% 95.54% 92.79% 91.89% 89.17% 85.59% 84.21% 82.95% 82.76% 81.02% 76.96%
名次
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
第一季度目标完成率排名 (二)
• 脱水时应注意： (1)每向后转移前，须先将组织块上的液体用吸水 纸吸干，以免影响后续乙醇的浓度;
（2）在高浓度或无水乙醇中，每级停留的时间不宜 太长，否则可使组织收缩变脆，影响切片；
（3）如需过夜，应停留在70%乙醇中，也可长期保 存，可防止因时间倒不开而影响后续步骤。
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(4)后固定：柔软组织在新鲜时不易切成小块， 往往采用重新固定法处理。
（5）特殊固定：神经组织以在活体动物灌流 固定后再重新投入固定液为佳，有些组织如肺 则采用由气管注射固定液后再投入固定液为好。
3．固定剂
用以固定组织的药剂，称为固定液。
常用的固定液有： （1）10%福尔马林液：商品甲醛（36%—40%甲 醛水溶液）配成固定液其浓度为3.6%—4%，也就 是习惯上称为10%的福尔马林液。 （2）10%中性缓冲福尔马林液：商品甲醛10ml， 0. 1mol/L pH7.4 PBS 90ml。
1
2
组3
织4
块5
处6
理7
时 间 表
8 9 10
11
12137Fra bibliotek%乙醇80%乙醇 90%乙醇 95%乙醇Ⅰ 95%乙醇Ⅱ 100%乙醇Ⅰ 100%乙醇Ⅱ 二甲苯Ⅰ 二甲苯Ⅱ 石蜡Ⅰ 石蜡Ⅱ 石蜡Ⅲ 石蜡Ⅳ
常温 常温 常温 常温 常温 常温 常温 常温 常温 48~50℃ 48~50℃ 58~60℃ 58~60℃
1．固定的目的
使细胞内蛋白质凝固，终止或抑制外源性和内源性 酶活性，防止组织自溶；使组织成份转变为不溶性 物质从而有利于保存。这就是固定的基本意义。
2．固定的注意事项
(1)组织块不宜太大，一般以厚度为2毫米，长度不超 过0.5厘米*0.5厘米。 (2)固定液的量一般以组织块大小的30倍为宜，最好 在固定组织的瓶底垫上脱脂棉或几层纱布以使固定液 能从上下左右前后各方都能渗入组织块。 (3)固定的时间，一般以24小时为宜。
8．活体标本：在组织细胞生活状态下进行观察 的标本，或生活状态下进行活体染色后制成 的标本。
9．血管注射标本： 一种是将树脂类铸形剂经血管灌 注后，用强酸或强碱腐蚀血管周围组织而制成的血管 铸形标本，可瓶装供肉眼观察或进一步处理后作扫描 电镜观察。另一种是将染料加明胶配制成染色液注入 血管内，然后取材、固定、包埋、切片和封固所制成 的组织切片标本。这类标本主要用于了解血管的走行 及其与所支配组织或器官的相互关系。
石蜡包埋法：
商品石蜡 的处理： 反复溶化以增加石蜡的硬度
和密度。
浸蜡 ： 温度不能超过该石蜡的溶点
的2℃以上；1~2h 。
包埋：通常使用包 埋盒。
包埋通常使用组织包埋机、包埋盒及配套使用的 不锈钢模具。把熔蜡倒入模具内，再用加热的弯曲钝 头镊子夹取已经过浸蜡的组织块，使切面朝下平正地 置放于模具底面的中央处，然后放上包埋盒，继续加 满蜡，待包埋盒表面的 熔蜡凝固后，将其移入 加冰块的冷水中加速凝 固，包埋即告完成。
12～24h 12～24h 2～3h 1～2h 1～2h 1h 1h 20~30min 20~30min 0.5h 0.5h 0.5h 0.5h
（六）组织切片技术
1、切片机简介：
石蜡切片机可分三 个部分，一是安装切片 刀的部分，有调节刀片 斜度和固着刀片的螺旋。 一是安装材料的部分， 也有螺旋可以调节材料 的位置。另一是操纵在 旋转中向前推进的部分， 控制着切片的厚薄，是 比较重要而复杂的部分。
5．固定后处理
材料固定后，药剂继续留在组织中，易使组 织破坏，必须用水或酒精洗去。
三种方式进行处理：
（1）流水冲洗（铬酸或铬酸盐固定的组织）；
（2）酒精充分洗涤（Bouin’s液含苦味酸）；
（3）直接入脱水剂。
（四）脱水与透明
1、目的 ：脱水与透明的目的在于为石蜡渗透 至组织块内部以便进一步包埋做必要的准备。 脱水必须从低浓度开始，逐渐转入高浓度脱水 剂。另外脱水必须进行得很彻底。
5．分离标本：将极小组织块用化学药物的水溶液浸 泡后，溶去其细胞间质，采用机械分离方法（如振 荡、针拨等方式）使之分离成单个而又完整的细胞， 经染色后涂于载玻片上进行镜检。
6．压片标本：组织经化学药物软化及染色后， 用盖片压封于载玻片上进行镜检的标本。如运动 终板的制作。
7．整装标本：一种是将很小的动物或早期胚胎经 固定、染色后，封固于载玻片上。另一种是将小 动物、胚胎或病变器官经固定后，保存于固定液 中瓶装供肉眼观察用。可了解胚体的表面立体形 态特征及病变部位与周围组织的毗邻关系。
目的要求
1、了解组织学制片的基本程序； 2、熟悉HE染色的步骤； 3、掌握HE染色结果的观察。
一、组织学常用的几种标本类型
1．切片标本：组织经固定、切片（包括冰冻 切片、石蜡切片及火棉胶切片）染色、封固 而制成的各种玻片标本。它为组织学中最常 用的标本。
2．铺片标本：将肠系膜或皮下组织铺于载 玻片上，经固定、染色、封固而制成的标 本。
（3）4%多聚甲醛磷酸缓冲液（pH7.4）
（4）Bouin’s液：苦味酸饱和水溶液75份， 甲醛25份，冰醋酸5份配制而成。
4．固定方法
（1）灌注法（Irrigation method）自左 心室插入主动脉，先以生理盐水冲冼血液后， 注入固定液，30min后取材，置同一固定剂 后固定。
（2）浸入法（Immersion method） 。
1、动物致死法： （1）颈椎脱臼法 （2）断头法 （4）空气栓塞法：
2、组织取材时应注意： (1)所取材料越新鲜越好； (2) 切 取 组 织 的 刀 剪 刃 口 必 须锋利； (3)取材时必须考虑切面的 方向； (4)组织块应力求小而薄； (5)收缩较大的新鲜组织； (6)注意清洁；
（3）麻醉法
（三）标本的固定
2、常用脱水剂：
（1）酒精： （2）丙酮：
3、常用的透明剂有二甲苯、甲苯、氯仿等。 二甲苯：透明组织的能力强，但易使组织收缩和
变脆，故在二甲苯中不宜搁置太久。 氯仿：其透明能力远比二甲苯慢，透明时间可以
延长至24小时也无妨。
（五）包埋
1． 目的：由于生物体的组织有各种硬度不同的成份， 必须加石蜡等作支持物质渗入组织块内部，并将组织 块包埋起来，然后用切片机以制作极薄的切片。 2． 种类：包埋物质目前广泛采用的除石蜡外，还有 火棉胶、炭蜡、明胶以及环氧树脂、OTC(冰冻切片包 埋剂）等。
二、组织切片的常规制作
（一） 概述
组织切片的制作方法有：石蜡切片法、冰冻切片 法、火棉胶切片法、超薄切片（电镜标本）、树脂切 片、碳蜡切片等。石蜡切片法是最常用的方法，本节 将较详细讲授其制作步骤。
组织切片制作方法的基本程序为： 取材→固定→脱水→透明→包埋→切片 →染色→封固。
（二）动物的致死与取材