急性眼刺激试验

2.3.13.1 第一阶段试验结果的判定（1）在急性经口毒性试验中，LD50＞5000mg/kg体重，可通过；对于稀释使用的消毒剂，当LD50≤5000mg/kg体重时，则需增做消毒剂最高应用浓度5倍的急性经口毒性试验。

增做的试验结果，如果LD50＞5000mg/kg体重，可通过；否则，应增做消毒剂原形样品的亚慢性毒性试验。

（2）在急性吸入毒性试验中，LC50＞10000mg/m3者，属于实际无毒，可通过；否则，应放弃使用。

（3）在皮肤刺激试验中，如结果为无刺激或仅具轻度刺激作用，可通过；否则，应放弃使用。

（4）在急性眼刺激试验中，如结果对眼无刺激性或具有轻刺激性，可通过；否则，应放弃使用。

（5）在阴道黏膜刺激试验中，如结果对阴道黏膜无刺激性或极轻度刺激性，可通过；否则，应放弃使用。

（6）在皮肤变态反应试验中，如消毒剂对皮肤仅具有极轻度的致敏作用，可通过；否则，应放弃使用。

2.3.13.2第二阶段试验结果的判定（1）在亚急性毒性试验中，如各剂量组均未观察到毒作用，可通过；否则，根据试验的最小观察到有害作用剂量或最大未观察到有害作用剂量（以mg/kg计），再参考消毒剂的毒理作用特点和使用条件，由专家评定。

对第一类消毒剂所进行的分别反映基因水平、体细胞染色体水平和性细胞染色体水平的3种类型致突变试验中，如有2种或3种类型试验结果为阳性，该消毒剂应放弃，不必继续进行试验。

如果仅一种类型试验为阳性，应再增做另一项同类型致突变试验。

若其结果仍为阳性，该消毒剂亦应放弃使用。

对第二类消毒剂所进行的分别反映基因水平和染色体水平类型的两项致突变试验中，如均为阳性，该消毒剂应放弃使用，不必继续进行试验。

若仅一种类型试验为阳性，应再增做另一项同类型致突变试验，如结果为阴性，可通过；否则需进入第三阶段或第四阶段试验。

对第三类消毒剂所进行的反映基因水平或体细胞染色体水平类型一项致突变试验中，如结果为阴性，可通过；如结果呈阳性，应再增补另一种类型的一项致突变试验，若仍为阳性，该消毒剂应放弃使用。

化妆品备案申报应做的毒理学检验项目经常会有化妆品备案企业询问产品备案时都需要做些什么项目,但解释半天却又一头雾水。

因此，北京天健华成国际投资顾问有限公司化妆品注册部的同学工作之余就写一些文字，以期解惑。

不许抄袭哦！一、化妆品涉及的常见毒理学检验项目（1）急性经口和急性经皮毒性试验（2）皮肤和眼刺激性试验（3）皮肤变态反应试验（4）皮肤光毒性试验（必要时）（5）Ames鼠伤寒沙门氏菌／回复突变试验（6）体外哺乳动物细胞染色体畸变试验二、不同类别化妆品成品的毒理学检验项目不同类别化妆品的检验项目一样吗？当然不一样，化妆品的类别是决定检验项目的关键。

我国将化妆品分为两大类，即：特殊用途化妆品和非特殊用途化妆品。

特殊用途化妆品按功能分为9类，即：育发、美乳、健美、防晒、祛斑、染发、烫发、脱毛、除臭。

非特殊用途化妆品（俗称普通化妆品）可分为：发用品、护肤品、彩妆品、指（趾）甲用品、芳香品。

下面就来分别看看它们对应的检验项目。

1、非特殊用途化妆品应进行的毒理学检验项目（1）发用品（2）护肤品（3）彩妆品（4）芳香品、指（趾）甲用品注： 1.免洗护发类不做急性眼刺激性试验。

2.不需进行试验。

3.进行急性皮肤刺激性试验，不需进行多次皮肤刺激性试验。

4.不需进行眼刺激试验。

5.对于紫外线吸收剂加入量≥0.5%的产品,还应进行皮肤光度试验和皮肤变态反应试。

表中未涉及的产品，在选择试验项目时应根据实际情况确定，可按具体产品用途和类别增加或减少检验项目。

多色号系列非特化妆品多色号系列化妆品是指：产品配方除色素(色调调整部分)种类或含量不同外，其余配方成分种类相同，且系列名称相同的普通化妆品。

该系列产品应作为一组产品同时申报。

抽样检验原则：抽样比例30%，不足10个，以10个计。

首选含有机色素和色素含量高的产品，如果含量相同，则选择色素种类最多的产品。

2、特殊用途化妆品应进行的毒理学检验项目注：3. 除育发类、防晒类和祛斑类产品外，紫外线吸收剂加入量≥0.5%的其他产品,还应进行皮肤光毒性试验。

五、急性眼刺激性/腐蚀性试验Acute Eye Irritation/Corrosion Test1 范围本规范规定了动物急性眼刺激性或腐蚀性试验的基本原则、要求和方法。

本规范适用于化妆品原料及其产品安全性毒理学检测。

2 规范性引用文件OECD Guidelines for Testing of Chemicals (No 405, Feb. 1987)USEPA OPPTS Harmonized Test Guidelines (Series 870.2400 , Aug. 1998 )3 试验目的确定和评价化妆品原料及其产品对哺乳动物的眼睛是否有刺激作用或腐蚀作用及其程度。

4 定义4.1 眼睛刺激性(Eye irritation)：眼球表面接触受试物后所产生的可逆性炎性变化。

4.2 眼睛腐蚀性(Eye corrosion)：眼球表面接触受试物后引起的不可逆性组织损伤。

5 试验的基本原则受试物以一次剂量滴入每只实验动物的一侧眼睛结膜囊内，以未作处理的另一侧眼睛作为自身对照。

在规定的时间间隔内，观察对动物眼睛的刺激和腐蚀作用程度并评分，以此评价受试物对眼睛的刺激作用。

观察期限应能足以评价刺激效应的可逆性或不可逆性。

6试验方法6.1 受试物液体受试物一般不需稀释, 可直接使用原液，染毒量为0.1mL。

若受试物为固体或颗粒状，应将其研磨成细粉状，并用水充分湿润, 染毒量应为体积0.1mL或重量不大于100mg（染毒量应进行记录）。

受试物为强酸或强碱（pH值≤2或≥11.5），或已证实对皮肤有腐蚀性或强刺激性时，可以不再进行眼刺激性试验。

气溶胶产品需喷至容器中，收集其液体再使用。

6.2 实验动物和饲养环境首选健康成年白色家兔。

至少使用3只家兔。

试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d时间。

在试验开始前的24h内要对试验动物的两只眼睛进行检查（包括使用荧光素钠检查）。

有眼睛刺激症状、角膜缺陷和结膜损伤的动物不能用于试验。

急性毒性试验动物急性毒性试验研究动物一次或24小时内多次给予受试物后，一定时间内所产生的毒性反应。

拟用于人体的药物通常需要进行动物急性毒性试验。

要求采用啮齿类或非啮齿类两种动物。

通常为小鼠或大鼠采用经口、吸入或经皮染毒途径。

急性毒性试验主要测定半数致死量（浓度），观察急性中毒表现，经皮肤吸收能力以及对皮肤、粘膜和眼有无局部刺激作用等，急性毒性试验处在药物毒理研究的早期阶段，对阐明药物的毒性作用和了解其毒性靶器官具有重要意义。

急性毒性试验所获得的信息对长期毒性试验剂量的设计和某些药物Ⅰ期临床试验起始剂量的选择具有重要参考价值，并能提供一些与人类药物过量急性中毒相关的信息。

急性眼睛刺激性／眼睛腐蚀性试验（巴豆油或甲醛）定义:眼睛刺激性：指眼球表面接触受试样品后产生的可逆性炎性变化。

眼睛腐蚀性：指眼球表面接触受试样品后引起的不可逆性组织损伤试验基本原则：1 受试样品以一次剂量滴入每只实验动物的一侧眼睛结膜囊内，以未作处理的另一侧眼睛作为自身对照；2 在规定的时间间隔内，观察对动物眼睛的刺激和腐蚀作用程度并评分，以此评价受试样品对眼睛的刺激作用。

观察时间应能足以评价刺激效应的可逆性和不可逆性。

观察时间最少72h，但一般不超过21d；3 当动物出现严重和持久的痛苦迹象时，以适当的方式将动物处死；4 强酸或强碱物质如pH≤2或pH≥11.5，由于其可预见的腐蚀特性，不必做本试验；5 已在皮肤试验中证实具有腐蚀或严重刺激毒性的物质不必进行眼刺激试验，可以推测该物质对眼睛将会引起相似的严重结果；6 在充分并公认的体外试验结果中确定可能产生刺激性或腐蚀性的物质不必进行体内试验。

目的：检测外来化合物对实验动物眼和粘膜得原发性刺激和腐蚀作用的急性试验，为人类眼和粘膜接触该受试物的潜在危害提供资料。

实验动物：首选成年白色家兔（如果使用其它的哺乳动物做试验，试验者应提供选择的依据【应选择与人类皮肤、粘膜反应比较相近的动物，常用的动物有家兔、豚鼠。

五、急性眼刺激性/腐蚀性试验Acute Eye Irritation/Corrosion Test1 范围本规范规定了动物急性眼刺激性或腐蚀性试验的基本原则、要求和方法。

本规范适用于化妆品原料及其产品安全性毒理学检测。

2 规范性引用文件OECD Guidelines for Testing of Chemicals（No 405，April 2002）USEPA OPPTS Harmonized Test Guidelines（Series 870.2400，Aug.1998）3 试验目的确定和评价化妆品原料及其产品对哺乳动物的眼睛是否有刺激作用或腐蚀作用及其程度。

4 定义4.1 眼睛刺激性（Eye irritation）：眼球表面接触受试物后所产生的可逆性炎性变化。

4.2 眼睛腐蚀性（Eye corrosion）：眼球表面接触受试物后引起的不可逆性组织损伤。

5 试验的基本原则受试物以一次剂量滴入每只实验动物的一侧眼睛结膜囊内，以未作处理的另一侧眼睛作为自身对照。

在规定的时间间隔内，观察对动物眼睛的刺激和腐蚀作用程度并评分，以此评价受试物对眼睛的刺激作用。

观察期限应能足以评价刺激效应的可逆性或不可逆性。

动物如果在试验的任何阶段出现严重抑郁、痛苦的表现，则应该给予人道地处死，依据试验情况对受试物进行适当评价。

动物如出现角膜穿孔、角膜溃疡、角膜4分超过48h、缺乏光反射超过72h、结膜溃疡、坏疽、腐烂等情况，通常为不可逆损伤的症状，也应该给予人道地处死。

6试验方法6.1 受试物液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液，染毒量为0.1mL。

若受试物为固体或颗粒状，应将其研磨成细粉状，染毒量应为体积0.1mL或重量不大于100mg（染毒量应进行记录）。

受试物为强酸或强碱（pH值≤2或≥11.5），或已证实对皮肤有腐蚀性或强刺激性时，可以不再进行眼刺激性试验。

气溶胶产品需喷至容器中，收集其液体再使用。

6.2 实验动物和饲养环境首选健康成年白色家兔。

一、实验背景化妆品、药物、化工产品等在使用过程中，可能会对皮肤和眼睛产生刺激作用。

为了评估这些物质的安全性，本实验对某化妆品进行了急性皮肤眼刺激试验，以观察其对皮肤和眼睛的刺激反应。

二、实验目的1. 评估某化妆品对皮肤和眼睛的急性刺激作用；2. 为该化妆品的安全性评价提供依据。

三、实验材料1. 实验动物：成年白色家兔，体重2.0-2.5kg，共8只；2. 受试化妆品：某品牌化妆品，生产批号：20231201；3. 赋形剂：无刺激性乳液；4. 实验仪器：皮肤刺激试验箱、电子天平、滴管、纱布、胶布、绷带等。

四、实验方法1. 急性皮肤刺激试验（1）实验动物分组：将8只家兔随机分为两组，每组4只，分别为实验组和对照组。

（2）皮肤准备：实验前24小时，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，去毛范围各约3cm×6cm，不可损伤表皮。

（3）涂抹受试物：实验组将0.1ml受试化妆品滴在2.5cm×2.5cm大小的四层纱布上，敷贴在一侧皮肤上；对照组将相同体积的赋形剂敷贴在另一侧皮肤上。

然后用一层油纸覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。

（4）观察与记录：试验结束后1、24和48小时，观察涂抹部位皮肤反应，按照表1和表2进行皮肤反应积分和刺激强度评价。

2. 急性眼刺激试验（1）实验动物分组：将8只家兔随机分为两组，每组4只，分别为实验组和对照组。

（2）眼刺激准备：实验前24小时，将实验动物眼部用生理盐水清洗，去除分泌物。

（3）滴加受试物：实验组将0.1ml受试化妆品滴入每只实验动物的一侧眼结膜囊内；对照组将相同体积的赋形剂滴入另一侧眼结膜囊内。

（4）观察与记录：试验结束后1、24和48小时，观察眼睛刺激反应，按照表1和表2进行刺激强度评价。

五、实验结果1. 急性皮肤刺激试验实验组：1只家兔在试验结束后1小时出现轻微红斑，24小时后红斑消退；2只家兔在试验结束后24小时出现轻微红斑和水肿，48小时后症状消失；1只家兔在试验结束后48小时出现轻微红斑和水肿，72小时后症状消失。

化学品毒性鉴定技术规范2005年6月目录一、总则 (3)二、试验方法（一）第一阶段试验 (15)1、急性吸入毒性试验 (16)2、急性经皮毒性试验 (20)3、急性经口毒性试验 (23)4、急性眼刺激性/腐蚀性试验 (26)5、皮肤刺激性/腐蚀性试验 (32)6、皮肤变态反应试验（皮肤致敏试验） (36)（二）第二阶段试验 (54)1、鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验） (55)2、体外哺乳动物细胞染色体畸变试验 (62)3、体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验 (68)4、体内哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验 (75)5、哺乳动物精原细胞/初级精母细胞染色体畸变试验，或 (79)精子畸形试验 (87)6、啮齿类动物显性致死试验 (90)7、免疫毒性评价试验方法 (95)8、亚急性吸入（14/28天）毒性试验 (104)9、亚急性经皮（21/28天）毒性试验 (110)10、亚急性经口（28天）毒性试验 (115)（三）第三阶段试验 (121)1、亚慢性吸入毒性试验 (122)2、亚慢性经皮毒性试验 (126)3、亚慢性经口毒性试验 (130)4、致畸试验 (136)5、两代繁殖毒性试验 (142)6、迟发性神经毒性试验 (147)（四）第四阶段试验 (153)1、慢性吸入毒性试验 (154)2、慢性经皮毒性试验 (160)3、慢性经口毒性试验 (166)4、致癌试验，或 (172)慢性毒性/致癌性合并试验 (180)5、毒物代谢动力学试验 (189)6、接触人群调查与观察（参考国内外有关专著或教科书）（五）参考试验 (196)1、皮肤变态反应试验-局部淋巴结法 (197)2、大肠杆菌回复突变试验 (202)3、酵母菌基因突变试验 (210)4、体外哺乳动物细胞正向基因突变试验 (214)5、果蝇伴性隐性致死试验 (220)6、枯草杆菌基因重组试验 (224)7、体外哺乳动物细胞程序外DNA合成（UDS）试验 (232)8、体内哺乳动物外周血细胞微核试验 (238)9、体外哺乳动物姊妹染色单体交换（SCE）试验 (244)10、体内哺乳动物骨髓细胞姊妹染色体交换（SCE）试验 (250)11、繁殖/生长发育毒性筛选试验 (256)12、亚急性毒性合并繁殖/发育毒性筛选试验 (262)13、一代繁殖试验 (269)14、神经毒性筛选组合试验 (274)总则General Principles1 依据根据《中华人民共和国职业病防治法》、《作业场所使用有毒物品劳动保护条例》、《危险化学品安全管理条例》、《职业卫生技术服务机构管理办法》、《化学品毒性鉴定管理规范》制定本规范。

比较几种消毒剂对实验动物的安全性摘要目的：观察不同有效成分的化学消毒剂对动物设施进行消毒时对实验动物的刺激性。

方法：依据GB/T 38496-2020《消毒剂安全性毒理学评价程序和方法》对84消毒液、过氧乙酸消毒液、新洁尔灭、2%强化戊二醛消毒液进行急性经口毒性试验、急性吸入毒性试验、皮肤刺激试验、急性眼刺激试验，评价这几种消毒剂的刺激性。

结果：采用相同检测方法对这几种消毒剂进行对比检测，刺激性：过氧乙酸消毒液＞2%戊二醛溶液＞84消毒液＞新洁尔灭。

结论：过氧乙酸消毒液、2%强化戊二醛消毒液适合在无动物情况下对动物设施进行消毒，84消毒液、新洁尔灭适合带动物消毒。

关键词化学消毒剂；实验动物设施；刺激性；随着医学和生物学的发展，动物试验涉及的科研或者检测领域也更加广泛，如新药测试，疾病模型建立、肿瘤研究、遗传学研究及检验检测等[1-2]。

屏障设施如果消毒不彻底，对微生物控制不到位，会加大SPF级实验动物感染的风险。

选用刺激性小或无刺激性的消毒剂，不仅能够严格控制动物房设施环境中的微生物数量，化学消毒剂在实验动物设施中的科学合理使用提供参考。

本文通过研究84消毒液、新洁尔灭、过氧乙酸消毒液、2%强化戊二醛消毒液四种消毒液对实验动物的毒理学试验，旨在研究日常用四种常见消毒液对屏障环境消毒时对实验动物的影响。

1材料和方法1.1仪器电子天平，上海豪晟科学仪器有限公司；静式吸入染毒柜，汉仁唐山设备制造有限公司。

1.2样品过氧乙酸消毒液，有效含量为2g/L；84消毒液，有效含量200mg/L；新洁尔灭，有效含量27g/L-33g/L；2%强化戊二醛消毒液，有效含量2.2±0.2%。

1.3实验动物SPF级KM小鼠，由斯贝福（北京）生物技术有限公司提供，动物生产许可证号SCXK （京）2019-0010。

普通级新西兰兔由璧山区腾鑫养殖场提供，动物生产许可证号SCXK（渝）2017-0010。

1.4方法1.4.1急性经口毒性试验选用SPF级KM小鼠80只，体重18g~22g。

急性眼刺激试验标准操作规程目的：确定评价化学品对哺乳类动物眼睛是否有刺激作用及其程度。

概述：受试样品以一次剂量加入每只实验动物的一侧眼睛结膜囊内，以未作处理的另一侧眼睛作为自身对照；在规定的时限内，观察对动物眼睛的刺激和腐蚀作用程度并评分，以此评价受试样品对眼睛的刺激作用。

观察时间赢能足以评价刺激效应的可逆性和不可逆性。

观察时间最少72小时，但是一般不超过21天；当动物出现严重和持久的痛苦迹象是，以适当的方式将动物处死；强酸物质或强碱物质，由于其可预见的腐蚀特性，不必做本实验；已在皮肤试验中证实具有腐蚀或严重刺激毒性的物质不必进行眼刺激试验；在充分并公认的体外试验结果中确定可能产生刺激性或腐蚀性的物质不必进行体内试验。

1；样品处理液态受试样品，一般不需要稀释，可直接使用。

不溶性或难溶固体或颗粒状物质，应其研磨成细粉状，过74微米孔径筛。

气溶胶产品需喷至容器中，收集其液体再使用。

对挥发性物质，剂量可以通过使用前后称量容器质量进行估值。

2；实验动物：成年白兔，2000克到3000克（1）可预见有严重反应的受试样品，先考虑用一只动物试验，结果有反应，则不必进行，不反应则，至少需要3只动物。

3；剂量设计；液态受试样品染毒量为0.1ML。

若受试样品为固态难溶颗粒状，染毒量应为100MG。

4；试验步骤（1）试验前眼睛的检查试验前动物药在动物实验室环境中至少适应3天。

试验前24小时，要对实验动物的两只眼睛进行常规检查。

有眼睛刺激症状，角膜缺陷或结膜损伤的动物不能用于试验。

（2）染毒；轻轻拉开实验动物一侧眼睛的下眼睑，将受试样品0.1ml（或100mg）滴入结膜囊中，使上，下眼被动闭合一秒，以防止受试样品丢失。

未处理的另一侧眼睛作为自身对照。

（3）滴入受试样品24小时内不冲洗眼睛，如果认为必要，在24小时可进行冲洗。

（4）根据表2的评价标准，如果受试样品出现中度以上刺激性时，必需时另选3只动物进行冲洗试验，滴入受试样品闭合一秒，30秒后用生理盐水冲洗5分钟，水的流量和流速都不应导致眼损伤。