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4种动物药水提液中3种嘌呤碱HP LC 法测定李 楠 王琳琳 刘海艳 张 洁 刘 军 王英华3(吉林大学化学学院 长春130012)摘 要 以甲醇/水为流动相,反相高效液相色谱2紫外检测器测定了乌蛇、蟾蜍、土虫、地龙水提取液中黄嘌呤、次黄嘌呤、腺嘌呤的含量,对样品提取和高效液相色谱条件进行了优化。
黄嘌呤、次黄嘌呤、腺嘌呤的检出限分别为01012×10-6、01041×10-6、01042×10-6g/mL,样品分析的日内测定相对标准偏差分别小于411%、713%、415%,日间测定相对标准偏差分别小于518%、219%、311%,平均加标回收率为94%～107%。
关键词 高效液相色谱,超声提取,嘌呤,动物药中图分类号:O652 文献标识码:A 文章编号:100020518(2009)08209962032008207207收稿,2008212228修回通讯联系人:王英华,女,教授;E 2mail:wangyh@jlu .edu .cn;研究方向:食品分析、化学计量学技术应用测定嘌呤类物质含量的方法有高效液相色谱法[1～3]、紫外分光光度法[4]、纸基质磷光法[5]和毛细管电泳法等。
高效液相色谱法流动相大多用H 2P O -42HP O 2-4等缓冲盐[1,2],其易堵塞仪器管路并影响色谱柱使用寿命,测定样品多为饮料和体液,有关食品及动物药中嘌呤含量测定的报道很少,而食品、医药等研究领域急需相关数据。
本文以水为提取溶剂,对乌蛇、蟾蜍、土虫和地龙干燥粉末进行超声提取、离心分离、滤膜过滤后直接注入高效液相色谱仪中测定,紫外检测黄嘌呤、次黄嘌呤、腺嘌呤含量。
Agilent 21100型HP LC 配有紫外检测器(美国Agilent 公司);K Q 2200VOE 型超声波提取仪(昆山市超声仪器有限公司);Agilent TC 2C 18色谱柱(250mm ×416mm ,5μm ,美国Agilent 公司),色谱条件:流动相为V (甲醇)∶V (水)=5∶95,流速为110mL /m in,柱温为30℃,紫外检测波长为254n m ,进样量为20μL,标准品:次黄嘌呤(hypoxanthine )、黄嘌呤(xanthine )、腺嘌呤(adenine )(北京经科宏达生物公司)配制成浓度为015g/L 标准储备液,储存于冰箱内(4℃);甲醇(色谱纯,美国Fisher 公司)。
超高效液相色谱法同时检测茶叶中的没食子酸咖啡碱和儿茶素一、超高效液相色谱法的原理超高效液相色谱法是一种在液相色谱法基础上发展起来的新技术，其原理是利用高压将流动相送入色谱柱进行快速分离，通过控制流速和柱温来实现对分离效果和分析时间的优化。
超高效液相色谱法具有分离效率高、分析速度快、灵敏度高和分辨率好等优点，逐渐成为茶叶中活性成分分析的首选方法。
二、茶叶中的没食子酸、咖啡碱和儿茶素1. 没食子酸没食子酸是茶叶中的一种重要成分，具有抗氧化、抗炎和抗菌等多种生物活性。
没食子酸可保护人体细胞不受自由基的伤害，有助于预防癌症、心脏病和糖尿病等疾病。
对没食子酸在茶叶中的含量进行准确分析具有重要的现实意义。
2. 咖啡碱咖啡碱是茶叶中的另一种重要成分，具有提神醒脑、抗疲劳和促进新陈代谢的作用，还可以帮助减轻哮喘和支气管炎等疾病的症状。
对茶叶中咖啡碱的含量进行准确检测，有助于了解茶叶的品质和功效。
3. 儿茶素儿茶素是茶叶中的主要成分，包括儿茶素、表儿茶素和咖啡儿茶素等多种类别。
儿茶素具有抗氧化、抗癌、抗衰老和降血压等多种保健作用，对人体健康具有重要意义。
对茶叶中儿茶素的含量进行快速、准确的检测具有重要的现实价值。
1. 样品制备取一定量的茶叶样品，进行粉碎和均质处理，然后采用适当的溶剂将样品中的活性成分提取出来。
2. 超高效液相色谱条件使用C18色谱柱进行分离，选择合适的移动相和梯度洗脱程序，控制流速和柱温，以确保分离效果和分析时间的优化。
3. 检测方法采用紫外检测器对没食子酸、咖啡碱和儿茶素的浓度进行检测，根据标准曲线计算样品中的活性成分含量。
通过上述方法，可以快速、准确地同时检测茶叶中的没食子酸、咖啡碱和儿茶素的含量，为茶叶品质的评价和功效的研究提供了重要的技术支持。
四、超高效液相色谱法在茶叶中活性成分检测中的应用超高效液相色谱法已经广泛应用于茶叶中活性成分的检测中，为茶叶品质的评价、功效的研究和生产的控制提供了重要的技术手段。
茶叶中儿茶素类物质的含量测定方法比较研究茶叶中的儿茶素类物质是茶叶的主要活性成分之一，对人体健康具有多种益处。
因此，准确测定茶叶中儿茶素类物质的含量对于茶叶加工和消费者选择茶叶具有重要意义。
随着科技的发展和科研水平的提高，出现了多种测定茶叶中儿茶素类物质含量的方法。
本文将对其中的方法进行比较研究，以期为茶叶行业提供科学依据和指导。
一、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是目前广泛应用于儿茶素含量测定的方法之一。
该方法通过将茶叶中的儿茶素类物质溶解并分离后，利用具有高灵敏度的检测器进行测定。
该方法具有准确度高、灵敏度好、分离效果好等优点，能够分析茶叶中多种儿茶素的含量。
然而，该方法的仪器设备较为昂贵，操作复杂，需要较长的分析时间，对于一些小型茶叶生产企业来说可能不太适用。
二、紫外光谱法紫外光谱法也是一种常用的测定茶叶中儿茶素含量的方法。
该方法利用儿茶素类物质在紫外光下的吸收特性，通过测量茶叶浸出液的吸光度来确定儿茶素的含量。
紫外光谱法操作简便，成本相对较低，适用于一些实验室和小型茶叶企业。
然而，该方法只能估测总儿茶素的含量，对于不同种类的儿茶素类物质的分析能力较弱。
三、自动显微镜法自动显微镜法是一种近年来新兴的儿茶素含量测定方法。
该方法通过对茶叶中儿茶素类物质的细胞结构进行显微观察和图像分析，以评估茶叶中儿茶素的含量。
该方法具有非破坏性、快速、简便等优点，能够准确测定茶叶中儿茶素的分布情况。
然而，该方法需要高性能的显微镜和先进的图像处理软件等设备，成本较高，不适用于一些资源有限的茶叶企业。
四、核磁共振法核磁共振法是一种先进的儿茶素含量测定方法，通过测量茶叶中儿茶素类物质在核磁共振谱图上的峰面积或峰高来计算其含量。
该方法具有准确性高、可定量多个成分等特点，能够同时测定茶叶中多种儿茶素类物质的含量。
然而，核磁共振法设备昂贵，对于资源有限的茶叶企业来说不太经济实用。
综上所述，茶叶中儿茶素类物质的含量测定方法主要包括高效液相色谱法、紫外光谱法、自动显微镜法和核磁共振法。
茶叶农残检测方法茶叶是我国传统的饮品，拥有悠久的历史和广泛的消费者基础。
然而，茶叶上可能残留有农药、重金属等有害物质，对人体健康造成潜在威胁。
因此，茶叶农残检测方法的发展对于保障消费者的健康至关重要。
本文将介绍几种常用的茶叶农残检测方法，并对其原理和应用进行详细阐述。
一、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种常见的茶叶农残检测方法。
它基于样品中的农残物质在特定条件下与固定相发生非常相互作用，进而实现物质的分离与定量。
该方法具有灵敏度高、准确性好、操作简便等优点。
此外，高效液相色谱法还可以同时检测多种农残物质，从而提高检测效率。
然而，该方法需要昂贵的仪器设备和复杂的分析技术，因此在实际应用中受到一定的限制。
二、气相色谱法气相色谱法是一种常用的茶叶农残检测方法，其原理是利用样品中的农残物质在高温下瞬间蒸发，然后进入气相色谱柱进行分离和定量。
该方法具有灵敏度高、选择性好、分离效果好等优点。
此外，气相色谱法还可以通过耳目或荧光探测器等检测器件对农残物质进行测定。
然而，该方法对仪器设备的要求较高，而且不能同时检测多种农残物质，因此它在实际应用中的可行性需要综合考虑。
三、质谱法质谱法是一种常用的茶叶农残检测方法，其原理是通过质谱仪对样品中的农残物质进行分析和鉴定。
质谱法具有灵敏度高、准确性好、选择性强等优点。
该方法可以同时分析多个农残物质，且可以对复杂的样品矩阵进行分离和鉴定。
此外，质谱法还可以通过质子化或电离法对农残物质进行定性和定量分析。
然而，该方法需要昂贵的仪器设备、复杂的分析技术和专业的操作人员，限制了其在实际应用中的广泛性。
四、光谱法光谱法是一种常见的茶叶农残检测方法，其原理是通过样品中农残物质的吸收、发射、散射等光学特性来分析和鉴定。
光谱法具有灵敏度高、非破坏性、操作简便等优点。
该方法可以使用紫外-可见吸收光谱、荧光光谱、红外光谱等不同的光谱仪器进行分析。
此外，光谱法还可以通过建立农残物质与光谱特征之间的定量关系，对农残物质进行定量分析。
实验反相高效液相色谱法测定茶叶提取物咖啡因的纯度一、目的要求1.理解反相高效液相色谱的分离原理。
2.掌握HPLC定性定量方法。
3.了解流动相组成对样品组分保留时间的影响。
二、方法原理反相键合相色谱法是一种最常见的高效液相色谱法，70％以上的HPLC分离分析工作是用它完成的。
这种方法特别适用于同系物、苯并系物等的分离。
十八烷基键合相（ODS或C18）是一种最常用的非极性化学键合固定相，而甲醇－水或乙腈－水体系是最常见的极性流动相。
反相键合相色谱法的保留机理目前多用疏溶剂理论解释。
疏溶剂理论假定羟基键合相表面是一层均匀的非极性羟类配位基，并认为极性溶剂分子与非极性溶质分子或与溶质分子中的非极性部分互有排斥力，溶质与键合相的结合是为了减少受溶剂排斥的面积，而不是由于非极性溶质分子或与溶质分子的非极性部分与键合相烷基之间的作用力，也就是说反相键合相的保留机理主要是疏水效应起主导作用。
在反相键合相色谱法中，溶质的疏水结构差异是分离的基础。
对非离子型化合物，溶质极性愈大，保留值愈小；对非极性化合物，溶质的表面积愈大，保留值愈大；对同系化合物，链长愈长或苯环愈多，保留值愈大。
在反相键合相色谱法中，溶剂的组成对样品组分的保留值有很大的影响。
溶质的保留值随流动相表面张力的减小而减小。
常用的溶剂中以水的表面张力最大。
若流动相中有机溶剂含量增加，流动相的表面张力将下降，则溶质的保留值减小。
利用保留值tR定性：在相同条件下，通过对比试样中具有与纯物质相同保留值的色谱峰，来确定试样中是否含有该物质及在色谱图中的位置，初步定性。
定量则采用峰面积进行计算。
三、仪器与试剂仪器：岛津液相色谱仪；六通进样阀；反相C18柱；20μLHPLC微量注射器；微孔滤膜杯式滤器；超声波清洗器及玻璃器皿一套。
试剂：咖啡因标准，采用色谱纯甲醇配制浓度为10mg/mL的咖啡因储备液（准确称取0.5g定容于50mL）；取1.00mL 10mg/mL的咖啡因标准再用甲醇稀释至100mL的浓度为100μg/mL咖啡因标准中间液。
超高效液相色谱法同时检测茶叶中的没食子酸咖啡碱和儿茶素一、没食子酸、咖啡碱和儿茶素的化学特性没食子酸是茶叶中主要的黄酮类化合物，具有抗氧化、抗菌、抗病毒等多种生物活性。
而咖啡碱是一种生物碱，其具有兴奋中枢神经系统、提神醒脑的作用。
儿茶素是茶叶中最主要的黄酮类化合物，具有抗氧化、抗癌、抗炎等作用。
这三种成分在茶叶中的含量不仅直接影响着茶叶的质量和功效，还与茶叶的生长环境、处理工艺等密切相关。
对茶叶中的这些成分进行准确快速的检测具有非常重要的意义。
二、UHPLC技术在茶叶中没食子酸、咖啡碱和儿茶素的同时检测1. 样品前处理茶叶样品通常需经过粉碎、称量、提取等处理步骤。
提取方法通常采用乙酸乙酯等有机溶剂，将茶叶中的有机成分充分提取出来，制备成待测样品。
2. 色谱条件UHPLC技术需要选用高效的色谱柱和流动相，以确保样品的快速分离和准确检测。
对于没食子酸、咖啡碱和儿茶素的同时检测，可以选择C18反相色谱柱，并采用甲醇-水混合溶剂系统作为流动相，通过梯度洗脱的方式完成对这三种成分的分离检测。
3. 方法验证在UHPLC技术中，方法验证非常重要。
要保证测定结果的准确性和可靠性，需对分离和检测方法进行系统的验证实验，包括线性范围、灵敏度、重现性、稳定性等指标的评价。
以确保所建立的UHPLC分析方法能够满足对没食子酸、咖啡碱和儿茶素进行快速准确检测的要求。
4. 结果分析利用建立的UHPLC分析方法进行茶叶中没食子酸、咖啡碱和儿茶素的检测，并对所得数据进行分析和解释。
通过比对标准物质的色谱图谱，可以对样品中的目标成分进行定性和定量分析，从而获得茶叶样品中这三种成分的含量信息。
三、技术应用通过UHPLC技术实现茶叶中没食子酸、咖啡碱和儿茶素的同时检测，可以为茶叶生产和加工提供技术支持和质量控制手段。
一方面，可以通过对这些成分含量的检测，评价茶叶的品质和功效，指导生产加工工艺的改进和优化，提高茶叶的市场竞争力。
也可为对茶叶成分进行科学研究提供技术保障，进一步挖掘茶叶中的有益成分，并探索其在保健食品、药品等领域的应用价值。
茶叶中5种酚酸类化合物的hplc测定方法茶叶是一种常见的饮品，不仅有清凉的口感，还具有丰富的营养成分。
其中，酚酸类化合物是茶叶中重要的活性成分之一。
本文将介绍一种利用高效液相色谱（HPLC）测定茶叶中5种酚酸类化合物的方法。
我们需要了解一下茶叶中的酚酸类化合物。
茶叶中含有多种酚酸类化合物，其中比较常见的有咖啡酸、橙酸、苹果酸、柠檬酸和藤黄酸等。
这些化合物具有抗氧化、抗炎、抗菌等多种生物活性，对人体健康有益。
接下来是HPLC测定方法的介绍。
HPLC是一种分离和定量分析的常用技术，具有高灵敏度、高分辨率和高重现性等优点。
在测定茶叶中的酚酸类化合物时，我们可以选择用反相色谱柱进行分离。
反相色谱柱能够有效地分离茶叶中的酚酸类化合物，使其达到良好的分离度和分析结果。
在进行HPLC测定前，我们需要准备样品的提取和制备工作。
首先，将茶叶样品研磨成细粉，然后加入适量的甲醇进行提取，振荡一段时间后离心。
离心后，将上清液取出并过滤，得到茶叶提取液。
接下来，将提取液进行稀释，并进行滤过，以去除悬浮物和杂质。
在HPLC测定中，我们可以选择使用紫外检测器进行检测。
紫外检测器对茶叶中的酚酸类化合物具有较高的灵敏度和选择性。
此外，为了提高分析结果的准确性和重现性，我们可以选择内标法进行定量分析。
在进行HPLC测定时，我们需要设置适当的流动相和梯度条件。
常用的流动相是乙腈和水的混合溶液，可以根据需要添加一些缓冲剂来调节pH值。
在梯度条件下，我们可以通过调整流动相的乙腈浓度来实现酚酸类化合物的分离和定量。
根据茶叶中的酚酸类化合物的峰面积和内标峰面积的比值，可以计算出茶叶中各种酚酸类化合物的含量。
通过比较样品与标准品的峰面积比值，可以确定茶叶中酚酸类化合物的种类和含量。
利用HPLC测定茶叶中5种酚酸类化合物的方法是一种准确且可靠的分析技术。
通过合理的样品提取和制备工作，选择适当的色谱柱和检测器，以及优化的流动相和梯度条件，我们可以准确地测定茶叶中的酚酸类化合物含量，为茶叶的质量评估和研究提供有力支持。
实验八 可乐、咖啡、茶叶中咖啡因的高效液相色谱分析一、实验目的：⑴ 解反相色谱的原理和应用⑵ 握标准曲线定量法二、实验原理：咖啡因又称咖啡碱，属黄嘌呤衍生物，化学名称1,3,7-三甲基黄嘌呤，可由茶叶或咖啡中提取而得的一种生物碱。
它能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋。
咖啡中含咖啡因1.2%－1.8％，茶叶约含2.0%－4.7％。
可乐、APC 药片中均含有咖啡因。
其分子式为C 8H 10O 2N 4，结构式： N NN N CH 3CH 3CH 3OO样品在碱性条件下，用氯仿定量提取，采用反相液相色谱柱进行分离，以紫外检测器进行检测，以咖啡因标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度作工作曲线，再根据样品中的咖啡因面积，由工作曲线算出浓度。
三、实验仪器与药品⑴仪器LC-10A 液相色谱仪 C-R6A 数据处理机 色谱柱（EconosphereC 18） 平头微量进样器⑵药品① 甲醇（色谱纯） 双蒸水 氯仿（A.R ） 1mol/LNaOH;NaCl(A.R.) Na 2SO 4(A.R.) 咖啡因（A.R.） 可口可乐（1.25L 瓶装） 雀巢咖啡 茶叶②1000mg/L 咖啡因储备液 将咖啡因在110℃下烘干1小时，准确称取0.1000g 咖啡因，用氯仿溶解，转移至100mL 容量瓶中，定容至刻度。
四、实验步骤：⑴ 色谱条件：柱温：室温流动相：甲醇／水＝60：40流量：1.0mL/min检测波长：275nm⑵ 咖啡因标准系列溶液配制：分别用吸量管吸取0.40、0.60、0.80、1.00、1.20、1.40mL 咖啡因储备液于六只容量瓶中，用氯仿定容至刻度，浓度分别为40、60、80、100、120、140mg/L⑶ 样品处理：①将100mL 可口可乐置于250mL 烧杯中，剧烈搅拌30min 或用超声波脱气5min ，以赶净二氧化碳。
②准确称取咖啡0.25g ，用水溶解定容至100mL 。
③准确称取茶叶0.3g,加蒸馏水30mL 煮沸10min ，冷却后将清液转移至100mL 容量瓶，并按此操作重复两次，定容至刻度。
