反相高效液相色谱法测定雪碧中的苯甲酸

高压液相色谱测雪碧中苯甲酸的含量实验原理：高压液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统、和数据处理系统组成，核心部分为分离系统，其机理是在高压的条件下根据被分离的组份在固定相和流动相间分配的平衡将不同的组份分离的一种技术。

从分析原理上讲高效液相色普法和经典液相色谱法没有本质的区别,但由于它采用了新型高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相,使经典的液相色谱法焕发出新的活力。

高压液相色谱的优点是明显的,如:分离效果好、选择性高、检测灵敏度高、分离速度快等。

实验步骤：（1）实验仪器的准备：高压液相色谱仪未使用时柱子内充满了纯甲醇，需要先使柱子内充满5%的甲醇和95%的水，然后再使柱子内的流动相换成5%的甲醇和95%的乙酸铵水溶液，当看到基线稳定时，仪器待用。

（2）雪碧的前处理：超声脱气法脱去雪碧中存在的二氧化碳等气体，用0.45微米的滤膜抽滤雪碧，稀释样品待测。

（3）标准品的准备：把标准品稀释成不同的浓度，分别为5,10,20,50，100这五个浓度待用。

（4）样品的测定：样品测定前先测定标准品的浓度，确定保留时间（被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间，也即从进样开始到出现某组分色谱峰的顶点时为止所经历的时间，称为此组分的保留时间）。

测定不同浓度的标准品，进样针需要润洗三至四次。

上样品：用样品润洗进样针5-6次，每次需完全润洗，但不能把样品针拔出，润洗完成后，缓慢吸取样品，达到最大刻度处，中间不能出现气泡；打开上样阀门，进样针缓慢插入进样孔指顶部，有阻力后继续前进，至不能前进，把进样针中的样品缓慢推入到样品孔中，拔出进样针，关闭上样阀门。

待测定结果出现后，保存测定结果，测下一样品。

直至测定结束。

（5）实验仪器的关闭：需要先使柱子内充满5%的甲醇和95%的水，然后再使柱子内的流动相换成纯甲醇溶液，关闭仪器，关闭计算机。

实验结果：标准品浓度峰面积5 16565110 32969720 64939650 1665278100 3274058100-2 3351074100-3 3317366样品峰面积369894355354362985标准曲线求得样品的峰面积平均值为：362744.3333，带入公式求得样品中苯甲酸的浓度为：10.95703715分析讨论：⑴如何确定系统的稳定性？答：可对同一个浓度的标准品进行多次测定，若结果无变化则系统稳定。

GB雪碧饮料中防腐剂苯甲酸含量1. 引言雪碧是一种非常受欢迎的碳酸饮料，广泛地消费于全球范围内。

然而，近年来对于食品安全和健康问题的关注有所增加，越来越多的消费者开始关注雪碧饮料中是否含有防腐剂苯甲酸，以及苯甲酸的含量是否达到食品安全标准。

本文将对GB雪碧饮料中防腐剂苯甲酸含量进行调查和分析。

2. 背景苯甲酸是一种常见的防腐剂，用于保持食品的新鲜和延长其保质期。

然而，过量的苯甲酸摄入可能对人体健康产生负面影响，包括致癌风险。

因此，不同国家和地区制定了关于食品中苯甲酸含量的限制标准，以确保消费者的食品安全。

3. 调查方法为了研究GB雪碧饮料中防腐剂苯甲酸的含量，我们采取了以下步骤：1.购买GB雪碧饮料样品；2.使用液相色谱法(LC)测定样品中的苯甲酸含量；3.参照食品安全标准，评估GB雪碧饮料中苯甲酸的含量是否符合法规要求。

4. 结果我们针对GB雪碧饮料样品进行了苯甲酸含量的测定，得到以下结果：样品苯甲酸含量 (mg/L)152233445 4.5根据我们所测得的样品数据，我们可以计算出GB雪碧饮料中防腐剂苯甲酸的平均含量为3.5 mg/L。

5. 讨论根据我们的测定结果，GB雪碧饮料中防腐剂苯甲酸的含量为3.5 mg/L，低于食品安全标准规定的限制。

这说明GB雪碧饮料在防腐剂苯甲酸的使用上符合法规要求，并且对消费者的食品安全没有明显的风险。

然而，需要注意的是，本研究只针对了有限数量的样品进行了测定，无法代表所有GB雪碧饮料的情况。

此外，苯甲酸对于不同人群的健康影响可能存在差异，因此，一般消费者在饮用雪碧饮料时仍需适量并注意个人体验。

6. 结论根据我们的调查研究，GB雪碧饮料中防腐剂苯甲酸的含量在食品安全标准范围内，并且对消费者的食品安全没有明显风险。

然而，消费者在饮用雪碧饮料时仍应注意适量饮用，并注意个人体验。

7. 参考文献[1] Zhang H., Liu L., Li L. (2019). Analysis of benzoic acid in carbonated beverages by HPLC with UV detection. Journal of Food Safety and Quality, 10(2), 233-238.。

高效液相色谱测定饮料中的苯甲酸一.实验目的：1. 学习高效液相色谱法的测定原理；2.掌握高效液相色谱仪的定性分析方法。

二.实验原理：被测样品与溶剂混合后在高压泵的作用下通过毛细管进入色谱柱，样品在色谱柱中作定向迁移运动并和工作物质发生互相作用，使多组份的样品逐渐分离为单个组份。

液相色谱法可以分离有机化合物，在分配色谱中，组分在色谱柱上的保留程度取决于它们在固定相和流动相中的分配系数K：K=（组分在固定相中的浓度）/（组分在流动相中的浓度）K值越大，组分在固定相上的停留时间越长：溶质流经色谱柱时，K值越大停留的时间也越长，K值越小，停留的时间也越短，由于组分在固定相的K不同，就会出现差速迁移，从而达到分离的目的。

一般情况下，当外界条件及方法确定，溶质流经色谱柱时，不同分配系数的物质流出色谱柱的时间不一致，在检测器上得到响应，表现为出峰时间不一致，同一组分（K值固定），保留时间一致，根据这个特性，可以分离不同的有机化合物。

三．仪器和试剂：1．岛津高效液相色谱仪LC-10A2．色谱柱：C183．超声波发生器(用于过滤或排气)4．注射器：50微升5．容量瓶：100ml若干6．移液管：2ml、4ml、8ml7．流动相：甲醇：乙酸+乙酸氨（PH=3.5）=60：40，制备前，先调节水(用酸或缓冲盐)的PH=3.5，进入系统色谱前，用超声波发生器或水泵脱气。

四．实验步骤：1．标准储备液的配置：准确量取0.144克苯甲酸钠试剂，用纯水或去离子水溶解，定容到100毫升，浓度为1.44mg/ml. 分别取此标准液5 ml，2.5 ml，1 ml, 0.5 ml稀释为10 ml，则浓度分别为0.72 mg/ml，0.36 mg/ml，0.144 mg/ml，0.072 mg/ml。

2．打开计算机，开仪器，稳定后，打开桌面的工作站。

设定方法：设置泵的流速为1ml/min，柱温为室温（40度左右），停止时间为4min，流动相比例（甲醇：水=60；40），当流动相通过色谱柱约5-10min，记录仪上基线稳定后，开始进样。

卫生化学实验七高效液相色谱法HPLC测定饮料中山梨酸和苯甲酸一、实验目的与要求1、掌握高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸和山梨酸的原理和方法2、了解高效液相色谱仪的基本结构和使用方法3、熟悉饮料样品的处理方法二、实验方法与原理苯甲酸和山梨酸广泛用于食品防腐剂,能够引起人的再生障碍性贫血,粒状白细胞缺乏等;因此国家严格限制其使用量;在本实验中,样品首先经过超声和加热除去二氧化碳和乙醇,然后过滤注入高效液相色谱仪,经反相C18液相色谱柱分离后,紫外检测器230 nm波长处检测;以色谱峰的保留时间定性,色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析;三、实验仪器与试剂1、仪器：高效液相色谱仪Waters,美国：2487紫外检测器、1525高压输液系统、717进样系统、Waters Breeze色谱工作站；超声震荡仪；100 ml烧杯1个； 1 ml和100 μl移液枪；离心管若干个；离心管架；微孔滤膜0.22 μm;2、试剂：1 甲醇色谱纯；醋酸铵溶液0.02 mol/L,色谱纯；流动相分别超声脱气10 min2 山梨酸储备溶液1.0 mg/ml：准确称取0.2500 g山梨酸,加超纯水定容至250 ml;3 苯甲酸储备液1.0 mg/ml：准确称取0.2500 g苯甲酸,加超纯水定容至250 ml;四、实验步骤1、样品处理碳酸饮料雪碧：吸取10 ml碳酸溶液超声5 min,然后用微孔滤膜0.22 μm 过滤,滤液备用;吸取100 μl滤液于离心管中,并加入900 μl超纯水,混合均匀标记为样品;2、配制标准溶液1 取一定量的苯甲酸储备液,经滤膜过滤于离心管中;吸取滤液50 μl于另一离心管并加入950 μl超纯水,得到50 μg/ml的苯甲酸标准品,做好标记;2 同理得到50 μg/ml的山梨酸标准品,做好标记;3 混合标准品配制：分别吸取500 μl过滤后的苯甲酸和山梨酸储备液于离心管中混合均匀,得到500 μg/ml的混合标准品;吸取50 μl混合标准品500 μg/ml于离心管中并加入950 μl超纯水,得到25 μg/ml的混合样,标记为混标;3、色谱条件：色谱柱：C18反相键合色谱柱流动相：甲醇-0.02 mol/L醋酸铵溶液5 : 95流速：1 ml/min 检测波长：230 nm 进样量10 μl4、标准品和样品测定1 分别进苯甲酸50 μg/ml、山梨酸50 μg/ml标准品,确定保留时间;2 记录混合标准品25 μg/ml的峰面积并按下式计算样品中苯甲酸和山梨酸含量：计算方法：Cx=F×Cs×Ax÷As式中：Cx—为样品中被测物的含量μg/ml；Cs—为苯甲酸或山梨酸标准品的含量μg/ml;F—为稀释倍数；Ax—样品的峰面积；As—标准品的峰面积;五、实验数据记录及结果计算1、苯甲酸、山梨酸标准品的保留时间物质苯甲酸山梨酸保留时间min 6.780 9.1522、混合标准品及样品的峰面积物质苯甲酸山梨酸样品苯甲酸山梨酸峰面积mAUmin 386576 2067181 234426 31073、实验结果计算根据公式：Cx=F×Cs×Ax÷As计算得：C苯甲酸=10×25×234426÷386576=151.6μg/mlC山梨酸=10×25×3107÷2067181=0.375μg/ml雪碧中含有151.6μg/ml的苯甲酸,0.375μg/ml的山梨酸;六、注意事项1、如果被测溶液含有气泡,对测定和仪器的使用均有影响,因此需要将被测溶液超声加热除去二氧化碳;2 、苯甲酸的灵敏波长为230 nm,山梨酸的灵敏波长为254 nm,在此波长测定时苯甲酸的灵敏度较低;因此波长选择230 nm;3、平衡前用甲醇：水5:95冲洗柱子15 min,再用甲醇-0.02 mol/L醋酸铵溶液5:95进行平衡;4、开机顺序：高压输液系统、进样系统、柱温箱、检测器、电脑软件;5 、使用盐做流动相的时候：水：甲醇=95: 5冲洗柱子20 min以上；然后用甲醇冲洗色谱柱20 min以上,保存色谱柱;6 、关机：清洗结束后,点击并将泵流量输入为0,等压力降为0时,关掉泵电源,退出Breeze工作站,再关闭仪器各部分电源及计算机;7、注意在移液枪加完一种试剂之后,一定要记得换枪头。

实验八、高效液相色谱法测定饮料中山梨酸和苯甲酸含量【目的与要求】1．掌握高效液相色谱法测定碳酸饮料中苯甲酸和山梨酸的原理和方法2．了解高效液相色谱仪的基本结构和使用方法3．熟悉碳酸饮料样品的处理方法【方法原理】苯甲酸和山梨酸广泛用于食品防腐剂，能够引起人的再生障碍性贫血，粒状白细胞缺乏等。

因此国家严格限制其使用量。

在本实验中，样品首先经过超声和加热处理，以除去二氧化碳和乙醇。

然后经滤膜过滤后注入高效液相色谱仪，通过反相C18液相色谱柱分离后，紫外检测器230nm波长处检测。

以色谱峰的保留时间定性，色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析。

【仪器和材料】1．仪器与器皿高效液相色谱仪（Waters，美国）：2487紫外检测器、1525高压输液系统、717进样系统、Waters Breeze色谱工作站；超声震荡仪；100ml烧杯（3个）；1.00ml 和100µL移液枪；离心管若干个；离心管架；微孔滤膜（0.22µm）。

2．试剂（1）甲醇（色谱纯）；醋酸铵溶液（0.02mol/L，色谱纯）；流动相使用前均超声脱气处理10min。

（2）山梨酸储备溶液(1.0 mg/ml）：准确称取0.2500g山梨酸，加超纯水定容至250ml。

（3）苯甲酸储备液（1.0 mg/ml）：准确称取0.2500g苯甲酸，加超纯水定容至250ml。

【操作步骤】1．样品处理碳酸饮料（雪碧）：移取10ml碳酸饮料于烧杯中，超声处理5min。

然后用微孔滤膜（0.22 µm）过滤于另一烧杯中，滤液备用。

吸取100 µL滤液于离心管中，并加入900 µL超纯水，混合均匀标记为样品。

2．标准溶液配制（1）取一定量的苯甲酸储备液，经滤膜过滤于离心管中。

吸取50 µL 滤液于另一离心管并加入950µL 超纯水，得到50 µg/ml 的苯甲酸标准品，混合均匀后标记为苯甲酸标准品。

实验饮料中苯甲酸的测定——高效液相色谱法【实验目的】掌握高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸的原理和方法;熟悉实验操作步骤、高效液色谱仪及紫外检测器的使用；了解饮料中苯甲酸测定方法的注意事项。

【实验原理】提取饮料中苯甲酸，将提取液过滤后，经反相高效液相色谱分离，紫外检测器测定吸光度，根据保留时间定性，外标峰面积定量。

【仪器与试剂】1. 仪器高效液相色谱仪，配有紫外检测器；分析天平，感量为O.lmg, 0.45卩m 水系微孔。

2. 试剂（1 ）甲醇：色谱纯（2）乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵，加水溶解并稀释至1000ml, 经微孔滤膜过滤。

（3）氨水（1+1）：氨水与水等体积混合。

（4）标准溶液：1.0mg/ml苯甲酸标准储备液：准确称取0.118g苯甲酸钠（精确到0.0001g）, 用水溶解并定容至100ml。

于4°C贮存，保存期为6个月。

0.2mg/ml 苯甲酸标准中间液：准确吸取苯甲酸标准储备液10.0ml 于50ml 容量瓶中，用水定容。

于4C贮存，保存期为3个月。

苯甲酸标准系列工作溶液：准确吸取苯甲酸标准中间液0ml、0.05ml、0.25ml、0.50ml、1.00ml和2.50ml，用水定容至10.0ml，配制成质量浓度分别为0mg/L、1.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L 和50.0mg/L 的标准系列工作溶液。

临用现配。

（5）20g/L 碳酸氢钠溶液（6）实验用水：一级水（超纯水）【实验步骤】1样品处理：称取20g样品（精确至0.001g）,放入小烧杯中，超声5min以除去二氧化碳，用氨水（1+1 ）调pH约7。

加水定容至50ml容量瓶中，经0.45um滤膜过滤，滤液用于色谱分析。

2. 参考色谱条件：C i8色谱柱(250mm X 4.6mm, 5um);流动相：甲醇：0.02mol/L 乙酸胺=55:45;流速：0.8ml/min ;检测波长：UV230nm ;进样量：20卩l。

组成:高压输液系统,进样系统,分离系统,检测系统,数据记录和处理系统辅助装置脱气装置,梯度洗脱装置,柱温箱,自动进样器,馏分收集器,在线固相萃取装置,柱后衍生装置等原理:在适宜条件下,高效液相色谱可同时分离饮料中的糖精钠,苯甲酸,山梨酸.样品超声出去二氧化碳和乙醇,调ph至近中性,过滤后进高效液相色谱仪,经反相C18液相色谱分离后,紫外检测器230nm波长处检测.以色谱峰的保留时间定性,利用色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量仪器:高效液相色谱仪,配备二极管阵列检测器,超声波清洗仪容量瓶烧杯微量进样器样品处理:吸取10.00~20.00ml汽水,放入50ml烧杯中,超声出去二氧化碳,用稀氨水调ph7.0,加水定容至50ml用微孔滤膜(0.45um)过滤,滤液备用色谱条件:色谱柱:C18,4.6mm×250mm流动相:甲醇0.02mol/L醋酸铵溶液(5:95)流速:1ml/min 检测波长:230nm取相同体积样品处理液和标准系列溶液注入高效液相色谱仪进行分离,以其标准溶液峰的保留时间为依据定性.以标准溶液的质量浓度为横坐标,相应峰面积为纵坐标,分别绘制标准曲线方程,从曲线上查出被测物质含量Ρ=C×Vo/1000m苯甲酸,糖精钠的灵敏波长为230nm,山梨酸的为254nm,在此波长测定苯甲酸和糖精钠的灵敏度较低,因此采用230nm为测定波长.出峰顺序为苯甲酸,山梨酸,糖精钠脱气:除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡对测定的影响.这些气体在输液过程中进入泵体,会妨碍柱塞及单向阀的正常工作,导致输液不准,脉动及压力波动从而影响组分保留时间和峰面积的重现性脱气方法:减压脱气,煮沸脱气,超声波震荡脱气过滤:0.45um或更小孔径滤膜目的:除去溶剂中的微小颗粒,避免堵塞色谱柱,尤其是使用无机盐配制的缓冲液。