(完整版)大肠杆菌培养基配制及培养方法

大肠杆菌培养操作规程本页仅作为文档页封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.March大肠杆菌培养操作规程一、目的及适用范围制订本规程的目的为规范大肠杆菌总RNA的制备，保证为诊断试剂产品提供质量可控的质控品及标准品基质。

本规程适用于南京实验室提取大肠杆菌总RNA 的操作。

依照本操作规程，每次可提前大约提取基质液原液。

二、常规时间安排RNA完全提取根据需求，自行安排。

三、培养用耗材准备1、锥形瓶、双层铝箔、棉绳2、包扎一盒1ml的枪头，50ml康宁冻存管四、培养基配制(早上)培养基应现配现用，每次配置350ml，一次性使用完毕。

1、按下表称取物资配置LB培养基到500ml锥形瓶中：2、用双层铝箔和棉绳对锥形瓶进行封口，摇晃锥形瓶以使各物质迅速、均匀、完全、溶解。

待灭菌。

五、PBS溶液配制1、10XPBS不需要每次生产都配置，生产前跟检查PBS量是否充足，如充足则可跳过该步骤。

2、配制10XPBS缓冲液备用；例如配制1000L10XPBS储存液，取1000ml配液瓶，根据下表称取各物质。

用去离子水定容至1000ml。

3、将PBS溶液混合均匀，包扎好，待灭菌。

六、灭菌1、将配置好的PBS溶液，培养基，1ml枪头准备好。

2、确认灭菌锅内水位是否达到标准水位，若未达到，则加入纯化水至标准水位。

3、将包扎好的培养基、PBS溶液和枪头盒一同放入灭菌锅。

注意PBS盖不可太紧，盖紧灭菌锅盖，须旋紧；设置各参数：121℃，20min。

4、灭菌结束后，待灭菌锅压力降至“0”，打开灭菌锅盖；取出灭好菌的培养基和枪头盒。

5、PBS、培养基放置于室温静置2h，待完全冷却。

枪头盒放入80°C鼓风干燥箱三小时烘干。

备用。

6、冷却至室温后，进行活化。

七、菌种复苏（下班前）1、打开超净工作台紫外灯，紫外照射半小时，关闭紫外灯。

2、在超净工作台内进行菌种复苏接种操作，打开50ml冻存管管盖后，用酒精灯外焰灼烧灭菌处理冻存管管口，打开处理好的培养基瓶，用酒精灯外焰灼烧灭菌处理培养基瓶瓶口，倒10ml培养基至50ml冻存管中，用酒精灯外焰灼烧灭菌处理培养基瓶瓶口后将培养基瓶密封待用。

大肠杆菌种子液的制备牛肉膏蛋白胨培养基的配方：液体培养基牛肉膏 3.0g蛋白胨10.0g氯化钠 5.0g水1000mlpH 7.4-7.6固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂1 试管斜面与平板的制备（1）称量按培养基配方比例依次准确称取蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂、水放入烧杯中。

（2）熔化在上述烧杯中先加入少于所需要量的水，用玻璃棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，药品完全溶解后，补充水到所需的总体积。

将称量好的 1.8％琼脂放入已溶的药品中，再加热熔化，最后补充所损失的水分。

（3）调PH 在未调PH前，先用精密PH试纸测量培养基的原始PH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH,边加边搅拌，并随时用PH试纸测基PH直到PH达到7.4-7.6。

反之用1mol/L HCl进行调节。

（4）分装将培养基分装入三个试管中和三角烧瓶中。

其试管装量不超过管高的1/5，三角烧瓶的量不超过1/2加塞培养基分装完毕后，在试管口和三角烧瓶口上塞上棉塞。

（5）包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用一道麻绳扎好。

用记号笔注明培养基名称、配制日期。

（6）灭菌将上述培养基以0.1Mpa,121℃,15min高压蒸气灭菌。

（7）倒平板，取三个已消毒的培养皿，在无菌操作台上用三角烧瓶中的培养基倒制三个平板培养基，冷却。

（8）搁置斜面将灭菌的试管培养基冷却至50℃左右，将试管口端搁在玻璃棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。

2 接种大肠杆菌斜面种子(1) 取实验室储备的大肠杆菌BL21种子，在酒精灯附近，用接种环在已制备好的斜面上接种上大肠杆菌。

(2) 将接种好的斜面放入37℃的恒温培养箱子中培养24h。

3 制备平板种子(1) 在无菌条件下，取一支保存的大肠杆菌的斜面，用无菌生理盐水将菌种冲洗下来，再用无菌生理盐水将其梯度稀释为1倍，10倍，100倍和1000倍，用移液枪分别吸取各梯度的溶液涂布平板(每个梯度涂布三个平板，每次吸取溶液100ul)，然后在37℃培养箱中过夜。

大肠杆菌的培养1. 介绍大肠杆菌(Escherichia coli)是一类具有多种生物学功能的革兰氏阴性菌，在科学研究和工业生产中广泛应用。

为了更好地利用大肠杆菌及其功能，需要对其进行培养和分离，以获得足够的生物材料。

2. 大肠杆菌培养的基本方法大肠杆菌的培养需要特定的培养基和条件。

下面介绍大肠杆菌的基本培养方法。

2.1 培养基的选择常用的大肠杆菌培养基包括Luria-Bertani(LB)培养基、MacConkey培养基和TB培养基等。

其中，LB培养基为较为广泛应用的培养基。

其主要组成成分包括营养成分、糖类、盐类等。

在实验室中，通常用LB培养基作为大肠杆菌的培养基。

2.2 培养条件的控制大肠杆菌的生长适宜温度为37℃，PH值为7.2-7.5，培养过程中需要适宜的氧气供应。

在LB培养基中培养时，可以在室温下保存，但最好在4℃下保存。

2.3 常见实验的流程在实验中，通常需要进行以下操作：菌的接种、培养、收获和保存等。

1.菌的接种首先需要选择一个新鲜的培养基，将大肠杆菌的菌种接种到培养基上。

通常使用无菌的卡片棒进行操作，经过操作后菌种应均匀分布在培养基表面。

2.培养接下来将接种好的培养基放入培养箱中，在适宜的条件下进行培养。

培养期间需要观察培养基的状态，如果出现不规律的杂质，则需要重新接种。

3.收获当菌种生长到一定程度后，可以进行收获。

收获的方法主要有离心沉淀和过滤两种。

其中离心沉淀可以采用低速离心和高速离心排液的方法，而过滤通常采用滤纸或滤膜的方法进行。

4.保存最后需要将采集到的菌液进行保存。

保存可采用冷冻或冻干的方法，分别可以在-20℃和-80℃下保存。

3.大肠杆菌的培养可以通过合适的培养基和条件，使其生长和繁殖。

根据实验的具体需要，可以选择相应的培养基和培养方法，以保障实验的有效性和准确性。

大肠杆菌一般培养方法大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，也是实验室常用的模型菌株之一、它具有许多重要的应用价值，如基因工程、发酵制药和生物学研究等。

因此，了解大肠杆菌的常规培养方法是非常重要的。

大肠杆菌的培养基本上可以分为两个类型：液体培养基和固体培养基。

下面我将为您详细介绍。

1.液体培养基液体培养基是一种将细菌培养在含有养分的液体中的方法。

使用液体培养基可以快速扩大大肠杆菌数量，并且可以用于后续实验，如基因克隆和蛋白表达等。

下面是一种常见的液体培养基配方：- 色氨酸酸盐 (tryptone): 10g/L- 酵母粉 (yeast extract): 5g/L-氯化钠(NaCl):10g/L- 葡萄糖 (glucose): 5g/L-洗涤剂提供的磷酸缓冲溶液(PBS)：500mL，pH值自动调整到7.0将这些成分溶解在适量的去离子水中，并将溶液进行无菌过滤。

然后将无菌培养基分装到培养瓶中，每个瓶子的体积约为250-500mL，用铝箔进行覆盖。

接种数量的大肠杆菌通常为菌液的10-20倍。

将培养瓶放在摇床上以200rpm的速度培养，温度为37°C。

培养时间一般为12-16小时。

2.固体培养基固体培养基是将细菌培养在含有固体化剂（如琼脂）的培养基上的方法。

使用固体培养基可以使大肠杆菌形成菌落，便于分离和挑选单个菌落。

下面是一种常见的固体培养基配方：- 琼脂 (agar): 15g/L- 色氨酸酸盐 (tryptone): 10g/L- 酵母粉 (yeast extract): 5g/L-氯化钠(NaCl):10g/L- 葡萄糖 (glucose): 5g/L-洗涤剂提供的磷酸缓冲溶液(PBS)：500mL，pH值自动调整到7.0将这些成分溶解在适量的去离子水中，并将溶液进行无菌过滤。

然后将无菌培养基分装到试管或平盘中，每个试管或平盘的体积约为10-15mL或20-25mL，用无菌塞子或膜进行封口。

竭诚为您提供优质文档/双击可除大肠杆菌培养实验报告篇一：大肠杆菌实验报告大肠杆菌紫外线诱变及抗药性菌株筛选0740063阿噟兰1.前言抗生素能破坏细菌细胞壁的结构，使细菌的繁殖和生长受到抑制。

但某些细菌对抗生素表现出抗性，原因是其基因发生了改变，产生能抵抗抗生素的性状。

在自然情况下，细菌的基因突变率很低，而且突变是不定向的，因此在自然条件下，想要获得有抗性的细菌是很困难的。

当给与适当的物理条件时，其突变率会大大增加。

如当用α射线、β射线、γ射线、Χ射线、中子和其他粒子、紫外线、微波等物理因素辐射时，能够促进遗传物质突变。

DnA对紫外线（uV）有强烈的吸收作用，尤其是碱基中的嘧啶，它比嘌呤更为敏感。

紫外线引起DnA结构变化的形式有DnA链断裂、碱基破坏、胸腺嘧啶二聚体等。

因此，紫外线通常作为诱变剂，用于微生物菌种选育。

一般细胞分裂越旺盛，诱变剂量越大，突变率高，诱变最有效的波长253~265nm。

选择合适的诱变剂量对于获得较高突变率十分关键，过高或过低的辐射剂量会导致菌株死亡或诱变不充分而降低诱变效果。

在紫外线诱变下，菌株发生不定向的突变，想要得到需要的特向变异必须对诱变后的菌株做筛选。

本实验想要得到的是能够抵抗抗生素的菌株，因此可以用抗生素培养基作为筛选培养基对菌种进行筛选。

若菌株没有发生定向突变，则该菌株不能在抗性培养基上正常生长，只有发生了定向突变才可能在筛选培养基上正常生长。

紫外线对于菌株有诱变作用外，对菌株还有较强的致死作用，因为紫外线改变了菌株的基因结构导致菌株无法正常生长繁殖。

因此，通过本实验的操作，在合适的照射剂量的设置下，比较不同不同照射剂量下的致死效果和突变率，并初步分析两者的相关性。

在分析死亡曲线和诱变率曲线的基础上，能了解诱变育种的机理和方法，为做进一步的诱变实验做准备。

2.材料和方法2.1实验材料、仪器和试剂菌种：大肠杆菌仪器：超净台、离心机、高压灭菌锅、培养箱、磁力搅拌器、培养皿、涂布器、移液管、移液器试剂：牛肉膏蛋白胨培养基相关试剂、硫酸卡那霉素水溶液（50mg/ml）、生理盐水2.2实验方法2.2.1制备培养基普通培养基——牛肉膏蛋白胨培养基（400ml）：牛肉膏5g蛋白胨10gnacl5g琼脂20g蒸馏水1000mlph7.0按配方配制好培养基后置于灭菌锅中115℃15min，倒平板，4皿*15ml*5组+2皿*15ml=22皿*15ml=330ml筛选培养基(200ml)：含抗生素50mg/L。

大肠杆菌培养基制备过程
制备大肠杆菌培养基的过程如下：
1. 准备培养基成分：大肠杆菌培养基的成分包括碳源、氮源、矿物质盐及其他添加物。

常用的
碳源有葡萄糖、蔗糖等；氮源可以选择氨基酸、氨基酸类化合物等；矿物质盐可以选择无机盐、有机盐等。

添加剂有pH调节剂、辅因子等。

2. 杀菌处理：将所需的碳源、氮源、矿物质盐及其他添加物加入适量的蒸馏水中，经过高温高
压灭菌处理。

3. 酶解处理：将培养基中添加的蛋白质进行酶解处理，以提供大肠杆菌生长所需的氮源。

4. 调整pH值：使用pH调节剂调整培养基的pH值，常见的调节剂有氢氧化钠和氢氧化钾等。

5. 分装和灭菌：将制备好的培养基分装到培养瓶或培养皿中，然后进行高温高压灭菌处理，以
保证培养基的无菌状态。

6. 储存和使用：将灭菌后的培养基在低温下储存，以延长其使用寿命。

使用时，将培养基回溶，配制成适当浓度的液态培养基，用于大肠杆菌的培养和研究。

需要注意的是，大肠杆菌培养基的制备过程可能存在一定的差异，具体的制备步骤和成分比例
可根据实验需求进行调整。

此外，操作过程中需要注意无菌操作，并保持培养基的无菌状态，
以避免杂菌污染。

大肠杆菌种子液的制备牛肉膏蛋白胨培养基的配方：液体培养基牛肉膏3.0g蛋白胨10.0g氯化钠5。

0g水1000mlpH 7。

4—7.6固体培养基在液体培养基的基础上再加入1。

5%－2.0％的琼脂1 试管斜面与平板的制备（1）称量按培养基配方比例依次准确称取蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂、水放入烧杯中.（2）熔化在上述烧杯中先加入少于所需要量的水，用玻璃棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，药品完全溶解后，补充水到所需的总体积。

将称量好的1。

8%琼脂放入已溶的药品中，再加热熔化，最后补充所损失的水分。

（3）调PH 在未调PH前，先用精密PH试纸测量培养基的原始PH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌,并随时用PH试纸测基PH直到PH达到7。

4—7。

6。

反之用1mol/L HCl进行调节.（4）分装将培养基分装入三个试管中和三角烧瓶中。

其试管装量不超过管高的1/5,三角烧瓶的量不超过1/2加塞培养基分装完毕后,在试管口和三角烧瓶口上塞上棉塞.（5）包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,其外再用一道麻绳扎好.用记号笔注明培养基名称、配制日期。

（6）灭菌将上述培养基以0。

1Mpa,121℃，15min高压蒸气灭菌。

（7）倒平板，取三个已消毒的培养皿，在无菌操作台上用三角烧瓶中的培养基倒制三个平板培养基，冷却.（8）搁置斜面将灭菌的试管培养基冷却至50℃左右，将试管口端搁在玻璃棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜.2 接种大肠杆菌斜面种子（1）取实验室储备的大肠杆菌BL21种子，在酒精灯附近，用接种环在已制备好的斜面上接种上大肠杆菌。

(2) 将接种好的斜面放入37℃的恒温培养箱子中培养24h.3 制备平板种子(1) 在无菌条件下，取一支保存的大肠杆菌的斜面，用无菌生理盐水将菌种冲洗下来，再用无菌生理盐水将其梯度稀释为1倍,10倍,100倍和1000倍,用移液枪分别吸取各梯度的溶液涂布平板(每个梯度涂布三个平板，每次吸取溶液100ul），然后在37℃培养箱中过夜。

大肠杆菌的菌种保存
一.目的:保存大肠杆菌菌种
二.原理:大肠杆菌为革兰氏阴性菌,单在或成对排列,可以在普通肉汤培养基(形成菌落边缘整齐湿润),麦康凯培养基上(形成红色菌落), 兼性厌氧培养.
甘油可以保护大肠杆菌在低温环境中存活,可以防止菌体在超低温环境中水分形成冰粒,起到保护作用.
三.实验器材及材料:麦康凯培养基(分离细菌),普通肉汤培养基(扩增细菌),超低温冰箱,恒温震荡培养箱,操净台,试管1000ul移液枪,离心杯,甘油.
四.实验步骤
1、培养基：配制营养肉汤培养基
配方：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，磷酸氢二钾1g，蒸馏水1000ml．(高压灭菌备用)
2、分离大肠杆菌
3、染色观察,做细菌生化鉴定,确认为大肠杆菌
4、扩增培养：在液体培养基中接入大肠杆菌菌落（总量约为试管的
1/3），37℃恒温震荡培养箱中培养18-24h
5、保存方法：在离心杯中加入300ul菌液+700ul甘油(80%甘油+20%
生理盐水)－70℃培养
6、验菌:取出离心杯验菌,看是否有细菌生长。

很多企业或科研院所工作的朋友在做大肠杆菌表达某个蛋白时，常会发现某些有毒性的蛋白在普通的LB培养基中增殖速度缓慢或不能增殖。

如口蹄疫O型病毒3ABC，3个基因合在一起重组入PET系列表达载体时，在诱导前扩菌阶段细菌增殖缓慢。

这时很多人会认为出现这种情况的原因是遭到了噬菌体感染。

很多朋友也会遇到这样的问题，费了很大功夫将要表达的目的基因进行了密码子优化，然而最终结果还是不能表达所需蛋白。

了解自动诱导方法增加一种成功表达目的蛋白的机会！若你所要表达的目的蛋白不能表达，所有的条件（不同的诱导温度、不同的诱导时间、不同的诱导剂浓度）都进行了试验还是没有有所突破，这时你可以试一试采用大肠杆菌自诱导的方法。

我们知道很多蛋白在不加诱导剂的情况下有微量的表达，但是这微量表达的蛋白反而会对目的蛋白的大量表达产生抑制！还有不同抗性的表达质粒在长时间培养抗性消失时会发生不同情况的质粒丢失！特别是氨苄抗性的质粒！此时你也可以考虑采用联合自动诱导的方法。

本研究配方减少了传统的ITPG诱导过程，将扩菌过程和诱导过程相结合，利用培养基的不同组分被分别代谢用来促进细胞生长到高密度和自动诱导lac启动子驱动蛋白表达。

表达过程更便利，同时增加蛋白的可溶性及表达量，提高蛋白的表达效率。

减少IPTG对细菌的毒害作用！自动诱导培养基配方如下：胰蛋白胨20g酵母提取物10g丁二酸钠 5.4g二水柠檬酸钠0.3g甘油25ml葡萄糖0.5gAlpha-乳糖2gNa2HPO4 2.55gKH2PO4 3.4gNH4CL 2.68gNa2SO4 0.71gMgSO4.7H2O 0.493gFeCL3.6H2O 0.03g以上组分定容与1L蒸馏水中。

自动诱导操作步骤：1、10微升菌液加入10毫升培养基中，复苏过夜。

2、将复苏好的菌液接种入250毫升自动诱导培养基中。

3、220rpm 37度培养14-16h。

4、收集菌体，检测目的蛋白表达情况，并进行蛋白的纯化！。

使用牛肉膏蛋白胨培养基组成成分：牛肉膏3g,蛋白胨10g,Nacl 5g,琼脂15～20g,水1000mL,PH7.4～7.6。

具体配置步骤：1.称药品按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中.牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量,随后放入热水中,牛肉膏使与称量纸分离,立即取出纸片.蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速.2.加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至所需量.若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中,再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补足所失的水分.3. 调pH 检测培养基的pH,若pH偏酸,可滴加lmol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检测,直至达到所需pH范围.若偏碱,则用lmol/L HCl进行调节.pH 的调节通常放在加琼脂之前.应注意pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度.4.过滤液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤,以利培养的观察.但是供一般使用的培养基,这步可省略.5.分装按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内.分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染. 分装量:固体培养基约为试管高度的l/5,灭菌后制成斜面.分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜.半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝.6.加棉塞试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞.棉塞的形状,大小和松紧度要合适,四周紧贴管壁,不留缝隙,才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用.要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内,以防棉塞脱落.有些微生物需要更好的通气,则可用8层纱布制成通气塞.有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞.7.包扎加塞后,将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸,以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞.若培养基分装于试管中,则应以5支或7支在一起,再于棉塞外包一层牛皮纸,用绳扎好.然后用记号笔注明,培养基名称,组别,日期.8.灭菌将上述培养基于121.3℃湿热灭菌20min.如因特殊情况不能及时灭菌,则应故人冰箱内暂存.9.无菌检查将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～48h,无菌生长即可使用,或贮存于冰箱或清洁的橱内,备用.大肠杆菌的培养：37摄氏度，恒温培养48到72小时，因为接种时和具体培养条件的不同，其生长一般都在2天外才能长出明显的菌落。

大肠杆菌种子液的制备牛肉膏蛋白胨培养基的配方：液体培养基牛肉膏 3.0g蛋白胨10.0g氯化钠 5.0g水1000mlpH 7.4-7.6固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂1 试管斜面与平板的制备（1）称量按培养基配方比例依次准确称取蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂、水放入烧杯中。

（2）熔化在上述烧杯中先加入少于所需要量的水，用玻璃棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，药品完全溶解后，补充水到所需的总体积。

将称量好的 1.8％琼脂放入已溶的药品中，再加热熔化，最后补充所损失的水分。

（3）调PH 在未调PH前，先用精密PH试纸测量培养基的原始PH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH,边加边搅拌，并随时用PH试纸测基PH直到PH达到7.4-7.6。

反之用1mol/L HCl进行调节。

（4）分装将培养基分装入三个试管中和三角烧瓶中。

其试管装量不超过管高的1/5，三角烧瓶的量不超过1/2加塞培养基分装完毕后，在试管口和三角烧瓶口上塞上棉塞。

（5）包扎加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，其外再用一道麻绳扎好。

用记号笔注明培养基名称、配制日期。

（6）灭菌将上述培养基以0.1Mpa,121℃,15min高压蒸气灭菌。

（7）倒平板，取三个已消毒的培养皿，在无菌操作台上用三角烧瓶中的培养基倒制三个平板培养基，冷却。

（8）搁置斜面将灭菌的试管培养基冷却至50℃左右，将试管口端搁在玻璃棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。

2 接种大肠杆菌斜面种子(1) 取实验室储备的大肠杆菌BL21种子，在酒精灯附近，用接种环在已制备好的斜面上接种上大肠杆菌。

(2) 将接种好的斜面放入37℃的恒温培养箱子中培养24h。

3 制备平板种子(1) 在无菌条件下，取一支保存的大肠杆菌的斜面，用无菌生理盐水将菌种冲洗下来，再用无菌生理盐水将其梯度稀释为1倍，10倍，100倍和1000倍，用移液枪分别吸取各梯度的溶液涂布平板(每个梯度涂布三个平板，每次吸取溶液100ul)，然后在37℃培养箱中过夜。

大肠杆菌发酵培养基及发酵培养方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的革兰氏阴性菌，广泛存在于人体和动物的肠道中。

大肠杆菌是一种非致病性菌株，也是一种重要的实验室模式细菌，广泛用于生物学、分子生物学和生物工程等领域的研究。

在研究中，为了培养大肠杆菌并使其生长繁殖，需要提供适宜的发酵培养基。

下面将介绍一种常用的大肠杆菌发酵培养基及发酵培养方法。

1. 碱性消化酪蛋白（Peptone）：提供菌体生长所需的氨基酸和碳氮源。

2. 天然酪蛋白（Tryptone）：提供菌体生长所需的氨基酸和碳氮源。

3.单质氯化钠（NaCl）：维持适宜的渗透压。

4.复合钠磷酸盐缓冲液：维持培养基的pH值。

5.复合钠酸盐或磷酸二钠：提供磷酸和其他离子。

6.葡萄糖：作为碳源供能。

7. 瓜尔豆胨（Yeast Extract）：提供维生素和微量元素。

8.氯化镁（MgCl2）：提供镁离子，促进细菌生长。

9. 镓氰酸（Glycerol）：提供细菌生长所需的能源。

10.硫酸镁（MgSO4）：提供硫酸和镁离子。

大肠杆菌的发酵培养方法如下：1.准备培养基：根据具体实验目的配制相应的发酵培养基，常用的是LB培养基。

首先称取适量的碱性消化酪蛋白、天然酪蛋白和葡萄糖，溶解于适量的水中，调整pH值为7.0。

然后加入其他成分，如NaCl、复合钠磷酸盐缓冲液等，再加入足够的水使总体积达到所需量。

最后将培养基加热至沸腾，搅拌溶解，然后用自动过滤器过滤除菌。

2.酸碱调节：将培养基分装到培养瓶中，每瓶约装200-250mL。

使用滤液灭菌器或高温高压灭菌，将培养基灭菌。

3.原液接种：取一天前培养好的大肠杆菌菌种，用直线均匀接种于含有发酵培养基的培养瓶中，可根据需要调整接种量。

4.接种培养：将培养瓶置于恒温摇床上适当温度的恒温箱中，保持适宜的温度（通常为37℃）和摇动速度。

等待一定的时间，观察细菌生长情况。

5.静置培养：可以将菌液经过适当的培养时间后进行离心，去掉上清液，留下细菌沉淀。