大肠杆菌培养ppt课件

过，而空 气中的微生物不能通过。
灼烧灭菌
高压蒸汽灭菌锅
二、无菌技术 1.无菌操作的目的
防止培养基被其他微生物污染 (及避免操作者被微生物感染)
2、无菌技术包括 (1)将实验器具和培养基：高压蒸汽灭菌
(2)接种环(针)、试管口: 灼烧 灭菌
(3)实验操作空间：酒精+紫外线 消毒 （接种室(箱)、超净工作台） (4) 双手: 酒精 消毒
(5) 实验操作应在 酒精灯火焰 旁进行 (6)避免已灭菌处理的材料用具与 周围物品 相接触。
2.倒平板
灭菌后的培养基在无菌操作台上，酒精灯火焰附近，倒 入4个培养皿中，倒后立即置于水平位置上，轻轻晃动， 使培养基铺满平皿底部，待凝，使之形成平面
• 紫外灯，过滤风，酒精灯，酒精棉球 • 在火焰旁右手3指拿锥形瓶，2指拿封口膜 • 使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰 • 左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养
(二)培养基的配制
☆ 培养基 是由人工方法配制而成的，专供微生物 或动植物细胞生长繁殖使用的混合营养 液。另外还需要满足微生物生长对pH 、 氧气、二氧化碳及渗透压的要求。
☆ LB液体培养基（细菌通用培养基） 50mL
蛋白胨0.5g,酵母提取物0.25g,氯化钠0.5g,水50mL
☆ LB固体平面培养基 1g琼脂
思考
1、为何要将平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基 表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养 基面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠 落培养基，造成污染。
2、如何检查培养基是否受杂菌的污染？ 将未接种的培养基放在恒温箱中培养，若无菌落产生 则未受杂菌污染。
思考
3.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧 接种环？

发酵
将发酵罐放入恒温振荡器中培养，控制温度和湿度适宜，观察细菌的生长情况。
收获
当细菌生长到一定阶段时，进行收获，提取所需产物。
04
大肠杆菌培养过程中的问题与解决策略
杂菌污染及其防治
杂菌污染
大肠杆菌培养过程中经常出现 杂菌污染，导致培养失败。
污染来源
杂菌污染通常来自培养基、设 备、空气等。
防治策略
THANKS
感谢观看
肠道益生菌
大肠杆菌被认为是肠道益生菌之一，可促进肠道蠕动、增强免疫力、降低胆固醇等。
人类健康
大肠杆菌在肠道内的数量和种类对人类健康有着重要影响，可通过补充益生菌来维持肠道微生态平衡 。
06
大肠杆菌培养的教学实践建议
实验方案的设计与优化建议
确定实验目标
01
明确实验所要达到的目标，如分离、鉴定、纯化大肠杆菌等。
肠道微生物
大肠杆菌是肠道微生物群落中的一 种，对肠道健康和功能具有重要作 用。
促消化
大肠杆菌能够促进肠道蠕动和消化 ，有助于营养物质的吸收。
免疫刺激
大肠杆菌能够刺激肠道免疫系统的 发育和功能，增强机体对病原菌的 抵抗力。
生物拮抗
大肠杆菌具有生物拮抗作用，能够 抑制病原菌的生长和繁殖。
02
大肠杆菌培养的基本原理
将菌种接种到培养基中，放入恒温振荡器中 培养。
发酵罐的灭菌与清洗
准备所需材料
包括发酵罐、不锈钢筛网、清 洗剂等。
灭菌
将发酵罐用高压蒸汽灭菌法灭菌 ，确保无菌状态。
清洗
用清洗剂清洗发酵罐内外部，去除 污垢和残留物。
接种、发酵与收获
准备所需材料
包括发酵罐、接种器、恒温振荡器等。

2.常用方法 巴氏消毒法：牛奶 化学药剂：双手、水源 灼烧灭菌：接种环等（金属） 干热灭菌：160-170℃ 1-2h （玻璃器皿、金属） 高压蒸汽灭菌：121℃ 100KPa 15-30min（培养基） 紫外线消毒法：30min（空气中的微生物） 酒精灯火焰附近操作；超净工作台上操作。
回忆有关细胞的元素组成、分子 组成的知识，想一想微生物应该生活 在什么环境中呢？
1.平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌 要求：
（1）每四人一组，每组均需完成两种方法； （2）组内成员可任选一种分离方法。 2.培养 将培养皿倒置放在培养箱内，于36℃培养 24h。
课题1 大肠杆菌的培养与分离
思考： 1.为什么培养皿在培养箱内要倒置呢？ 2.菌落是种群吗？
作业： 1.对比实验，说出自己操作过程中的
3.用途：★ ★ ★ ①选择培养基：缺某种物质或多加某种物质 ②鉴别培养基：加指示剂或化学药品
月桂基硫酸盐 胰蛋白胨肉汤
（LST）
配置培养基：
溶化（溶解）
分装
倒平板：
倒平板：
接种：
接种针灼烧灭菌
平板划线
大肠杆菌的纯化方法：
稀释涂布平板法
平板划线法
大肠杆菌的分离纯化
——结晶紫中性红胆盐琼脂
不足； 2.简述实验操作注意事项； 3.通过实验注意事项完善实验设计。
每个人都会有自己的特长。一个人做某些事会比其他事做的更好。但许多人从未找到最适合自己的事情，其根本原因往往是他们没有进 果你对一切都随遇而安，那总是会有一天你会后悔莫及的。心，只有一颗，不要装的太多。人，只有一生，不要追逐的太累。心灵的愉 有；简单的快乐，来自心态的知足。家，很平淡，只要每天都能看见亲人的笑脸，就是幸福的展现。爱，很简单，只要每天都会彼此挂 暖。幸福并不缥缈，在于心的感受。爱并不遥远，在于两心知的默契。人与人之间，尊重是相互的，心与心相交，尊重是必须的，尊重 体现在做人做事，尊重，是一个人的人品尊重，让人与人走近。人无所舍，必无所成。心无所依，必无所获。自己的路只有自己去走， 去度。能抓住希望的只有自己，能放弃自己的也只有自己。能怨恨嫉妒的是自己，能智慧温暖的还是自己。心中有岸，才会有渡口，心 安然。每个人都会有自己的想法、做法、活法。理念不同，做法不同，活法就不同，我们没必要去干涉别人，影响别人，甚至攻击别人 不会报复；他不好，不去打击，不去鄙视。人人都有自尊，人人都有苦衷，生活中没有谁，不希望自己活得更好，走得更顺。学会理解 一个优秀的人，都有一段苦逼的时光。或许是因为一份学业，一份工作，一段爱情，离开了爸爸妈妈，去了一座别的城市。当你倦了厌 母正在为你打拼，这就是你必须坚强的理由。不管发生什么，记住不是只有你一个人在努力不要轻易放弃。一个人在外面，很不容易， 强！每一个闪光的人，都在不为人知的地方默默努力。穿越孤独，战胜恐惧，完善自己。可以流泪，可以休憩，可以抱怨，但绝不放弃 圆缺，都会途经，也都将过去。内心的宁静，是最有力量的修行。佛说，人的痛苦，源于追求了错误的东西。常常，我们苦苦的追逐， 殊不知，有些不甘放下的，往往不是值得争取的，有些苦苦追逐的，往往不是生命需要的。我们要做的是让心静下来，心静下来才知道 什么，让心静下来，静观自在。人，要么像辣椒一样有脾气。要么像白菜一样有层次。要么像莲藕一样有心眼。可我做不到！我就像一 拐弯抹角，一就是一，二就是二。虽然这样的性格吃不开，容易得罪人，但我还是喜欢这样的自己，不虚伪，不算计别人，喜欢做真实 人有傻福。人的善良一定要有底线，大度要讲原则，道德讲底线。你不发脾气，别人就以为你没脾气，你不争取，别人就会占尽你的便 机，也不要活得太单纯。不要别人跟你说几句好听的，你就不管不顾地对人家好，到头来辜负了自己的一片好意。生活是自己的，你的 乐，都得靠自己去感受，去捕捉。改变别人是事倍功半，改变自己是事半功倍。相信自己，美好的生活从改变自己开始！自信，是走向 胜困难的利剑，是达向理想彼岸的舟楫。有了它，就迈出了成功的第一步；有了它，就走上了义无反顾的追求路。诚信是人最美丽的外 的鲜花。人有见识，就不轻易发怒。宽恕人的过失，便是自己的荣耀。青春赚的钱，难赚回青春；生命赚的钱，难买回生命；幸福换来 爱情索取的钱，难索回爱情；时间挣来的钱，难挣回时间。即使用一生得到全世界的钱，全世界的钱也买不回你的一生，请记住金钱不 的时候要休息，该放松的时候要放松，快乐生活才是最给力的。人这一辈子，不可能事事如人意，遇到困难和烦心的事情；要学会自己 快乐的心境和乐观的心态。前行路上，遇见烦恼的时候，不妨学说三句话，第一句话：“算了吧”；第二句话：“不要紧”；第三句话 的”。没有过不去的事情，只有过不去的心情；心若晴朗，人生便没有雨天。别人拥有的，不必羡慕；只要努力，时间都会给你。总想 者必赢。令狐冲说：“有些事情本身我们无法控制，只好控制自己。”考前两个月就是冲刺。养兵千日，用兵一时更快、更高、更强。 的母亲是失败，成功的父亲是汗水面对目标，信心百倍，人生能有几次搏？面对成绩，心胸豁达，条条大陆通罗马。如果敌人让你生气 胜他的把握，如果朋友让你生气，那说明你仍然在意他的友情高考试卷是一把刻度不均匀的尺子：对于你自己来说，难题的分值不一定 平线留给世界的就只能是背影 。没有平日的失败，就没有最终的成功。重要的是分析失败原因并吸取教训。能冲刷一切的除了眼泪，就 推移感情，时间越长，冲突越淡，仿佛不断稀释的茶。不怕考不上，就怕不敢考。积一时之跬步，臻千里之遥程在冷峻的雪山上很多朝 学习与坐禅相似，须有一颗恒心。时间太瘦，指缝太宽调节好兴奋期，学习一浪高一浪名列前茅是银，日新月异是金怨言是上天得至人 是人类祷告中最真诚的部分不必每分钟都学习，但求学习中每分钟都有收获人非要经历一番不同平时的劫难才能脱胎换骨，成为真正能 须咬牙厉志，蓄其气而长其志，切不可恭然自馁也生活比电影狠多了，从来不给弱者安排大逆转的情节。即使赚得了全世界，却失去了 义呢？不要把时间、财力和劳动，浪费在空洞多余的话语上。永远以用心乐观的心态去拓展自我和身外的世界。人的一生，有许多事情 慢慢回味的，过去的就莫要追悔，一切向前看吧 任何打击都不足以成为你堕落的借口，即使你改变不了这个世界，你却依然可以改变自 路永远走下去。不肯下一点功夫，永远不会明白自己从何而来，又将立足于何处。. 凡事不要想得太复杂，手握的太紧，东西会碎，手 路，走的人多了，也便成了路。通过云端的道路，只亲吻攀登者的足迹。不是每个人都适合与你白头偕老。有的人是拿来成长的，有的 有的人是拿来一辈子怀念的。闪光的未必都是金子，而沉默的也不一定就是石头。世界上那些最轻易的事情中，拖延时间最不费力。每 为了让远方变得更近一些。你多学一样本事，就少说一句求人的话。我们是如何一步步落后于别人的，自己心里特别清楚，无非是从生 开始的。人在千里，家在心里；家在千里，人在心里。只有创造，才是真正的享受，只有拚搏，才是充实的生活。 世上真正厉害的 不 牌，而是哪怕你拿到的是一副差牌，也能赢得胜利！别抱怨生活的无聊生活嘛，就是无聊中自己找些乐子。我可以被打败但我不允许自 聪明人之所以没有成功，缺少的不是智慧，而是那种为成功而拼搏的干劲 成功不是将来才有的，而是从决定去做的那一刻起，持续累 怀，让是一种修养，退、让则是一种智慧。所谓天才，只不过是把别人喝咖啡的功夫都用在工作上了。善于利用零星时间的人，才会做 现实会告诉你 不努力就会被生活踩死，无需找什么借口，一无所有 就是拼的理由。靠山山会倒，靠水水会流，靠自己永远不 精诚所至 坎坎坷坷，跌跌撞撞那是在所难免。但是，不论跌了多少次，你都要坚强地再次站起来。任何时候，无论你面临着生命的何等困惑，抑 无论道路如何的艰难，无论希望变得如何渺茫，请你不要绝望，再试一次，成功一定属于你一个家庭没有书，就好像一间房子没有窗户 和快乐看作是生活目的的本身。手指有长有短，知识有高有低。学无前后，达者为师。任何不能打倒你的，将会使你更加坚强。如果你

常见药物对大肠杆菌的抑菌效果评价
01 02
青霉素类
青霉素类药物对大肠杆菌的抑菌效果较好，但由于大肠杆菌易产生β-内 酰胺酶，使其对青霉素类药物产生耐药性，因此临床上常使用酶抑制剂 复合制剂来提高治疗效果。
头孢菌素类
头孢菌素类药物对大肠杆菌的抑菌效果也较好，且较少出现耐药性，是 临床上治疗大肠杆菌感染的常用药物之一。
03
喹诺酮类
喹诺酮类药物对大肠杆菌的抑菌效果较强，且具有广谱抗菌作用，但由
于大肠杆菌对喹诺酮类药物的耐药性逐渐增加，因此在使用时需要注意
合理用药。
耐药机制研究进展及挑战
要点一
耐药机制研究进展
近年来，随着分子生物学技术的发展和应用，对大肠杆菌耐 药机制的研究取得了重要进展。研究发现，大肠杆菌可通过 产生β-内酰胺酶、外排泵、改变药物作用靶位等多种方式产 生耐药性。此外，基因水平转移也是大肠杆菌获得耐药性的 重要途径之一。
比较基因组学研究
物种间比较
通过比较不同大肠杆菌菌株或与其他相关物种的基因组序列，可 以揭示物种间的进化关系、基因水平转移等事件。
基因组重排
大肠杆菌基因组在进化过程中可能发生重排事件，如倒位、易位等， 这些事件可以通过比较基因组学方法进行检测和分析。
基因家族和同源基因分析
通过比较基因组学方法，可以鉴定大肠杆菌中的基因家族和同源基 因，进而研究其功能冗余和适应性进化等问题。
04
大肠杆菌蛋白质组学分析
蛋白质组学技术原理及应用
蛋白质组学技术原理
蛋白质组学是研究生物体内所有蛋白质组成、结构、功能及其相互作用的一门 科学。主要技术包括蛋白质分离、鉴定、定量和相互作用研究等。
蛋白质组学技术应用
应用于疾病诊断、药物研发、生物工程、环境科学等领域，如寻找疾病生物标 志物、研究药物作用机制、优化蛋白质生产等。

要基因型：
与基因重组相关的基因型
recA、recB、recC等
与甲基化相关的基因型
dam、dcm、mcrA、mcrB和C、mrr、hsdM等
与点突变相关的基因型
mutS、mutT、dut、ung、uvrB等
与核酸内切酶相关的基因型 hsdR、hsdS、endA等
与终止密码子相关的基因型 与抗药性相关的基因型 与能量代谢相关的基因型
四、致病性：
致病性大肠杆菌
肠道致病性大肠 杆菌
肠道外致病性大 肠杆菌
4
含粘附素和肠毒素等、 可分泌具有细胞毒性 的（类）志贺毒素
主要引起非炎症性腹 泻、出血性肠炎、溶 血性尿毒综合征等
主要引致败血症以及 尿道、生殖道、乳腺 等感染
五、微生物诊断：
从可疑症状着手分析，再采集病变组织或者收集粪便或肠内容物，划线接种于麦康 凯或伊红美蓝琼脂平板上，挑取可疑菌落同时接种于TSI琼脂和普通琼脂斜面，然 后革兰氏染色、镜检形态，淘汰不符合者，最后做生化试验；也可用多重PCR法检 测细菌的特异性基因。
3
概述
3
大肠杆菌在麦康凯培养基上长成红色菌落
三、生化特性：
微生物资源数据库共享平台 菌株保藏编号 NKCCMR NK 7.C 7037
普通营养琼脂 上 生 长 24h 后 ， 形成圆形凸起、 光滑、湿润、 半透明、灰白 色、中等大小 菌落。
大肠杆菌与沙门氏菌生化试验鉴别表
实验类别 葡萄糖
乳糖
麦芽糖
E.coli基因组中还包含有许多插入序列，这些插入的片段都是由基因的水平转移和基 因重组而形成的。利用大肠杆菌基因组的这种特性对其进行改造，使其中的某些基 因发生突变或缺失，从而给大肠杆菌带来可以观察到的变化，这种能观察到的特征 叫做大肠杆菌的表现型 (Phenotype)，把引起这种变化的基因构成叫做大肠杆菌的基 因型(Genotype)。具有不同基因型的菌株表现出不同的特性。

仔猪黄痢

症状 潜伏期：短12小时内，长仅1-3日内 临诊表现： 仔猪出生正常，后腹泻、消瘦死亡 粪便：黄色浆状、内含凝乳小片
严重肛门松弛、排粪失禁、肛门冒出稀
粪 发病率和死亡率很高，可达90-100%
仔猪大肠杆菌病

排 出 白 色 或 黄 色 稀 粪
仔猪黄痢

病理变化：

LT：有抗原性，分子量大，60℃经l0min破坏，引起肠 黏膜细胞分泌亢进，发生腹泻和脱水；
ST：无抗原性，分子量小，须60℃以上和长时间才能破 坏，同样引起分泌性腹泻。

ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
侵袭性：某些ETEC，能直接侵入并破坏肠黏膜细胞。 与质粒有关。 大肠杆菌素：由质粒编码，主要是由引起全身性侵人 的大肠杆菌产生，据认为，与细菌引起败血症的能力 有关。 细胞毒素（志贺样毒素(SLT)）：有3型：SLT-I、SLTⅡ和SLT-Ⅳ，SLT-Ⅱ与引发人出血性肠炎的O157：H7 的致病作用有关，而SLT-Ⅳ则能使猪产生水肿病的临 诊和病理特征。
?12月龄雏鸡患病时输卵管明显增粗内积黄白色干酪样渗出物?成年产蛋鸡发病时输卵管局部高度扩张内积异形蛋样渗出物表面不光滑切面轮层状输卵管粘膜充血增厚大肠杆菌病的诊断?初步诊断?流行病学?临诊特点?病理变化大肠杆菌的诊断?确诊?细菌学检查?病料采取?败血型
第三章 人畜共患传染病
大肠杆菌病
大肠杆菌病


本病最早于1982年在美国首次爆发，之后加拿大、 英国和日本等发达国家，都发生过大肠杆菌O157 的暴发流行；尤其是1996年日本爆发近万人的特 大型的食物中毒，造成严重的危害，其感染已成 为世界性公共卫生问题。
毒力因子

定植因子：又称菌毛(fimbriae，pili)、黏附素(adhesin)或F 抗原，与肠黏膜特异性受体结合而定植于黏膜。如 F4(即K88)、F5(即K99)、F8(即987P)、F4l。 内毒素：细胞壁外膜中脂多糖，引起败血症。 外毒素：ETEC产生，质粒编码。有不耐热肠毒素(LT) 和耐热肠毒素(ST)二种。

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• 肠毒素是ETEC在体内或体外生长时产生并分泌到胞外 的一种蛋白质性毒素，按其对热的耐受性不同可分为不 耐热肠毒素(LT)和耐热肠毒素(ST)二种。在动物ETEC中， 只有猪源F4+株能同时产生LT和ST，其他菌株仅产ST。
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2、产类志贺毒素大肠杆菌(SLTEC)
麦康凯培养基
伊红美蓝培养基
血液培养基
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本菌能发酵多种碳水化合物产酸产气。 大多数菌株可迅速发酵乳糖。约半数菌株不 分解蔗糖，几乎均不产生硫化氢，不分解尿 素。TSI（三糖铁培养基）上反应呈黄色。
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抗原及血清型
• 大肠杆菌抗原主要有O、K和H三种。 • O抗原：173种 • K抗原：103种 • H抗原：60种 • 由此，有人认为自然界大肠杆菌的血清型可
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形态特征：
大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢的 直杆菌，大小0.4～0.7umx2～3um， 两端钝圆，散在或成对，大多数菌 株周生鞭毛，但也有无鞭毛或丢失 鞭毛的变异株。
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原 子 力 显 微 镜 图 片
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染色特性：
碱性染料对本菌有良好着色性， 革兰氏染色法被染成红色。
1）粘附性菌毛：在1990年Bertsching等首次报道，从 致猪水肿病的大肠杆菌分离出F18，是猪水肿病的 SLTEC菌株的一个重要的毒力因子，它有助于细菌 在猪肠黏膜上皮细胞定居和繁殖。
2）致水肿病2型类志贺毒素 (SLT-2e或SLT-2v)：系 引起猪水肿病的SLTEC所产生的一种蛋白质性细胞 毒素。

2、成分
水、碳源、氮源、 无机盐、生长因子
(生长因子即细菌生长必需，而自身不能合成的 化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)
不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方
调节pH
真菌：5～6 细菌：6.5 ～ 7.5
有时会加一定量的氯化钠以维持一定的渗透压
四、无菌操作
1.无菌操作的概念
无菌操作杂泛菌指在培养微生物的操作中，所有防止________污染的方法。
每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下 一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的 增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。
2、在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？ 为什么？
划线结束后灼烧接种环，及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和 感染操作者。
大肠杆菌在人体的_____中一肠般道对人体无害，但任何 大大肠肠杆杆菌菌如是_果_进__入_____工__程__中_被__广_泌都泛尿会采系对用统人的体工产具生。危害。
基因
质粒、 EcoRⅠ限制酶、
E.coli-DNA连接酶、
受体细胞
菌落的概念
菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量生长 繁殖时，所形成的肉眼可见的具有一定形态结构 的子细胞群体。
天然培养基：
天然培养基有血清、 血浆、和组织提取液 （如鸡胚和牛胚浸 液）。 优点：营养成分丰富， 培养效果好 缺点：来源受限;成分 复杂，影响对某些实 验产物的提取和实验 结果的分析;易发生支 原体污染;
人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和 繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。
主要包括：
_各__种__器__具__必须无菌、 __培__养__基___也必须要无菌、 ___________时不能带入其他杂菌

大肠杆菌可以透过 接合作用传递遗传 物质。
五、抗原及血清型
（一）抗原 O抗原，即菌体抗原，为细胞壁脂多糖。该抗原刺激 机体主要产生IgM类抗体。 H抗原， 即鞭毛抗原 ，H抗原主要刺激机体产生IgG 类抗体，与其他肠道菌基本无交叉反应。 K抗原，即荚膜抗原，位于O抗原外层，为多糖。具 有K抗原的菌株不能被其相应的抗O血清所凝集叫 “O不凝集性”。 据耐热性不同，K抗原又分为：L、A和B 三型。

超过56种 100种以上
170多种
（二）血清型 可用O:K:H排列表示其血清型。如：O8:K23:H19， 表示该菌具有O抗原8，K抗原23，H抗原为19。 致人畜腹泻的产肠毒素大肠杆菌，除含K抗原外， 还可含有蛋白质性粘附素抗原。对粘附素抗原应并 列写于多糖K抗原之后。如：O8:K87，K88:H19 中 K88即为粘附素抗原。
大肠杆菌
大肠杆菌的历史
肠杆菌科,为革兰氏阴性杆菌。根据生化反应、血清 学试验、DNA同源性研究，肠杆菌科至少包括44个 菌属，170个以上的菌种。 埃希菌属（Escherichia）中最重要的是大肠埃希菌 (E. coli) ，常称为大肠杆菌。 大肠杆菌广泛分布于自然界，包括腐生菌、寄生菌 和人及动物的病原菌。多数是人和动物肠道正常菌 群的重要成员。 20世纪中叶，认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对 人和动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜（禽），常 引起严重腹泻和败血症。

病料
腹泻或水肿病例 败血症病例
常采集粪便或肠粘膜刮取物 麦康凯或伊红美兰琼脂平板划线
常采集血液及其病变组织 血琼脂或麦康凯琼脂平板划线
挑取疑似大肠杆菌菌落5～10个分别在琼脂平板进行纯培养 革兰染色镜检 革兰氏染色阴性 接种TSI琼脂培养基

THANKS
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。
食物中毒通常发生在食用被污染 的肉类、奶制品、蔬菜等食品后 ，因此食品生产和加工过程中的
卫生控制至关重要。
抗生素抗性与超级细菌
抗生素是治疗细菌感染的重要药物，但长期使用抗生素会导致细菌产生抗药性。
大肠杆菌等细菌在长期接触抗生素的过程中，会逐渐适应并抵抗抗生素的作用，形 成超级细菌。
超级细菌对多种抗生素具有抗药性，给治疗带来了极大的困难，也对全球公共卫生 安全构成了严重威胁。
致病性或提高其生物合成能力，为工业生产和医疗应入探究大肠杆菌的致病机制，为开发更有效的抗 菌药物和治疗方法提供理论支持。
加强跨学科合作
加强生物学、化学、物理学等领域的跨学科合作，利用新 技术和新方法，推动大肠杆菌研究的创新发展。
提高应用价值
将大肠杆菌的研究成果应用于实际生产和医疗实践中，提 高其应用价值和社会效益。同时，需要关注伦理和安全问 题，确保研究工作的合规性和可持续性。
致病性大肠杆菌的传播途径多样，包 括动物-人传播、人-人传播和食物-人 传播。
这些致病性大肠杆菌通过食物、水或 接触污染表面进入人体，导致腹泻、 呕吐、腹痛等症状，严重时甚至会导 致休克和死亡。
食物中毒与感染
食物中毒是指食用了被致病性大 肠杆菌污染的食物而引起的急性
中毒性疾病。
感染后可能出现恶心、呕吐、腹 痛、腹泻、发热等症状，严重时 可导致脱水、电解质紊乱和休克
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大肠杆菌的研究进展
新技术与新方法
基因组学技术
利用新一代测序技术，对大肠杆 菌基因组进行全面解析，发现新 的基因和基因变异，为研究其生 物学特性和致病机制提供基础。
蛋白质组学技术
通过蛋白质组学方法，研究大肠杆 菌的蛋白质表达和功能，揭示其在 不同环境下的适应机制和调控机制 。

（三）肠致病性大肠杆菌 （Enteropathogenic E.coli,EPEC）
婴幼儿腹泻 致病机制 黏附到小肠上皮细胞，破坏刷状缘，导致邻近微绒 毛破坏，A/E组织病理损伤，引起严重水样腹泻。
Brett Finlay, University of British Columbia
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（四）肠出血性大肠杆菌
33343536肠杆菌科中与医学有关的常见菌属和菌种埃希菌属大肠杆菌志贺菌属痢疾志贺菌爱德华菌属迟钝爱德华菌沙门菌属伤寒沙门菌枸橼酸菌属佛劳第枸橼酸菌克雷伯菌属肺炎克氏菌肠杆菌属产气肠杆菌哈夫尼亚菌属蜂窝哈夫尼亚菌沙雷菌属粘质沙雷菌变形杆菌属普通变形杆菌摩根菌属摩氏摩根菌属普罗威登斯菌属雷氏普罗威登斯菌耶尔森菌属鼠疫耶尔菌欧文菌属草原居民欧文菌菌属菌种数代表种37
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（二）培养特性
兼性厌氧2～3mm、灰白色S型菌落。 有的有β型溶血。能产生大肠菌素。
（三）生化反应
葡乳麦甘蔗 尿素酶 H2S IMViC 动力 ⊕⊕⊕⊕⊕ - - + + - - +
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（四）抗原构造
有O、K、H三种抗原。 O抗原:为脂多糖，170多种，是分群的基础 K抗原:100多种，有抗吞噬和补体杀菌作用 ，与细菌毒力有关。分为L、A、B三种。一个菌 株一般只含一个型别的K抗原。 H抗原:50多种，与运动有关。 表明大肠杆菌血清型方式是按O∶K∶H排列
光滑型菌落,有的有β型溶血,在液体 培养中呈均匀混浊生长。
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3.活泼的生化反应
肠道致病菌与非致病菌 鉴定中重要的生化反应
S-S平板
乳糖发酵试验
肠道非致病菌 （埃希菌+）
志贺菌、 沙门菌等-
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4.抗原构造复杂

• 1.分类(按物理形态分) • (1)液体培养基 • (2)固体培养基
①常用的固体培养基:
琼脂固体培养基. ②微生物在固体培养基
表面生长,可以形成
肉眼可见的菌落.
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2.培养基内所含的基本物质
• (1)水 • (2)碳源
• (3)氮源
• (4)无机盐
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3.培养基内所需的其他条件 • (1)pH值 • 如:培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或微碱
α-固定化酶的使用 α-固定化酶 条件和效果
枯草杆菌
果酒和果醋的制作 果酒:酵母菌+天然 干酵母 果醋:醋化醋杆菌 菌种或醋曲
泡菜的腌制和亚硝 假丝酵母、乳酸菌 天然微生物 酸的测定
植物组织培养
菊花
第二页，共38页。
实验1 大肠杆菌的培养和分离
• 实验目的： • 1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进
的铅笔上，冷却后使培养基形成斜面。
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步骤:
１、配制培养基; 培养基灭菌、器具灭菌
2、冷却，倒平板 (编号,无菌环境操无菌环境操作)
４、划线分离、恒温培养箱培养12~24h
(无菌环境操作)
５、接种斜面,4℃冰箱保存(目的:为了保存菌种)
6、实验完成后，接触过细菌的器皿均应灭菌处理后丢失。
4℃冰箱保存。
视频
6.实验完成后，接触过细菌的器皿均应灭菌处 理后丢弃。 目的：为了防止实验菌残留于接种环而污染环境 和感染实验人员。
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1为了获得纯净的培养物，其关键是防止外来杂菌的入侵 污染： 1）培养皿； 2）培养基； 3）接种过程是无菌的 2请思考：培养基、培养皿、手、接种环分别如何消毒或 灭菌？

细菌培养基需求中性偏碱，霉菌培养基需求中性偏酸。
LB液体培养基：
细菌在液体培养基中 扩大培养
LB固体培养基
倒入平板，用 于分离细菌
制成斜面，用于保存 细菌
（三)细菌的分离
划线分离
操作简单
涂布分离
单菌落更易分开
操作复杂
（三）无菌技术
泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 1、消毒： 是指杀灭大部分病原微生物的方法。 常用消毒方法： （1）100℃煮沸5-6min （2）巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min （3）用75%酒精等进行皮肤消毒 （4）紫外线消毒
进行操作时，注意瓶口、壁上等不能沾有培养基，否则易发生污染。
大肠杆菌的培养和分离实验操作步骤
• 实验器材
培养基（微生物生存的环境和营养物质）
LB液体培养基 大肠杆菌菌种斜面 空白斜面
（一）培养基的制备与灭菌
取两个250ml的三角瓶，分别装入50ml LB液体培养基和50ml LB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜，用牛皮 纸包装后放入灭菌锅内，1kg压力灭菌15min。
（2） 划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端 开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个 细菌繁殖而来的菌落。
（3）为什么每次划线之前都要灼烧接种环？
每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留 的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的 末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减 少，以便得到单菌落。
即时反馈
课堂小结与作业布置