大肠杆菌如何培养

大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。

二、培养基制备LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4）液体培养基胰化蛋白胨 10.0g酵母粉 5.0g氯化钠 10.0g水 1000mlpH 7.4固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂三、平板的制备1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。

2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。

如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂）。

3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。

所有锥形瓶如上述操作。

用记号笔注明培养基名称、配制日期。

4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。

5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。

液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。

将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。

6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。

四、接种大肠杆菌1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。

2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。

大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。

二、培养基制备LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4）液体培养基胰化蛋白胨 10.0g酵母粉 5.0g氯化钠 10.0g水 1000mlpH 7.4固体培养基在液体培养基的基础上再加入 1.5％－2.0％的琼脂三、平板的制备1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉 5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。

2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。

如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入 2.5g琼脂）。

3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。

所有锥形瓶如上述操作。

用记号笔注明培养基名称、配制日期。

4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。

5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。

液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。

将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。

6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。

四、接种大肠杆菌1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。

2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。

一、实验目的1. 学习大肠杆菌的培养方法，掌握其生长规律。

2. 掌握无菌操作技术，培养纯化大肠杆菌。

3. 了解大肠杆菌在食品、环境及医学等领域中的应用。

二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种革兰氏阴性杆菌，广泛存在于人和动物的肠道中。

在实验室条件下，大肠杆菌可以通过人工培养获得纯化菌株。

本实验采用LB培养基培养大肠杆菌，通过观察菌落形态、显微镜观察等方法，了解大肠杆菌的生长特点。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）大肠杆菌菌种；（2）LB培养基；（3）无菌水；（4）无菌试管、培养皿、移液管、镊子、酒精灯等。

2. 实验仪器：（1）恒温培养箱；（2）显微镜；（3）酒精灯；（4）高压蒸汽灭菌器。

四、实验步骤1. 菌种复苏（1）将大肠杆菌菌种接种于LB培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。

（2）待菌液生长旺盛后，取适量菌液，用无菌水进行稀释。

2. 培养基制备（1）按照LB培养基配方，称取相应的成分，加入去离子水溶解。

（2）将溶液煮沸，去除其中的氧气。

（3）将溶液冷却至50-55℃，加入适量的无菌水。

（4）用无菌滤膜过滤除菌。

3. 接种与培养（1）将制备好的LB培养基倒入培养皿中，待凝固后，用无菌移液管吸取菌液，均匀涂布于培养基表面。

（2）将培养皿倒置，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。

4. 观察与鉴定（1）观察菌落形态，记录菌落颜色、大小、边缘等特征。

（2）用无菌镊子挑取菌落，制成涂片。

（3）将涂片置于显微镜下观察，观察细菌的形态、排列等特征。

5. 结果与分析（1）菌落形态：大肠杆菌菌落呈圆形、光滑、湿润，颜色为乳白色。

（2）显微镜观察：大肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，菌体短粗，两端钝圆，呈杆状。

五、实验结果1. 菌落形态：大肠杆菌菌落呈圆形、光滑、湿润，颜色为乳白色。

2. 显微镜观察：大肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，菌体短粗，两端钝圆，呈杆状。

六、实验讨论1. 在实验过程中，无菌操作非常重要，以免污染菌种。

大肠杆菌培养步骤方法大肠杆菌是一种重要的细菌，它在实验室中被广泛用于分子生物学研究和基因工程。

下面是大肠杆菌的培养步骤方法，共50条，并展开详细描述：1. 准备所需的培养基及试剂，包括琼脂、培养基粉、蔗糖、牛肉膏、酵母提取物、氯化钠、磷酸二氢钾等。

2. 将琼脂及培养基粉加入适量蒸馏水中，搅拌均匀后加热至沸腾，然后灭菌。

3. 将灭菌后的琼脂培养基倒入培养皿中，使其凝固成固体琼脂。

4. 取出实验室保存的大肠杆菌菌种，用无菌吸管从存储容器中取出适量菌液。

5. 将菌液均匀地涂布在琼脂培养皿表面，待其吸收后轻轻晃动培养皿使其均匀分布。

6. 将涂布好的培养皿倒置放入孵化箱中，以37℃恒温孵育。

7. 每隔一段时间观察培养皿上的菌落形成情况，选择合适的菌落进行分离和培养。

8. 在培养过程中，注意观察是否有任何异常，如细菌变异、污染等情况。

9. 定期检查培养基的PH值和温度，保持在适宜的范围内。

10. 当需要保存大肠杆菌菌株时，可以将单一菌落悬浮在无菌离心管中，并添加10%甘油保藏在-80℃低温库中。

11. 每次操作前要做好无菌操作，以避免外源菌的污染。

12. 大肠杆菌培养时，应严格控制氧气供应，可以选择静态培养或者摇瓶培养。

13. 在摇瓶培养中，要保持培养液的充分通气，防止细菌缺氧而死亡。

14. 对于含氧厌恶的大肠杆菌菌株，可以选择在含葡萄糖并定期通氮气的缺氧箱中进行培养。

15. 大肠杆菌培养皿观察时，可使用显微镜进行观察，观察菌落形态、大小和颜色等特征。

16. 对于选择性培养基的应用，可以根据需要添加抗生素或者其他选择性物质来筛选感兴趣的菌株。

17. 在进行大肠杆菌培养时，要注意控制培养基的含盐量和碳源，以及其他微量元素的添加。

18. 可以通过PCR或者其他分子生物学方法快速鉴定大肠杆菌的种属和亚种属。

19. 在大肠杆菌的培养中，要注意排放生物危害废弃物，并采取相应的安全防护措施。

20. 大肠杆菌培养时，要做好相关记录，包括菌种信息、培养条件、观察结果等。

大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。

二、培养基制备LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4）液体培养基胰化蛋白胨10.0g酵母粉 5.0g氯化钠10.0g水1000mlpH 7.4固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂三、平板的制备1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。

2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。

如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂）。

3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。

所有锥形瓶如上述操作。

用记号笔注明培养基名称、配制日期。

4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。

5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。

液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。

将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。

6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。

四、接种大肠杆菌1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。

2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。

实验1,大肠杆菌的培养和分离篇一：实验1 大肠杆菌的培养和分离实验教学提纲实验1 大肠杆菌的培养和分离教学提纲实验目的1. 进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。

2. 进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的划线培养。

3. 说明大肠杆菌的培养条件和操作要求的原理。

实验材料1. 配制LB液体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，加水50mL溶解。

2. 配制LB固体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，琼脂1g，加水50mL溶解（配制LB固体培养基是用来倒平板和倒试管斜面）。

实验步骤1. 培养基灭菌。

在两个150mL的三角瓶中分别装入50mL LB液体培养基和50mL LB 固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜(一种塑料薄膜，中间有小孔的滤膜。

既可以通气，又不使细菌进入。

)。

将培养皿用牛皮纸包好，放入高压灭菌锅中，1kg压力灭菌15min（有压力时开始计时）。

同时将需要灭菌使用的培养皿、试管、三角瓶等和所用器械（接种环、镊子等）等一块灭菌。

2. 倒平板，倒斜面。

灭菌后。

待高压锅压力与大气压相同时，打开锅盖，将有培养基的三角瓶、试管、培养皿等放在灭菌后的超净工作台上。

超净工作台操作：打超净工作台的紫外灯（注意：打开紫外灯后人必须离开），持续30min，关闭紫外灯，打开过滤风和白炽灯。

将有培养基的三角瓶和培养皿放在灭菌后的超净工作台上后，点燃酒精灯，用镊子夹出酒精棉球擦拭桌面，并用酒精棉球擦手。

待固体培养基冷却到60℃时（手放上还有些热的时候），在酒精灯火焰旁，以右手无名指及小指夹持含有固体培养基的三角瓶的封口膜，右手其他三个手指拿着三角瓶；左手拿着培养皿，并打开上盖的一边，将三角瓶的培养基约10～20mL倒入1 个培养皿中。

倒入后立即置于水平位置上，轻轻摇晃，使培养基铺满培养皿底，待凝，使之形成平面。

倒斜面（试管内空白斜面），用玻璃漏斗倒入试管内，每试管2mL。

大肠杆菌过夜培养操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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1. 培养基的制备，根据大肠杆菌的生长需求，选择合适的培养基。

大肠杆菌扩大培养操作规程一、实验目的本操作规程旨在指导实验人员进行大肠杆菌的扩大培养，以获取足够量的菌液用于后续实验。

二、实验材料和设备1.大肠杆菌菌株（可从实验室或商店购买）2.LB培养基（Luria-Bertani）3.营养琼脂（可从实验室或商店购买）4.实验室培养皿（含有适当孔径的培养皿）5.离心管（容量应能满足培养菌液的要求）6.培养箱7.培养炉8.离心机9.移液器和吸头三、实验步骤1.准备工作a.准备好所需的培养基（LB培养基），并按照说明配制。

b.准备好所需的培养皿，确保培养皿的洁净无菌。

2.菌种接种a.将大肠杆菌菌株从保存的冰冻物中取出，解冻后立即进行接种操作。

b.取一小部分菌落，用移液器吸取，并迅速加入培养基中。

3.培养菌液a.将接种好的培养基转移到离心管中，每支离心管装满约1.5ml培养基。

b.离心管盖紧，轻轻倒置数次，使菌液均匀分布。

c.将离心管放入培养箱中，设定适当的温度和时间进行培养。

4.培养基上菌液的涂布a.准备好干净的培养皿，并倒入约20ml的营养琼脂。

b.等菌液培养时间结束后，将培养液转移到干净的离心管中。

c.打开离心管盖，将菌液均匀涂布在培养皿上，用酒精灯或酒精棉球消毒铁环，按图案转移到培养皿上。

d.将培养皿盖紧，倒置放置，避免细菌污染。

5.培养皿的培养a.将培养皿放入培养炉中，设定适当温度进行培养。

b.培养温度一般为37°C，培养时间根据实验需要而定，一般为16-24小时。

6.菌落计数a.培养时间结束后，从培养箱中取出培养皿。

b.用目镜观察培养皿上的菌落，记录菌落的数量和特征。

c.如需进一步使用扩大菌液，可将菌落转移到离心管中进行保存。

四、注意事项1.操作过程需保持洁净无菌，避免细菌污染。

2.温度和时间的选择应根据实验需要和大肠杆菌的培养特性来确定。

3.使用离心机时要注意转速和离心时间的设置，避免菌液的氧化破坏。

4.涂布菌液时注意均匀和无气泡的涂布，以获得准确的菌落计数结果。