发酵分析—分光光度法

发酵过程及优化实验——产淀粉酶细菌的优化实验淀粉酶是一类能催化淀粉糖苷键水解的酶类，作用于淀粉分子产生糊精、低聚糖及葡萄糖等多种产物。

而淀粉酶是应用最广的酶制剂之一，占全球酶工业市场份额的25%-33%。

淀粉酶广泛分布于动物、植物和微生物有机体中。

目前，已报道的能够产生淀粉酶的微生物种属包括不动杆菌属、微球菌属、黄隐球酵母、盐单胞菌属、青霉菌属、类芽孢杆菌属、链霉素属、假单胞菌属和杆菌菌属等。

实验一培养基的配置、灭菌一、实验目的1. 温故配制微生物培养基的原理及配制的一般方法、操作步骤。

2. 了解鉴别性培养基的原理，并掌握配制鉴别性培养基的放到和步骤。

二、实验原理鉴别性培养基是一类在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而达到只需用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中找出目的菌菌落的培养基。

如对于淀粉酶产生菌的筛选，选用的是在含有淀粉的培养基中培养微生物，滴加碘液进行染色，若出现透明圈，则表明该菌能产生胞外淀粉酶。

三、材料和器材（1）培养基：普通培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，自来水1000mL，pH7.2~7.4。

鉴别型培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，可溶性淀粉10g，NaCl 5g，琼脂20g，自来水1000mL，pH7.2~7.4。

另一个鉴别性培养基加可溶性淀粉15g每1000ml。

（2）器皿：电子天平，烧杯，锥形瓶，量筒，培养皿，玻棒，涂布棒，移液管等。

（3）其他：药匙，记号笔，报纸等。

（4）碘原液：称取碘化钾22g，加少量蒸馏水溶解，加入碘11g，溶解后定容至500mL，贮于棕色瓶中。

稀碘液：取碘原液2mL，加碘化钾20g，用蒸馏水定容至500mL，贮于棕色瓶中。

四、方法和步骤1．配制基本培养基，分装50mL至250mL锥形瓶，供实验菌株扩增。

2．配制鉴别培养基，检测实验菌株是否能产胞外淀粉酶。

3．配制稀释用的生理盐水，分装4.5mL至每个试管（11管）。

实验1 21.工业发酵分析：指应用化学分析法和仪器分析法对工业发酵中的各种物质成分的含量及有关参数进行测定，对产品的质量进行检测的一门学科。

2.工业发酵分析的分析方法物理分析法，化学分析法物理化学分析法(光学分析；色谱分析；气体分析)化学分析法：化学分析是以化学反应为基础的分析方法。

主要有重量分析法和滴定分析法重量分析法：挥发法、萃取法、沉淀法。

滴定法：酸碱滴定定法、氧化还原滴定法、络合滴定法、沉淀滴定法等。

物理化学分析：以物理化学性质为基础的定性定量方法，是一种灵敏，快速，准确的分析方法光学分析法：吸收光谱法【紫外分光光度法、可见光分光光度法、】，旋光法。

折光法色谱分析：经典液相色谱法【柱层析法纸层析法薄层层析法】气相色谱法，高效液相色谱法气体分析仪器分析：比色分析及分光光度分析；层析法；气相色谱分析3.工业发酵分析的作用①保证原材料的质量；②掌握生产过程情况和决定工艺条件；③进行经济核算；③进行科学研究工作的手段；⑤为发酵生产过程控制工艺条件提供参数；⑥控制产品质量4、采集从大量分析对象中抽取一定有代表性的样品，供分析化验用样品的采集分随机抽样和代表性取样两种方法5.总酸：无机酸；有机酸（挥发酸；非挥发酸）挥发酸：甲酸；乙酸非挥发酸：乳酸；柠檬酸总脂：乙酸乙酯：己酸乙酯；丁酸乙酯；乳酸乙酯4总酸测定注意事项①指示剂的用量应适宜，过少加入的氢氧化钠多，过多加入的氢氧化钠少，②指示剂要纯净，避免杂质与氢氧化钠反应③应做空白试验，消除系统误差④快到滴定终点时，要缓慢加，以防加入的量过多5、总算测定原理白酒中的有机酸，以酚酞为指示剂，采用氢氧化钠溶液进行中和滴定，以消耗氢氧化钠标准滴定溶液的量计算总酸的含量。

3总酯测定原理用氢氧化钠溶液中喝白酒的游离酸，再加一定量的标准的氢氧化钠使酯皂化，过量的氢氧化钠溶液再用标准的盐酸进行滴定，依据反映所消耗的标准盐酸的体积，计算出总脂的含量。

注意问题：测定目的：4 酱油中的氨基酸态氮如何进行定量分析？测定原理是什么？氨基酸是一种两性电解质，不能直接用酸碱滴定，是因为酸碱滴定时其等电点的ph过高或过低，单加指示剂难以满足要求，常采用甲醛法，因为一般的化学方法不能将氨基酸分离，只能通过测定氨基酸态氮的方法定量。

分光光度法测过氧化氢公式
分光光度法是一种常用的化学分析方法，用于测定溶液中物质的浓度。

过氧化氢是一种常见的化合物，它在医药、食品、环境监测等领域有着广泛的应用。

在分光光度法中，测定过氧化氢的浓度可以通过比较样品吸收或透射光的强度与标准溶液的吸收或透射光的强度来确定。

分光光度法测定过氧化氢的公式可以通过比色法或发光法来实现。

在比色法中，过氧化氢的浓度与其对光的吸收关系密切相关，可以使用比色皿或光度计来测定其吸光度。

测定过程中，根据比色试剂与过氧化氢反应产生的有色产物的吸光度变化来推算过氧化氢的浓度。

而在发光法中，过氧化氢在适当的条件下会与某些物质反应产生发光现象，通过测定发光强度来确定其浓度。

总的来说，分光光度法测定过氧化氢的公式可以用吸光度或发光强度与浓度之间的关系来描述，具体的公式形式会根据具体的实验条件和所用的仪器、试剂等因素而有所不同。

在实际操作中，需要根据具体的实验要求和条件选择合适的公式来进行测定，并严格按照标准操作程序进行操作，以确保测定结果的准确性和可靠性。

分光光度法测定云芝发酵浸膏中总三萜含量作者：李雨婷李萌金周雨吴雷宋慧来源：《硅谷》2014年第11期摘要采用分光光度法对云芝发酵浸膏中总三萜化合物含量进行测定。

结果表明：5%香草醛-冰醋酸用量为0.3 mL，高氯酸用量为0.8 mL，反应温度为70℃，反应时间为20 min，加冰醋酸5 mL，摇匀，在570 nm处测定其吸光值，效果最佳。

标准曲线方程为Y=0.0092x-0.0447，R2=0.9991，吸光值与齐墩果酸含量在13 μg～91 μg范围内呈良好的线性关系；三萜类化合物的质量分数为0.564%，RSD=0.7%。

齐墩果酸加样回收率98.60%～101.88%，平均加样回收率为99.93%，RSD为1.12%；在反应结束0～40 min内，吸光值相对稳定。

该方法具有简便、快速、灵敏、重复性好。

关键词云芝发酵浸膏；总三萜化合物；分光光度法中图分类号：O657.3 文献标识码：A 文章编号：1671-7597（2014）11-0092-02云芝为多孔菌科云芝属，是腐生真菌，生于多种阔叶树木桩、倒木和枝上。

世界各地森林中均有分布[1]。

云芝含有多种活性物质，其含有的三萜类化合物具有抗炎、保肝、止痛[2]等功能，还具有显著的抗肿瘤和促进免疫、降低血压作用[3]，在功能性食品的应用上具有一定的前景。

但有关云芝发酵浸膏中的三萜类化合物含量却少有报道。

本文参照目前广泛使用的三萜类化合物测定的方法[4-6]，对采用乙醇浸泡的常规方法提取云芝发酵浸膏中的三萜类化合物进行含量测定，以期为云芝发酵浸膏中的三萜类化合物的开发和利用提供依据。

并旨在为云芝的进一步开发和综合利用提供科学参考。

1材料与方法1.1 材料与试剂齐墩果酸标准品购于成都曼思特生物有限责任公司，冰醋酸、高氯酸、香草醛、乙醇、甲醇均为分析纯。

1.2 仪器与设备7530G紫外分光光度计（上海分析仪器厂）；HH-2数显恒温水浴锅、（金坛市富华仪器有限公司）；SHB-B95型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。

微生物发酵铵离子检测方法
1. 离子选择电极法，这是一种常用的铵离子检测方法，通过测量铵离子浓度与电极电位的关系来确定铵离子的浓度。

这种方法操作简单，灵敏度高，可以实时监测铵离子的变化。

2. 分光光度法，分光光度法是通过测量溶液中铵离子与某种试剂形成的复合物的吸光度来确定铵离子的浓度。

这种方法需要使用特定的试剂，操作相对复杂，但具有较高的准确性和灵敏度。

3. 色谱法，色谱法是通过色谱仪分离并测定样品中的铵离子。

这种方法需要专门的色谱设备，操作较为繁琐，但可以实现对铵离子的高效分离和定量分析。

4. 生物传感器法，生物传感器是一种利用生物材料（如酶、细胞等）对目标物质进行特异性识别并转化为可测信号的装置。

可以利用特定的微生物或酶来构建铵离子生物传感器，实现对铵离子的高灵敏检测。

需要根据具体的实验条件和要求选择合适的方法进行微生物发酵铵离子的检测。

同时，还需要注意样品的预处理、仪器的精确操
作以及数据的准确分析，以确保获得可靠的检测结果。

希望以上信息能够对你有所帮助。

发酵工业分析考试答案1、水分测定方法有儿大类，具体方法有哪些：2、恒重是指重复干燥至前后两次质量差不超过0.5mg；3、啤酒花中水分测定原理是在减压条件下，水的沸点降低，可在比较低的温度下进行干燥以排除水分，样品质量减少的量即得为样品中的水分含量。

4、奶酪屮水分的测定原理是在水分测定蒸饰器屮加入比水轻且与水互不相容的有机溶剂和样品，加热时使水分与有机溶剂共同蒸出，水冷凝冋流落入接收管的下部，有机溶剂浮在水血。

当流入接收管的有机溶剂液面高于接收管的支管吋，就流回至烧瓶中。

待水分体积不再增加，读取其体积即得到样品的水分含量。

常用邮寄溶剂是甲苯、二甲苯、正戊醇。

5、Karl Fischer法只要有现成仪器及配制试剂，它是迅速而准确测定水分的方法，是化工产品水分测定的主要方法之一，常被用作为水分特别是痕量水分的标准测定方法。

6、水分活度值是指食品中水分存在的状态，即水分与食品结合程度大小。

水分活度值越高,结合程度越低；水分活度值越低，结合程度越高。

7、糖类测定的意义：糖类测定在工业发酵中具有特别重要的作用。

原料中淀粉的重要质量指标；发酵过程屮可以根据糖量的变化判断发酵是否正常；发酵(如谷氨酸等)生产屮, 也需要测定发酵醪中的残糖含量以确定发酵终止时间。

此外，淀粉、糖化酶的活力测定实际上也是通过测定糖量进行计算的。

8、廉一爱农法测糖原理及操作是：淀粉经水解生成葡萄糖，葡萄糖屮醛基易被氧化，菲林试剂与还原糖反应生成红色沉淀，菲林试剂得要现配现用，是甲液加入乙液并等体积混合。

反应终点用次甲基蓝指示剂显示。

9、廉一爱农法的讨论：一、甲液加入乙液，甲液保证准确；二、滴定时要保证在沸腾的条件下进行，滴速不要过快；三、滴定时不能随便摇动三角瓶，更不能从电热套上取下后再进行滴定。

10、发酵原料中粗蛋白质的测定：常量凯氏定氮法原理：将试样与浓硫酸共热硝化，使蛋白质分解生成氨(NH3), NH3与硫酸化合生成硫酸钱；然后加碱(NaOH)蒸憾使NH3 游离；再用标准酸(HCL)接收，过量酸用标准碱滴定。

实验一淀粉酶生产菌的筛选一、实验目的学习淀粉酶产生菌的筛选方法。

二、实验原理淀粉酶在酿造、纺织、食品加工、医药等领域有广泛用途。

淀粉酶是一类淀粉水解酶的统称，它能将淀粉水解成糊精等小分子物质并进一步水解成麦芽糖或葡萄糖，淀粉被水解后，遇碘不再变蓝色，因此可根据淀粉培养基上透明圈的大小来判断所选菌株的淀粉酶活力。

三、实验用品1．样品淀粉含量丰富的土样。

2．培养基肉汤培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，加水至1000ml，pH7.0。

121℃灭菌20min。

初筛平板培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，可溶性淀粉2g，琼脂18g，加水至1000ml，pH7.4。

121℃灭菌20min。

Lugol碘液：碘1g，碘化钾2g，蒸馏水300ml。

先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘溶解于碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水即可。

3．器材高压蒸汽灭菌锅，超净工作台，电子天平，电炉，恒温振荡器，恒温培养箱；烧杯，量筒，三角瓶，培养皿，移液管，洗耳球，试管，试管架，接种针，涂布棒。

四、实验方法1．培养基制备：配制肉汤培养基45ml，分装于250ml三角瓶中，纱布封口，灭菌。

配制初筛平板培养基350ml，分装于500ml三角瓶中，封口膜封口，灭菌。

2．倒平板：将融化的初筛平板培养基冷却至50～60℃，以无菌操作法倒至已灭菌的培养皿中，至盖满底部。

冷却凝固待用。

3．样品预处理：取5g土样接入45ml肉汤培养基中，30℃摇床振荡15min制成土壤悬液，此时的稀释度为10-1。

另取4支试管，分别记作10-2、10-3、10-4、10-5共5个梯度，每支试管内加入9mL 无菌水。

用无菌移液管从三角瓶中吸取1mL土壤悬液，加入到10-2试管中混匀，再从此试管中吸取1mL加入到10-3试管中，依此类推直至10-5试管。

4．平板涂布分离：分别从不同稀释度的试管中吸取0.1ml悬液，均匀涂布于初筛培养基平板上，于30℃培养24～48h。

发酵分析检验技术1、发酵分析的主要分析方法物理分析法、化学分析法、物理化学分析法。

2、采样的步骤检样—原始样品—平均样品。

3、样品的处理（P4）（1）直接溶解（水溶解、有机溶剂溶解）（2）有机质破坏（干法灰化、湿法灰化）（3）蒸馏法（常压蒸馏、减压蒸馏、水蒸气蒸馏）（4）溶剂提取法（溶剂分层法、浸泡法、盐析法）4、试剂的要求分为四级，一级试剂为优级纯，保证试剂，符号G.R. ，（Guaranteed reagent),用作基准物质；二级试剂为分析纯，常用分析试剂，符号A.R. （Analytical reagent）；三级试剂为化学纯，符号C.P.（Chemical Pure)，作为一般要求较低的分析试剂；四级试剂为实验试剂，符号为L.R.（Laboratory reagent),纯度较低，分析中很少使用。

5、基准物质或基准试剂：能用于直接配制标准溶液的物质。

6、作为基准物质必需符合下列要求：（1）试剂必须具有足够高的纯度，一般要求其纯度在99.9%（质量分数）以上，所含的杂质应不影响滴定反应的准确度；（2）物质的实际组成与它的化学式完全相符，若含有结晶水，其结晶水的数目也应与化学式完全相符；（3）试剂性质应该稳定；（4）试剂最好有较大的相对分子质量，这样可以减少称量误差。

7、标准溶液的保存时的注意事项（1）标准溶液应密封保存，防止溶液蒸发。

（2）见光易分解、易挥发的溶液应贮存于棕色磨口瓶中。

（3）易吸收CO2并能腐蚀玻璃的溶液，应贮存于耐腐蚀的玻璃瓶或聚乙烯瓶中。

在瓶口还应设有碱石灰干燥管，以防倒出溶液时吸入CO2。

（4）由于溶液易蒸发而挂在瓶内壁上，在使用时应摇匀，使浓度均匀。

8 、PH计（1）校正一点定位法：选取与被测试剂pH相近的缓冲溶液为标准两点定位法：第一点定位：用PH=6.86缓冲溶液；第二点定位：水样PH小于7，用PH=4.0定量第二点；PH大于7，用PH=9.18重新定量第二点。

发酵液中色氨酸含量的快速测定3王　健　陈　宁　徐咏全　杨海军　张克旭(天津科技大学食品科学与生物工程学院,天津,300222)摘　要　报道了一种利用分光光度法快速测定发酵液中色氨酸的新方法。

该方法基于在硫酸存在下,色氨酸与对二甲胺基苯甲醛缩合生成蓝色化合物,该产物在600nm 处有吸收峰,对色氨酸测定的范围为0～100μg/mL ,工作曲线方程为C =23.56A ,C 为色氨酸,A 为吸光度。

相关系数为R 2=0.9972。

关键词　色氨酸,对二甲氨基苯甲醛,分光光度法　第一作者:博士研究生。

3天津市科委攻关项目(No.983113711)　收稿时间:2003-04-01 发酵液中L 2色氨酸的测定是发酵法生产色氨酸中不可缺少的步骤,它的定性和定量测定方法有纸层析法、薄层分析、比色法、高效液相色谱法、氨基酸分析仪测定法等[1～4]。

比色法有对二甲胺基苯甲醛比色测定法及荧光测定法等[2～4]。

对二甲胺基苯甲醛是L 2色氨酸的特异性显色剂,在实验室常用此法进行L 2色氨酸的定量分析。

已报道的对二甲胺基苯甲醛比色测定法测定时间较长,文中对该方法进行了改进,在硫酸介质中,色氨酸与对二甲胺基苯甲醛发生缩合反应生成的希夫碱在600nm 处有吸收峰。

通过实验讨论了上述缩合反应的条件、反应时间及发酵液中副产氨基酸对测定的影响。

1　材料与方法1.1　仪　器752紫外分光光度计。

1.2　试　剂色氨酸储备液(1g/L ):准确称取L 2色氨酸(天津德宇生物技术公司)0.1000g (105℃烘1h )于50mL 烧杯中,加入适量蒸馏水溶解,然后移入100mL 容量瓶中,以蒸馏水定容,使用时稀释加入。

对二甲氨基苯甲醛储备液(3g/L ):准确称取对二甲氨基苯甲醛0.3000g ,溶于100mL 1∶1H 2SO 4中,使用时直接取用。

亚硝酸钠溶液(2%):准确称取亚硝酸钠0.200g 于烧杯中,然后移入10mL 容量瓶中,以蒸馏水定容,新鲜配制。

1、化学试剂的纯度划分为：国标试剂：该类试剂为我国国家标准所规定，适用于检验、鉴定、检测基准试剂（PT，绿标签）：作为基准物质，标定标准溶液。

优级纯（GR，绿标签）（一级品）：主成分含量很高、纯度很高，适用于精确分析和研究工作，有的可作为基准物质。

分析纯（AR，红标签）（二级品）：主成分含量很高、纯度较高，干扰杂质很低，适用于工业分析及化学实验。

化学纯（CP，蓝标签）（三级品）：主成分含量高、纯度较高，存在干扰杂质，适用于化学实验和合成制备。

2、化学分析法是以化学反应为基础的分析方法，可分为定性分析和定量分析两类。

3、亨利定律为气体的公式之一，是由威廉·亨利所发现的定律。

在常温下且密闭的容器中，溶于某溶剂的某气体之体积摩尔浓度，会正好与此溶液达成平衡的气体分压成正比。

4、样品采集的要求：代表性、典型性、适时性5、样品采集基本术语原始样品：指按采样规则和操作要求，从待测原料、产品或商品一个检验货批或货批的各个部位采集的分样(又称小样)均匀混合在一起形成的样品。

平均样品：将原始样品按一定的均匀缩分法分出的作为全面检验用的样品。

试验样品：由平均样品分出用于全部项目检验用的样品。

复检样品：由平均样品分出用于复检用的样品。

保留样品：由平均样品分出用于在一定时间内保留，以备再次检验用的样品。

缩分：指按一定的方法，不改样品的代表性而缩小样品量的操作。

6、干法灰化原理：将样品置于电炉上加热，使其中的有机物脱水、炭化、分解、氧化。

再置高温炉中灼烧灰化，直至残灰为白色或灰白色为止，所得残渣即为无机成分。

优点：此法对有机质破坏彻底，操作简便，试剂用量少，测定的空白值较小。

缺点：灰化时间长，对挥发性元素如汞元素，因在高温下挥散损失大，故不宜用。

7、湿法消化在强酸性溶液中，利用硫酸、硝酸、高氯酸、过氧化氢、高锰酸钾等的氧化能力，使有机质分解，被测金属离子则呈离子状态留在溶液中。

优点：（1）有机物分解速度快，所需时间短。

摘要采用分光光度法对化妆品中氨基酸含量的测定了研究探讨.氨基酸的氨基与茚三酮水合物反应可生成蓝紫色化合物，该化合物最大吸收峰在568nm 波长处，且此吸收峰值的大小与氨基酸释放出的氨基成正比,因此可作为氨基酸定量分析方法。

该方法简便、灵敏、快速重现性良好，可用于化妆品的产品检验方法。

[13,14]关键词:化妆品；总氨基酸；分光光度法;含量测定目录§1 前言 (4)1。

1 氨基酸的分类 (4)1。

2 氨基酸的应用...................................................。

. (4)1.2。

1 在食品行业的应用 (5)1。

2.2 在医药工业的应用 (5)1。

2。

3 在饲料添加剂行业的应用 (5)1.2。

4 在化妆品行业的应用 (5)1。

2.5 在农业上的应用 (6)1。

2。

6 在其他行业的应用 (6)1.3 氨基酸含量的测定方法 (6)1.3.1 化学法 (6)1。

3.1.1 甲醛滴定法 (6)1.3.1。

2 凯氏定氮法 (6)1。

3。

2 分光光度法 (6)1。

3.3.3 纸色谱法和薄层色谱法 (7)13。

3。

4 气相色谱法 (7)1.3。

3. 5 液相色谱法 (7)1。

3。

3.6 毛细管电泳色谱法 (8)1.3。

3.7 电化学法 (8)§2 材料与方法 (8)2.1 实验原理 (9)2。

2 实验试剂及仪器 (9)2。

2。

1 主要试剂 (9)2.2。

2 主要仪器 (9)2。

3 溶液的配制 (9)2.4 实验方法 (10)2.4.1 测量波长的选择 (10)2。

4.2 显色时间的考察 (10)2。

4.3 标准曲线的绘制 (10)2.4。

4 样品氨基酸的提取 (10)2。

4.5 样品中氨基酸含量测定 (10)§3 结果与讨论 (10)3.1 测量波长的选择 (10)3.2 显色时间的考察 (11)3.3 标准曲线的绘制 (11)3。